CART細胞治療質(zhì)量控制淺談

1、CAR-T細胞治療質(zhì)量控制淺談細胞治療，將改變?nèi)祟惣膊〉闹委煼妒?，由過去重復的癥狀控制轉(zhuǎn)為一次性的治愈，是引領生物醫(yī)學的希望。其中，嵌合抗原受體（CAR）T細胞療法是近年來發(fā)展非常迅速的一種細胞治療技術。目前在全球已有兩款藥物獲得FDA的批準上市，分別是諾華的Kymriah和凱特的YESCARTA，中國有多家公司產(chǎn)品進入臨床申報階段，這種療法已成為更多患者的選擇，CAR-T細胞制造過程符合全球監(jiān)管要求成為廣泛討論的話題。1中國正衽申報臨床的I南示傳奇生物科技科濟生物制藥藥明巨諾重慶精準醫(yī)療上海叵潤達生復星凱特北京藝妙神州科技上海優(yōu)卡迪生物中源協(xié)和北京馬力喏生物博生吉醫(yī)藥科技恒瑞源正生物細胞治療

2、質(zhì)量控制分析其中細胞質(zhì)量控制貫穿CAR-T從研發(fā)到臨床的所有步驟，但CAR-T作為“活”的藥物,其很多特性與傳統(tǒng)藥物有很大的差別，下表列舉了與傳統(tǒng)藥物的主要差異點：第一個上市的CAR-T藥物Kymriah的釋放標準涉及到多個方面的指標，下圖是小編收集到的Kymriah的釋放指標所需要測試的實驗：Titbit工.KYMRJAHLol亡TestRequirTnentsftjrcommercialuseSampleufiedf(rtellingAppearanceColorlesstosightlyyellowformulatedproduct(b)(4)IdentitybyCARq-PCKPosi

3、tiveforPCR.signal(b)(4)Pert少詛雛ofviableTedh(b)4)Finslproduct(b)(4)DeterminatjonoftransHuctifinefficientbyCAR-q-PCR)(b)(4)1PercentageofnahJcCD19+Bcelk何糾Finalprnduil(b)(4)TotalceDtoimHReportcells/niLFinalproduct(b)(4)Numberoftnablecells(calculated)(b)(4)totalviablecellsFinn!prodnd(b)(4)Dose(calculateda

4、.nto5.0 xCARpositiveviableTcells/bodyweight(550k耳j0,to2.5xioflCARpositiveviableTcellstFinalprcjJucL(sflertliawj2Caktilationformula；(%C14.K唧w船knxViabfemW畑玳rmioHxVohtmcperdQx)/ioofperpatients(.50legth應nujbberisdiuidetlperKybodi/iLviyht)DeterminationctfCARexprcsskinhyflow(ytometry(b)(4)Finalproduct(b)(

5、4)ReleaseofIFNyonresponsetoCD19-expressingtargeteellst）Finalproduct(b)(4)BjicterijilEndotoxins(b)(4)Finalprodnc1(b)(4)SterilityNegiliv-6岀li加由iphdiiib)(4)MycoplasmaNtfgilivii(b)Dctcrminati0】tofVSV-GDMAbyqujintitatiePCR(qFCR)(b)(4).何KITE的YESCARTA的質(zhì)量控制也涉及到非常多的生物學實驗，篇幅有限，就不一一列舉了，具體指標可參考如下的鏈接： HYPERLINK

6、/downloads/BiologicsBloodVaccines/CellularGeneTherapyProdu /downloads/BiologicsBloodVaccines/CellularGeneTherapyProducts/ApprovedProducts/UCM584335.pdf另一方面CAR-T制造工藝復雜，下圖列舉了CAR-T的制作流程，其中涉及到病毒轉(zhuǎn)染，外源物質(zhì)的引進，長時間培養(yǎng)等因素，這勢必對質(zhì)量控制提出了巨大的挑戰(zhàn)。MolecularTherapyOncolytics(2016)16015細胞治療質(zhì)量控制原則及法規(guī)基于以上原因，CAR-T細胞質(zhì)量控制特別強調(diào)制

7、備工藝的穩(wěn)定性、多批次驗證、全程質(zhì)控和按照SOP嚴格操作。要建立穩(wěn)定的質(zhì)量檢驗和放行檢驗標準。美國和歐洲出臺了相應的法規(guī)來規(guī)范細胞治療的質(zhì)量控制，以下是國外針對細胞治療出臺的相關政策法規(guī)：FDA#GuidanceforIndustry：GuidanceforHlumanSomaticCllTh電wpyandGeneTherapy(RockvillfijMDrMar.1998).FDA.GuidenesforIndustry：SwpplemenUllGuidnc?onTestingforReplicationCmpetentRetrovirusinRetroviralVictorBaedlGen

8、eTherapyProdmctsandDuringFolbw-upofPtienisinClinicalTrialsUsingRetroviralVectors(Rockville,MUNov.300&).FDA,GuidanceforFDAReviewersandSponsors;ContentndReviewofCherni5tryrManufacturing,andControl(CMC)lnformaUoriforHumanSomiaticCellTherapyInvestigationalNewDrugAppli匚ztion與(INDe)(R匚kville,MD.Apr.2003).

9、IFDA.GuidanceforIndustry；PotencyTestsforCellularandGeneTherapyProducts(Rockville.MD(Jan.2011).FDA,GuidanceforIndustryPireclinbca)AssessmentofInves-tigationalCelliuhrandGeneTherapyProducts(Rockville.MDrNov.2012),USP.USPGneralChapter,CellandGnTherapyProducts(RockvilleMD,2011).EMA.GuidelineonDevelopmen

10、taodManufactureofLentivirsalVectorsLondonhMay2005)-EDQM.EurPhjGeneTransferMedicinalProductsforHucnanUm5.14(EDQM.Strasbourg.France.20101.(大家如有需要，可至文末掃碼下載)在我國，細胞治療的國家主管部門是國家衛(wèi)生和計劃生育委員會(NHFPC)和國家食品藥品監(jiān)督管理總局(CFDA),下圖是我國針對細胞治療出臺的相關政策法規(guī)：疇圉冢衛(wèi)生計主叢關成人的侔細胞洽療屋基因治抒臨床研兗廣控熨點或人爲因治疔申報臨庸試驗指導原則釁E齣治療產(chǎn)品硏究導評階技術抬導虛則試行）$C按新

11、菊進行餐理）去于即發(fā)干細胸臨味研究笆理辦法疇圉冢衛(wèi)生計主叢關成人的侔細胞洽療屋基因治抒臨床研兗廣控熨點或人爲因治疔申報臨庸試驗指導原則釁E齣治療產(chǎn)品硏究導評階技術抬導虛則試行）$C按新菊進行餐理）去于即發(fā)干細胸臨味研究笆理辦法（試行的說知瓦人體細胞泊療硏究和制刑質(zhì)盂控制技術的拒導于取消第三裘醫(yī)療技術臨庫引用準入審批有關工作的通知陥醫(yī)療技術臨床應用管理辦法橙苜批處許臨床應用的第三董醫(yī)療技術冃錄31993.51994.1003.3SOfl.a2009.52009.62012015.73.015.81017.12自仲免疫姻腕CT如胞NK細腿泊抒技術萱岬規(guī)范（征求意見稿戀干細胞臨床詡究背理為法矗和瓦干

12、細胸制割質(zhì)工控制21臨康前研究扌旨導原則試f亍】以下以CTL019為例來分析細胞治療質(zhì)量控制策略，目前細胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量控制分為四個大的方面，分別為安全性（Safety）,純度（Purity）,潛能性（Potency）以及均一性（Identity）,這些質(zhì)量控制會貫穿CAR-T生產(chǎn)的不同階段，下圖列舉了這些檢測會在不同的階段開展。MaslefCell曲k(MCB)0EI9BQ陽撫旳CtilBank(WCB)VjrvsBanlt(MVBiWVBJ即呷FrchductSBMaslefCell曲k(MCB)0EI9BQ陽撫旳CtilBank(WCB)VjrvsBanlt(MVBiWVBJ即呷Frch

13、ductSB翁BioRcliancetrAKF【:drntilytreogtfnkj2F在T細魄表直表遲莖（2F在T細魄表直表遲莖（FACS）匚即轉(zhuǎn)染聶率血呻水平（：|PCR）細胞社（全自功細胞計數(shù)儀）毎干克棒歪6R裁T整胞刊毎計算邀圍活率CD45KD3+-(FACS)匚UR在表這苣(:AC5)CRE轉(zhuǎn)M室EFINA亦平(qPFR)殊余BSAjftM(EH5A)雀余殖珠檢則雀余(CD45tCD3-CD15tj揃測(FACEr1Safety1IkJ無廂.円竜素r壹原體忙刪犠叱據(jù)圮界栓詛-衆(zhòng)寶且耗旳:心刪甌岀亂期ai”FQA軒求1LJ輕霍訪醴1E細挪俶大卜活率-細胞佛鑒屋（Z絡胞因子釋放和反應性再

14、劇城細胞生衣速軽測試肉余磯珠檢測對機為表迖的吧機細胞功橄測生物學實驗用于質(zhì)量分析帶來的挑戰(zhàn)在這些實驗中，大部分是生物學實驗，生物學實驗因為操作方法，樣本差異等因素會給結果帶來較大的波動，也給這些方法向GMP轉(zhuǎn)移帶來了挑戰(zhàn)，同時這些實驗結果的驗收標準和規(guī)范難以制定，以CAR-T的轉(zhuǎn)染效率測定為例，不同的人對流式細胞儀結果設門得到的差異會有較大的差異。細胞治療質(zhì)量控制的基石實驗-濃度，活率細胞濃度活率測試方面，其是很多生物學實驗的基礎，比如細胞生長速率測定，細胞因子檢測，細胞生物學效應檢測方面，細胞計數(shù)是這些實驗的第一步，這一步如果錯誤，那么結果波動大是預料之中的。另外在在細胞培養(yǎng)過程中，極為重要

15、的一點是優(yōu)化細胞培養(yǎng)條件。細胞的濃度，活率，結團率，形態(tài)是了解反應器中細胞培養(yǎng)狀態(tài)的重要指標?？偠灾?，CAR-T從細胞收集開始到最后的產(chǎn)品回輸，濃度活率一直是最關鍵的指標之一。既然濃度活率對于CAR-T整個生產(chǎn)過程這么的重要，小編自作主張的調(diào)研和試用了市場上最暢銷的幾款細胞計數(shù)儀，尤其衷愛我國自主研發(fā)生產(chǎn)的CountstarRigel熒光細胞分析儀。不得不說，這款產(chǎn)品的智能、精準、合規(guī)滿足了小編對細胞計數(shù)儀所有的想象。智能作為新時代年輕人，觸屏的使用已經(jīng)深入人心，這款產(chǎn)品的設計也讓小編有告別傳統(tǒng)PC時代，與科技進步共發(fā)展的認同感。只需動一動手指，即可全自動獲得細胞分析結果和圖像。高質(zhì)量的圖像

16、可通過多點觸控放大或縮小，讓你看得真切，讓小編對結果的真實性不再懷疑。三分鐘檢測五個樣，用這樣的神器，老板再也不用擔心我的計數(shù)速度啦。正是這款小小的熒光細胞分析儀其實具有大智慧。除細胞濃度活率檢測外，對于CarT細胞中效應細胞毒性、細胞凋亡等測試這款儀器也能進行很好的分析。-卜I_IFI活率細庖殺雷細胞凋亡-卜I_IFI活率細庖殺雷細胞凋亡CD袖前止吩析精準小編親測，使用AOPI活率檢測程序測試細胞濃度和活率，看一遍即會使用，5槽測試結果CV0.99,多臺儀器間測試結果一致。多個地區(qū)，多類樣品,多個人開展測試，也不再擔心數(shù)據(jù)的一致性。8.00E+067.00E+066.00E+060.9955

17、i.OOE+OS4.OOE+DB3.OOE+D62.00E+061.00E+Q6O.OOE+OO0.48.00E+067.00E+066.00E+060.9955i.OOE+OS4.OOE+DB3.OOE+D62.00E+061.00E+Q6O.OOE+OO0.41.72E+06CountstarRigel的AOPI細胞活率測試，可用于全血的質(zhì)量評估，PBMC分離效率檢測，T細胞的培養(yǎng)狀態(tài)，T細胞的增殖率和活率，產(chǎn)品釋放質(zhì)量控制，在CarT細胞治療整個質(zhì)量控制過程均可使用細瞌擴增壤曲憐飾收廉坦帕SPBMC6治療整個質(zhì)量控制過程均可使用細瞌擴增壤曲憐飾收廉坦帕SPBMC6合規(guī)從美國藥典，F(xiàn)DA以及CFDA的法規(guī)來看，對細胞治療產(chǎn)品用于藥品，符合GMP規(guī)范進行管理成為未來的趨勢。所以，小編對儀器最重要最基本的要求就是需要符合GMP/cGMP、數(shù)據(jù)審計追蹤、FDA21CFRPART11。CountstarRigel從設計到服務完全符合這個要求！同時，CountstarRigel提供標準微珠顆粒、3Q驗證服