雌激素調(diào)控子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞中LRP16基因表達(dá)及其意義

1、雌激素調(diào)控子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞中LRP16基因表達(dá)及其意義孟元光，韓為東，黃柯，伍志強(qiáng)，趙亞力，母義明，宋磊【關(guān)鍵詞】LRP16基因；雌激素；Ishikaa細(xì)胞；EExpressinregulatinfLRP16geneby17estradilanditssignifianeinhuanendetrialanerIshikaaells【Keyrds】LRP16;estrgen;Ishikaa;Eadherin;endetrialarina【關(guān)鍵詞】LRP16基因；雌激素；Ishikaa細(xì)胞；E鈣粘合素；子宮內(nèi)膜癌【中圖號(hào)】Q78；Q250弁言既往研究效果證明LRP16是一個(gè)雌激素E2

2、反響性基因，E2通過(guò)其受體ER上調(diào)LRP16基因的表達(dá)，LRP16基因過(guò)表達(dá)促進(jìn)內(nèi)源性ER陽(yáng)性的乳腺癌F7細(xì)胞增殖，而按捺其表達(dá)那么限定F7細(xì)胞的增殖，而且限定了F7細(xì)胞對(duì)E2的反響性增殖本領(lǐng)1-4.我們?cè)贗shikaa子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中探究了E2對(duì)LRP16基因的表達(dá)調(diào)控效應(yīng)以及LRP16表達(dá)對(duì)E2活性的依靠性，而且研究了LRP16基因過(guò)表達(dá)對(duì)Ishikaa細(xì)胞增殖以及侵襲生長(zhǎng)的影響，不雅察到LRP16基因表達(dá)依靠于E2活性，該基因過(guò)表達(dá)通過(guò)下調(diào)E鈣粘合素Eadherin促進(jìn)Ishikaa細(xì)胞侵襲生長(zhǎng).1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1質(zhì)料atrigel膠、Eardherin鼠抗人單抗購(gòu)于美國(guó)BD公司，G41

3、8，24Transell模子體系購(gòu)于美國(guó)ster公司、纖維毗連卵白(Fibrnetin,FN)、小牛血明凈卵白BSA以及17estradil購(gòu)于美國(guó)Siga公司；DE造就液、胎牛血清FS購(gòu)于美國(guó)Hylne公司；兔抗P2，P9，D44，鼠抗Eadherin以及atin抗體購(gòu)于美國(guó)Sataruz公司；L15以及無(wú)酚紅DE造就基購(gòu)于協(xié)和醫(yī)科大學(xué)底子所細(xì)胞中央；去除E2血清由我室自行制備；32PdTP購(gòu)自北京亞輝公司；探針標(biāo)識(shí)表記標(biāo)幟試劑盒購(gòu)自美國(guó)Prega公司；ER與LRP16真核表達(dá)載體由我室保存.II182780由軍科院葉棋濃傳授提供；Superfet轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自Qiagen公司；LRP16基因

4、啟動(dòng)子-676至-24bp驅(qū)動(dòng)的熒光素酶報(bào)道子pGL3S5拜見(jiàn)文獻(xiàn)3.1.2細(xì)胞造就Ishikaa，T47D以及DAB231由我室保存，造就參照AT要領(lǐng).去除E2造就至少3d.1.6NrthernbltTriZl提取總RNA，每個(gè)樣品取20g上樣于12g/L的甲醛變性凝膠，100V電泳1.5h，毛細(xì)管法將核酸轉(zhuǎn)移至尼龍膜，80烤膜2h.雜交后的尼龍膜用4SS/5g/LSDS漂洗30in，置-80放射自顯影.詳細(xì)歷程拜見(jiàn)文獻(xiàn)5.1.7esternblt40g細(xì)胞總卵白質(zhì)上樣于100g/L的SDSPAGE膠電泳，轉(zhuǎn)膜后別離與抗人P21400，P91400，D441400，Eadherin1200及

5、atin1500孵育留宿，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)識(shí)表記標(biāo)幟的二抗雜交，放射自顯影.2效果2.1LRP16基因在Ishikaa細(xì)胞中的表達(dá)程度依靠于E2活性接納Nrthernblt要領(lǐng)闡發(fā)了E2對(duì)Ishikaa細(xì)胞中LRP16表達(dá)程度的影響，效果如圖1A所示，E2刺激了細(xì)胞中LRP16RNA表達(dá)程度的上調(diào)；為不雅察按捺ER活性對(duì)Ishikaa細(xì)胞中LRP16表達(dá)的影響，我們接納純的雌激素按捺劑II182780造就細(xì)胞，不雅察到LRP16RNA程度明顯下調(diào)圖1B，該效果表白E2刺激Ishikaa細(xì)胞中LRP16表達(dá)，而按捺E2活性那么下調(diào)LRP16表達(dá).為不雅察ER表達(dá)程度對(duì)LRP16表達(dá)的影響，我們將

6、ER載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Ishikaa細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后48h檢測(cè)細(xì)胞中LRP16RNA表達(dá)量，效果如圖1示，外源性轉(zhuǎn)染ER顯著進(jìn)步了Ishikaa細(xì)胞中ER的表達(dá)量，同時(shí)上調(diào)了LRP16基因的表達(dá)程度；為進(jìn)一步驗(yàn)證ER是否通過(guò)對(duì)LRP16基因轉(zhuǎn)激活上調(diào)其表達(dá)，我們接納差異劑量的ER表達(dá)載體與LRP16啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的熒光素酶報(bào)道子pGLS5共轉(zhuǎn)染T47D,Ishikaa以及DAB231細(xì)胞，檢測(cè)相對(duì)熒光素酶活性，效果如圖1D示，隨細(xì)胞中ER含量的增高LRP16啟動(dòng)子活性加強(qiáng)，這一效果明白證明ER具有刺激LRP16轉(zhuǎn)激活效應(yīng)，而且該效應(yīng)依靠于ER的含量.以上效果表白LRP16的轉(zhuǎn)激活依靠于E2的活性.圖1LRP

7、16基因表達(dá)依靠于雌激素活性略圖2LRP16基因過(guò)表達(dá)促進(jìn)了Ishikaa細(xì)胞的侵襲生長(zhǎng)略圖3LRP16過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)了Ishikaa細(xì)胞中Eadherin基因的RNA與卵白程度略3討論子宮內(nèi)膜癌是婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，雌激素對(duì)正常子宮內(nèi)膜的過(guò)分刺激以及雌激素受體的過(guò)分表達(dá)是導(dǎo)致子宮內(nèi)癌產(chǎn)生與希望的重要因素，越來(lái)越多的研究資料證明雌激素通過(guò)其卑劣靶基因?qū)е伦訉m內(nèi)膜癌的產(chǎn)生與希望6，故識(shí)別新的雌激素靶基因并對(duì)其生物學(xué)成效舉行研究對(duì)從分子程度研究子宮內(nèi)膜癌有緊張的科學(xué)意義與埋伏的診斷治療代價(jià).LRP16是本研究組識(shí)別的一個(gè)雌激素反響性基因，既往研究證明雌激素通過(guò)其受體ER上調(diào)LRP16基因轉(zhuǎn)錄，該基

8、因過(guò)表達(dá)促進(jìn)內(nèi)源性ER陽(yáng)性的乳腺癌F7細(xì)胞增殖，分子機(jī)制涉及了G1/S期周期轉(zhuǎn)換卵白ylinE與ylinD1的表達(dá)上調(diào)1-2.但LRP16在內(nèi)源性ER陽(yáng)性子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的研究如今尚不明晰.本工程以子宮內(nèi)膜癌Ishikaa為形式細(xì)胞，重點(diǎn)探究LRP16對(duì)雌激素的反響性以及LRP16過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞生物學(xué)舉動(dòng)的影響及其大概的分子學(xué)機(jī)制.效果表現(xiàn)雌激素刺激LRP16基因在Ishikaa細(xì)胞中的表達(dá)，而按捺雌激素活性下調(diào)了LRP16基因表達(dá)，表白LRP16表達(dá)對(duì)雌激素活性的依靠性，進(jìn)一步證明LRP16是一個(gè)雌激素反響性靶基因，同時(shí)證明LRP16表達(dá)程度可以反響雌激素的活性狀態(tài)以及雌激素信號(hào)通路的活潑程度

9、.子宮內(nèi)膜癌的侵襲生長(zhǎng)是瘤細(xì)胞緊張的惡性表征，其分子學(xué)機(jī)制重要涉及了P2，P9，D44以及Eadherin的表達(dá)下調(diào)7-9.我們不雅察到LRP16過(guò)表達(dá)明顯增長(zhǎng)了Ishikaa細(xì)胞的體外侵襲生長(zhǎng)本領(lǐng)，分子學(xué)研究效果表現(xiàn)LRP16過(guò)表達(dá)下調(diào)了Eadherin基因的表達(dá)，開(kāi)端表白LRP16促進(jìn)Ishikaa細(xì)胞侵襲生長(zhǎng)的分子機(jī)制重要涉及了Eadherin表達(dá)程度的變革.總之，通過(guò)本工程研究我們熟悉到雌激素調(diào)控的靶基因LRP16在子宮內(nèi)膜的產(chǎn)生與希望中大概有緊張作用，進(jìn)一步的臨床病理學(xué)研究效果將充實(shí)證明這一論點(diǎn).【參考文獻(xiàn)】1HanD,uY,LuX,etal.UpregulatinfLRP16RNA

10、by17estradilthrughativatinfestrgenreeptr(ER),butntestrgenreeptr(ER),andprteshuanbreastanerF7ellprliferatin:ApreliinaryreprtJ.EndRelataner,2022,10(3):215-222.2韓為東，李琦，趙亞力,等.小滋擾RNA按捺LRP16基因表達(dá)限定了F7乳腺癌細(xì)胞增殖J.中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào),2022,21(1):113-119.3ZhaYL,HanD,LiQ,etal.ehanisftransriptinalregulatinfLRP16geneexpre

11、ssinby17estradilinF7huanbreastanerellsJ.JlEndrinl，2022,34(1):77-89.4趙亞力,韓為東,母義明,等.雌激素通過(guò)ER與Sp1的彼此作用上調(diào)LRP16基因的轉(zhuǎn)錄J.中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué),2022,20(3):99-105.6atanabeA,KinshitaY,HskaaK,etal.FuntinfestrgenrelatedreeptralphainhuanendetrialanerJ.JlinEndrinetab,2022,7(28):679-685.7ellLK,eyerJJ,Tretiakva,etal.FuntinfestrgenrelatedreeptralphainhuanendetrialanerJ.linanerRes,2022,10(16):5546-5553.8TalvensaariattilaA,Santala,SiniY,etal.Prgnstivaluefatrixetallprteinase2(P2)expressininendetrialen