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1、第十一章 生物素-親和素放大技第一節(jié) 生物素第十一章 生物素-親和素放大技第一節(jié) 生物素的理化性質與標(biotinB一、活化生物(一)(二)標記蛋白質醛基的活化生物素有兩種:生物素酰肼(BHZ)和肼化生物胞素(BGHZ)DNA二、生物素標記蛋(一)(二)(三)第二節(jié) 親和素、鏈霉親和素的理化性質與標一、親和素及其活能結合 4 個分子的生物素,二者之間的親和力極強二、鏈霉親和素及其活能結合 4 個分子的生物素,二者之間的親和力極強二、鏈霉親和素及其活65kD三、親和素(或鏈霉親和素)的標抗原或抗體、鐵蛋白和熒光蛋白等,其中最常用的是酶、異硫 酸熒光素(FITC)和膠體金。親和素(或鏈霉親和素)
2、(一)(二)(SA)因表面所帶正電荷少,且不含糖基,在實驗中的非特異性。第三節(jié) 生物素-親和素系統(tǒng)的特應體系中反應物的分離、純化。BAS一、靈敏度:每個親和素分子有四個生物素結合部位,因此,BAS 具有多級放大作用,使其在應用時二、特異性:親和素與生物素間的結合具有極高的親和力,其反應呈高度專一性。而且,BAS 結合三、穩(wěn)定性:親和素與生物素間的親和常數極高,結合形成的復合物的解離常數很小,呈不可逆反四、適用性:生物素和親和素可與酶、熒光素和放射性核素等各類標記技術結合,用于檢測體液、BAS第四節(jié) BAS第四節(jié) 生物素-親和素系統(tǒng)的應一、生物素-親和素系統(tǒng)基本類型及原(LAB)BAB 法 BA
3、B 法也稱為橋聯(lián)親和素-標記生物素法(BRAB),是以游離的親和素(或鏈霉親和素)作為橋ABCABCBAB(或鏈霉親和素)與酶標 生物素結合,形成可溶性的親和素(或鏈霉親和素)-生物素-過氧化物酶復合物(ABCSABC)。當其與 檢測反應體系中的生物素化抗體(直接法)或生物素化第二抗體(間接法)相遇時,ABC(SABC)中未飽BABA(LAB)法是以標記親和素(或鏈霉親和素)二、生物素-親和素系統(tǒng)在酶免疫測定中的(一)將 BAS 與 ELISA 偶聯(lián)可提高 ELISA 的靈敏度:每個親和素可結合 4 個生物素,可使反應明顯放三、生物素-親和素系統(tǒng)在熒光免疫技術中的應A(BAB(或鏈霉親和素抗體的夾心法。酶放大時間分辨熒光免疫分析(EATRFIA)則是在抗原與固相 McAb 和生物素化 McAb 反應形成夾心復合四、生物素-親和素系
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