食品中阿斯巴甜和阿力甜的測定（食品安全國家標準）

1、 食品安全國家標準食品中阿斯巴甜和阿力甜的測定范圍本標準規(guī)定了碳酸飲料、乳飲料、濃縮果汁、果凍、膠基糖果、蜜餞和固體飲料中阿斯巴甜、阿力甜的測定方法。本標準適用于碳酸飲料、乳飲料、濃縮果汁、果凍、膠基糖果、蜜餞和固體飲料中阿斯巴甜、阿力甜的測定。原理根據(jù)阿斯巴甜和阿力甜易溶于水、甲醇和乙醇等極性溶劑而不溶于脂溶性溶劑特點，果凍和蜜餞試樣用甲醇水在超聲波振蕩下提?。粷饪s果汁、碳酸飲料和固體飲料類試樣用水提??；乳飲料類試樣用乙醇沉淀蛋白后用乙醇水提取；膠基糖果用正己烷溶解膠基并用水提取。各提取液在液相色譜C18反相柱上進行分離，在波長200 nm處檢測，以色譜峰的保留時間定性，外標法定量。試劑和材

2、料注：除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的實驗室一級水。3.1 試劑3.1.1 甲醇（CH3OH）：色譜純。3.1.2 乙醇（CH3CH2OH）：優(yōu)級純。3.2 標準品3.2.1 阿力甜標準品（C14H25N3O4S）：純度99%。3.2.2 阿斯巴甜標準品（C14H18N2O5）：純度99%。3.3 標準溶液配制3.3.1 阿斯巴甜和阿力甜的標準儲備液（0.5mg/mL）:各稱取0.0250g阿斯巴甜和阿力甜置于兩個50mL容量瓶中，加入水溶解并定容至刻度，置于冰箱保存，有效期為90天。阿斯巴甜和阿力甜混合標準工作液系列的制備:將阿斯巴甜和阿力甜標準儲備液用水

3、逐級稀釋成混合標準系列，阿斯巴甜和阿力甜的濃度均分別為100g/mL、50g/mL、25g/mL、10.0g/mL、5.0g/mL的標準使用溶液系列。置于冰箱保存，有效期為30天。儀器和設(shè)備液相色譜儀：配有二極管陣列檢測器或紫外檢測器。超聲波震蕩器。天平：感量分別為1mg和0.1 mg。離心機：轉(zhuǎn)速4000 r/min。分析步驟試樣制備 碳酸飲料、濃縮果汁和固體飲料 稱取約5g碳酸飲料試樣（精確到0.001g）于50ml燒杯中，在50水浴上除去二氧化碳，然后將試樣全部轉(zhuǎn)入25mL容量瓶中，備用；稱取約2g濃縮果汁試樣（精確到0.001g）于25ml容量瓶中，備用；稱取約1g固體飲料試樣（精確到

4、0.001g）于25ml容量瓶中，加20ml水后超聲波震蕩提取20min，備用。將上述試樣提取液用水定容到25mL，混勻，4000r/min離心5min，上清液經(jīng)0.45m水系濾膜過濾后用于色譜分析。乳飲料 稱取約5g試樣（精確到0.001g）于50mL離心管，加入10mL乙醇，蓋上蓋子，輕輕上下顛倒數(shù)次（不能振搖），靜置1min，4000r/min離心5min，上清液濾入25mL容量瓶，沉淀用5mL乙醇+水（2+1）洗滌，離心后合并上清液，用乙醇+水（2+1）定容至刻度，經(jīng)0.45m有機系濾膜過濾后用于色譜分析。果凍對于可吸果凍和透明果凍，用玻棒攪勻，含有水果果肉的果凍需要用食品加工機進行勻

5、漿。稱取約5g （精確到0.001g）制備均勻的果凍試樣于50ml的比色管中，加入25ml 80%的甲醇水溶液，在70的水浴上加熱10min，取出比色管，趁熱將提取液轉(zhuǎn)入50ml容量瓶，再用15ml 80%的甲醇水溶液分兩次清洗比色管，并每次振搖約10s，并轉(zhuǎn)入同一個50ml的容量瓶，冷卻至室溫，用80%的甲醇水溶液定容到刻度，混勻，4000r/min 離心5min，將上清液經(jīng)0.45m有機系濾膜過濾后用于色譜分析。蜜餞類食品如試樣有果核首先需要去掉果核。對于較干較硬的試樣，用食品加工機按試樣與水的質(zhì)量比為14進行勻漿，稱取約5g （精確到0.001g）勻漿試樣于25ml的離心管中，加入10m

6、l 70%的甲醇，搖勻，超聲10min，4000r/min 離心5min，上清液轉(zhuǎn)入25ml容量瓶，再加8ml 50%的甲醇重復(fù)操作一次，上清液轉(zhuǎn)入同一個25ml容量瓶，最后用50%的甲醇定容，經(jīng)0.45m有機系濾膜過濾后用于色譜分析。對于含糖多的、較粘的、較軟的試樣，用食品加工機按試樣與水的質(zhì)量比為12進行勻漿，稱取約3g （精確到0.001g）勻漿試樣于25ml的離心管中，加入10 ml 60%的甲醇，搖勻，超聲10min，4000r/min 離心5min，上清液轉(zhuǎn)入25ml容量瓶，再加10 ml 50%的甲醇重復(fù)操作一次，上清液轉(zhuǎn)入同一個25ml容量瓶，最后用50%的甲醇定容，經(jīng)0.45

7、m有機系濾膜過濾后用于色譜分析。膠基糖果用剪刀將膠基糖果剪成細條狀，稱取約3g（精確到0.001g）剪細的膠基糖果試樣，轉(zhuǎn)入100ml的分液漏斗中，加入25ml水劇烈振搖約1min，再加入30ml正己烷，繼續(xù)振搖直至口香糖全部溶解（約5min），靜置分層約5min，將下層水相放入50ml容量瓶，然后加入10 ml水到分液漏斗，輕輕振搖約10秒，靜置分層約1min，再將下層水相放入同一容量瓶中，再加入10 ml水重復(fù)一次操作，最后用水定容至刻度，搖勻后過0.45m水系濾膜后用于色譜分析。儀器參考條件色譜柱: ODS C18柱，4.6 mm250 mm，5 m。柱溫：25。流動相：甲醇+水（406

8、0）。流速：0.8mL/min。進樣量：20L。 檢測器：二極管陣列檢測器或紫外檢測器。檢測波長：200nm。標準曲線的制作將阿力甜標準系列工作液分別在上述色譜條件下測定相應(yīng)的峰面積（峰高），以標準工作液的濃度為橫坐標，以峰面積（峰高）為縱坐標，繪制標準曲線。標準色譜圖見附錄A。試樣溶液的測定在相同的液相色譜條件下，將試樣溶液注入液相色譜儀中，以保留時間定性，以試樣峰高或峰面積與標準比較定量。分析結(jié)果的表述按標準曲線外標法計算試樣中阿斯巴甜和阿力甜的含量。計算公式見式（1）： （1）式中：X試樣中阿力甜的含量，單位為克每千克（g/kg）；c由標準曲線計算出進樣液中阿斯巴甜和阿力甜的濃度，單位為微克每毫升（g/mL）；V試樣的最后定容體積，單位為毫升（mL）；m試樣質(zhì)量，單位克（g）；1000由g/g換算成g/kg的換算因子。結(jié)果保留三位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測XX果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10 %。其他本方法中阿斯巴甜和阿力甜的線性范圍均為5.0阿力甜的線100阿力甜的線，各類食品的阿斯巴甜和阿力甜的檢出限和定量限均相同，具體指標如下表所示： 表1 各類食品中阿斯巴甜和阿力甜的檢出限和定量限食品類別稱樣量（g）定容體積（ml）進樣量（）定量限（mg/kg）檢出限（mg/kg）碳酸飲