BET系列細菌內(nèi)毒素分析儀操作規(guī)程1

1、天大天發(fā)BET系列細菌內(nèi)毒素分析儀操作規(guī)程1. 儀器組成及開機11 儀器組成 細菌內(nèi)毒素測定儀主機、計算機、打印機、EasyBET 軟件。 1. 2 .試驗環(huán)境要求 安裝在沒有明顯空氣流動的潔凈的工作間，無菌、無塵、低溫。13 開機 打開細菌內(nèi)毒素測定儀主機的電源開關(guān)，打開計算機，啟動EasyBET 軟件。操作方法21 軟件啟動，雙擊軟件圖標打開軟件，軟件首先搜索內(nèi)毒素測定儀，找到后顯示該儀器的型號。如果儀器未聯(lián)機則不能進行檢測操作。211用戶登錄 登錄過的用戶選好檢驗員，輸入密碼，點擊確定即可進入；沒登錄過的用戶輸入檢驗員名稱，設(shè)置好密碼點擊【添加新檢驗員】即可進入。圖1212 進入主畫面

2、待儀器右上角溫度顯示為370.3時，即可進行試驗設(shè)置和檢測。圖222標準曲線的可靠性試驗221標準品系列濃度溶液準備 在進行標準系列的制備時，2至10倍的稀釋方法都可以使用， 將細菌內(nèi)毒素標準品用細菌內(nèi)毒素檢查用水按等比例稀釋（如2倍稀釋，5倍稀釋等，制備成一個至少包含三個標準濃度的標準系列溶液，例如，0.5、 0.25、0.125、 0.06、0.03Eu/ml系列或5、1、0.2、0.04Eu/ml系列）， 每個標準濃度在檢測時最少要做三個平行管，稀釋步驟參照凝膠法標準品稀釋步驟。222檢測軟件設(shè)置 用鼠標點擊【新試驗】出現(xiàn)【試驗設(shè)置向?qū)А慨嬅?，首先填寫鱟試劑批號、內(nèi)毒素批號、檢查用水批號

3、，選中【做新標準曲線】，填寫初始濃度、稀釋梯度、濃度點數(shù)、平行管數(shù)，然后用鼠標點擊【自動設(shè)置標準曲線】，在表格中出現(xiàn)所設(shè)置的數(shù)據(jù)。鼠標點擊【陰陽性對照】畫面，選中【陰性對照】，填寫平行管數(shù)， 圖3 圖4鼠標點擊【試管位置選擇】， 點擊【自動選擇】后點擊【開始檢測】，程序設(shè)置完畢，該文件存在【檢品管理中心】的標準曲線內(nèi)，該標準曲線以【鱟試劑批號】+【內(nèi)毒素批號】+【當(dāng)前時間】作為文件名存盤，也可在畫面底列【保存文件名】處改動，自行輸入名稱，但要事先建好該文件夾。出現(xiàn)如下畫面：圖5該文件存在【檢品管理中心】的標準曲線內(nèi)。該標準曲線以【鱟試劑批號】+【內(nèi)毒素批號】+【當(dāng)前時間】作為文件名存盤，也可在

4、畫面底列【保存文件名】處改動，自行輸入名稱，但要事先建好該文件夾。223 試驗檢測 2.2.3.1 溶解分狀裝鱟試劑 根據(jù)用量溶解鱟試劑，如使用多支鱟試劑，將溶解的鱟試劑混合在一起，分裝到無熱原的儀器專用檢測管內(nèi)，每支檢測管內(nèi)0.1ml （要求沒有氣泡）。2.2.3.2 加樣 取稀釋好的內(nèi)毒素系列濃度溶液，根據(jù)所設(shè)定管數(shù)分別加入有鱟試劑的小試管中0.1ml，注意加樣前應(yīng)混合溶液30秒，且每個濃度點加樣前應(yīng)更換加樣頭。另取細菌內(nèi)毒素檢查用水做陰性對照。2.2.3.3 檢測 每個濃度點在加完樣后應(yīng)立即用封口膜封口，放入細菌內(nèi)毒素測定儀設(shè)定位置，儀器自動開始檢測。待標準曲線最后一個濃度的OD值超過預(yù)

5、設(shè)值后，用鼠標點擊【手動停止檢測】，停止數(shù)據(jù)采集。點擊標準曲線坐標畫面，生成并儲存標準曲線，計算出相關(guān)系數(shù)。2.2.3.4 試驗報告打印 點擊【報告打印預(yù)覽】，在報告打印預(yù)覽畫面點擊【打印】即可。圖623供試品干擾預(yù)試驗231供試品溶液制備：將供試品溶液用細菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成所選擇的系列濃度，同時制備系列濃度的供試品陽性管和陽性管，供試品陽性管外加內(nèi)毒素標準品濃度和陽性管標準品濃度相同，標準品濃度為所選用標準曲線的中間濃度。232檢測軟件設(shè)置 用鼠標點擊【新實驗】出現(xiàn)試驗向?qū)М嬅?，首先填寫鱟試劑批號、內(nèi)毒素批號、檢查用水批號，點擊【供試品設(shè)置】，選擇供試品名稱，所做供試品管的稀釋倍數(shù)；填寫

6、供試品批號、稀釋倍數(shù)（所選擇的系列濃度最小稀釋倍數(shù)）、平行管數(shù)。選中【回收率管】 ，填寫外加內(nèi)毒素濃度、供試品稀釋組數(shù)、稀釋梯度，點擊自動設(shè)置，在表格中出現(xiàn)所設(shè)置數(shù)據(jù)，例如【稀釋倍數(shù)】為10；【供試品稀釋梯度】為2；【供試品稀釋組數(shù)】為4。那表格顯示供試品10，20，40，80四個稀釋倍數(shù)下回收率管及供試品管的試驗設(shè)置。如測定單一濃度的試驗，【供試品稀釋組數(shù)】填寫【1】。圖7鼠標點擊【陰陽性對照】畫面，選中【陰性對照】，填寫平行管數(shù)，選中【陽性對照】，填寫平行管數(shù)。鼠標點擊【試管位置選擇】， 點擊【自動選擇】后點擊【開始檢測】，程序設(shè)置完畢。文件存在所選的【供試品名稱】目錄下，以【供試品批號+

7、當(dāng)前時間】為該試驗文件名。標準曲線試驗可以和供試品試驗一同進行，在軟件設(shè)置時，進入新試驗畫面后，首先按照標準曲線試驗設(shè)置（2.2.2），再進入供試品設(shè)置（2.3.2）。2.3.3試驗檢測 根據(jù)用量溶解鱟試劑，如使用多只鱟試劑將溶解的鱟試劑混合在一起，分裝到無熱原的儀器專用檢測管內(nèi)，每只檢測管內(nèi)0.1ml （要求沒有氣泡）。取稀釋好的供試品系列濃度溶液、供試品陽性系列溶液、陽性標準品溶液，根據(jù)所設(shè)定平行管數(shù)分別加入有鱟試劑的小試管中0.2ml（沒有氣泡），注意加樣前應(yīng)混合溶液30秒，且每個濃度點加樣前應(yīng)更換加樣頭。另取細菌內(nèi)毒素檢查用水做陰性對照，每個濃度點在加完樣后應(yīng)立即用封口膜封口，放入分析

8、儀設(shè)定位置，儀器自動開始檢測。試驗完成后，用鼠標點擊【手動停止檢測】，停止數(shù)據(jù)采集。在【標準曲線】處選擇標準曲線后，計算機自動計算出結(jié)果。234試驗報告打印：鼠標點擊【報告打印預(yù)覽】，在報告打印預(yù)覽畫面點擊【打印】即可。2.4供試品檢查測定2.4.1供試品溶液制備 根據(jù)干擾預(yù)試驗結(jié)果，將供試品稀釋到無干擾濃度，同時制備該濃度的供試品陽性溶液和陽性標準品溶液，供試品陽性溶液外加內(nèi)毒素標準品濃度和陽性標準品濃度相同，標準品濃度為所選用標準曲線的中間濃度。2.4.2檢測軟件設(shè)置 點擊【新試驗】出現(xiàn)試驗向?qū)М嬅妫紫忍顚戺c試劑批號、內(nèi)毒素批號、檢查用水批號，點擊【供試品設(shè)置】，選擇供試品名稱，所做供試

9、品管的稀釋倍數(shù)；填寫供試品批號、稀釋倍數(shù)平行管數(shù)。選中【回收率管】 ，填寫外加內(nèi)毒素濃度、供試品稀釋組數(shù)、【供試品稀釋組數(shù)】填寫“1”。，點擊自動設(shè)置，在表格中出現(xiàn)所設(shè)置數(shù)據(jù)。如果有兩個或兩個以上批號供試品同時檢測，在第一個批號設(shè)置完成后，更改供試品批號，點擊自動設(shè)置，重復(fù)以上步驟至所有批號供試品設(shè)置完成。如果有兩個或兩個以上不同供試品同時檢測，在第一個批號設(shè)置完成后，更改供試品名稱、批號、稀釋倍數(shù)，點擊自動設(shè)置，重復(fù)以上步驟至所有供試品設(shè)置完成。鼠標點擊【陰陽性對照】畫面，選中【陰性對照】，填寫平行管數(shù)，選中【陽性對照】，填寫平行管數(shù)。鼠標點擊【試管位置選擇】， 點擊【自動選擇】后點擊【開始

10、檢測】，程序設(shè)置完畢。文件存在最后設(shè)置的【供試品名稱】目錄下，以【供試品批號+當(dāng)前時間】為該試驗文件名。圖82.4.3試驗檢測2.4.3.1 溶解分裝鱟試劑 根據(jù)用量溶解鱟試劑，將溶解的鱟試劑混合在一起，分裝到無熱原的儀器專用檢測管內(nèi)，每只檢測管內(nèi)0.1ml （沒有氣泡）。2.4.3.2 加樣 取稀釋好的供試品溶液、供試品陽性溶液、陽性標準品溶液，根據(jù)所設(shè)定平行管數(shù)分別加入有鱟試劑的小試管中0.1ml或0.2ml（沒有氣泡），注意加樣前應(yīng)混合溶液30秒，且每個濃度加樣前應(yīng)更換加樣頭。另取細菌內(nèi)毒素檢查用水做陰性對照。2.4.3.3 檢測 每個供試品在加完樣后應(yīng)立即用封口膜封口，放入細菌內(nèi)毒素測

11、定儀設(shè)定位置，儀器自動開始檢測。試驗完成后，點擊【手動停止檢測】，停止數(shù)據(jù)采集。在【標準曲線】處選擇標準曲線后，計算機自動計算出結(jié)果。2.4.4 試驗報告打印 用鼠標點擊【報告打印預(yù)覽】，在報告打印預(yù)覽畫面點擊【打印】即可。2.5 多任務(wù)同時工作 EasyBET檢測軟件內(nèi)毒素分析儀檢測孔位足夠時，可以同時進行多個試驗。在一個試驗完成設(shè)置后，可以重新開始另一個試驗的設(shè)置。在試驗運行過程中,還可以打開以前的試驗數(shù)據(jù)進行分析查看。26 儀器參數(shù)設(shè)置 在主畫面中點擊右上角的儀器溫度顯示圖片，進入儀器設(shè)置畫面，在該畫面中還可以對儀器作3Q認證等試驗，如圖9所示，選擇儀器型號和通信端口，如果該兩項的內(nèi)容錯誤將無法進行試驗。根據(jù)所檢測的供試品的顏色決定選擇檢測波長，如果為無色透明的供試品選擇450nm，如果供試品帶有黃色可以選擇660nm，消除供試品顏色對檢測的干擾。圖92.7 觀察分析反應(yīng)曲線 在試驗的過程中和試驗結(jié)束后數(shù)據(jù)分析時可以觀察每一個試管的反應(yīng)曲線，圖10中的反應(yīng)曲線為內(nèi)毒素標準品的正常反應(yīng)曲線，如果供試品中存在的干擾成分未被排除，它的反應(yīng)曲線必定有所變化，該軟件提供了多種曲線顯示分析方法，其中反應(yīng)速率法可以區(qū)別出供試品中是否有葡聚糖。另外，根據(jù)使用的不同鱟試劑，要適當(dāng)調(diào)整顯示幅度、零化期時間、預(yù)設(shè)OD