選修一知識(shí)點(diǎn)歸納總結(jié)

1、文檔編碼 : CZ9H5M1D3R8 HD4O1X5H10E3 ZI3M8N1C4G9讀書(shū)之法,在循序而漸進(jìn),熟讀而精思專題一 課題一果酒和果醋的制作1,發(fā)酵：通過(guò)微生物技術(shù)的培育來(lái)生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過(guò)程；2,有氧發(fā)酵：醋酸發(fā)酵無(wú)氧發(fā)酵：酒精發(fā)酵乳酸發(fā)酵3,酵母菌是異養(yǎng)兼性厭氧菌型微生物真菌4,在有氧條件下,酵母菌進(jìn)行有氧呼吸,大量繁衍 C6H12O66O26H2O酶 6CO212H2O+能量5,在無(wú)氧條件下,酵母菌能進(jìn)行 酒精發(fā)酵；C6H12O6酶 2C2H5OH2CO2+能量6,20 左右最相宜酵母菌繁衍 酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度把握在 18 -25 7,在葡萄酒自然發(fā)酵的過(guò)程中 , 起主要作

2、用的是附著在葡萄皮表面的 野生型酵母菌. 在發(fā)酵過(guò)程中, 隨著酒精濃度的提高 , 紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液, 使葡萄酒顯現(xiàn)深紅色 . 在缺氧呈酸性的發(fā)酵液中,酵母菌可以生長(zhǎng)繁衍,而絕大多數(shù)其他微生物都因無(wú)法適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約；8,醋酸菌是單細(xì)胞細(xì)菌 原核生物,代謝類型是異養(yǎng)需氧型, 生殖方式為二分裂9,當(dāng)氧氣,糖源都充分時(shí),醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí),醋酸菌將 乙醇變?yōu)橐胰?再將乙醛變?yōu)榇姿?；C2H5OHO2 CH3COO酶 HH2O+能量10,把握發(fā)酵條件：醋酸菌對(duì) 氧氣的含量特殊靈敏,當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí),即使只是短時(shí)間中斷通入氧氣,也會(huì)引起醋酸菌死亡；醋酸菌最適生長(zhǎng)溫

3、度為 短,又削減雜菌污染的機(jī)會(huì)；30 -35 ,把握好發(fā)酵溫度,使發(fā)酵時(shí)間縮11,試驗(yàn)流程：選擇葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵果酒（醋酸發(fā)酵果醋） 先沖洗在去梗 12,酒精檢驗(yàn)：果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生,可以用 精反應(yīng)顯現(xiàn)灰綠色；重鉻酸鉀來(lái)檢驗(yàn)；在酸性條件下,重鉻酸鉀與酒13,充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵 時(shí)用來(lái)排出二氧化碳的；出料口是用來(lái)取樣的；排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲 的膠管與瓶身相連接,其目的是防止空氣中微生物的污染；開(kāi)口向下的目的 是有利于二氧化碳的排出；使用該裝置制酒時(shí),應(yīng)當(dāng)關(guān)閉充氣口；制醋時(shí),應(yīng)當(dāng)充氣口連接氣泵,輸入氧氣；專題二課題一微生物的試驗(yàn)室培育1,培

4、育基：人們依據(jù)微生物對(duì)養(yǎng)分物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長(zhǎng)繁衍的養(yǎng)分基質(zhì)；培育基依據(jù)物理性質(zhì)可分為液體培育基 劑瓊脂后,制成瓊脂固體培育基；半固體培育基和固體培育基；在液體培育基中加入凝固微生物在固體培育基表面生長(zhǎng),可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落；依據(jù)菌落的特點(diǎn)可以判定是哪一種菌；依據(jù)培育基的用途,可將培育基分為選擇培育基和鑒定培育基；選擇培育基是指在培育基中加入 某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物生長(zhǎng),促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)；鑒別培育基是依據(jù)微生物 的特點(diǎn),在培育基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的,用以鑒別不同類別的微生物；培育基的化學(xué)成分包括：水,無(wú)機(jī)鹽,碳源,氮源,（生長(zhǎng)因子）等；2,無(wú)菌技

5、術(shù)：獲得純潔培育物的關(guān)鍵是 防止外來(lái)雜菌的入侵,要留意以下幾個(gè)方面：對(duì)試驗(yàn)操作的空間,操作者的衣著和手,進(jìn)行清潔和消毒；將用于微生物培育的器皿,接種用具和培育基等器具進(jìn)行滅菌；為防止四周環(huán)境中微生物的污染,試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰鄰近進(jìn)行；試驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)防止已經(jīng)滅菌處理的材料用具與四周的物品相接觸；3,消毒與滅菌的區(qū)分第 1 頁(yè),共 7 頁(yè)讀書(shū)之法,在循序而漸進(jìn),熟讀而精思消毒指使用較為溫存的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部 一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）；消毒常用煮沸消毒法,巴氏消毒法（對(duì)于一些不耐高溫的液體）,化學(xué)藥劑消毒,紫外線消毒；滅菌就是指使用猛烈的理化因素殺死物體內(nèi)外

6、燒滅菌,干熱滅菌,高壓蒸汽滅菌；滅菌方法：接種環(huán),接種針,試管口等使用灼燒滅菌法；全部的微生物,包括芽孢和孢子；滅菌方法有灼玻璃器皿,金屬用具等使用干熱滅菌法,所用器械是干熱滅菌箱；培育基,無(wú)菌水等使用高壓蒸汽滅菌法,所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋4,制作牛肉膏蛋白胨固體培育基方法步驟：運(yùn)算,稱量,溶化,滅菌,倒平板；倒平板操作的步驟：（略）詳見(jiàn)課本（把握倒平板時(shí)間方法：手觸碰,剛好不在燙手時(shí)）平板冷凝后,皿蓋上會(huì)凝聚水珠,將 平板倒置,既可以防止培育基表面的水分過(guò)度地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基,造成污染；5,純化大腸桿菌微生物接種的方法最常用的是 平板劃線法和稀釋涂布平板法；平板劃線法

7、是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培育基表面連續(xù)劃線的操作；將集合的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面；在數(shù)次劃線后培育,可以分別到由 一個(gè)細(xì)胞繁衍而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體（菌落）；稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培育；分為系列 稀釋操作和涂布平板操作兩步；用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的 目的是：使集合在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞,從而能在培育基表面形成單個(gè)的菌落,以便于純化菌種；平板劃線法操作步驟：詳見(jiàn)課本平板劃線操作的爭(zhēng)論：為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作終止時(shí),仍舊需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作

8、的第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線終止后,接種環(huán)上殘留的菌種,使下一次劃線時(shí),接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端,從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加,使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐步削減,以便得到菌落；劃線終止后灼燒接種環(huán),能準(zhǔn)時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種,防止細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者；涂布平板操作的步驟：詳見(jiàn)課本,留意稀釋流程；6,菌種的儲(chǔ)存對(duì)于頻繁使用的菌種,可以接受 暫時(shí)保藏的方法；暫時(shí)保藏方法缺點(diǎn)：這種方法儲(chǔ)存的時(shí)間不長(zhǎng),菌種簡(jiǎn)潔被污染或產(chǎn)生變異；對(duì)于需要長(zhǎng)期儲(chǔ)存的菌種,可以接受 甘油管藏的方法；7,疑難解答生物的養(yǎng)分人及動(dòng)物的養(yǎng)分物質(zhì)

9、：水,無(wú)機(jī)鹽,糖類,脂質(zhì),蛋白質(zhì),維生素 六類；植物的養(yǎng)分物質(zhì)：礦質(zhì)元素,水,二氧化碳 等三類；微生物的養(yǎng)分物質(zhì)：水,無(wú)機(jī)鹽,碳源,氮源及特殊養(yǎng)分物質(zhì)（生長(zhǎng)因子）五類；（2）確定培育基制作是否合格的方法將未接種的培育基在恒溫箱中保溫12 天,無(wú)菌落生長(zhǎng),說(shuō)明培育基的制備是勝利的；讀書(shū)之法,在循序而漸進(jìn),熟讀而精思專題二課題二土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)1,尿素是一種重要的氮肥,農(nóng)作物 不能直接吸取利用,而是第一通過(guò)土壤中的細(xì)菌將 尿素分解為氨和CO2,這是由于細(xì)菌能合成 脲酶；2,科學(xué)家能從熱泉中把耐熱細(xì)菌選擇出來(lái)是由于 熱泉的高溫條件剔除了絕大多數(shù)微生物,這樣也適用于試驗(yàn)室中微生物的選擇

10、,原理是 人為供應(yīng)有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括養(yǎng)分,溫度,PH等）,同時(shí)抑制或阻擋其他微生物生長(zhǎng)；微生物學(xué)中,將答應(yīng)特定種類的微生物生長(zhǎng),同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培育基稱為 選擇培育基；3,稀釋涂布平板法常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目,這種方法稱作 活菌計(jì)數(shù)法；除此之外,顯微鏡直接計(jì)數(shù)也是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法；4,接受稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí),培育基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來(lái)源于 樣品稀釋液中一個(gè)活菌；通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能估量出樣品中大約含有多少活菌；為了保證結(jié)果精確,一般選擇菌落數(shù)在30300 的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；估量出每克樣品中的菌落數(shù)的運(yùn)算方法是（平均菌落數(shù)涂布的稀釋液體積

11、）稀釋倍數(shù)；利用稀釋涂布平板法勝利統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵是 恰當(dāng)?shù)南♂尪龋?,統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)比活菌的實(shí)際數(shù)目低；這是由于當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在一起時(shí),平板上觀看到的只是一個(gè)菌落；因此,統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用 菌落數(shù)表示；6,依據(jù)圖示27 填寫(xiě)以下試驗(yàn)流程：配制土壤溶液 系列稀釋 涂布平板與培育 菌落計(jì)數(shù)7,土壤微生物主要分布在距地表 38cm 的近中性土壤中,約 7080 為細(xì)菌；8,分別不同的微生物接受不同的稀釋度,其緣由是 不同微生物在土壤中含量不同,其目的是保證獲得菌落數(shù)在30 300 之間,適于計(jì)數(shù)的平板；細(xì)菌稀釋度為10 4,10 5,10 6 ,放線菌稀釋度為 10 3,10 4,10 5,真菌稀釋

12、度為 10 2,10 3,10 4；9,培育不同微生物往往需要不同培育溫度；細(xì)菌一般在3037培育12d,放線菌一般在2528 培育5 7d,霉菌一般在2528 的溫度下培育34d；因培10,在菌落計(jì)數(shù)時(shí),每隔24h 統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目；選取菌落數(shù)目穩(wěn)固時(shí)的記錄作為結(jié)果,以防止養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目；11,菌落的特點(diǎn)包括外形,大小,隆起程度,顏色等方面；12 試驗(yàn)過(guò)程取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要 滅菌；應(yīng)在火焰旁稱取土壤 10 g；將稱好的土樣倒入盛有 90mL 無(wú)菌水的錐形瓶中,塞好棉塞；在稀釋土壤溶液的過(guò)程中,每一步都要在 火焰旁進(jìn)行；試驗(yàn)時(shí)要對(duì)培育皿作好標(biāo)記；注明培

13、育基類型,培育時(shí)間,稀釋度,培育物 等；為了提高效率,在操作時(shí)更加有條不紊,應(yīng)當(dāng) 事先規(guī)劃時(shí)間；13 ,在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中,細(xì)菌合成的 脲酶將尿素分解成了氨；氨會(huì)使培育基的堿性 增強(qiáng),PH 上升；因此,我們可以通過(guò)檢測(cè)培育基 pH 變化來(lái)判定該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生；在以 尿素為唯獨(dú)氮源的培育基中加入酚紅指示劑；培育某種細(xì)菌后,假如 尿素；PH 上升,指示劑將變紅,說(shuō)明該細(xì)菌能夠分解第 3 頁(yè),共 7 頁(yè)讀書(shū)之法,在循序而漸進(jìn),熟讀而精思專題三課題一菊花的組織培育1,細(xì)胞分化：在生物個(gè)體發(fā)育過(guò)程中,細(xì)胞在外形,結(jié)構(gòu)和生理功能上顯現(xiàn)穩(wěn)固性差異 的過(guò)程；2,離體的植物組織或細(xì)胞,在培育了一段時(shí)間

14、以后,會(huì)通過(guò)細(xì)胞分裂,形成愈傷組織,愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)章,是一種高度液泡化的呈無(wú)定外形狀的薄壁細(xì)胞；3,由高度分化的植物組織或細(xì)胞 產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程,稱為植物細(xì)胞的 脫分化,或者叫做去分化；4,脫分化產(chǎn)生的愈傷組織連續(xù)進(jìn)行培育,又可以 重新分化成根或芽等器官,這個(gè)過(guò)程叫做再分化；再分化形成的試管苗,移栽到地里,可以發(fā)育成完整的植物體；5,全能性：具有某種生物全套遺傳信息的任何一個(gè)活細(xì)胞,都具有發(fā)育成完整個(gè)體的才能,即每個(gè)生物細(xì)胞都具有全能性；但在生物體的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中并不表現(xiàn)出來(lái),條件下,通過(guò)基因的 選擇性表達(dá),構(gòu)成不同組織和器官；這是由于在特定的時(shí)間和空間6,植物組織培育技術(shù)的應(yīng)

15、用有：實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的 快速繁衍；培育脫毒作物；制作人工種子；培育作物新品種以及細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等；7,比較根尖分生組織和愈傷組織的異同組織類型細(xì)胞來(lái)源細(xì)胞外形細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞排列細(xì)胞去向8,影響植物組織根尖受精卵正方形無(wú)液泡緊密分化成多種分生組織細(xì)胞組織愈傷組織高度分化細(xì)胞無(wú)定形高度液泡化疏松再分化成新個(gè)體相同點(diǎn)都通過(guò)有絲分裂進(jìn)行細(xì)胞增殖培育的條件材料：不同的植物組織,培育的難易程度差別很大；植物的種類,材料的年齡和儲(chǔ)存時(shí)間的長(zhǎng)短等都會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果；菊花組織培育一般選擇未開(kāi)花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料；養(yǎng)分：離體的植物組織和細(xì)胞,對(duì)養(yǎng)分,環(huán)境等條件的要求相對(duì)特殊,需要配制相宜的培育基；常用

16、的培育基是MS 培育基,其中含有的大量元素是N,P,S,K,Ca,Mg ,微量元素是Fe,Mn ,B,Zn,Cu,Mo ,I,Co,有機(jī)物有甘氨酸,煙酸,肌醇,維生素,蔗糖等；激素：植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂,脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素；在生長(zhǎng)素存在的情形下,細(xì)胞分裂素的作用顯現(xiàn)加強(qiáng)趨勢(shì)；在培育基中需要添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等植物激素,其使用種類,濃度,使用的先后次序,用量的比例 等都影響結(jié)果；生長(zhǎng)素用量比細(xì)胞分裂素用量 比值高時(shí),有利于根的分化,使用次序 試驗(yàn)結(jié)果抑制芽的形成；比值低時(shí),有利于芽的分化,抑制根的形成；先生長(zhǎng)素,后比值適中是,促進(jìn)愈傷組織 的形成；有利于分裂但不

17、分化細(xì)胞分裂素先環(huán)境條件：PH,溫度,光等環(huán)境條件；不同的植物對(duì)細(xì)胞分裂素,各種條件的要求往往不同；進(jìn)行菊花的組織培 細(xì)胞既分裂也分化后生長(zhǎng)素養(yǎng),一般將pH 把握在58 左右,溫度把握在 1822,并且每日用日光燈照耀 12h. 同時(shí)使用 分化頻率提高9,操作流程配制MS 固體培育基：配制各種母液：將各種成分按配方比例配制成的濃縮液（培育基母液）；使用時(shí)依據(jù)母液的濃縮倍數(shù),運(yùn)算用量,并加蒸餾水稀釋；配制培育基：應(yīng)加入物質(zhì)有瓊脂,蔗糖,大量元素,微量元素,有機(jī)物和植物激素的母液,并用蒸餾水定容到1000 毫升；在菊花組織培育中,可以不添加植物激素；因菊花莖段組織培育比較簡(jiǎn)潔；第 4 頁(yè),共 7

18、頁(yè)讀書(shū)之法,在循序而漸進(jìn),熟讀而精思滅菌：實(shí)行的滅菌方法是 高壓蒸汽滅菌；微生物培育基以 有機(jī)養(yǎng)分為主,MS 培育基就需供應(yīng)大量 無(wú)機(jī)養(yǎng)分；外植體的消毒 外植體：用于離體培育的植物器官或組織片段；選取菊花莖段時(shí),要取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝；菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉,用軟刷輕輕刷洗,刷洗后在流水下沖洗 20min 左右；用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分,放入體積分?jǐn)?shù)為 70%的酒精中搖動(dòng)23 次,連續(xù) 67s,立刻將外植體取出,在無(wú)菌水中清洗；取出后仍用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面水分,放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.1%的氯化汞溶液中12min ；取出后,在無(wú)菌水中至少清洗3 次,漂洗消毒液；留意：對(duì)外植體

19、進(jìn)行表面消毒時(shí),就要 考慮藥劑的消毒成效,又要考慮植物的耐受才能；接種：接種過(guò)程中插入外植體時(shí) 外形學(xué)上端朝上,每個(gè)錐形瓶接種 78 個(gè)外植體；外植體接種與細(xì)菌接種相像,操作步驟相同,而且都要求無(wú)菌操作；培育：應(yīng)當(dāng)放在無(wú)菌箱中進(jìn)行,并定期進(jìn)行消毒,保持相宜的溫度（1822）和光照（12h）移栽：栽前應(yīng)先打開(kāi)培育瓶的封口膜,讓其在培育間生長(zhǎng)幾日,然后用流水清洗根部培育基；然后將幼苗移植到消過(guò)毒的蛭石或珍寶巖等環(huán)境中生活一段時(shí)間,進(jìn)行壯苗；最終進(jìn)行露天栽培；栽培10,外植體在培育過(guò)程中可能會(huì)被污染,緣由有：外植體消毒不完全；培育基滅菌不完全；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等；專題四課題一果膠酶在

20、果汁生產(chǎn)中的作用1,由水果制作果汁要解決兩個(gè)主要問(wèn)題：一是果肉的 出汁率低,耗時(shí)長(zhǎng)；二是榨取的果汁渾濁,黏度高,簡(jiǎn)潔發(fā)生沉淀；人們使用果膠酶,纖維素酶等來(lái)解決上述問(wèn)題；2,植物細(xì)胞壁以及胞間層的主要組成成分有 影響出汁率,又使果汁渾濁；3,果膠是植物細(xì)胞壁以及胞間層的主要組成成分纖維素和果膠；并且兩者不溶于水,在果汁加工中,既之一,它是由半乳糖醛酸聚合而成的一種高分子化合物,不溶于水；在果汁加工中,果膠不僅會(huì)影響出汁率,仍會(huì)使果汁渾濁；果膠酶的作用是能夠?qū)?果膠分解成可溶性的半乳糖醛酸,瓦解植物的細(xì)胞壁及胞間層,并且使果汁變得澄清；4,果膠酶是一類酶總稱,包括果膠分解酶,多聚半乳糖醛酸酶,果膠

21、酯酶_等；5,酶的活性是指酶催化確定化學(xué)反應(yīng)的的才能；酶活性的高低可以用在確定條件下,酶所催化的某一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速度來(lái)表示；在科學(xué)爭(zhēng)論與工業(yè)生產(chǎn)中,酶反應(yīng)速度用單位時(shí)間內(nèi),單位體積中 反應(yīng)物的減小量或產(chǎn)物的增加量來(lái)表示；6,影響酶活性的因素包括：溫度,PH,酶的抑制劑等；7,當(dāng)酶處于最適溫度或最適pH 時(shí),酶的活性最高；如溫度過(guò)高,過(guò)酸或過(guò)堿,就導(dǎo)致酶變性失活在確定范疇內(nèi),果肉的出汁率和果汁的澄清度 8,探究溫度對(duì)酶活性的影響與果膠酶的活性成正比；此試驗(yàn)的自變量是溫度；依據(jù)單一變量原就,你應(yīng)確保各試驗(yàn)組相同的變量有 _PH,底物濃度底物量,試驗(yàn)器材,酶的用量 等等_；9,探究PH 對(duì)酶活性的

22、影響探究pH 對(duì)果膠酶活性的影響,只須將溫度梯度改成pH 梯度,并選定一個(gè)相宜的溫度進(jìn)行水浴加熱；反應(yīng)液中的pH 可以通過(guò)體積分?jǐn)?shù)為 0.1%的氫氧化鈉或鹽酸溶液進(jìn)行調(diào)劑；10 ,探究果膠酶的用量爭(zhēng)論的變量是果膠酶的用量,其他因素都應(yīng)保持不變；試驗(yàn)時(shí)可以配制不同濃度的果膠酶溶液,也可以只配制一種濃度的果膠酶溶液,然后使用不同的體積即可；需要留意的是,反應(yīng)液的pH 必需相同,第 5 頁(yè),共 7 頁(yè)讀書(shū)之法,在循序而漸進(jìn),熟讀而精思否就將影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)專題五課題三血紅蛋白的提取和分別1,分別蛋白質(zhì)原理：蛋白質(zhì)外形,大小,電荷性質(zhì)和多少,溶解度,吸附性質(zhì),親和力等千差萬(wàn)別；2,凝膠色譜法（支配色譜

23、法）：原理：分子量大的分子通過(guò)多孔凝膠顆粒的間隙,顆粒內(nèi)部,路程長(zhǎng),流淌慢；路程短,流淌快；分子量小的分子穿過(guò)多孔凝膠凝膠材料：多孔性,多糖類化合物,如 葡聚糖,瓊脂糖；分別過(guò)程：混合物上柱洗脫 大分子流淌快,小分子流淌慢收集大分子 收集小分子洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液,促使蛋白質(zhì)分子的差速流淌；作用：分別蛋白質(zhì),測(cè)定生物大分子分子量,蛋白質(zhì)的脫鹽等；3,緩沖溶液原理：由弱酸和相應(yīng)的強(qiáng)堿弱酸鹽組成,調(diào)劑酸和鹽的用量,可配制不同 pH 的緩沖液；緩沖液作用：抵制外界酸,堿對(duì)溶液 4,凝膠電泳法：pH 的干擾而保持pH 相對(duì)穩(wěn)固；原理：不同蛋白質(zhì)的 帶電性質(zhì),電量,外形和大小不同,在電場(chǎng)中受

24、到的作用力大小,方向,阻力不同,導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的 運(yùn)動(dòng)方向和運(yùn)動(dòng)速度不同；分別方法：瓊脂糖凝膠電泳,聚丙烯酰胺凝膠電泳 等；分別過(guò)程：在確定 pH 下,使蛋白質(zhì)基團(tuán)帶上正電或負(fù)電；加入帶負(fù)電荷多的 SDS,形成“蛋白質(zhì)SDS 復(fù)合物”,使蛋白質(zhì)遷移速率 僅取決于分子大?。?,試驗(yàn)步驟樣品處理：紅細(xì)胞的洗滌：洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白,采集的血樣要準(zhǔn)時(shí)接受低速短時(shí)間離心分別紅細(xì)胞,然后用膠頭吸管吸出上層透亮的黃色血漿,將下層暗紅色的紅細(xì)胞液體倒入燒杯,再加入五倍體積的生理鹽水,緩慢攪拌 10min ,低速短時(shí)間離心,如此重復(fù)洗滌三次,直至上清液中沒(méi)有黃色,說(shuō)明紅細(xì)胞已洗滌潔凈；血紅蛋白

25、的釋放：在蒸餾水和甲苯作用下,紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白；加入甲苯的目的是溶解細(xì)胞膜,有利于血紅蛋白的釋放和分別；分別血紅蛋白溶液：將攪拌好的混合溶液離心后,試管中的溶液分為 4 層；第一層為無(wú)色透亮的 甲苯層,第2 層為白色薄層固體,是 脂溶性物質(zhì)的沉淀層,第3 層是紅色透亮液體,這是 血紅蛋白的水溶液,第4 層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物；粗分別（即透析）：透析可以去除樣品中 分子量較小的雜質(zhì),或用于更換樣品的緩沖液；純化調(diào)劑緩沖液面：打開(kāi)色譜柱下端的流出口,使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊,關(guān)閉出口；加入蛋白質(zhì)樣品：用吸管將透析后的樣品沿管壁圍繞移動(dòng)加到色譜柱的頂端；留意不要破壞凝

26、膠面；加樣后,打開(kāi)下端出口,使樣品滲入凝膠床內(nèi),等樣品完全滲入凝膠層后,關(guān)閉出口；調(diào)劑緩沖液面：加入 20mmol/L 的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度洗脫：連接緩沖液洗脫瓶,打開(kāi)下端出口,進(jìn)行洗脫；收集分裝蛋白質(zhì)：待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí),用試管收集；純度鑒定：SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳（選做）6,如何檢測(cè)凝膠色譜柱的裝填是否勝利 由于凝膠是一種半透亮的介質(zhì),因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的 日光燈,檢查凝膠是否裝第 6 頁(yè),共 7 頁(yè)讀書(shū)之法,在循序而漸進(jìn),熟讀而精思填得勻稱；此外,仍可以加入大分子的有色物質(zhì),觀看色帶移動(dòng)的情形；假如色帶勻稱,狹窄,平整,說(shuō)明凝膠色譜柱的性能良好；假如色譜柱顯現(xiàn)紋路或是氣泡,輕小扣打柱體以排除氣泡,排除不了時(shí)要重新裝柱；7,為什么凝膠的裝填要緊密,勻稱？假如凝膠裝填得不夠緊密,勻稱,就會(huì)在色譜柱內(nèi)形成無(wú)效的間隙,使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些間隙中通過(guò),攪亂洗脫液的流淌次序,影響分別的成效；8,加入檸檬酸鈉有何目的？為什么要低速,短時(shí)離心？為什么要緩慢攪拌？防止血液凝固；防止白細(xì)胞沉淀；防止紅細(xì)胞破