泡桐花總黃酮抗哮喘豚鼠氣道炎癥的作用機(jī)制探討

1、泡桐花總黃酮抗哮喘豚鼠氣道炎癥的作用機(jī)制討論【關(guān)鍵詞】豚鼠；,慢性氣道變應(yīng)性炎癥；,泡桐花總黃酮摘要：目的通過豚鼠哮喘模型研究泡桐花總黃酮抗哮喘氣道變應(yīng)性炎癥的作用。方法以卵蛋白A致敏豚鼠為動(dòng)物模型，灌胃途徑予以泡桐花總黃酮大、小劑量，觀察各組豚鼠支氣管肺泡灌洗液BALF中白細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞ES數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞特異性趨化因子Etaxin的改變。結(jié)果泡桐花總黃酮可顯著延長(zhǎng)致敏豚鼠的引喘埋伏期，不同程度地抑制BALF中的ES和白細(xì)胞總數(shù)及氣道上皮Etaxin的過度表達(dá)。結(jié)論泡桐花總黃酮對(duì)哮喘具有一定的保護(hù)作用，其中泡桐花總黃酮可能通過調(diào)控Etaxin在氣道黏膜上皮的過度表達(dá)，進(jìn)而抑制Es向哮

2、喘氣道的募集，消除氣道炎癥，成為其發(fā)揮抗過敏性哮喘的重要環(huán)節(jié)。關(guān)鍵詞：豚鼠；慢性氣道變應(yīng)性炎癥；泡桐花總黃酮Abstrat：bjetiveThisstudyasdesignedtinvestigatetheeffetsfflavnidsinFrutusPaulniaenIARandLAR.ethdsAnguineapigasthatidel,induedbyVAasadinisteredbyintragastrigavage(ig)ithdifferentdsesfflavnidsinFrutusPaulniae.Thelatentperid,thenuberfaidphilsandtheEt

3、axininbrnhalvelarlavagefluid(BALF)erebserved.ResultsTheflavnidsinFrutusPaulniaeulddelaythelatentperidfairayinflaatinsignifiantly.Thenuberfaidphilsandttalhitebldellinbrnhalvelarlavagefluid(BALF)asrestrainedbyflavnidsinFrutusPaulniae.Inadditin,theflavnidsinFrutusPaulniaeuldinhibittheverexpressinfEtaxi

4、ninthetraheaepitheliu.nlusinTheresultssuggestthatflavnidsinFrutusPaulniaeanantagnizeairayinflaatinbyinhibitingtheverexpressinftheEtaxinintraheaepitheliu.Keyrds：PauluniafrtunEi(Sesl.)Hesl;Flavnids;Brnhiaastha氣道炎癥是支氣管哮喘(astha)的病理根底，有多種炎癥細(xì)胞、炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子參與其炎癥過程1。研究發(fā)現(xiàn)2嗜酸性粒細(xì)胞ES趨化聚集，在氣道炎癥的形成過程中起重要作用，Etaxin是ES

5、的選擇性趨化劑3，也是ES在哮喘發(fā)病過程中選擇性增加的原因。因此，調(diào)控Etaxin的過度表達(dá)，抑制ES在氣道內(nèi)的募集，消除氣道炎癥，對(duì)治療哮喘具有關(guān)鍵性意義。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道4，5，少常用草藥泡桐花在支氣管哮喘的臨床治療上具有一定的效果；泡桐花浸膏可以明顯改善哮喘豚鼠肺組織的病理損傷，對(duì)哮喘豚鼠有顯著的治療作用；泡桐花主要成分6為揮發(fā)油、總黃酮、熊果酸等，其中總黃酮含量較豐富3.081%。我們以泡桐花總黃酮為研究對(duì)象，采用ig給藥途徑，結(jié)合圖象分析技術(shù)討論其抗哮喘作用及其機(jī)制。1材料與方法1.1動(dòng)物與分組安康白化豚鼠，雌雄各半，體重20050g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為模型、陽性、空白對(duì)

6、照組和泡桐花總黃酮大、小劑量組。10只/組。1.2藥品與試劑卵白蛋白valbuin，A：Siga公司，Grade；Etaxin一抗(BA1469，Rabbitanti-Etaxin)武漢博士德生物工程，相應(yīng)二抗試劑盒及陽性對(duì)照片購自北京中山生物技術(shù)；醋酸地塞米松片，浙江仙琚制藥股份，批號(hào)051247。泡桐花總黃酮由鄭州大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)研究室提供。1.3動(dòng)物誘喘及用藥參照宮兆華7方法，常規(guī)飼養(yǎng)觀察3d無異常后，予10A生理鹽水(N.S)溶液200g/kgip致敏，并于當(dāng)天開場(chǎng)按表1劑量給藥。第15天時(shí)，予5%A的N.S溶液霧化吸入誘導(dǎo)哮喘發(fā)作。用哮喘發(fā)作動(dòng)物取出后的表現(xiàn)為咳嗽、呼吸困難、煩躁、抽

7、搐、跌倒甚至死亡)的動(dòng)物進(jìn)展實(shí)驗(yàn)。1.4用藥過程中哮喘防治作用觀察用藥第5，12天及第15天，3次對(duì)豚鼠進(jìn)展激發(fā)實(shí)驗(yàn)。予5%A的N.S溶液霧化吸入激發(fā)10s，封閉時(shí)間共20s，觀察記錄各組動(dòng)物哮喘嚴(yán)重程度，取第15天的引喘埋伏期自霧化開場(chǎng)至豚鼠腹肌痙攣、腹部凹陷出現(xiàn)的時(shí)間作為引喘埋伏期，超過6in者以360s計(jì)算為統(tǒng)計(jì)指標(biāo)。在第5，12天的激發(fā)過程中，先后有8只動(dòng)物大、小劑量組各2只，模型組3只，陽性組1只因反響劇烈，搶救不及而窒息死亡。1.5BALFbrnhalvelarlavagfluidBALF的采集與細(xì)胞計(jì)數(shù)暴露豚鼠氣管肺，用絲線結(jié)扎右肺門處，行氣管插管灌洗左肺。灌入N.S5l抽吸2次

8、2次，灌洗回收率大于80%，無菌離心1500r/in10in，沉淀細(xì)胞以Hanks液處理后即刻在顯微鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)，細(xì)胞濃度調(diào)至2106/l，涂片，瑞氏染色，計(jì)數(shù)白細(xì)胞總數(shù)和ES數(shù)。1.6免疫組化Etaxin檢測(cè)摘取右肺中葉，放入乙醇、醋酸和甲醛混合固定液中固定48h。石蠟切片43張脫蠟至水，行免疫組化EtaxinES趨化性細(xì)胞因子染色。免疫組化操作按說明書進(jìn)展，DAB顯色。另設(shè)不加一抗的切片作陰性對(duì)照。每只動(dòng)物在細(xì)支氣管黏膜各隨機(jī)選擇5個(gè)Ht視野，計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)每個(gè)Ht視野Etaxin表達(dá)陽性信號(hào)的積分光密度ID，以平均值表示該動(dòng)物氣道Etaxin陽性表達(dá)程度。1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有

9、數(shù)據(jù)以s表示，使用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)展分析。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2結(jié)果2.1泡桐花總黃酮對(duì)豚鼠引喘埋伏期的影響結(jié)果說明，各組造模動(dòng)物的引喘埋伏期均較正常組縮短，說明造模動(dòng)物皆發(fā)生了哮喘反響；各用藥組與模型對(duì)照組比擬具有顯著性意義，P0.05或0.01，說明各用藥組對(duì)哮喘具有不同程度的保護(hù)作用。結(jié)果見表1。表1泡桐花總黃酮對(duì)豚鼠引喘埋伏期的影響略與模型對(duì)照組比擬，*P0.05，*P0.012.2對(duì)BALF中白細(xì)胞總數(shù)與ES計(jì)數(shù)的影響結(jié)果說明，泡桐花總黃酮大劑量和陽性藥對(duì)BALF中白細(xì)胞總數(shù)和ES計(jì)數(shù)有抑制作用，與模型組比擬，差異有極顯著性意義P0.01。結(jié)果見表2。表2對(duì)BALF中白細(xì)

10、胞總數(shù)與ES計(jì)數(shù)的影響略與模型對(duì)照組比擬，*P0.05，*P0.012.3豚鼠氣道上皮表達(dá)Etaxin陽性蛋白信號(hào)的圖象分析鏡下Etin陽性信號(hào)主要位于支氣管黏膜上皮、肺泡上皮和平滑肌細(xì)胞、肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿，內(nèi)含棕黃色顆粒物質(zhì)。圖象分析結(jié)果顯示，模型組支氣管黏膜上皮Etaxin表達(dá)陽性信號(hào)的ID顯著高于空白組，差異有顯著性意義P均0.01；與模型組比擬，陽性藥和總黃酮大劑量組表達(dá)Etin陽性蛋白信號(hào)細(xì)胞的ID明顯降低，差異有顯著性意義P0.05。結(jié)果見表3。表3對(duì)豚鼠氣道Etaxin陽性細(xì)胞數(shù)量的影響略與模型對(duì)照組比擬，*P0.05,*P0.013討論哮喘(astha)是一種由多種因素引起

11、的以可逆性氣道阻塞、氣道高反響和氣道炎癥為特征的免疫變態(tài)反響性疾病1，2。慢性氣道炎癥是哮喘發(fā)病的一個(gè)重要因素，有多種炎癥細(xì)胞、炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子參與其炎癥過程。氣道炎癥是氣道高反響(BrnhialHyperrespnsiveness，BHR)的根底，無論過敏性還是非過敏性哮喘，氣道炎癥都以Es的浸潤(rùn)募集和激活為最終途徑，而哮喘時(shí)異常高表達(dá)于氣道上皮的Etaxin作為ES高度選擇性的化學(xué)趨化劑，成為ES在哮喘發(fā)病過程中選擇性增加的原因2。研究發(fā)現(xiàn)，浸潤(rùn)于哮喘模型動(dòng)物細(xì)支氣管黏膜的ES數(shù)與該部位Etaxin陽性表達(dá)程度呈顯著正相關(guān)8。因此，調(diào)控Etaxin的過度表達(dá)，抑制Es在氣道內(nèi)的募集，消除

12、氣道炎癥，對(duì)治療哮喘具有關(guān)鍵性意義。在哮喘的治療藥物中，甾體類抗炎藥糖皮質(zhì)激素等是目前較有效的藥物，但因其副作用多，不宜長(zhǎng)期使用，導(dǎo)致哮喘的控制率不盡人意，死亡率較高1。中藥成分雖然復(fù)雜，但其具有整體調(diào)節(jié)且毒副作用相對(duì)較小的優(yōu)點(diǎn)，因此，從中藥中挖掘抗炎平喘成分是將來哮喘研究的重要內(nèi)容。本實(shí)驗(yàn)以引喘埋伏期、ES和Etaxin作為觀察指標(biāo)，討論泡桐花總黃酮抗支氣管哮喘變應(yīng)性炎癥的防治作用及其可能的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，泡桐花總黃酮可顯著延長(zhǎng)致敏豚鼠的引喘埋伏期，不同程度地抑制BALF中的ES和白細(xì)胞總數(shù)及氣道上皮Etaxin的過度表達(dá)，與模型組比擬有顯著差異。給藥5d和12d，泡桐花總黃酮大小劑量不

13、能預(yù)防再次吸入卵蛋白抗原后的哮喘發(fā)作，并且動(dòng)物死亡率高，這很可能是動(dòng)物對(duì)抗原敏感度高所致。給藥第15天，再次吸入卵蛋白抗原后的哮喘發(fā)作較平穩(wěn)，無死亡發(fā)生，可能與藥效發(fā)揮和免疫耐受有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，泡桐花總黃酮對(duì)哮喘具有一定的保護(hù)作用，其中泡桐花總黃酮可能通過調(diào)控Etaxin在氣道黏膜上皮的過度表達(dá)，進(jìn)而抑制Es向哮喘氣道的募集，消除氣道炎癥，成為其發(fā)揮抗過敏性哮喘的重要環(huán)節(jié)。參考文獻(xiàn)：1王國(guó)斌重視哮喘，正確診治和控制哮喘J.中原醫(yī)刊，2002，2911：402LuisTeranLhekinesandasthaJ.Iunlgytday，2000，21(5)：2353劉新，張?zhí)K，崔毅豚鼠氣道炎癥中Etaxin基因表達(dá)的意義J.微生物學(xué)雜志，2022，253：33.4全國(guó)中草藥匯編編寫組.全國(guó)中草藥匯編.北京：人民衛(wèi)生出版社，1975：466.5張永輝，劉宗花，杜紅麗，等中藥泡桐花浸膏對(duì)哮喘豚鼠肺組織作用的病理學(xué)研究J.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，19(6):473.6王曉，程傳格，劉建華.泡桐花精油化學(xué)