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1、DNA工DNA工段(如 和 等。段(如 和 等。器含pUC19E.coliDH5，1.5mLeppendorf限制性內(nèi)切酶EcoRIHind （1）LB（Tryptone）酵母提取物（Yeastextract）NaCl 20（3）Tris-HClEDTA(pH8.0高溫高壓滅菌15（4）0.2mol/L20（3）Tris-HClEDTA(pH8.0高溫高壓滅菌15（4）0.2mol/L（5）5mol/LKAcH2O （7）RNAA（RNaseA）將RNaseA10mmol/LTris-HCl(pH7.5),15mmol/LNaCl（8）TE10mmo/LTrisCl(pH8.0)，1mmol/

2、LEDTA(pH8.0)。高壓滅菌后（9）50TAE242g57.1mL（17.4200mL0.5mol/LEDTA（pH8.0）補(bǔ)足至4上放置3-5 離心小時(shí)，4下12000rpm5-10min（9）用400l70%乙醇洗滌沉淀1-2，4下8000rpm5-10min，（10）用20-50lTE（含RNaseA20g/mL），372.1DNA上放置3-5 離心小時(shí)，4下12000rpm5-10min（9）用400l70%乙醇洗滌沉淀1-2，4下8000rpm5-10min，（10）用20-50lTE（含RNaseA20g/mL），372.1DNAremier5.0VectorNTIDNA板上

3、），37水浴保溫2-3（1）取50TAE 左右的間隙。采用 222r(1.2.采用 222r(1.2.大腸桿菌E.coli DH5a 菌株，質(zhì)粒pUC1930.1mol/L 2100mg/mlLB蛋白胨（Tryptone）酵母提取物（Yeastextract）5NaCl 從LBE.30.1mol/L 2100mg/mlLB蛋白胨（Tryptone）酵母提取物（Yeastextract）5NaCl 從LBE.coliDH5單菌落，接種于3-5mlLB37培養(yǎng)基中，37振蕩培養(yǎng)2-3OD6000.5CaCl2將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入10ml離心管中，于4下6000rpm10棄去上清，用預(yù)冷的0.1mol/L 的CaCl22ml輕輕懸浮細(xì)胞,分裝到2支eppendorf中，冰上放置15-304下6000rpm10 的r(將上述菌液搖勻后取100l4.r(將上述菌液搖勻后取100l4.PCR 擴(kuò)增技 PCR 擴(kuò)增技 415cm30244Taq500mmol/L 15 2、5Taq6、引物溶液濃度500mm

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