《發(fā)酵染菌應急預案》

1、第7頁 共7頁發(fā)酵染菌應急預案發(fā)酵染菌應急預案 一、 染菌確認與報告 1、 染菌確認 a、連續(xù)3個樣品鏡檢發(fā)現(xiàn)有雜菌且有增多趨勢，無菌試驗樣品發(fā)現(xiàn)染菌，發(fā)酵各項理化指標有明顯異常變化的，可判斷為染菌；b、疑心染菌的罐，在不影響正常消費安排的前提下，繼續(xù)培養(yǎng)，且取無菌樣進展肉湯培養(yǎng)，同時做平皿劃線別離，直到結論明確。 2、 染菌報告 發(fā)酵車間員工發(fā)現(xiàn)染菌和疑似染菌的情況，必須立即報告車間主任，發(fā)酵車間主任理解情況后做初步判斷，并通知菌種車間、中試車間及消費部經(jīng)理，共同判斷、分析p 。 發(fā)酵車間應首先發(fā)現(xiàn)本車間的發(fā)酵染菌情況，否那么車間主任和工藝員應負有責任。 二、染菌現(xiàn)象描繪 對染菌罐樣品，應做

2、以下描繪： 1、 發(fā)現(xiàn)染菌的時間 確定從哪一個樣品開場發(fā)現(xiàn)染菌或疑心染菌，之后的樣品有沒有同樣的現(xiàn)象、雜菌量有無變化。 2、 鏡檢描繪 菌體形態(tài)結合美蘭和品紅兩種染色方法染色同時判斷，比擬所染雜菌與消費菌變化情況的形態(tài)，染色深淺，大小，數(shù)量與消費菌比擬。 注:鏡檢應觀察5個視野以上，Bt、桿菌肽發(fā)酵液樣品應稀釋10倍再涂片鏡檢。 3、 理化指標 pH變化情況，菌濃變化情況，對效價的影響，發(fā)酵液氣味 附樣品描繪記錄： 染菌分析p 記錄表 消費批號： 罐號 取樣時間 鏡檢情況 備注 分析p 討論情況： 結論： 簽名： 年 月 日 處理措施： 簽名： 年 月 日 預防措施： 簽名： 年 月 日 三、

3、染菌檢查與分析p 1、 思想認知 發(fā)生染菌情況后，各車間負責人應實事求是，主動查找車間范圍內的問題，杜絕本位，做到通力協(xié)作、齊心分析p 、查閱書籍、邏輯推理、認真檢查、嚴格試驗、廣泛討論、不辭辛苦。 2、染菌原因初步分析p a、種子罐早中期染菌：母瓶種子帶菌。 空氣過濾器“漏菌”。 滅菌不到位。 接種操作不嚴密。 其他意外事件如停電、閥門壞等。 b、發(fā)酵罐早中期染菌：種子罐帶菌。 空氣過濾器“漏菌”。 滅菌不到位。 移種操作不嚴密。 補料操作或補料液有問題。 其他意外事件如停電、閥門壞、設備漏等。 3、 雜菌別離、培養(yǎng) 對已確定染菌和隱性染菌的罐批，應取染菌發(fā)酵液或疑似染菌的發(fā)酵液無菌樣, 在

4、平皿上標明樣品的品名、來與取樣時間，然后在超凈工作臺上進展平皿劃線別離,在37恒溫箱內培養(yǎng), 每天在燈光下檢查有無雜菌生長。觀察雜菌菌落特征，并涂片鏡檢，確定所染雜菌的類型。 4、 雜菌耐熱性實驗 取染菌發(fā)酵液或疑似染菌的發(fā)酵液4瓶，標明品名、來與取樣時間取1瓶作對照，另3瓶分別在110、115、121滅菌30分鐘。然后將四個樣品定量接入肉湯培養(yǎng)基，在37恒溫箱內培養(yǎng),觀察肉湯的培養(yǎng)情況。 5、 設備檢查 a、空氣凈化系統(tǒng) 翻開預、精過濾器殼體，拆檢過濾器橡皮墊圈，檢查是否有老化、斷裂而失去密封效能；拆檢預、精過濾器濾芯，檢查是否有老化、斷裂，濾芯外觀孔目是否有堵塞、變形現(xiàn)象。 拆檢完畢，安裝

5、殼體并對過濾器法蘭接口、排污閥、空氣取樣閥、壓力表絲口、空氣閥、焊接縫等進展試壓、試漏，密封性能需到達無泄漏標準；且預濾、精濾的壓差應在0.05MPa的范圍之內。 b、罐體、閥門試漏 準備好洗衣粉水、刷子，蓋好罐蓋，關閉排氣閥，開啟進氣閥，給發(fā)酵罐加壓，當罐壓0.10MPa時，即可對該罐進展試漏。 試壓試漏方法：試外漏時，把洗衣粉水噴涂在閥門閥蓋、法蘭或絲口上，及閥門整體外部和管路焊縫等可能泄漏的地方。試內漏時，關閉待試閥門，把洗衣粉水噴涂在閥門排氣管孔上，經(jīng)涂抹局部如有氣泡產(chǎn)生，可以確定有漏點，應及時復檢。 c、蛇管、夾層試漏 放盡罐內積水,開空氣吹干或用布擦干罐內壁.將蛇管、夾套內充滿水，

6、注意觀察是否有水滲出。也可將夾套內的水放盡，將壓縮空氣通入蛇管、夾套內，用洗衣粉水噴涂，注意觀察是否有氣泡冒出。 6、 無菌試驗 發(fā)現(xiàn)染菌的設備處理后應做無菌試驗： a、培養(yǎng)基配方 原料名稱 配比 酵母粉 0.5 玉米漿 3 葡萄糖 1 氯化鈉 0.5 消前pH6.57.0。 b、培養(yǎng)條件 372，48hr以上 注：消后應取樣涂片鏡檢，作為鏡檢對照。 7、 菌種車間接種后，將肉湯培養(yǎng)基1520ml倒入接種瓶中，與殘留液混合， 37恒溫箱內培養(yǎng)48hr以上。 8、 環(huán)境檢查與清潔 a、超凈工作臺沉降菌檢測 b、菌種、發(fā)酵車間環(huán)境清潔 三、 染菌處理 1、染菌料液的處理 參照發(fā)酵異常現(xiàn)象的處理SO

7、P 2、設備處理 在染菌料液處理完后，在再次投料之前, 先徹底清洗染菌發(fā)酵罐罐體、附件, 同時進展嚴密程度檢查,以防滲漏，然后用甲醛等化學物質熏蒸處理,再用蒸汽滅菌包括各種附屬設備。 四、 預防措施與根底研究 1、 空氣系統(tǒng) 定時放水，保持枯燥。 定期拆檢,在過濾器滅菌時要防止過濾介質被沖翻或燒灼,還要防止發(fā)酵液倒流入空氣過濾器內。 2、 設備檢修 發(fā)酵罐及其附屬設備應做到無“滲漏”,無“死角”。定期試漏。 無菌操作室和菌種培養(yǎng)間定期消毒,以保持無菌狀態(tài)。 定期用甲醛熏消。 3、 操作要求 發(fā)酵罐放罐之后,對罐體和附屬設備進展全面清洗和檢查,去除罐內的殘渣,除盡罐壁上的污垢,去除罐內附件處的堆

8、積物。 培養(yǎng)基配制時要防止物料結塊或帶入異物,配料罐和輸送料液系統(tǒng)要定時清洗消毒。 對進入無菌室的全部物料、器械實行滅菌。 4、 人員培訓 a、對新員工培訓，應采取學徒制，指定有資質的技術工當師傅，并對新員工的學習進程做好跟蹤考核，保證其操作程度。 b、對員工進展劃線別離、無菌取樣等根本操作培訓，保證操作的準確性、一致性。 c、定期開展崗位操作競賽，對員工的操作質量進展考核，進步員工進展日常操作培訓的積極性。 5、 整理出公司各發(fā)酵產(chǎn)品正常消費時各周期的典型鏡檢照片各一套，搜集典型的染菌料液鏡檢照片和各種雜菌的鏡檢照片。 6、 研究不同的雜菌單獨培養(yǎng)時的情況，如形態(tài)，生長速度，培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、通氣、計數(shù)式接種量等因素的影響。 7、 研究不同的雜菌和消費菌種混合培養(yǎng)時的情況，重點是觀察在不同的混合時間混合時，雜菌