吩噻嗪類抗精神病藥物的分析

1、第十一章吩噻嗪類抗精神病藥物的分析The analysis of Phenothiazine antipsychotics 藥物分析學(xué)教研室1 本 章 內(nèi) 容 234基本結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 鑒 別 有關(guān)物質(zhì)檢查 含量測(cè)定 掌握：結(jié)構(gòu)、性質(zhì)和分析測(cè)定方法熟悉：鑒別試驗(yàn)及有關(guān)物質(zhì)檢查的方法了解：性狀、臨床特性及其體內(nèi)藥物分析 教學(xué)目的與要求各種幻覺(jué)妄想為主的患者稱為精神分裂癥I型情感淡漠、思維貧乏為主的患者稱為精神分裂癥II型 腦內(nèi)多巴胺神經(jīng)系統(tǒng)的功能亢進(jìn) 吩噻嗪類藥物吩噻嗪類藥物的作用機(jī)制 第一節(jié) 結(jié)構(gòu)與性質(zhì) Structure and Property 吩噻嗪類藥物為苯并噻嗪的衍生物，分子結(jié)構(gòu)中均含有

2、硫氮雜蒽母核。R: -H、-Cl、-CF3、-COCH3、-SCH2CH3R: 具有23碳鏈的二甲或二乙胺基，或含氮雜環(huán)如哌嗪和哌啶的衍生物吩噻嗪類藥物的基本結(jié)構(gòu) P292 典型藥物分子結(jié)構(gòu) 鹽酸異丙嗪Promethazine Hydrochloride鹽酸氯丙嗪Chlorpromazine Hydrochloride奮乃靜Perphenazine鹽酸氟奮乃靜Fluphenazine Hydrochloride癸氟奮乃靜Fluphenazine Decanoate鹽酸三氟拉嗪Trifluoperazine Hydrochloride鹽酸硫利達(dá)嗪Thioridazine Hydrochlorid

3、e鹽酸氯丙嗪Chlorpromazine Hydrochloride結(jié)構(gòu)分析 1. 硫氮雜蒽母核 （1）含S、N的三環(huán)共軛的大體系，S、N與苯環(huán)形成p-共軛具有紫外吸收光譜特征 （2）硫氮雜蒽環(huán)上硫原子為-2價(jià)，具有還原性，易氧化呈色 （3）硫氮雜蒽環(huán)上硫原子有兩對(duì)孤對(duì)電子，易與金屬離子絡(luò)合呈色 2. 取代基 R：脂烴胺基、哌嗪基，具堿性 R：鹵素 1. 弱堿性主要理化性質(zhì)堿性較強(qiáng)弱堿性極弱 脂肪烴氨基、哌嗪及哌啶等衍生物所含氮原子堿性較強(qiáng)，可用于鑒別和含量測(cè)定。2.易氧化性 光照時(shí)易氧化變質(zhì)，避光保存 易被H2SO4、HNO3、H2O2、FeCl3氧化 藥物硫酸硝酸過(guò)氧化氫鹽酸氯丙嗪顯紅色，

4、漸變?yōu)榈S色鹽酸異丙嗪顯櫻桃紅色，放置后顏色漸變深生成紅色沉淀，加熱即溶解，溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色奮乃靜顯深紅色，放置后紅色漸褪去鹽酸氟奮乃靜顯淡紅色，溫?zé)岷笞兂杉t褐色鹽酸三氟拉嗪生成微帶紅色的白色沉淀；放置后，紅色變深，加熱后變黃色鹽酸硫利達(dá)嗪顯藍(lán)色3.與金屬離子配合呈色 可與鈀離子配合生成有色化合物，可用于鑒別和含量測(cè)定。氧化產(chǎn)物亞砜和砜無(wú)此反應(yīng) 機(jī)理 4.紫外光吸收特性 硫氮雜蒽母核為共軛體系，紫外區(qū)三個(gè)吸收峰值，約205nm、254nm、300nm，最強(qiáng)多在254nm附近 藥物溶劑C (g/ml) max (nm) A百分吸收系數(shù)鹽酸氯丙嗪鹽酸 (91000)52540.4691530

5、6鹽酸異丙嗪鹽酸 (0.1mol/L)6249883937奮乃靜無(wú)水乙醇72580.65鹽酸氟奮乃靜鹽酸 (91000)10255553593鹽酸三氟拉嗪鹽酸 (120)10256630鹽酸硫利達(dá)嗪乙醇8264與3152位上的取代基(R)不同，會(huì)引起吸收峰發(fā)生位移 其結(jié)構(gòu)中-2 價(jià)的硫，易氧化，氧化產(chǎn)物砜及亞砜有四個(gè)吸收峰 5.紅外吸收特性 DABC第二節(jié) 鑒別試驗(yàn) Test of Identification 化學(xué)鑒別法 光譜法 色譜法 其他方法 第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)一般選用24種不同原理的分析方法組成一組鑒別試驗(yàn)鹽酸異丙嗪片 （ ChP2015）氧化顯色反應(yīng) 氯化物的鑒別反應(yīng) 薄層色譜法(TL

6、C)或高效液相色譜法(HPLC) 提取后紅外分光光度法(IR)鹽酸氯丙嗪 （ USP32-NF27） 紅外分光光度法(IR) 薄層色譜法(TLC) 氯化物的鑒別反應(yīng) 奮乃靜 （ EP7） 熔點(diǎn)測(cè)定 紅外分光光度法(IR) 鹽酸硫利達(dá)嗪（ JP15） 氧化顯色反應(yīng) 紅外分光光度法(IR) 氯化物的鑒別反應(yīng) 一、化學(xué)鑒別法 弱堿性 易氧化性 與金屬離子配合呈色生物堿沉淀劑反應(yīng) 氧化顯色反應(yīng)與鈀離子配合呈色反應(yīng)鹵素取代基吩噻嗪類藥物的鹽酸鹽含鹵素取代基的反應(yīng) 氯化物的鑒別反應(yīng) 【示例11-1 】鹽酸氯丙嗪鑒別 （JP15 ） 化學(xué)鑒別法1.與生物堿沉淀劑反應(yīng) 0.1g/20ml 稀鹽酸3滴三硝基苯酚

7、10ml 靜置5小時(shí)生成沉淀 測(cè)定熔點(diǎn)175179濾過(guò), 洗滌 丙酮重結(jié)晶105干燥1小時(shí)鹽酸氯丙嗪片鑒別？ 三硝基苯酚沉淀再用丙酮重結(jié)晶 測(cè)定熔點(diǎn)2. 氧化顯色反應(yīng)HNO3 FeCl3 H2SO4 H2O2 常用氧化劑 化學(xué)鑒別法常見(jiàn)顯色藥物硫酸硝酸過(guò)氧化氫鹽酸氯丙嗪顯紅色，漸變?yōu)榈S色鹽酸異丙嗪顯櫻桃紅色，放置后顏色漸變深生成紅色沉淀，加熱即溶解，溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色奮乃靜顯深紅色，放置后紅色漸褪去鹽酸氟奮乃靜顯淡紅色，溫?zé)岷笞兂杉t褐色鹽酸三氟拉嗪生成微帶紅色的白色沉淀；放置后，紅色變深，加熱后變黃色鹽酸硫利達(dá)嗪顯藍(lán)色化學(xué)鑒別法鹽酸異丙嗪（2）取本品約 0.1g，加水3ml 溶解后，加硝

8、酸 1ml，即生成紅色沉淀；加熱，沉淀即溶解，溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色。（1）取本品約 5mg，加硫酸5ml 溶解后，溶液顯櫻桃紅色；放置后，色漸變深?；瘜W(xué)鑒別法鹽酸氯丙嗪示例11-3 取本品約 10mg，加水1ml溶解后，加硝酸5滴即顯紅色，漸變?yōu)榈S色?；瘜W(xué)鑒別法鹽酸氯丙嗪片鑒別？ 示例11-4 示例11-5 11-6 JP15 三氯化鐵 紅色 3.與鈀離子配合顯色 【示例11-7 】癸氟奮乃靜的鑒別 ChP（2015） 取本品約 50mg，加甲醇2ml 溶解后，加 0.1% 氯化鈀溶液 3ml，即有沉淀生成，并顯紅色，再加過(guò)量的氯化鈀溶液，顏色變深?；瘜W(xué)鑒別法4.含鹵素取代基的反應(yīng)奮乃靜

9、綠色焰色反應(yīng) 化學(xué)鑒別法銅網(wǎng) P297 (紅色) (無(wú)色) 顯色反應(yīng)（如氟奮乃靜等含氟有機(jī)藥物） 4.含鹵素取代基的反應(yīng)鹽酸癸氟奮乃靜注射液 （ ChP2015） 加茜素鋯碳酸鈉及碳酸鉀各約100mg600灰化 20mg加鹽酸酸化、過(guò)濾 加熱、蒸干化學(xué)鑒別法氟化物 酸性茜素鋯試液 ZrF62- (黃色) 茜素磺酸鈉 5.氯化物的鑒別反應(yīng)鑒別反應(yīng) 與AgNO3的沉淀反應(yīng) 與MnO2等氧化劑的氧化還原反應(yīng) 化學(xué)鑒別法AgNO3沉淀反應(yīng)鑒別：由于硫氮雜蒽母核具有還原性，稀HNO3的加入使該類藥物發(fā)生氧化顯色反應(yīng)?？稍诠┰嚻啡芤褐屑影痹囈菏钩蓧A性，吩噻嗪類藥物析出，濾除沉淀，取濾液進(jìn)行試驗(yàn)。 注意 M

10、nO2等氧化劑的氧化還原反應(yīng)進(jìn)行鑒別： 注意：硫氮雜蒽母核和氯離子均被氧化鑒別方法：具有揮發(fā)性的氧化產(chǎn)物氯氣使 用水濕潤(rùn)的碘化鉀淀粉試紙顯藍(lán)色鑒別反應(yīng) 與AgNO3的沉淀反應(yīng) 與MnO2等氧化劑的氧化還原反應(yīng) 化學(xué)鑒別法5.氯化物的鑒別反應(yīng)化學(xué)法小結(jié) （一）與生物堿沉淀劑反應(yīng):與生物堿沉淀劑形成衍生物，測(cè)定熔點(diǎn)（二）氧化顯色反應(yīng)：S原子為-2價(jià)，具有還原性（三）與鈀離子配合呈色：Pd2+與S配合（四）含鹵素取代基的反應(yīng): 焰色反應(yīng)；顯色反應(yīng)（五）氯化物的鑒別反應(yīng)： AgNO3沉淀反應(yīng)；MnO2氧化還原反應(yīng)1. 紫外分光光度法 母核在205 nm、254 nm和300 nm三個(gè)波長(zhǎng)處附近有最大吸

11、收，最強(qiáng)峰多在 250265nm 2位上的取代基(R)不同，會(huì)引起吸收峰發(fā)生位移其結(jié)構(gòu)中-2 價(jià)的硫，易氧化，氧化產(chǎn)物砜及亞砜產(chǎn)生四個(gè)吸收峰二、光譜法 ChP2010收載的吩噻嗪類原料藥均采用紅外分光光度法(IR)鑒別，制劑提取后IR鑒別。光譜法2. 紅外分光光度法 鹽酸氯丙嗪鹽酸異丙嗪 光譜法三、色譜法主要用于吩噻嗪類藥物及其制劑的鑒別方法：對(duì)照品法 要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。TLC法 主要用于吩噻嗪類藥物及其制劑的鑒別 HPLC法 方法：對(duì)照品法要求在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對(duì)照品峰的tR一致。吩噻嗪類藥物還可以通過(guò)熔點(diǎn)測(cè)定進(jìn)行鑒別

12、【示例11-22】 EP7奮乃靜鑒別法：照毛細(xì)管法測(cè)定，本品的熔點(diǎn)為96100。 四、其他方法 DABC第三節(jié) 有關(guān)物質(zhì)檢查 Test of related substancesIs it pure?有哪些有關(guān)物質(zhì)？ 合成路線殘留的中間產(chǎn)物 有哪些有關(guān)物質(zhì)？ 貯藏過(guò)程中產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì) 有哪些有關(guān)物質(zhì)？ 有關(guān)物質(zhì): 一、殘留的中間產(chǎn)物 二、貯藏過(guò)程中產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì) 如何檢查這些有關(guān)物質(zhì)？ 測(cè)定方法 樣品液10.1%-1.0% 溶液 樣品液20.01%-0.1% 溶液 有關(guān)物質(zhì)檢查 高低濃度對(duì)照法薄層色譜（TLC） 高效液相色譜（HPLC） （一）TLC薄層色譜很直觀，定性定量用途寬。定性根據(jù)比移

13、值，半定量法靠斑點(diǎn)。樣1樣2TLC判斷:控制雜質(zhì)斑點(diǎn)個(gè)數(shù)， 控制雜質(zhì)種類 樣1雜質(zhì)斑點(diǎn)強(qiáng)度不得 超過(guò)樣2主斑點(diǎn)10l 硅膠G板 【示例11-25】 ：鹽酸氯丙嗪的有關(guān)物質(zhì)檢查 供試液： 對(duì)照液：TLC試驗(yàn)： 5mg/ml 25g/ml 展開(kāi)后晾干 空氣中干 燥20min 紫外燈下檢視 判定雜 質(zhì)斑點(diǎn) USP32-NF27檢查法 特點(diǎn)： （1）簡(jiǎn)便易行，不需特殊的儀器； （2）只能控制單個(gè)雜質(zhì)的限量。 （二）HPLC法 1. 峰面積歸一化法2. 不加校正因子的主成分自身對(duì)照法3. 加校正因子的主成分自身對(duì)照法（有對(duì)照品） 4. 內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定雜質(zhì)的含量(有對(duì)照品) 5. 外標(biāo)法(有對(duì)照品)

14、（二）HPLC法 （高低濃度對(duì)比法）供試品 對(duì)照液 判定方法： 規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目 規(guī)定雜質(zhì)峰面積特點(diǎn)： （1）需特殊儀器； （2）可以控制雜質(zhì)總量。 Waters 液相色譜儀2690 島津液相色譜儀LC-10A 【示例11-23】鹽酸氯丙嗪的有關(guān)物質(zhì)檢查供試液： 0.4mg/mL 對(duì)照液：0.002mg/mL ChP2015檢查法 雜質(zhì)限量? 【示例11-23】鹽酸氯丙嗪的有關(guān)物質(zhì)檢查單個(gè)不大于，總和不超過(guò)2倍 ChP2015檢查法 DABC第四節(jié) 含量測(cè)定CONTENT ASSAY吩噻嗪類藥物含量測(cè)定？ 酸堿滴定A 分光光度法BHPLC CHPLC-MS D一、酸堿滴定法1. 非水溶液滴定法

15、進(jìn)行非水酸堿滴定的原因：許多弱酸、弱堿不能直接在水溶液中滴定(CK HBr H2SO4 HCl HNO3冰醋酸是強(qiáng)酸的區(qū)分溶劑。強(qiáng)酸在冰醋酸中的總強(qiáng)度的順序?yàn)椋?? HBr HCl HNO3 HClO4 H2SO4酸性溶劑是弱堿的均化性溶劑，是強(qiáng)酸的區(qū)分性溶劑 堿性溶劑是弱酸的均化性溶劑，是強(qiáng)堿的區(qū)分性溶劑 +HClO4滴定 空白試驗(yàn)校正終點(diǎn)指示 10ml30ml8pKb10 冰醋酸作溶劑10pKb12 冰醋酸+醋酐pKb12 醋酐弱堿的滴定有機(jī)堿及其鹽類供試品冰醋酸 結(jié)果 電位指示終點(diǎn)法 HAc體積隨溫度變化較大，且還具有揮發(fā)性，測(cè)定樣品與標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)溫度不同，應(yīng)對(duì)濃度進(jìn)行校正。如果：t1

16、-t010C或貯存時(shí)間超過(guò)30天則在臨用前必須重新標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性等當(dāng)點(diǎn) H+ + Cl- + NaOH NaCl + H2OBH+ +Cl- + NaOH B + H2O + NaCl 突躍體積V1V2 滴定體積 VV2V1 乙醇-水溶液中，采用NaOH滴定；在反應(yīng)體系加入適量鹽酸，采用電位滴定法指示終點(diǎn)一、酸堿滴定法2. 乙醇-水溶液中的氫氧化鈉滴定法 1.直接分光光度法(原料藥) 2.提取后分光光度法(制劑)3.提取后雙波長(zhǎng)分光光度法(去除氧化物干擾) 4.二階導(dǎo)數(shù)分光光度法(自學(xué))5.鈀離子比色法 二、分光光度法 3.提取后雙波長(zhǎng)分光光度法 提取后分光光度法能夠除去

17、一些干擾物質(zhì)，但卻不能除去吩噻嗪類藥物的氧化物。提取時(shí)，氧化物隨游離堿進(jìn)入有機(jī)相；測(cè)定時(shí)，因結(jié)構(gòu)相近，氧化物在吩噻嗪類藥物的測(cè)定波長(zhǎng)處產(chǎn)生吸收，干擾測(cè)定。 即，吸收度差值（A）僅與待測(cè)組分的濃度有關(guān)，而與干擾組分無(wú)關(guān)，干擾組分的干擾被消除。 定量依據(jù)：樣品在二波長(zhǎng)下吸收度差值（A） 【示例11-37】 鹽酸氯丙嗪注射液的含量測(cè)定（ USP32-NF27） 式中：C(mg/ml)為對(duì)照品溶液的濃度； V(ml)為所取供試品的體積； 括號(hào)內(nèi)的公式分別為供試品溶液(U)和對(duì)照品溶液(S)在下標(biāo)所示波長(zhǎng)處的吸光度差。測(cè)定波長(zhǎng)：254nm（最大吸收波長(zhǎng)）277nm（等吸收波長(zhǎng)） 空白對(duì)照液：0.1mol

18、/L鹽酸溶液 計(jì)算公式： 吩噻嗪類藥物在pH 20.1的緩沖溶液中，與鈀離子(Pd2+)形成紅色配合物，在500nm波長(zhǎng)附近具有最大吸收 由于鈀離子僅與未被氧化的硫元素配合顯色，消除了藥物中氧化物對(duì)測(cè)定的干擾。 比色液的濃度：50 250 g/mL 顯色穩(wěn)定性：10分鐘后可穩(wěn)定約2小時(shí) 5. 鈀離子比色法【示例11-38】鹽酸異丙嗪注射液USP32-NF276.25mg 加飽和氯化鉀溶液氫氧化鈉溶液堿化甲醇正庚烷提取3次 470nm處測(cè)定吸收度 合并提取液鹽酸酸化提取3次 合并提取液并定容至50ml標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品溶液各2ml +PdCl2顯色Stationary phaseODS 三、高效液相

19、色譜法1. 反相高效液相色譜法 方法特點(diǎn)： ODS內(nèi)標(biāo)法+校正因子 甲醇-水；乙腈-水 紫外 三乙胺溶液-甲醇-乙腈 色譜柱：流動(dòng)相：檢測(cè)器：定量法：2. 離子對(duì)高效液相色譜法 極性強(qiáng) 反相ODS柱保留弱 影響離子對(duì)形成的條件反離子的性質(zhì)與濃度流動(dòng)相的組成流動(dòng)相pH離子強(qiáng)度常用的離子對(duì)試劑：烷基磺酸鹽陰離子對(duì)試劑，如戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉、十二烷磺酸鈉等。 影響條件：流動(dòng)相一般呈酸性，以利于生物堿的離解離子對(duì)試劑的非極性部分越大，形成的離子對(duì)分配系數(shù)越大，保留時(shí)間越長(zhǎng)（十二烷基磺酸鈉庚烷磺酸鈉戊烷磺酸鈉）四、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)集HPLC的高分離效能和MS的高專屬性及

20、高靈敏度于一體，已經(jīng)成為目前測(cè)定復(fù)雜生物樣本中微量藥物的首選方法，同時(shí)也是進(jìn)行藥物及有關(guān)物質(zhì)定性分析的常用方法?；疽髴?yīng)用：本類藥物的鑒別試驗(yàn) 酸堿滴定法含量測(cè)定 離子對(duì)高效液相色譜法 描述：本類藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 本章小結(jié) 1. 有氧化產(chǎn)物存在時(shí)，吩噻嗪類藥物的鑒別方法為A. 非水溶液滴定法B. 紫外分光光度法C. 熒光分光光度法D. 鈀離子比色法E. pH指示劑吸收度比值法 B D課堂練習(xí)2. 有氧化產(chǎn)物存在時(shí)，吩噻嗪類藥物的含量測(cè)定方法為A. 非水溶液滴定法B. 紫外分光光度法C. 熒光分光光度法D. 鈀離子比色法E. pH指示劑吸收度比值法 D3. 檢查鹽酸異丙嗪中“有關(guān)物質(zhì)”時(shí)，采用的對(duì)照溶液為A. 雜質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液B. 標(biāo)準(zhǔn)“有關(guān)物質(zhì)”溶液C. 供試品溶液D. 供試液的稀釋溶液E.