侵襲性深部真菌病實(shí)驗(yàn)室診斷

1、關(guān)于侵襲性深部真菌病的實(shí)驗(yàn)室診斷第1頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四侵襲性真菌病的致病菌條件致病菌 致病性雙相真菌 念珠菌 組織胞漿菌曲霉 球孢子菌隱球菌 芽生菌接合菌 馬內(nèi)菲青霉鐮刀菌 孢子絲菌暗色真菌酵母菌毛孢子菌枝頂孢霉第2頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四侵襲性真菌病(IFD)主要包括：念珠菌病隱球菌病侵襲性曲霉病第3頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四高危人群+高危因素=IFD第4頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四IFD的高危人群和高危因素廣譜抗生素應(yīng)用入住ICU血液系統(tǒng)腫瘤病人（粒缺、骨髓移植）

2、器官移植HIV感染應(yīng)用皮質(zhì)激素糖尿病靜脈插管第5頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四第6頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四尸體解剖中侵襲性真菌感染的發(fā)生率78798081828384858687888990919202468Aspergillus spp.Candida spp.All otherPrevalence at Autopsy %Prevalence of invasive aspergillosis at necropsy at JW Geothe University Hospital,Frankfurt,Germany(Lancet

3、,2000;335:2076)第7頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四54.84%12.9%3.23%9.68%19.35%國(guó)內(nèi)西南醫(yī)院尸解資料，(1971-2000)，郝飛教授提供AspergillusCryptococcusMucorCandidaAll others第8頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四侵襲性真菌病的流行病學(xué)特點(diǎn)危險(xiǎn)因素不斷增多，發(fā)生率逐年增高趨勢(shì)，確切資料有待收集整理白念珠菌仍然是最常見臨床分離致病菌 非白念珠菌增加（帶來的問題）曲霉已成為重要的致死真菌第9頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四真菌感染的實(shí)驗(yàn)診

4、斷方法及問題形態(tài)學(xué)檢查：經(jīng)驗(yàn)？陽性率？培養(yǎng)+鑒定：時(shí)間長(zhǎng)，敏感性？血清學(xué)檢查：敏感性？特異性？分子生物學(xué)檢查：標(biāo)準(zhǔn)化？第10頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四真菌抗原、細(xì)胞壁成分檢測(cè)GM試驗(yàn)：血漿、血清、BAL、胸水、CSF，用于曲霉檢測(cè)；G試驗(yàn): 用于曲霉、念珠菌檢測(cè)，對(duì)隱球菌、接合菌無意義；乳膠凝集試驗(yàn): 檢測(cè)隱球菌；第11頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四新生隱球菌乳膠凝集試驗(yàn)第12頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四血清GM作為診斷的早期標(biāo)志物Marr and Leisenring Clin Infect Dis 2005

5、; 41:S381第13頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四在BAL中檢測(cè)GM作為早期診斷標(biāo)志Musher et al. J Clin Microbiol 2004: 42(12): 5517-22敏感性 (%)特異性 (%)陽性預(yù)測(cè) (%)陰性預(yù)測(cè) (%)血清47937382BAL8510010088Becker et al. Br J Haematol 2003; 121: 448第14頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四關(guān)于GM試驗(yàn)與G試驗(yàn)可作為推定診斷的標(biāo)準(zhǔn);GM: 檢測(cè)半乳甘露聚糖，對(duì)曲霉感染診斷特異性強(qiáng)，假陽性反應(yīng)可以在青霉菌屬中出現(xiàn)；部分含

6、青霉烷砜衍生物的抗菌藥物可以誘發(fā)陽性反應(yīng)；G試驗(yàn): 檢測(cè)(1,3)-D-葡聚糖，在很多真菌中都可以出現(xiàn)陽性反應(yīng)，但在隱球菌、接合菌、毛霉、根霉呈陰性反應(yīng)；第15頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四Prospective utility of (1-3)-B-D-Glucan (BG), galactomannan (GM) and anti-Candidaalbicans germ tube antibodies (CAGT) for the diagnosis of invasive fungal disease (IFD) in haemato-oncology adu

7、lt patientsA. Alhambra1, M.S. Cutara2, J.M. Moreno1, A. Del Palcio Perez-Medel1, I. Moragues3, J.Pontn3, A. Del Palacio11Hospital Universitario Doce de Octubre, MADRID, Spain 2Hospital Universitario SeveroOchoa, LEGANES, Spain 3Universidad del Pais Vasco, BILBAO, Spain第16頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四

8、Invasive Candidiasis S SP PPV NPVCAGT (%) 57 93 44 96BG (%) 77 86 39 97Invasive Aspergillosis S SP PPV NPVGM (%) 92 94 73 98BG (%) 57 84 42 91第17頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四CONCLUSIONS The incidence of IFD correlated directly and significantly (x2 p=0.0005) with risk stratification group: highest pr

9、oportion in the high-risk group.Since all the biomarkers have inherent limitations, a better diagnosis yield is achieved combining the biomarkers. All three biomarkers share high negative predictive value and can exclude reasonably IFD in haematology adult patients treated with wide spectrum antifun

10、gals.第18頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四Evaluation of two serologic test for diagnosis invasive AspergillosisC. Castro, A. Romero, A. Aller, T. Gonzalez, A. Gonzlez, E. Martn-MazuelosH. U. Valme, SEVILLA, Spain第19頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四A total of 236 sera from 51 patients in risk of IA were tested

11、for GM using Platelia Aspergillus kit (Bio Rad, France) which 36 sera (10 patients) were tested for BG also using Fungitell kit (Associates of Cape Cod., USA). Patients were attended at the University Hospital of Valme from Seville from January of 2008 to December 2008. Patients with GM index 0.5 in

12、 two consecutive samples have been marked as GM positive and samples with results 80pg/ml were marked as BG positive. All GM positive patients were classified according to EORTC/MSG criteria (2008) for probability of IA.第20頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四GM testFrom 51 patient studied, 16 of them showed

13、 at least one positive specimen (33 sera). Only 6 patients showed two consecutive positive results (0.5 GM test) and they show clinical signs or microbiological criteria for AI proven (3 patients) and probable (3 patients). 第21頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四BG assayThe BG assay were used in parallel wi

14、th GM in 36 sera which 26 showed positive result from 9 patients, (3 with AI proven and 6 AI probable). 3 patients showed positive results before for BG test ( 3,5 days) and 6 patients presented simultaneously both antigens. Never the GM test was the first serological test to show a positive result.

15、G試驗(yàn)陽性的9名患者中，G試驗(yàn)單獨(dú)陽性的有3個(gè)病人，兩種抗原同時(shí)陽性有6個(gè)病人，未出現(xiàn)單獨(dú)GM試驗(yàn)陽性的情況。第22頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四ConclusionCalculating significant sensitivity for both detection methods was not feasible due to a low number of proven/probable AI. BG detection showed positive results before GM test and present the great advanta

16、ge to be a “panfungal”antigen. BG detection should be used with other techniques for detection of invasive Aspergillosis infections.第23頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四真菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)示意圖第24頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四深部真菌感染患者血漿1-3-D葡聚糖檢測(cè) 病例選擇 深部真菌感染患者35例，年 齡1288歲，來自我院2004年1月到5月住院患者，均經(jīng)培養(yǎng)證實(shí)存在深部真菌感染，感染部位包括呼吸道、泌尿道、血

17、液及靜脈插管引起的系統(tǒng)性感染。正常健康對(duì)照組30人，來自我院健康查體者。第四軍醫(yī)大學(xué) 第25頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四檢測(cè)結(jié)果正常對(duì)照組血漿1-3-D葡聚糖含量最高為7.29 pg/ml ，最低為0.45 pg/ml，平均值為2.832.57pg/ml；深部真菌感染組血漿1-3-D葡聚糖含量最高為168.9 pg/ml，最低為14.93pg/ml，平均值為54.0636.13 pg/ml。經(jīng)SPSS統(tǒng)計(jì)軟件T-檢驗(yàn)分析，對(duì)照組與深部真菌感染組1-3-D葡聚糖平均值差異非常顯著（t=7.741,P0.001）。 第26頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分

18、，星期四討論入選的深部真菌感染患者均經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)證實(shí)為念珠菌感染，包括白色念珠菌23株、熱帶念珠菌8株、季也蒙念珠菌1株、克柔念珠菌1株和光滑球擬假絲酵母菌2株，無隱球菌感染。如以10 pg/ml為cutoff值，則陽性率為100%; 以20 pg/ml為cutoff值，則陽性率為91.4。葡聚糖檢測(cè)可在擬診早期為臨床醫(yī)生提供機(jī)體是否感染真菌的可靠信息，因此葡聚糖含量檢測(cè)不失為一種實(shí)用的真菌感染早期診斷方法。第27頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四注意使用青霉素類加酶抑制劑香菇多糖等會(huì)引起假陽性！第28頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四PCRPCR技術(shù)用于診斷種特異-PCR非特異 PCR雜交Standart singlenestedPCR-EIAReal-time標(biāo)本全血血漿血清BAL最低檢測(cè)范圍4-10 cfu/ml25-100 fg DNA原位雜交目的基因多拷貝基因第29頁，共31頁，2022年，5月20日，8點(diǎn)34分，星期四122 patients 323 samples