【報告】大腸桿菌培養(yǎng)試驗報告

1、文檔來源為:從網絡收集整理.word版本可編輯.歡迎下載支持.【關鍵字】報告大腸桿菌培養(yǎng)實驗報告篇一：大腸桿菌檢測實驗報告國標法測定大腸桿菌樣本的細菌總數實驗目的實驗原理：國標法操作的原理實驗器材：培養(yǎng)箱，10只移液管，1只250ml錐形瓶，5只大試管，試管架，4個平皿，500ml大 燒杯1個，電子天平，紗布，脫脂棉，滅菌鍋，PH計或PH試紙，100ml量筒，橡皮手套， 超凈臺實驗藥品：磷酸鹽緩沖液，蒸餾水，LB培養(yǎng)基，瓊脂，5%NaOH，5%HCl實驗步驟：一：10只移液管，1只250ml錐形瓶，5只大試管，4個平皿，500ml大燒杯1個，100ml 量筒進行洗滌，然后一起放入高壓蒸汽滅菌鍋

2、中在121攝氏度條件下滅菌20min。滅完菌后 烘干，完成后放入超凈臺中。用酒精擦拭超凈臺，紫外消毒30min* ：1：用電子天平稱取成品LB 3.1241g和瓊脂1.8756g放入250ml的潔凈錐形瓶中。2： 用量筒量取125ml的蒸餾水加入該錐形瓶中，制成培養(yǎng)基。3：用棉花堵住該錐形瓶的瓶口，用牛皮紙包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再將培養(yǎng)基放入 滅菌鍋中在121攝氏度之下滅菌20min。4：滅完菌后放入超凈臺中備用。二：1：取1只無菌250ml錐形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS2：將1ml樣品加入到該錐形瓶中，搖勻制成1:50的細菌溶液。3：取4只試管，編號144：用無菌移液管分別向4只

3、試管中加入9ml的PBS5：用1ml無菌移液管從樣品中移取1ml菌液加入到1中.震蕩試管使菌液均勻。6：用 1ml無菌移液管從1號試管中移取1ml的細菌溶液加入2號試管中，搖勻7：用另一只1ml無菌移液管從2號試管中移取1ml細菌溶液，加入3中，搖勻以此類推直至4只試管中均加入了細菌溶液。9：取4只平皿，編號1410：分別用4只無菌移液管從這4只試管中移取1ml的菌液置于4只平皿中，加入4 5 5 0攝氏度溫度下的培養(yǎng)基，約15 mm厚度。緩慢旋轉平皿使菌液與培養(yǎng)基混合均勻；1文檔收集于互聯(lián)網，如有不妥請聯(lián)系刪除.文檔來源為:從網絡收集整理.word版本可編輯.歡迎下載支持.待培養(yǎng)基冷凝后倒置

4、。11：將培養(yǎng)基在3 6攝氏度條件下培養(yǎng)12小時。12：取出培養(yǎng)皿，選擇細菌個數在30至300個之間的平皿數細菌的個數。四：實驗結果(記得在操作過程和得到結果時拍照)1號，2號菌落個數多不可計，舍棄4號平皿中菌落數目小于10 cfu，舍棄3號平皿中菌落分布較均勻，數3號中的菌落數，一共有210個cfu。計算樣品中細菌濃度為：1.05 x 105 Cfu/ml點評超凈臺中的實驗步驟講述詳細，明確，不錯。前面的步驟敘述有點亂，建議按照如下標 題重新調整順序。實驗步驟：1、儀器清洗將燒杯，培養(yǎng)皿、試管等儀器用洗衣粉清洗，超聲5min.然后用清水清洗，超聲5min, 最后用三蒸水清洗，放入烘箱中烘干。

5、2、培養(yǎng)基配制精確稱量。放入錐形瓶中，加入。mL蒸餾水，搖勻3,滅菌包扎、滅菌，烘干備用3、超凈臺中的操作(如上)除了實驗步驟和結果，還要有討論和注意事項例如：實驗討論：1、評價該方法(操作簡易程度，靈敏度如何，適用性)2、為何選擇細菌個數在30至300個之間的平皿數細菌的個數？注意事項比如各種儀器的使用注意事項，以及保持潔凈，防止染菌等。篇二：微生物生理生化實驗報告實驗十一 IMViC與硫化氫試驗指導教師：李?；ㄖ芰谌M學號：06012XX041姓名：宋天佳專業(yè)：XX級水產養(yǎng)殖學號：03021XX025姓名：皇 昊 專業(yè)：XX級化學1班學號：06012XX055姓名：續(xù)鵬輝專業(yè)：XX級水產

6、養(yǎng)殖一、實驗目的了解IMViC與硫化氫反應的原理及其在腸道菌鑒定中的意義和方法。2、實驗原理IMViC 是 I一吲哚(indol test)、M 一甲基紅(methyl red test)、V伏-普(Voges-Prolauertest)和C 檸檬酸鹽(citrate test) 4個實驗的縮寫。這4個實驗主要用來快速鑒別產2文檔收集于互聯(lián)網，如有不妥請聯(lián)系刪除.文檔來源為:從網絡收集整理.word版本可編輯.歡迎下載支持.桿菌與大腸桿菌，多用于水的細菌檢查。大腸桿菌雖非致病菌，但在飲用水時若超過一 定指標，則表示水質受糞便污染。產氣桿菌也廣泛存在于自然界中，因此檢查水是要將 兩者分開。硫化氫

7、（H2S）實驗也是檢查腸道細菌的生化實驗。（一）吲口朵試驗（indol test）吲哚試驗是用來檢測吲哚試驗的產生，有些細菌分解培養(yǎng)基中的色氨酸生成吲朵（靛基 質），經與試劑中的對二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲朵而呈紅色。色氨酸+ H2O色氨酸酶 吲朵+ NH3 +丙酮酸吲朵+對二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲朵（紅色）只有部分細菌能產生色氨酸酶，從而具有分解色氨酸產生吲朵的能力，因此吲朵實驗可 以作為一個生化檢測指標。大腸桿菌產色氨酸酶實驗結果為陽性（紅色），產氣腸桿菌 不產色氨酸酶實驗結果為陰性（無色）。（二）M-甲基紅試驗（methyl red test）用來檢測由葡萄糖產生的有機酸，如甲酸、乙

8、酸、乳酸等。細菌代謝糖產生酸使培養(yǎng) 基變酸（pH下降），使甲基紅指示劑變色：橘黃色（pH6.3紅色（pH4.2）盡管，所有腸道微生物都能發(fā)酵葡萄糖產生有機酸，但大腸桿菌和產氣腸桿菌有區(qū)別:兩者在培養(yǎng)早期產生有機酸，但大腸桿菌在培養(yǎng)后仍能維持酸性pH4,而產氣腸桿菌則 將有機酸轉化為非酸性產物，使pH上升至6左右。因此，大腸桿菌為陽性（紅色），產氣 腸桿菌陰性（黃色）。（三）伏-普實驗（Voges-Prolauer test）測定細菌利用葡萄糖產生非酸性或中性末端產物（如丙酮酸）的能力。丙酮酸進行縮合、脫竣生成乙酰甲基醇，此化合物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰 與蛋白胨中的精氨

9、酸的胍基作用，生成紅色化合物，及伏-普反應陽性，不產生紅色化合物 者為反應陰性。堿性條件、加入少量含胍基的化合物可使反應更明顯。大腸桿菌不產丙酮酸實驗結果為陰性（無色），產氣腸桿菌產丙酮酸實驗結果為陽性（紅 色）。丙酮酸 乙酰乳酸 乙酰甲基甲醇 胍基+二乙紅色化合物（四）檸檬酸鹽試驗（citrate test）用來檢測檸檬酸鹽是否被利用，有些細菌以檸檬酸鈉為碳源，培養(yǎng)基中的檸檬酸和磷酸銨被分解后，產生堿性化合物，使pH升高，當加入1%澳麝香草酚藍指示劑時，培養(yǎng) 基就會有綠色轉變?yōu)樯钏{色，澳麝香草酚藍指示范圍：pH7 藍色。大腸桿菌不能利用檸檬酸鹽實驗結果為陰性（綠色），產氣腸桿菌能利用檸檬酸鹽

10、實驗結果為陽性（藍色）。（五）硫化氫實驗3文檔收集于互聯(lián)網，如有不妥請聯(lián)系刪除.文檔來源為:從網絡收集整理.word版本可編輯.歡迎下載支持.用來檢測硫化氫的產生，也是用于腸道細菌檢查的常用生化實驗。含硫有機物（如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸）能被部分細菌分解產生H2S，H2S和培養(yǎng)基中的鉛鹽或 鐵鹽反應，形成黑色的硫化鉛或硫化鐵沉淀。大腸桿菌不能分解含硫有機物實驗結果為陰性 （無沉淀），產氣腸桿菌能分解含硫有機物實驗結果為陽性（黑色沉淀）。三、實驗器材1、菌種：大腸桿菌、產氣腸桿菌斜面各一支。2、培養(yǎng)基：蛋白胨水培養(yǎng)基、葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基、檸檬酸鹽培養(yǎng)基、硝酸鹽還原 培養(yǎng)基、醋酸鉛培養(yǎng)基3、

11、溶液和試劑：甲基紅指示劑，40%KOH, 5%-萘酚溶液，乙醚，吲哚試劑4、儀器或其他用具：試管架，接種環(huán)等四、操作步驟一）實驗準備.葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基配制：蛋白胨3g,葡萄糖3g,磷酸氫二鉀1.2g,水600ml,溶 解，調節(jié)Ph7., 0-7.2,分裝于70支試管中，112回滅菌30min。.檸檬酸鹽培養(yǎng)基配制：NH4H2PO40.2g, K2HPO4 0.2g, NaCl1g, MgSO4 40mg,檸檬酸 鈉0.4g,瓊脂4g,調節(jié)pH6.8, 1%澳香草酚藍乙醇液2ml,水200ml,溶解，分裝于20支 試管中，121回滅菌20min。（pH不宜偏高，以淡綠色為宜）.硝酸鹽還原培養(yǎng)

12、基配制：蛋白胨1.25g,氯化鈉0.625g,硝酸鉀0.25g,水125ml,溶 解，調節(jié)pH7.4左右，分裝于16支試管中，121回滅菌20min。.硫化氫試驗養(yǎng)基配制:蛋白胨5g,氯化鈉1.25g,檸檬酸鐵銨125mg，硫代硫酸鈉125mg, 瓊脂5g,水250ml。先將瓊脂、蛋白胨融化，冷至60回時加入其他成分，調pH7.2左右， 分裝于35支試管中，112回滅菌20min。二）接種與培養(yǎng).穿刺法分別接種大腸桿菌、產氣桿菌于2支醋酸鉛培養(yǎng)基（H2S）, 37回培養(yǎng)48h。.分別接種大腸桿菌、產氣桿菌于2支蛋白胨水培養(yǎng)基（I）、2支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng) 基（M&V）, 37回培養(yǎng)2d。.劃S

13、曲線法分別接種大腸桿菌、產氣桿菌于2支檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基（C）, 37回培養(yǎng) 2d。三）結果觀察.H2S實驗：觀察是否有黑色硫化鉛沉淀產生。.吲哚實驗：2d后的培養(yǎng)物內加34滴乙醚，搖動數次，靜至13min,待乙醚上升 后，沿管壁徐徐滴加2滴吲哚試劑，在乙醚和培養(yǎng)物之間產生紅色環(huán)狀物者為陽性反應。.甲基紅實驗：2d后的培養(yǎng)物內加2滴甲基紅試劑，培養(yǎng)物變?yōu)榧t色者為陽性，黃色者 為陰性（注意甲基紅不要過量，以免出現(xiàn)假陽性）。.伏一普實驗：2d后的培養(yǎng)物內加510滴40%KOH,然后加入等量的5%-萘酚溶液，4文檔收集于互聯(lián)網，如有不妥請聯(lián)系刪除.文檔來源為:從網絡收集整理.word版本可編輯.歡迎

14、下載支持.用力振蕩，紅色為陽性。.檸檬酸鹽實驗：觀察2d后的培養(yǎng)物上有無細菌產生及其顏色，藍色為陽性，綠色為 陰性。五、實驗結果將實驗結果填入下表?！笆硎娟栃苑磻?，“一表示陰性反應。六、討論.吲哚試驗、甲基紅試驗、伏一普試驗、檸檬酸鹽試驗的實驗結果與理論結果一致。 H2S試驗的實驗結果與理論結果不一致，兩支醋酸鉛培養(yǎng)基中都產生黑色沉淀，均為陽性反 應，可能的原因：接種操作時，先穿刺接種產氣腸桿菌，之后，接種針未充分加熱滅菌，再 穿刺接種大腸桿菌時混入部分大腸桿菌；接種針在接種產氣腸桿菌時，接種針上不粘上了產 氣腸桿菌，未被加熱滅菌，再接種大腸桿菌時，將產氣腸桿菌混入，使大腸桿菌產生假陽性 反

15、應。.吲哚試驗，實驗現(xiàn)象不明顯，可能的原因：培養(yǎng)基中的色氨酸含量不夠高；吲哚試 劑加入的量不夠，一部分粘在試管壁上損失掉，之后補加時乙醚已揮發(fā)；滴加吲哚試劑時動 作不夠輕緩，破壞了紅色化合物的生成。.為什么大腸桿菌是甲基紅反應陽性，而產氣腸桿菌為陰性？這個試驗與伏一普試驗 最初底物和最終產物有何異同？大腸桿菌、產氣腸桿菌都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產生丙酮酸，進一步分解 代謝途徑不同。大腸桿菌，可產生乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產物，可使培養(yǎng)基 PH值下降至pH4.5以下，使甲基紅指示劑變紅，即甲基紅反應陽性。產氣腸桿菌則使丙酮 酸進行縮合、脫羧生成乙酰甲基甲醇，此化合物在堿性條件

16、下能被空氣中的氧氣氧化成二乙 酰，二乙酰與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物，即伏-普陽性反應。.說明在硫化氫試驗中醋酸鉛的作用可以用哪種化合物代替醋酸鉛？醋酸鉛培養(yǎng)基（試紙）可檢驗硫化氫的產生，反應為：Pb（Ac）2+H2S=PbSJ+2HAc產生黑 色的硫化鉛。所以培養(yǎng)基（紙帶）變黑為陽性，不變?yōu)殛幮?。從硫離子的角度講，硝酸銀、硫酸銅可產生同樣現(xiàn)象。.為什么在細菌吲哚試驗中用吲哚的存在作為色氨酸酶活性的指示劑而不用丙酮酸？ 吲哚比較容易檢測，特異性也高，不容易受干擾。丙酮酸則相對難以檢測，特異性很低， 很多反應都能產生丙酮酸，如葡萄糖酵解的終產物也是丙酮酸。篇三：多管發(fā)酵法檢測水中的

17、大腸菌群的實驗報告學院：環(huán)境科學與工程學院班級：11級環(huán)境科學（2）班姓名：李寶攜學號：98 實驗3多管發(fā)酵法檢測水中的大腸菌群一、實驗目的（1）了解飲用水和水源水大腸菌群的原理和意義。（2）學習檢測水中大腸菌群的方 法。2、實驗原理大腸菌群是評價水質好壞的一個重要的衛(wèi)生指標，也是反映水體被生活污水污染的一項 重要監(jiān)測項目。大腸菌群是一群以大腸埃希氏菌為主的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽抱桿菌，在5文檔收集于互聯(lián)網，如有不妥請聯(lián)系刪除.文檔來源為:從網絡收集整理.word版本可編輯.歡迎下載支持.37回生長時，能在48小時內發(fā)酵乳糖并產酸產氣。我國生活飲用水衛(wèi)生標準中規(guī)定一升水樣 中總大腸菌群

18、數不超過三個。多管發(fā)酵法包括初發(fā)酵試驗、平板分離和復發(fā)酵試驗三個部分。發(fā)酵管內裝有乳糖蛋白 胨液體培養(yǎng)基，并倒置一德漢氏小套管。當發(fā)酵產酸時，澳甲酚紫可由紫色變?yōu)辄S色，乳糖 能起選擇作用，因為很多細菌不能發(fā)酵乳糖，而大腸菌群能發(fā)酵乳糖而產酸產氣。三、實 驗材料1、水樣中心湖湖水2、試劑三倍濃縮乳酸蛋白胨培養(yǎng)液3、儀器及其他用品試管、發(fā)酵管、燒杯、量筒、移液槍、高壓滅菌鍋四、操作過程1、取16支發(fā)酵管，其中5支加入5mL三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液。取35mL三倍乳糖蛋白 胨培養(yǎng)液于燒杯中，量取70mL水進行稀釋，將三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液稀釋成一倍的乳酸蛋 白胨培養(yǎng)液，分別取10mL 一倍的乳酸蛋白胨培養(yǎng)液與10支試管中，最后，1支加入9ml 自來水。2、完成后包裝好，于121回高壓滅菌鍋中滅菌30min左右。3、滅菌完畢，冷卻后，在無菌操作條件下，向裝有三倍的乳酸蛋白胨培養(yǎng)液的5支試 管加入10ml水樣，向裝有一倍的乳糖蛋白胨培養(yǎng)