細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)培訓(xùn)課件

1、 異基因造血干細(xì)胞移植（Allo-HSCT）是目前治愈急性白血病的主要方法。移植后復(fù)發(fā)是影響患者存活的主要障礙之一。 移植后復(fù)發(fā)的治療手段主要有二次移植和DLI（供者淋巴細(xì)胞輸注）、停用免疫抑制劑和應(yīng)用細(xì)胞因子等方式。 前 言1細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022 異基因造血干細(xì)胞移植（Allo-HSCT）是目前治愈急性白 二次移植風(fēng)險(xiǎn)高，25%-50%的患者死于感染、急性GVHD等治療相關(guān)并發(fā)癥，且二次移植后復(fù)發(fā)率亦高達(dá)40-60%，兩年無(wú)病存活僅12%-21%。 DLI后GVHD總發(fā)生率為60%，其中40%、度aGVHD，20%左右、cGVHD。 迫切需要找到一種新的方法來(lái)改善其生存2細(xì)胞治

2、療移植復(fù)發(fā)10/4/2022 二次移植風(fēng)險(xiǎn)高，25%-50%的患者死于感染、急性GVHD 免疫治療的發(fā)展，使其逐漸成為白血病患者造血干細(xì)胞移植后復(fù)發(fā)的治療手段之一。 我們中心應(yīng)用細(xì)胞免疫治療急性非淋巴細(xì)胞白血病自體骨髓移植患者的結(jié)果表明5 年生存率為75% ,非細(xì)胞治療組5年生存率為45%，細(xì)胞組在累計(jì)生存率上明顯優(yōu)于非細(xì)胞治療組。3細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022 免疫治療的發(fā)展，使其逐漸成為白血病患者細(xì)胞免疫治療大致分為兩類： 一是疫苗治療，即輸注可在體內(nèi)刺激抗白血病活性的細(xì)胞，如樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）相關(guān)腫瘤疫苗等； 二是過(guò)繼性細(xì)胞免疫治療，即輸注有內(nèi)在抗白血病活性的免疫效應(yīng)細(xì)胞，如細(xì)胞因

3、子誘導(dǎo)殺傷（CIK）細(xì)胞、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）等。4細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022細(xì)胞免疫治療大致分為兩類：4細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/3/202 DC：樹(shù)突狀細(xì)胞，抗原提呈細(xì)胞 免疫反應(yīng)的關(guān)鍵“決策細(xì)胞” 增強(qiáng)針對(duì)腫瘤抗原免疫反應(yīng)的理想靶點(diǎn) 目前全球已有3支DC腫瘤疫苗獲標(biāo)準(zhǔn)5細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022 DC：樹(shù)突狀細(xì)胞，抗原提呈細(xì)胞5細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/3/DC已由實(shí)驗(yàn)室走向臨床DC臨床反應(yīng)仍有限：成熟度，臨床反應(yīng)，外源性負(fù)載的表位數(shù)較少等。 基因修飾DC：表達(dá)腫瘤抗原，增強(qiáng)免疫反應(yīng)的刺激因子、細(xì)胞因子，下調(diào)免疫負(fù)調(diào)控分子。-未來(lái)發(fā)展的一個(gè)重要方向6細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/

4、4/2022DC已由實(shí)驗(yàn)室走向臨床6細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/3/2022基因修飾DC的優(yōu)勢(shì) 無(wú)MHC限制性 提供更多的抗原表位 保證持久的抗原表達(dá) 胞內(nèi)抗原加工的抗原提呈更有效 表達(dá)外源基因的病毒載體能刺激和激活DC 避免正?？乖?fù)載可能存在的自身免疫反應(yīng)Shurin MR, et al. New York: Springer. 2009.7細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022基因修飾DC的優(yōu)勢(shì) 無(wú)MHC限制性Shurin MR, etT細(xì)胞激活（3種信號(hào)）8細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022T細(xì)胞激活（3種信號(hào)）8細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/3/2022基因修飾DC策略 導(dǎo)入編碼腫瘤抗原基因或表達(dá)抗原

5、的mRNA 導(dǎo)入編碼免疫刺激分子、細(xì)胞因子、趨化因子、抗 凋亡分子和其他增強(qiáng)DC功能因子的基因Kikuchi T. Tohoku J Exp Med. 2006.9細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022基因修飾DC策略 導(dǎo)入編碼腫瘤抗原基因或表達(dá)抗原的mRNAK修飾方法與靶分子選擇Shurin MR, et al. Expert Opin Biol Ther. 2010.10細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022修飾方法與靶分子選擇Shurin MR, et al. Ex11細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/202211細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/3/2022Boudreau JE, et al. Mol Ther

6、. 2011.12細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022Boudreau JE, et al. Mol Ther. 基因修飾DC臨床結(jié)果13細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022基因修飾DC臨床結(jié)果13細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/3/2022Sipuleucel-T（美國(guó)，Dendreon）Sipuleucel-T利用DC負(fù)載PAP和GM-CSF的融合蛋白，這提示DC疫苗聯(lián)合細(xì)胞因子可能改進(jìn)治療結(jié)果。14細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022Sipuleucel-T（美國(guó)，Dendreon）SipulAGS-003（美國(guó)，Argos Therapeutics） 轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌 自體腫瘤來(lái)源mRNA+合成的CD4

7、0L RNA15細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022AGS-003（美國(guó)，Argos Therapeutics）3期試驗(yàn)方案16細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/20223期試驗(yàn)方案16細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/3/2022病毒載體系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)Kikuchi T. Tohoku J Exp Med. 2006.17細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022病毒載體系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)Kikuchi T. Tohoku J 載體對(duì)DC生物學(xué)影響Ribas A. Curr Gene Ther. 2005.18細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022載體對(duì)DC生物學(xué)影響Ribas A. Curr Gene T 最近研究發(fā)現(xiàn)，APA分子

8、（antigen presentation attenuators）為抗原呈遞細(xì)胞內(nèi)控制信號(hào)傳導(dǎo)通路的關(guān)鍵性抑制因子，阻止了有效的抗自身腫瘤抗原的免疫反應(yīng)。 SOCS1（suppressor of cytokine signaling 1）是APA中最關(guān)鍵性抑制因子之一。因此我們?cè)诔Ｒ?guī)采用細(xì)胞因子促進(jìn)DC細(xì)胞成熟的基礎(chǔ)上，加上了針對(duì)APA的小干擾RNA以特異性阻斷其基因功能；加上特異性的腫瘤相關(guān)抗原（Survivin和muc1）負(fù)載，誘導(dǎo)的DC細(xì)胞與T細(xì)胞具有成熟度更高、功能與特異性更強(qiáng)的顯著優(yōu)點(diǎn)。19細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022 最近研究發(fā)現(xiàn)，APA分子（antigen present

9、a提高DC抗原呈遞能力及腫瘤特異性CTL效應(yīng)SOCS1SurvivinMuc1Flagellin中試放大急毒試驗(yàn)安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)人體細(xì)胞試驗(yàn)Ad520細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022提高DC抗原呈遞能力及腫瘤特異性CTL效應(yīng)SOCS1Surv細(xì)胞免疫治療的優(yōu)點(diǎn)體外活化、擴(kuò)增和修飾免疫細(xì)胞可選擇性的控制其GVL；增殖速度快、殺傷活性高、副作用小等優(yōu)點(diǎn)；體外培養(yǎng)繞過(guò)了體內(nèi)免疫系統(tǒng)中復(fù)雜的負(fù)調(diào)控系統(tǒng)的影響，活性更強(qiáng)；輸注免疫細(xì)胞可避免由于應(yīng)用大劑量的某些細(xì)胞因子引起的毒副反應(yīng)。 21細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022細(xì)胞免疫治療的優(yōu)點(diǎn)體外活化、擴(kuò)增和修飾免疫細(xì)胞可選擇性的控制面 臨 的 問(wèn) 題為使制

10、備的免疫細(xì)胞具有更好的GVL效應(yīng)，體外擴(kuò)增技術(shù)尚需進(jìn)一步研究和完善；治療方法尚不完善, 對(duì)于治療時(shí)機(jī)、劑量、療程、給藥方法、挑選合適的佐劑及如何克服腫瘤免疫逃逸等方面均有許多尚待解決和完善的問(wèn)題；針對(duì)白血病的免疫機(jī)制及細(xì)胞回輸后在體內(nèi)的作用機(jī)制尚未完全闡明，一些細(xì)胞免疫治療的療效還存在爭(zhēng)議。22細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022面 臨 的 問(wèn) 題為使制備的免疫細(xì)胞具有更好的GVL效應(yīng)，體細(xì)胞免疫治療的不良反應(yīng) 免疫細(xì)胞是誘導(dǎo)、激活的自體細(xì)胞，這種治療相當(dāng)安全，有部分病例在細(xì)胞回輸后2-10個(gè)小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)體溫升高（37.240），一般持續(xù)時(shí)間26小時(shí)，可自行緩解，極少數(shù)高熱病人使用解熱藥就可以完全

11、緩解。23細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022細(xì)胞免疫治療的不良反應(yīng) 免疫細(xì)胞是誘導(dǎo)、激活的研究方法及步驟 病人的選擇：急性白血病異基因移植后復(fù)發(fā)（包括形態(tài)學(xué)復(fù)發(fā)、分子學(xué)復(fù)發(fā)和細(xì)胞遺傳學(xué)復(fù)發(fā)）的患者。簽署治療知情同意書DC-CIK體外培養(yǎng)治療方法：4次DC，2次CIK。觀測(cè)指標(biāo)：臨床療效、 治療前后免疫功能變化、 治療前后細(xì)胞因子的變化。24細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022研究方法及步驟 病人的選擇：急性白血病異基因移植后復(fù)發(fā)（包括采集供者或患者抗凝全血50-60ml培養(yǎng)DC和CIK細(xì) 胞 回 輸d7 d9 d11 d13DC DC DC DC CIK CIK治 療 方 法25細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)

12、10/4/2022采集供者或患者抗凝全血50-60ml培養(yǎng)DC和CIK細(xì) 胞 26細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/202226細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/3/2022 急性白血病異基因移植后復(fù)發(fā)17例，其中分子學(xué)復(fù)發(fā)9例，骨髓復(fù)發(fā)7例，中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病復(fù)發(fā)1例； 細(xì)胞免疫治療異基因移植后復(fù)發(fā)的完全緩解率為82%,GVHD發(fā)生率為65%，均為度以下GVHD。 臨 床 資 料27細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022 急性白血病異基因移植后復(fù)發(fā)17例，其中分子學(xué)復(fù)發(fā)9例，骨髓細(xì)胞免疫治療急性白血病移植后復(fù)發(fā)病例性別/年齡診斷供者CIK前治療GVHD臨床情況細(xì)胞治療后生存時(shí)間存活情況治療前治療后1F/35AML同

13、胞NONO分子學(xué)復(fù)發(fā)CR14M29M2M/21AML無(wú)關(guān)格列衛(wèi) cGVHD分子學(xué)復(fù)發(fā)CR22M31M 3M/31AML無(wú)關(guān)NoGVHD分子學(xué)復(fù)發(fā)CR17M21M4F/19ALL單倍體NoGVHD分子學(xué)復(fù)發(fā)CR10M27M5M/17AML 無(wú)關(guān)NoNo分子學(xué)復(fù)發(fā)CR15M32M6F/28AML無(wú)關(guān)NoGVHD分子學(xué)復(fù)發(fā)CR-RL3M死亡7F/55AML同胞DSI腸道GVHD 分子學(xué)復(fù)發(fā)復(fù)發(fā)6M死亡8M/61AML同胞NoGVHD分子學(xué)復(fù)發(fā)CR5M死亡 9M/8AML無(wú)關(guān)+單倍體NoGVHD分子學(xué)復(fù)發(fā)CR14M34M10F/34MDS-AML同胞手術(shù)+放療+化療 NO髓外復(fù)發(fā)CR26M73M11M

14、/25ALL無(wú)關(guān)化療NO復(fù)發(fā)后CRCR40M64M12F/38AML同胞手術(shù)+放療+化療 GVHD復(fù)發(fā)后CRCR31M129M13M/38ALL無(wú)關(guān)化療NO復(fù)發(fā)后CRCR8M26M14F/15AML單倍體化療GVHD復(fù)發(fā)后PR未緩解3M死亡15M/22ALL單倍體化療GVHD復(fù)發(fā)后NRCR-RL4M死亡16M/30AML同胞鞘注NOCNLNR17M35M17F/35 M3-CR3同胞砷劑cGVHD復(fù)發(fā)CR13M59MDSI 供者外周血造血干細(xì)胞輸注CR-RL CR后3個(gè)月骨髓復(fù)發(fā) 病例9為第一次無(wú)關(guān)供者移植后2月復(fù)發(fā)，化療后未緩解，給予第二次單倍體移植后9月分子學(xué)復(fù)發(fā)病例12為移植后5年髓外復(fù)

15、發(fā)，給予手術(shù)和局部放療，3個(gè)月后骨髓復(fù)發(fā)28細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022細(xì)胞免疫治療急性白血病移植后復(fù)發(fā)病例性別/年齡診斷供者CIK病例資料患者，女性，49歲2001.6 診斷為急性髓性白血病M2 DA方案化療1療程后獲CR，鞏固化療1療程2001.9 HLA相合同胞外周血干細(xì)胞移植2009.6 胸壁髓外復(fù)發(fā) 手術(shù)切除+放療+細(xì)胞免疫治療2010.3 髓外+骨髓復(fù)發(fā)，blast 87.5% MA方案化療1療程獲CR此后予細(xì)胞免疫治療5次，持續(xù)CR狀態(tài)2012.5 復(fù)查提示分子學(xué)復(fù)發(fā)，TA方案化療+細(xì)胞免疫治療，再次達(dá)CR。29細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022病例資料患者，女性，49歲2

16、9細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/3/20細(xì)胞免疫治療前后殘留變化 DC+CIK TA方案化療30細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022細(xì)胞免疫治療前后殘留變化 DC+CI患者細(xì)胞免疫治療前后殘留變化無(wú)關(guān)供者移植移植后+10月自體細(xì)胞免疫治療+11月+15月+13月31細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022患者細(xì)胞免疫治療前后殘留變化無(wú)關(guān)供者移植移植后+10月自體細(xì)細(xì)胞免疫治療聯(lián)合化療治療粒細(xì)胞肉瘤一例 孫某，男性，43歲； 2011年9月以左頸部皮膚腫塊起病，活檢后病理經(jīng)江蘇省人民醫(yī)院、江蘇省腫瘤醫(yī)院、北京大學(xué)病理科會(huì)診，診斷為髓系肉瘤； 先后接受DA、MA（2療程）、FLAG（2療程）方案共5療程化療，初始

17、化療效果可，隨后化療效果不佳，化療后皮膚腫塊不消失；32細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022細(xì)胞免疫治療聯(lián)合化療治療粒細(xì)胞肉瘤一例 孫某，男性，43歲； 2012年5月28日就診我科； 5月30日開(kāi)始給予TA+VM-26方案化療，化療后輸注DC+CIK細(xì)胞； 7月20日開(kāi)始給予TA+VM-26方案化療，化療后輸注DC+CIK細(xì)胞； 治療過(guò)程中骨髓始終未受累。33細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022 2012年5月28日就診我科；33細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/35月30日6月15日7月16日8月21日化 療化 療34細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/20225月30日6月15日7月16日8月21日化 療化 療5

18、月30日6月15日7月16日8月21日35細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/20225月30日6月15日7月16日8月21日35細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)AML自體移植聯(lián)合 DC-CIK治療流程急性髓性白血?。ㄖ械臀?，M3除外）（留標(biāo)本）誘導(dǎo)化療完全緩解（無(wú)HLA相合供者）鞏固強(qiáng)化3-4個(gè)療程自體移植 血象恢復(fù)（4周后）DC-CIK細(xì)胞治療36細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022AML自體移植聯(lián)合 DC-CIK治療流程急性髓性白血病（中低急非淋自體骨髓移植后免疫治療結(jié)果（P=0.037)37細(xì)胞治療移植復(fù)發(fā)10/4/2022急非淋自體骨髓移植后免疫治療結(jié)果（P=0.037)37細(xì)胞治細(xì)胞免疫治療前后血清中細(xì)胞因子的對(duì)比 IFN-r（pg/ml）TNF-a（pg/ml）IL-10（pg/ml）IL-6（pg/ml）IL-4（pg/ml）IL-2（pg/ml）治療前7.082.554.203.273.800.787.534.107.723.246.250.60治療后88.62196.5066.12155.5826.3655.0426.5832.0149.7599.7042.8787.71P 值0.48