養(yǎng)殖池塘小型底棲動(dòng)物簡(jiǎn)易分離方法

1、養(yǎng)殖池塘小型底棲動(dòng)物分離方法研究研究對(duì)象生活史的全部或大部分時(shí)間生活于水體底部的水生動(dòng)物能通過(guò)500m孔徑篩網(wǎng)但不能通過(guò)42m孔徑篩網(wǎng)的動(dòng)物為小型底棲動(dòng)物（meiofauna）自由生活的線蟲(chóng) (Nematoda) 橈足類 (Copepoda, 主要 為猛水蚤Harpacticoida) 寡毛類(Oligochaeta)多毛類(Polychaeta)緩步動(dòng)物 (Tardigrada)介形類 (Ostracoda)渦蟲(chóng) (Turbellaria)腹毛蟲(chóng) (Gastrotricha)顎咽動(dòng)物 (Gnotostomulida)有甲動(dòng)物(Loricefera)須蝦類 (Mystacocarida) 螨類

2、 (Halacarida)動(dòng)吻蟲(chóng) (Kinorhyncha)主要類群(FENCHEL 1978; COULL, 1988)研究意義沉積物中有機(jī)碎屑的開(kāi)發(fā)者和底棲微藻及細(xì)菌的主要消耗者與細(xì)菌, 原生動(dòng)物等微型生物組成底棲小/微食物網(wǎng) 是許多經(jīng)濟(jì)魚(yú)、蝦和貝類幼體的優(yōu)質(zhì)餌料, 保持水質(zhì)穩(wěn)定，提高物質(zhì)轉(zhuǎn)化效率，促進(jìn)能量傳遞 物種多樣性高, 個(gè)體數(shù)量,分布廣泛, 個(gè)體微小、繁殖率高,生命周期短, 對(duì)微尺度環(huán)境改變反應(yīng)快速, 是環(huán)境污染監(jiān)測(cè)的重要生物指標(biāo)早期研究階段 (1900-1950)研究簡(jiǎn)史系統(tǒng)分類的加速發(fā)展和群落定性描述（20世紀(jì)50年代初-60年代中期）生態(tài)生理實(shí)驗(yàn)和生態(tài)系統(tǒng)動(dòng)力學(xué)研究的起端（6

3、0年代后期70年代）實(shí)驗(yàn)生物海洋學(xué)研究（80年代以來(lái)）Kowalevsky (1901)Giard(1904) Cobb (1920)Remane (1927, 1933)Mare (1942) 國(guó)際小型底棲動(dòng)物學(xué)家協(xié)會(huì)的成立小型底棲動(dòng)物研究指南McIntyre (1969)Fenchel et al., （1970）評(píng)價(jià)生態(tài)系統(tǒng)，環(huán)境改變的指示者 Lorenzen（1994）小型底棲動(dòng)物導(dǎo)論小型底棲動(dòng)物學(xué)成為獨(dú)立的成熟的前沿學(xué)科研究的中心養(yǎng)殖池塘國(guó)內(nèi)研究動(dòng)態(tài)起步晚 20 世紀(jì) 70-80 年代郭玉清，張志南，慕芳紅等人以陸架海域?yàn)橹?，啟?dòng)于渤海，在黃海、東海、南海陸續(xù)展開(kāi)以分類學(xué)和多樣性調(diào)查

4、為主養(yǎng)殖池塘小型底棲動(dòng)物研究于子山, 張志南. 蝦池小型底棲動(dòng)物的數(shù)量研究,1994翟雪梅, 張志南. 蝦池生態(tài)系能流結(jié)構(gòu)分析, 1998郭玉清, 葉兆弘. 蝦池小型底棲動(dòng)物類群組成和數(shù)量分布,2008小型底棲動(dòng)物分離方法手工直接挑選法淘洗法、移注法、冰浮法、耗氧法和密度梯度法等將硅溶膠應(yīng)用于分離（De Jonge et al., 1977）用Ludox 作為介質(zhì)的離心分離方法（NICHOLS, 1979）硅膠液密度梯度離心技術(shù)是最有效的提取方法（McIntyre & Warwick 1984 ; Giere, 1993）硅膠液密度梯度離心技術(shù)所有進(jìn)行分離小型底棲生物的技術(shù), 都依賴于沉積物和

5、小型底棲動(dòng)物間密度的差異底棲樣品比重2.52.8，小型底棲動(dòng)物比重1.15，硅膠溶液1.21.3高速離心機(jī)Ludox HS 40 550元/L由聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) 覆膜的鋁酸鹽溶膠 (Percoll)優(yōu)點(diǎn)精確分離率高通用標(biāo)準(zhǔn)缺點(diǎn)成本高儀器需求高不利于推廣硅膠液密度梯度離心技術(shù)所有進(jìn)行分離小型底棲生物的技術(shù), 都依賴于沉積物和小型底棲動(dòng)物間密度的差異底棲樣品比重2.52.8，小型底棲動(dòng)物比重1.15，硅膠溶液1.21.3高速離心機(jī)Ludox HS 40 550元/L由聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) 覆膜的鋁酸鹽溶膠 (Percoll)目標(biāo)和措施簡(jiǎn)易分離法分離液成本NaCl溶液蔗糖溶液簡(jiǎn)化操作

6、步驟用攪拌沉淀代替高速離心降低儀器要求不使用高速離心機(jī)保證分離效果使用人工底泥進(jìn)行校正測(cè)試預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)查蝦塘中小型底棲動(dòng)物的類群和豐度確認(rèn)使用福爾馬林固定的必要性確定蔗糖溶液和NaCl溶液的濃度簡(jiǎn)易分離法研究以克氏原螯蝦養(yǎng)殖池塘里常見(jiàn)的水蚯蚓和線蟲(chóng)為小型底棲動(dòng)物的代表，比較純水、飽和蔗糖溶液、飽和NaCl溶液和硅膠溶液對(duì)小型底棲動(dòng)物的分離比率分別取50條水蚯蚓和100條線蟲(chóng)經(jīng)5%福爾馬林固定，虎紅染色劑染色后混入10ml未經(jīng)染色的底泥土中，制成一份待測(cè)樣品向待測(cè)樣品中加入200ml分離液，并快速攪拌20s，靜止5s待粗沙粒沉淀，倒出上層清液，在體式顯微鏡下記錄清液中染色的水蚯蚓和線蟲(chóng)的數(shù)量，計(jì)算分

7、離比率分離液分為水、飽和蔗糖溶液和飽和食鹽溶液三組，每組設(shè)置5個(gè)重復(fù)對(duì)照組使用硅膠溶液Ludox HS40作為分離液，使用密度梯度離心法數(shù)據(jù)分析LSD (LEAST-SIGNIFICANT DIFFERENCE) 最小顯著差數(shù)法DUNCAN (DUNCANS MULTIPLE RANGE TEST) 新復(fù)極差法（SSR）實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果飽和NaCl溶液飽和蔗糖溶液純凈水Ludox HS 40水蚯蚓61.2%82%3.2%94.4%線蟲(chóng)84%47%6.6%93.8%水蚯蚓分離率：Ludox HS 40 飽和蔗糖溶液 飽和鹽溶液 純凈水線蟲(chóng)分離率： Ludox HS 40 飽和鹽溶液 飽和蔗糖溶液 純凈水分差分析表明四種不同分離液的分離率均有顯著差異討論器材簡(jiǎn)單，分離液易獲得，操作簡(jiǎn)單，時(shí)間短使用飽和蔗糖溶液分離水蚯蚓，使用飽和NaCl溶液分離線蟲(chóng)，分離率可以達(dá)到80%以上此方法可用于日常養(yǎng)殖生產(chǎn)中對(duì)池塘底