FISH在血液病診斷中的新應用

1、20 80 年代熒光原位雜交技術一經出現(xiàn),便成為眾多科學家,尤其是細胞遺傳學家們關切的焦點。所謂的FISH(熒光原位雜交,它是利用已知核酸序列作為探針并且直接以熒光素標記或先以生物素或地高辛等半抗原標記后再與靶NA 進行雜交,然后經過免疫細胞化學進程連接上熒光素標記物下觀察雜交信號從而關于標本中待測核酸進行定性、定位和定量分析的技術。由于利用FISH 技術可在顯微鏡下直接觀察到基因組的異常狀況,因而大大地提高了染色體分析的敏感性、準確性和可靠性;隨著探針的設計與制作技術的發(fā)展再加上熒光標記手段的強化FISH 技術慢慢受到臨床學者們的關切,越來越多臨床學者們利用FISH(熒光原位雜交技術進行臨床

2、診斷或作為扶助診斷的手段。在我國,最早引入FISH 技術進行臨床試驗的方法的是進行白血病分析的血液學家們利用文獻上已知的各種與血液疾病相關的基因作為檢測的目標經過這類基因或特殊區(qū)段在細胞染色體上的不同表現(xiàn)從而分析、判斷患者的患病情況與病因,并且以此作為扶助決定后續(xù)治療方案或監(jiān)控患者預后情況的依據。由于FISH 在臨床診斷的應用探針進行檢測的過去,由于關于疾病的生理現(xiàn)象與基因組的異常情況的了解不足使得 以FISH 為基礎開展的診斷項目只能局限于一些為人所熟知的易變基因的檢測中最常見的BCR/CML白血病分型判別標準之一隨著學者們關于各種臨床疾癥起因的研究的慢慢深入科學家們發(fā)現(xiàn),多的疾病與基因組水

3、平的變異相關此外,由于學者們關于FISH技術的了解與普及現(xiàn)時很多臨床學家們除了采用FISH 在血液病診斷中的新應用圖 1. Vysis 血液病四種特殊探針類型ual Color, Single Fusion, 雙色單融合探針用于檢測細胞內發(fā)生的高百分比的特異性染色體易位, NA 雜交靶位點位于兩個遺傳斷裂點之間。ES (Extra Signal, 額外信號使用ES 探針可以降低在正常細胞中發(fā)生的由于雜交探針共區(qū)域而造成的異常圖像。ual Color, Break Apart,雙色分離探針適用于可能發(fā)生在一個已知的基因斷裂點發(fā)生多重易位。ual Color, ual Fusion,雙色雙融合探針

4、可以降低正常細胞核中出現(xiàn)非正常信號的幾率,適用于檢測低水平發(fā)生的平衡易位及不同染色體間發(fā)生的兩個長片段跨度斷裂。6CLL 12 各種易位平均值中數(shù)生存期月32 79 114 113 24此外患者,FISH技術也是一個有效分型的指標,血液病的研究者們都知道患者不同分型的患者間,其病征、受藥的效果、愈后的情況都會有很大的區(qū)別過去,血液學家們常用流式檢測技術進行分型近年來,人們發(fā)現(xiàn)患者中不同分型間的區(qū)別可以直接在染色體水平上進行檢測且準確率很高因此越多學者們建議附上FISH 的實驗結果以作為判別患者所屬亞群決定其后治療方案的依據。疾病亞型染色體易位相關探針 M2t(8;2LSIAML/ETOC,F

5、M3t57LSIPML/RARAC,F LSI CMEo6ort66LSICBFbetaCM5q23重排LSIMLLC除了一些通用的指針關于于一些特殊的樣本,分析G帶顯色時從其染色體圖譜上難以判斷其染色體變異的樣本可以經過關于這些樣本的疑存問題區(qū)段的相關探針進行確診像這類的實驗設計FISH的實驗結果填補顯帶分析的不足以作為顯帶結果的有力證據及扶助工具。例如17 號、15 號染色體變異的染色體圖譜從顯帶圖譜的情況,難以判斷出此兩染色體上的變異到底屬于缺失還是易位在顯微鏡下,經過WCP15探針WCP17綠我們可以清楚的判斷出該細胞中存在的變異類別為ins(17;15(q12;q11q22(詳細圖片

6、請參見基因公司產品手冊。疾病亞型染色體易位相關探針外套細胞淋巴瘤t(11;14(q13;q32 LSI IGH/CCN1 C,F濾泡性淋巴瘤t(14;18(q32;q21 LSI IGH/BCL2 C,F粘膜相關性淋巴瘤t(11;18(q21;q21 LSI AP12/MAIT1 C, F帕基特淋巴瘤t(8;14(q24;q32 LSI MYC or LSI IGH/MYCCEP8 CTC彌漫大細胞淋巴瘤3q27 LSI BCL6 C, 由于FISH 技術不僅可關于單細胞懸液進行檢測織切面樣本進行病理診斷因此FISH技術,除了可用一些探針關于白血病的種類進行判別、亞群分型外,FISH技術亦可應

7、用于另一部分的常見血液疾病淋巴瘤的診斷中。行的新的檢測方案外FISH 46 條染色體進行變異分析。所謂的多色5 24 關于染色體而制備整套染色體涂染探針一次雜交即可分辯全部人類染色體,經過利用不同染色體上雜交數(shù)種不同顏色探針的不同配比狀況經過一些專業(yè)的數(shù)據分析軟件FISH 信號模擬分析軟件關于各染色體上的多種顏色探針的雜交情況進行多色信號模擬分析, 24 24 種不同的顏色遺傳學家們便可經過簡單的色彩分析以識別染色體復雜異常、標記染色體和FISH 技術關于一些熟悉的疾病相關基因進行診斷外,學者們也慢慢的開始自行設計、配關于、組合不同的探針以關于不同的疾患進行染色體分析例如過去,關于于PhCML的病患學者們一般只采用LSI 雙色雙融合探針進行檢測以判別此 CML 患者是否屬于 Ph+亞型;然而最近有學者指出同為Ph+ CML的病患,其病程的進展速率亦有很大的不同經過研究發(fā)現(xiàn),其中有一類患者兩關于基因易位融合的變異外,9 號染色體的長臂部分缺失這類病人具有一旦病發(fā)其發(fā)病期較其它不含的患者短且生存期較一般的Ph+ CML的病患短等特性因此,血液學家們在遇到CML 患者時除了應用傳統(tǒng)的LSI 雙色雙融合探針進行分析外還可考慮聯(lián)合一些如 針關于患者進行進一步的辨析。同樣的情況