食品安全快速檢測技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

1、實(shí)驗(yàn)一速測卡快速測定果蔬中農(nóng)藥殘留【目的要求】通過實(shí)訓(xùn)，理解速測卡法的基本原理，掌握速測卡法檢測的基本技能?！緳z測原理】膽堿酯酶可粗話靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸和靛酚（藍(lán)色），有機(jī)磷或 氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶有抑制作用，使催化、水解、變色過程發(fā)生改變， 由此可判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在?！局饕獌x器】農(nóng)藥殘留速測卡，超聲波提取儀，便攜式農(nóng)藥殘留速測儀，電子天平?！静牧吓c試劑】果蔬樣品34種。pH7.5的磷酸緩沖液：分貝稱取15.0g磷酸氫二鈉與1.59g磷酸二氫鉀，用500mL 蒸餾水溶解?！静僮鞑襟E】樣品前處理A整體測定法 將果蔬樣品剪成1cm左右見方碎片，取5

2、g放入燒杯中，加入 10mL緩沖溶液，搖勻，靜置10min以上或用超聲波提取儀提取2min左右，得 到的浸泡溶液為樣品提取液。B表面測定法擦去果蔬表面灰塵，滴35滴緩沖溶液在果蔬表面，用另一片 果蔬在滴液處輕輕摩擦，得到的滴液為樣品提取液 分析檢測取一片農(nóng)藥殘留速測卡，用白色藥片沾取樣品提取液（34滴），在便攜式農(nóng)藥 殘留速測儀（37C）防止10min以上進(jìn)行預(yù)反應(yīng)，預(yù)反應(yīng)后的藥片表面必須保持 濕潤;將農(nóng)藥殘留速測卡對折，用手捏3min或用便攜式農(nóng)藥殘留速測儀恒溫3min， 使紅色藥片與白色藥片疊合發(fā)生反應(yīng)；每批測定應(yīng)設(shè)一個(gè)緩沖液空白對照檢測卡。【結(jié)果判定】與空白對照檢測卡對比，白色藥片不變色

3、或?yàn)闇\藍(lán)色均為陽性結(jié)果，白色藥片變成天藍(lán) 色或與空白對照檢測卡相同為陰性結(jié)果。實(shí)驗(yàn)二鹽酸克侖特羅檢測卡【適用范圍】此方法應(yīng)用于豬肉、內(nèi)臟和豬尿液中鹽酸克侖特羅含量的檢測【檢測原理】本試劑運(yùn)用抗原抗體的特異反應(yīng)以及側(cè)向色譜和膠體金技術(shù)進(jìn)行尿液中克 侖特羅分子的快速定性檢測。用BSA偶聯(lián)的克侖特羅分子和膠體金顆粒結(jié)合后，包被在醋酸纖維素膜上； 在硝酸纖維素膜上將克侖特羅抗體和BSA抗體分別包被在檢測區(qū)（T）和質(zhì)控區(qū) （C）。當(dāng)尿液樣本加到加樣孔后，樣本中的克侖特羅分子和克侖特羅-BSA-膠體 金偶聯(lián)物一起色譜泳動(dòng)到檢測區(qū)競爭與克侖特羅抗體結(jié)合，剩余的克侖特羅 -BSA-膠體金繼續(xù)泳動(dòng)到質(zhì)控區(qū)域抗體

4、結(jié)合。因此，當(dāng)樣本中的克侖特羅濃度超 過一定量后，膠體金偶聯(lián)物就不能和克侖特羅抗體結(jié)合，此時(shí)檢測區(qū)不出現(xiàn)紫紅 色線條；當(dāng)樣本中克侖特羅濃度低于一定值或樣本中沒有克侖特羅時(shí)，膠體金偶聯(lián)物就 與克侖特羅抗體結(jié)合，從而在檢測區(qū)顯示出意料紫紅色線條；而無論樣品中是否含有克 侖特羅，質(zhì)控區(qū)都會(huì)出現(xiàn)紫紅色線條，以示檢測有效?！局饕獌x器】食品加工機(jī)，低速離心機(jī)，電子秤（精度g），250gL單道微量移液器（移液槍）。【材料與試劑】鹽酸克侖特羅檢測卡、檢測試劑A（3%三氯乙酸溶液）、檢測試劑B（0.10mmol/L氫氧 化鈉溶液）、pH試紙（114）、剪刀、10mL試管（或離心管）、一次性塑料吸管、一次性手 套

5、等。【操作步驟】從原包裝鋁箔袋中取出檢測卡，在1h內(nèi)應(yīng)盡快地使用。將肉或內(nèi)臟樣本用剪刀簡稱隨調(diào)后放入食品加工機(jī)中用一字刀粉碎，稱取5g粉碎樣本 置于試管中，加入5mL檢測試劑A。蓋上蓋，搖勻，浸泡約10min。用離心機(jī)離心裝有浸泡液和樣本的試管2min（3000r/min），用移液槍移取250pL上清 液轉(zhuǎn)移入2mL檢測管中，加入約1滴檢測試劑B，調(diào)整pH值至7左右。將鹽酸克侖特羅檢測卡置于干凈平坦的臺(tái)面上，用塑料吸管垂直滴加3滴無空氣樣品處 理液于加樣孔內(nèi)。等待紫紅色條帶的出現(xiàn)，測試結(jié)果應(yīng)在5min時(shí)讀取?！窘Y(jié)果判定】陽性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色條帶，在測試區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶

6、出現(xiàn)。陰性（-）：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C） 內(nèi)。無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或檢測卡已變質(zhì)損壞， 應(yīng)重新測試1次，如仍為此現(xiàn)象，應(yīng)更換檢測卡或聯(lián)系供應(yīng)廠家。陽性結(jié)果表明鹽酸克侖特羅含量在閾值以上，陰性結(jié)果表明鹽酸克侖特羅含量在閾值以 下?！眷`敏度】靈敏度（閾值）：根據(jù)每種檢測卡控制濃度而定，鹽酸克侖特羅有3ng/mL（kg）、5ng/mL （kg）、6ng/mL（kg）等控制規(guī)格，判斷前請向供應(yīng)廠家咨詢控制閾值?！咀⒁馐马?xiàng)】針對豬組織和尿液采用不同類型的檢測卡，使用時(shí)應(yīng)區(qū)別使用。使用鹽酸克侖特羅（尿液）檢測卡對豬尿液進(jìn)行檢驗(yàn)

7、時(shí)，直接將豬尿液代替樣品處理液 用于檢測即可。肉及內(nèi)臟中脂肪會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果，取樣時(shí)請?zhí)蕹庋劭梢姷闹?。鹽酸克侖特羅檢測卡應(yīng)在常溫下使用，不用對剛屠宰的豬肉或冷凍豬肉進(jìn)行直接檢測。自來水、蒸餾水或去離子水不能作為陰性對照，可用與閾值接近的幾個(gè)濃度階梯來校驗(yàn) 檢測卡的靈敏度。（本項(xiàng)目參考標(biāo)準(zhǔn)：NY/9T933-2003尿液中鹽酸克侖特羅的測定膠體金免疫色譜法）實(shí)驗(yàn)三 氯霉素ELISA試劑盒使用【目的要求】理解氯霉素ELISA試劑盒在蜂蜜、牛乳及組織中氯霉素檢測的現(xiàn)實(shí)意義?！緳z測原理】本方法是應(yīng)用抗原抗體反應(yīng)原理，采用競爭一直法構(gòu)建的，用于定量測定蜂蜜、肉了你 及牛乳中氯霉素殘留的一種ELISA

8、試劑。在預(yù)包被有抗氯霉素抗體的微孔板的反應(yīng)孔內(nèi)，依次加入氯霉素酶標(biāo)記物、氯霉素標(biāo)準(zhǔn) 或樣品溶液，然后孵育一定時(shí)間，則游離氯霉素與氯霉素酶標(biāo)記物競爭氯霉素抗體結(jié)合位點(diǎn) （競爭性酶免疫分析）。沒有結(jié)合的氯霉素酶標(biāo)記物在洗滌步驟中被除去，將酶基質(zhì)（過氧 化脲）和發(fā)色劑（TMB）加入到微孔中并且孵育一定時(shí)間，結(jié)合的氯霉素酶標(biāo)記物將無色 的TMB轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物。未顯色孔為陽性，顯色孔為陰性。檢測過程設(shè)置陰性對照，陽 性對照或空白對照，可通過目測對比顏色變化進(jìn)行定性判讀，也可加入終止液使顏色由藍(lán)色 轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，讀取450nm處OD值（選擇參與波長N600nm）；或直接在630nm處讀取OD 值。OD值與

9、樣品中的鏈霉素濃度呈反比。可進(jìn)行定性、定量檢測?！酒鞑摹亢銣叵洌ǚ跸洌?，單道微量移液器，塑料吸管，洗瓶；酶標(biāo)儀，洗板機(jī)；動(dòng)物性制品， 乳制品等?！静僮鞑襟E】熟悉試劑盒說明書。將試劑盒內(nèi)的預(yù)包被孔條（通常是由12條可拆卸板條組成，每條8孔），按需要取出8 孔條使平衡到室溫，操作過程所需的試劑一同取出平衡到室溫。將準(zhǔn)備好的供試樣品溶液、標(biāo)準(zhǔn)品、陽性對照、陰性對照等分別定量取到反應(yīng)微孔內(nèi)并 進(jìn)行孵育，然后用配套洗液清洗反應(yīng)微孔。上述微孔去除多余水分后，逐孔定量加入酶標(biāo)記物，按要求孵育一定時(shí)間，然后用配套 洗液清洗反應(yīng)微孔。上述微孔去除多余水分后，逐孔定量加入TMB，按要求避光孵育一定時(shí)間，然后直接

10、判讀定性結(jié)果，或在酶標(biāo)儀上讀取OD值。實(shí)驗(yàn)四蔬菜、水果中鉛含量的快速測定【目的要求】掌握蔬菜、水果樣品的前處理方法；學(xué)會(huì)配制所需試劑；對測定結(jié)果能正確進(jìn)行判定。 【檢測原理】樣品經(jīng)處理后鉛與反應(yīng)試劑顯色，與空白對照管比較，不得更深?！酒鞑募霸稀考舻?，電子秤，塑料試管。果蔬樣品34個(gè)品種。【試劑】試劑A濃酸溶液試劑B 0.2mol/L三羥甲基氨基甲烷溶液。試劑C 20mL 1%鄰二氮菲與50M1 2.8%醋酸銨混合溶液。試劑D 0.10g鉛試劑(雙硫腙)置于100mL 2%吐溫-20溶液中，于70C恒溫水浴中加 熱 30min。蒸餾水或純凈水等?！静僮鞑襟E】樣品處理 稱取適量樣品，用剪刀剪碎，

11、從中準(zhǔn)備稱取約2.5g置于取樣杯中，加 入蒸餾水或純凈水10mL，再加入1滴指示劑A浸泡10min，待測。測定 取待測液1mL于1.5mL離心管中，依次加3滴指示劑B、1滴指示劑C、 1滴指示劑D，搖勻后放置3min，觀察顏色變化(表1)。同時(shí)用蒸餾水或純凈水做一個(gè)空 白對照管。表1結(jié)果記錄表空白對照管樣品管顏色變化結(jié)果判定結(jié)果判定比較樣品與空白對照管顯色結(jié)果。如果與空白對照管比較明顯深，呈 橙紅色或紅色，即說明樣品中鉛含量超過國家限量標(biāo)準(zhǔn)。若樣品與空白對照管顏色一樣或接 近，呈黃色，則說明樣品中鉛未檢出。將準(zhǔn)備好的供試樣品溶液、標(biāo)準(zhǔn)品、陽性對照、陰性 對照等分別定量取到反應(yīng)微孔內(nèi)并進(jìn)行孵育，

12、然后用配套洗液清洗反應(yīng)微孔。實(shí)驗(yàn)五蜂蜜中糊精和淀粉的快速檢測【檢測意義】最常見的蜂蜜產(chǎn)假是加入這趟、糊精和淀粉熬制的混合物。產(chǎn)假蜂蜜不單是經(jīng)濟(jì)利益的 問題，而且會(huì)帶來一些食用安全方面的危害。如易變質(zhì)酸敗等。本方法對蜂蜜中摻入的糊精 或淀粉非常敏感，可快速加以鑒別?！驹噭繙y試液配制：碘液（12）14g，溶于含有36g碘化鉀（KI）的100mL水中，加鹽酸三滴， 用水稀釋至1000mL，混合?！静僮鞑襟E】取一支試管，加入約1mL蜂蜜樣品，加入約3mL的純凈水，振搖混溶，滴入3滴測試 液，搖勻，5min后觀察試管溶液顏色變化?！窘Y(jié)果判定】如果試管溶液變?yōu)樽厣蜃仙蜃刈仙纱_定樣品中含有糊精；如

13、果測試液變?yōu)樗{(lán)色 或藍(lán)黑色，可確定樣品中含有淀粉及糊精。其顏色隨其含量的加大而加深。檢出限為0.2%。 正常蜂蜜測試管的顏色為黃色。實(shí)驗(yàn)六 水發(fā)魷魚中甲醛額快速測定【目的要求】根據(jù)待測樣品特性，選擇合適的快速檢測方法；掌握本實(shí)驗(yàn)所用試劑的配制及試劑盒的 維護(hù)；采樣正確，處理合適；正確判斷檢測結(jié)果。【原理方法】亞硝基亞鐵氰化鈉法測定水發(fā)魷魚中的甲醛。在堿性條件下，甲醛與亞硝基亞鐵氰化 鈉反應(yīng)后使溶液出現(xiàn)藍(lán)色特征。【器材】10mL納氏比色管，或者具塞塑料離心管。水發(fā)魷魚或者水發(fā)蝦仁等樣品若干。【試劑】4%鹽酸苯肼溶液 稱取固體鹽酸苯肼4g溶于水中，稀釋至100mL （現(xiàn)用現(xiàn)配）。5%亞硝基亞鐵氰化

14、鈉溶液 稱取固體亞硝基亞鐵氰化鈉5g溶于水中，稀釋至100mL （現(xiàn)用現(xiàn)配）。10%氫氧化鉀溶液 稱取固體氫氧化鉀10g溶于水中，稀釋至100mL。【操作步驟】直接將水發(fā)水產(chǎn)品浸泡液或水產(chǎn)品上殘存的浸泡液5mL滴加至10mL納氏比色管中， 然后加入1mL 4%鹽酸苯肼、35滴新配的5%亞硝基亞鐵氰化鈉溶液，再加入35滴10% 氫氧化鉀溶液，5min內(nèi)觀察顏色變化。給出檢測結(jié)果，完成水發(fā)魷魚中甲醛的檢測報(bào)告。實(shí)驗(yàn)七馬鈴薯中龍葵堿的快速檢測【目的要求】通過實(shí)訓(xùn)掌握馬鈴薯中龍葵堿的快速檢測方法及原理，熟悉實(shí)驗(yàn)操作，了解試劑配制?！驹矸椒ā魁埧麎A能與釩酸銨、硒酸鈉顯色，且隨時(shí)間變化，顏色變化多樣，是龍葵堿的特征性 反應(yīng)。同時(shí)龍葵堿也能與濃硝酸、濃硫酸發(fā)生氧化還原顯色反應(yīng)?！驹噭库C酸銨溶液 稱取1g釩酸銨，溶于1:1000的硫酸-水溶液中。硒酸鈉溶液 稱取0.3g硒酸鈉，溶于8mL水中，然后加入6mL硫酸，混勻?！静僮鞑襟E】（1）樣品處理 取適量土豆到隨后榨汁