Engineered mTgase定點偶聯(lián)課件

1、Engineered mTgase定點偶聯(lián)提綱1.Tgase定點偶聯(lián)的作用機理2.不同來源的Tgase作用底物廣泛性不同。3.目前Tgase進行定點偶聯(lián)的應用4.石藥集團Engineered mTgase技術及該定點偶聯(lián)方法應用效果。5.各種定點偶聯(lián)方法的比較。6.總結轉谷氨酰胺酶（Tgase）的催化作用機理圖mTGase起催化作用的三聯(lián)體：由在溝里的Cys64,Asp255和His274組成，因此需要其作用底物Gln和Lys（NH2-）需在物質的表面的靈活變動區(qū)。鏈不同來源的轉谷氨酰胺酶(Tgase)在作用底物的廣泛性上差異選擇哪種酶？所選擇的該種屬的酶是否作用于我們的目標物？hGhGCSF

2、IFN a2bEPOEPO+DTTDMC+DTThGhGCSFIFN a2bEPOEPO+DTTDMC+DTTmTgaseG-Tgase考馬斯亮藍染色熒光成像圖目前Tgase在抗體定點偶聯(lián)藥物方面的應用1、野生型Tgase作用于去糖基化的抗體的Q295。2、Innate Pharm的技術：對抗體Asn297進行突變，而產生突變的去糖基化抗體(鏈接)將該五肽插入到抗體的90個位點，有12個位點偶聯(lián)效果好4、石藥選擇不改變抗體，而改變Tgase(Engineered mTgase)。使Tgase能作用于所有IgG1/2/4 Fc的Gln(Methods to make homogenous ant

3、ibody drug conjugates) Dophen Biomed對bacterial transglutaminase (BTG或mTgase)進行改造，主要加大了BTG活性部位蛋白袋結構 的開口，使得抗體表面的谷氨酰胺能夠靠 近到BTG酶起催化作用的半胱氨酸殘基部位，這樣就能讓酶發(fā)揮催化作用而使藥物定點偶聯(lián)到抗體恒定區(qū)表面的谷氨酰胺殘基Q295上。mTgase催化蛋白上的Gln位點越少，則此mTgase的選擇性越高。這篇文章中提到，提高mTgase的選擇性方法：1.通過在mTgase的 N-末端的增Met,Ala_Pro或Gly_Pro2.突變氨基酸（G250S或G250T）上表看出

4、不同來源的Tgase通過突變或增加N-末端氨基酸所帶來的選擇性提高程度不一樣。綜上推測：石藥對mTgase的改造應該是通過突變或序列的增減實現(xiàn)。一步法將酶和linker毒素同時與抗體混合，需要抗體濃度20mg/ml以上Engineered mTgase 催化抗體偶聯(lián)藥物：一步法兩步法先用酶處理抗體，后進行偶聯(lián)，對抗體濃度要求低化學選擇性配對Engineered mTgase 催化抗體偶聯(lián)藥物：二步法Engineered mTgase與其它偶聯(lián)技術的比較除Engineered mTgase技術外其它定點偶聯(lián)技術無法利用現(xiàn)有抗體不同偶聯(lián)技術的穩(wěn)定性比較其它定點偶聯(lián)技術比Engineered mTgase技術的穩(wěn)定性差結論改造工具酶而不是抗體，能節(jié)省項目至少