三精天然植物染發(fā)劑與某些永久性染發(fā)劑

1、三精天然植物染發(fā)劑與某些永久性染發(fā)劑對小鼠的亞慢性毒作用魯娜 徐文靜 黃敏華 衛(wèi)燕文 王華指導老師: 趙英俠（上海中醫(yī)藥大學中醫(yī)臨床七年制，上海201203）摘要：目的 比較三精天然植物染發(fā)劑與某些永久性染發(fā)劑對小鼠的亞慢性毒作用。方法以市售三精天然植物染發(fā)劑、飛梵和施華蔻染發(fā)劑對小鼠背部毛發(fā)染色，每天1次，持續(xù)27天，觀察比較各組小鼠生長情況、血液生化指標、脾重及骨髓DNA含量。結(jié)果 染色各組皆有不同程度的脫毛，以飛梵組最為明顯；施華蔻組小鼠平均血紅蛋白量、平均血紅蛋白濃度與對照組相比有顯著降低，施華蔻組同三精組小鼠的平均血紅蛋白量相比也有明顯降低；飛梵組與對照組、施華蔻組、三精組小鼠的嗜酸

2、性粒細胞、中性粒細胞數(shù)量相比均明顯升高。結(jié)論 飛梵染發(fā)劑刺激性大，嚴重影響毛發(fā)生長，并可能會引起過敏等不良反應；施華蔻染發(fā)劑刺激性小，但同樣影響毛發(fā)生長，且可能造成貧血。三精染發(fā)劑刺激性最小，對小鼠毛發(fā)生長及造血功能無明顯影響。關鍵詞：染發(fā)劑，亞慢性毒性，皮膚炎癥，骨髓造血系統(tǒng)引言染發(fā)，作為人們對美追求的一種方式，如今已融入了日常生活，并引領著世界的風尚潮流。 染發(fā)劑作為一種美化頭發(fā)的化妝品，其品種繁多，銷售額大。目前，全球染發(fā)劑零售額高達70多億美元。美國2002年染發(fā)劑零售額已達153億美元，比2000年增長9.1%1。同樣，我國作為世界上最大染發(fā)消費市場，04年資料顯示染發(fā)人口已高達1.

3、96億，染發(fā)產(chǎn)品銷售額超過80億元，而且這個數(shù)字仍將飛速增長，在未來的35年中其將遠遠高于全球平均水平。目前,市場上的染發(fā)劑主要分四類:氧化型(永久性)染發(fā)劑、直接型(暫時性或半永久性)染發(fā)劑、金屬鹽類染發(fā)劑、天然植物型染發(fā)劑等。氧化型染發(fā)劑以其染色效果好、色調(diào)變化寬、維持時間長等諸多優(yōu)點而成為最受歡迎的染發(fā)劑，在歐洲和美國約占市場份額的80。 直接型染發(fā)劑是第二大類染發(fā)產(chǎn)品，包括暫時性和半永久性染發(fā)劑。這類染發(fā)劑比永久性染發(fā)劑刺激性小，不易損傷頭發(fā)和引起過敏，但色澤牢固度差。金屬鹽類染發(fā)劑是一種漸進式的染發(fā)產(chǎn)品，染發(fā)時不能即時見效，要經(jīng)多次使用才可使頭發(fā)著色逐步變深，達到需要的顏色后，色調(diào)保

4、持與永久性染發(fā)相近?？紤]到鉛的神經(jīng)毒性，歐盟已將醋酸鉛列入禁用物質(zhì)清單。天然植物型染發(fā)劑的染發(fā)原料主要是從植物中提取的有機物質(zhì)，毒性低，雖然染發(fā)效果有一定的局限性，但由于刺激性小而越來越受到人們的歡迎2 。因接觸染發(fā)劑而引起白血病的病例,國內(nèi)外報道較多。在美國化妝品生產(chǎn)基地之一的明尼蘇達州,40 %的女性白血病患者的病因都與使用染發(fā)劑有關。對13 000 名成年女性的調(diào)查表明,經(jīng)常使用染發(fā)劑者患白血病的危險性較之不使用者高出3. 8倍3 。我國北京友誼醫(yī)院也報道,近年來中老年急性白血病患者中許多人都有染發(fā)史。Mele A 等在一項對環(huán)境因素與3 種白血病亞型和難治性貧血伴幼稚細胞增多癥關系的病

5、例對照研究表明,這些疾病與黑色染發(fā)劑的接觸之間確實存在相關關系4 。近年來,因使用染發(fā)劑后出現(xiàn)接觸性皮炎的報道越來越多,癥狀包括:頭皮瘙癢、水腫、糜爛、低熱、腹部腫大,甚至全身毛發(fā)脫落。施金蓮等對哈爾濱市192 名理發(fā)從業(yè)人員進行調(diào)查,發(fā)現(xiàn)其中有各種皮膚刺激和皮膚損傷癥狀者占85.14 %5隨著染發(fā)產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，染發(fā)劑所存在的潛在危害問題也慢慢浮出水面。據(jù)中國消費者協(xié)會統(tǒng)計數(shù)據(jù)：2003年染發(fā)過敏投訴案例高達7萬起，由染發(fā)過敏誘發(fā)的死亡人數(shù)多達200人。2004年上半年，全國染發(fā)引起的投訴已經(jīng)超過4萬起，而且這一數(shù)據(jù)正在快速上升。在新聞媒體的教育下，化學染發(fā)產(chǎn)品對頭發(fā)及健康的危害已經(jīng)成為大家

6、的共識 染發(fā)危害日益嚴重，人們開始對化學染發(fā)劑產(chǎn)生了信任危機。于是天然植物染發(fā)劑開始被人們關注，并成為眾多消費者購買的第一選擇，而各大化妝品公司亦針對這點紛紛推出各自的天然植物染發(fā)劑產(chǎn)品。現(xiàn)階段對永久性染發(fā)劑毒性的研究很多，但是對于天然染發(fā)劑的毒性研究卻甚少，天然植物染發(fā)劑標榜其具有不過敏、不致癌、不傷發(fā)、不褪色、不染頭皮的優(yōu)點。本實驗的目的是：探討天然植物染發(fā)劑與傳統(tǒng)永久性染發(fā)劑反復多次使用可能造成的健康危害，選擇市場占有率較大、知名度較高的染發(fā)產(chǎn)品，進行亞慢性毒作用研究。1材料與方法 1.1材料.1 實驗動物:昆明種健康小鼠，雌雄各半，體重2030 g，共40 只, 上海中醫(yī)藥大學實驗動物

7、中心提供染發(fā)劑:飛梵、施華蔻、三精植物染發(fā)劑，均自市場購買。 試劑與儀器： CaC12、0.2molL-1HClO4；紫外分光光度計；COULTER LH 750血球計數(shù)儀，電子天平；EDTA抗凝管等。 方法1. 2. 1 染色方法 分組 40只小鼠隨機分為4組，每組10只。第一組：對照組；第二組：給與飛梵染發(fā)劑染色；第三組：給與施華蔻染發(fā)劑染色；第四組：給與三精植物染發(fā)劑染色。染色方法以0. 1 ml/ 10 g 體重模擬染發(fā)過程,均勻涂抹于小鼠背部約4cm2 皮膚(未剃毛) 上,之后用吹風機吹干。對照組則涂抹等量蒸餾水。每日1次,染毒27 d6。1. 2. 2 觀察指標及檢測方法小鼠血常規(guī)

8、：眼球摘除取血法取小鼠血液約1ml 置于EDTA抗凝管中，用COULTER LH 750血球計數(shù)儀檢測血常規(guī)。骨髓DNA含量測定7：取小鼠一側(cè)完整股骨，用 CaC12，10mL將全部骨髓沖入離心管中，置4冰箱中30min后，2500rmin-1離心15min，棄上清液，沉淀物加0.2molL-1HClO4 5mL充分混合90 加熱15min，冷卻,過濾，濾液用紫外分光光度計于268nm處測定紫外吸收OD值。體重。用小鼠體重秤稱重。脾稱重。打開小鼠腹腔后迅速取出脾臟，用萬分之一電子天平稱量。1. 2. 3數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法 應用統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理，組間比較采用單因素方差分析。2.結(jié)果 一般

9、情況.1 飛梵組第一天染色后呈黑色。施華寇組第1天染色后呈黑色，色澤光亮，較飛梵組染色效果好。三精組第1天染色后呈淡紫色，之后逐漸加深至第12天變?yōu)樯钭?，?3天時則略顯黑色。（見圖1-3）圖1 飛梵組染毛情況圖2 施華蔻組染毛情況圖3 三精組染毛情況脫毛先后及數(shù)量脫毛現(xiàn)象出現(xiàn)先后次序依次為飛梵組、三精組和施華蔻組。飛梵組：染后第3天有40%的雌性小鼠和20%的雄性小鼠出現(xiàn)脫毛。27天后，全部小鼠呈不同程度的脫毛。數(shù)量呈逐漸遞增趨勢。三精組：染后第4天有20%的雌性小鼠出現(xiàn)脫毛。27天后，全部雌性小鼠和80%的雄性小鼠出現(xiàn)不同程度的脫毛。數(shù)量呈緩慢遞增趨勢。施華蔻組：染后第11天有100%的雌

10、性小鼠和20%的雄性小鼠出現(xiàn)脫毛。27天后，全部小鼠呈不同程度的脫毛。數(shù)量呈快速遞增趨勢。脫毛方式及程度飛梵組：脫毛處毛發(fā)稀疏，隱現(xiàn)皮膚，并形成較大脫毛塊。施華蔻組：脫毛形式與飛梵組一致，逐漸形成脫毛塊。但較飛梵組脫毛面積小，程度輕，多數(shù)僅見毛發(fā)稀疏。三精組：脫毛部位呈片塊狀，起初脫毛可見皮膚，后新毛長出，由于其著色慢，固色程度差，可見背部白色新生毛塊。體重、脾重、骨髓 DNA含量的變化表1 實驗小鼠的體重、脾重、骨髓DNA含量（S）組別n4月255月25脾重(g)骨髓DNA含量（OD值）對照組1036飛梵組1018施華蔻組10125三精組108注：體重、脾重、骨髓DNA含量各染色組與對照組相

11、比均無顯著性差異。2.3 血常規(guī)指標測定結(jié)果組別nWBCRBCHb(109L-1)(1012L-1)(g/L)對照組99.70.51536飛梵組89.51488施華蔻組109.914312三精組8100.715014表2 實驗小鼠的血常規(guī)指標（一）（S）注：白細胞、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白含量與對照組相比均無顯著差異。表3 實驗小鼠的血常規(guī)指標（二）（S）組別n白細胞分類(%)中性粒淋巴單核嗜酸粒嗜堿粒對照組90.40.50.10.2飛梵組80.30.50.3施華蔻組90.20.2三精組80.10.1注：白細胞分類比例與對照組相比均無顯著性差異。表4 實驗小鼠的血常規(guī)指標（三）（S）組別nPCVM

12、CVMCHMCHCRDWPCMPV(fL)(pg)(g/L)(%)(109L-1)(fL)對照組945216135930763323飛梵組84621613418923298施華蔻組10451151*#32533*801308三精組845115133516771302注：與對照組相比, *P 0. 05 ，* P 0. 01與飛梵組相比，#P 0. 05， # P 0. 01施華蔻組小鼠平均血紅蛋白量、平均血紅蛋白濃度與對照組相比有顯著降低。施華蔻組同飛梵組小鼠的平均血紅蛋白量相比也有明顯降低（表4）。表5 實驗小鼠的血常規(guī)指標（四）（S）組別n白細胞分類計數(shù)(109L-1)中性粒淋巴單核嗜酸粒

13、嗜堿粒對照組951454飛梵組87*742*1施華蔻組960050.004335三精組861634 注： 與對照組相比, *P 0. 05，* P 0. 01與施華蔻組相比，P 0. 05， P 0. 01與三精組相比， P 0. 05, P 0. 01飛梵組同對照組、施華蔻組、三精組小鼠的中性粒細胞計和嗜酸性粒細胞計數(shù)相比均明顯升高（表5）。3討論隨著染發(fā)劑的生產(chǎn)和使用規(guī)模的擴大，其潛在的健康危害也日益受到人們的關注。國內(nèi)外大量文獻報道，染發(fā)劑不僅可以致皮膚過敏，嚴重者可致癌和致突變8 。1994年，Grodstein F等9通過隊列研究，得出了使用長效染發(fā)劑與造血系統(tǒng)腫瘤無關的結(jié)論，RR=

14、0.9(95CI=0.71.2)，且與首次使用年齡、使用年限、使用頻率均無相關。袁慧等10用PPD經(jīng)雙氧水氧化后的氧化產(chǎn)物為受試物，每隔3d在小鼠背部皮膚染毒1次，周期1個月。結(jié)果發(fā)現(xiàn)PPD氧化產(chǎn)物可影響小鼠的肝腎功能，具有遺傳毒性，能造成骨髓細胞染色體和DNA的損傷，并在受試劑量范圍內(nèi)存在劑量效應關系。可見，目前國內(nèi)外對染發(fā)劑引起的血液系統(tǒng)致癌作用尚無定論。目前一般認為，染發(fā)劑對人體的致癌作用、DNA損傷及致突變作用的強度，取決于接觸染發(fā)劑的濃度、密度、時間長短和接觸者本身免疫功能的強弱11。本實驗針對染發(fā)劑的使用特點，探討了反復多次使用染發(fā)劑可能造成的健康危害，對其染色一般情況進行觀察并選

15、取了骨髓造血系統(tǒng)和皮膚炎癥兩項敏感指標進行檢測。結(jié)果顯示： 永久性染發(fā)劑易上色，色澤更亮麗而持久，但使小鼠脫毛并顯著影響毛發(fā)生長；而三精天然植物染發(fā)劑雖不易上色，染色后易被小鼠舔去，固色程度不佳，新生的毛發(fā)不易上色，故在染毛區(qū)域內(nèi)有白色新生毛塊，但刺激性較小，對毛發(fā)生長無明顯影響。永久性染發(fā)劑中飛梵組小鼠脫毛現(xiàn)象出現(xiàn)最早，程度重，脫毛小鼠數(shù)量逐漸增加，程度逐漸嚴重，說明飛梵染發(fā)劑刺激性大，并嚴重影響毛發(fā)生長；施華蔻組小鼠脫毛開始時間晚，數(shù)量少，程度輕，但脫毛小鼠數(shù)量逐漸增加，程度逐漸加重，說明施華蔻染發(fā)劑刺激性小，但同樣影響毛發(fā)生長。三精組小鼠中一只雌鼠在實驗第4天出現(xiàn)脫毛，但其他小鼠在實驗后

16、11天才出現(xiàn)脫毛現(xiàn)象，提示天然植物染發(fā)劑對于個別特殊體質(zhì)者也可產(chǎn)生不良影響。飛梵、施華蔻、三精染發(fā)劑對小鼠骨髓造血功能均無明顯影響，可能與染色時間較短有關。使用飛梵牌染發(fā)劑的小鼠與對照組相比，其嗜酸性細胞、中性粒細胞數(shù)量明顯升高。嗜酸性粒細胞數(shù)量升高可能與過敏有關；中性粒細胞數(shù)量升高可能與感染、中毒、腫瘤有關 12 。使用施華蔻牌染發(fā)劑小鼠與對照組相比，平均血紅蛋白量、平均血紅蛋白濃度顯著降低，推測可能是施華蔻牌染發(fā)劑抑制血紅蛋白的生成或是致使血紅蛋白消耗過多導致，而造成貧血 12 。今后對上述幾方面還需做更加深入的研究。綜上所述，永久性染發(fā)劑雖然染色效果好，但其刺激性較大，顯著影響毛發(fā)的生長

17、，可導致嗜酸性粒細胞升高、血紅蛋白含量下降等現(xiàn)象。而三精植物染發(fā)劑雖然著色力差，染發(fā)效果不佳，但刺激性小，對小鼠機體無顯著影響，較永久性染發(fā)劑對小鼠各項生理指標影響小。由于染發(fā)劑對動物的染毒量和使用時間間隔與人類實際接觸情況有一定的差別，所以還需要在人群中開展流行病學調(diào)查，以便對染發(fā)劑的健康效應作出合理的評估。參考文獻1劉瑾文.染發(fā)的市場與最新發(fā)展日用化學品科學，2004,27(6):1-4.2朱會卷，朱英. 染發(fā)劑的安全性及其檢測方法研究進展J . 中國衛(wèi)生檢驗雜志,2006 ,16(7) :888.3Cantor KP ,Blair A ,Everett G,et al . Hair dy

18、e use and risk of leukemia and lymphoma J. American Journal of Public Health, 1988, 78 (5):570-571.4Mele A ,Szklo M,Visani G,et al . Hair dye use and other risk factors for leukemia and pre-leukemia: a case-control study. Italian Leukemia Study Group J. American Journal of Epidemiology, 1994, 139 (6):609-619.5施金蓮,馬桂芝,蔣葵,等. 化學染發(fā)劑和冷燙精的毒性及對人體健康影響的調(diào)查研究J . 環(huán)境與健康雜志,1993 ,6(13) :250-252.6徐燕英，陳躍進，汪雪生，等. 國產(chǎn)氧化型染發(fā)劑對小鼠皮膚的亞慢性毒作用J.環(huán)境職業(yè)醫(yī)學,2004, 21(4):291-294.7徐叔云主編. 藥理實驗方法學.M北京:人民衛(wèi)生出版社,19981107.8楊穎，熊習昆. 染發(fā)劑致癌和致窗框變效應的研究進展.國外醫(yī)學衛(wèi)生學分冊，2005, 32(2):117-120.9Grodstein F，Hennekens CH，C