藥物作用靶點(diǎn)100914課件

生命科學(xué)研究新進(jìn)展系列講座

藥物作用靶點(diǎn)與天然藥物篩選李海航,Ph.D華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院li_haihang@內(nèi)容一.前言(我國(guó)藥物行業(yè)存在的問(wèn)題簡(jiǎn)介)二.藥物靶,靶點(diǎn)或靶標(biāo)三.藥物靶標(biāo)的發(fā)現(xiàn)四.基于靶標(biāo)的藥物設(shè)計(jì)五.靶點(diǎn)藥物開(kāi)發(fā)概況六.基于靶標(biāo)的天然藥物七.多靶點(diǎn)藥物的開(kāi)發(fā)八.重要疾病的靶點(diǎn)藥物九.天然藥物提取分離與靶點(diǎn)藥物篩選研究我國(guó)藥物研究與開(kāi)發(fā)生命科學(xué)各領(lǐng)域中最薄弱,最落后,面臨危機(jī)西藥：到目前為止只有開(kāi)發(fā)了半個(gè)(青蒿素)或一個(gè)半自主藥物中醫(yī)藥：最古老，也最落后缺乏系統(tǒng)的藥物研究與開(kāi)發(fā)體系急功近利,投機(jī)取巧,夸大吹噓等成風(fēng),”研發(fā)”了大量無(wú)用新藥,無(wú)用新藥批文中國(guó)工程院醫(yī)藥衛(wèi)生學(xué)部院士秦伯益:“國(guó)家投入大幅度增長(zhǎng)、新藥苗頭不斷涌現(xiàn),可成果寥寥無(wú)幾,有國(guó)際影響的創(chuàng)新藥一個(gè)都沒(méi)有?！?9年以來(lái),我國(guó)自主研發(fā)、有國(guó)際影響的“新藥”僅兩個(gè),50年代合成的二巰基丁二酸鈉和60年代開(kāi)發(fā)的青蒿素。60年代至今,無(wú)一原創(chuàng)藥誕生。我國(guó)每年都有上百新藥被注冊(cè),而美國(guó)、英國(guó)一年難出幾例新藥中國(guó)工程院醫(yī)藥衛(wèi)生學(xué)部院士秦伯益

原創(chuàng)藥研發(fā)中存在三大誤區(qū)

誤區(qū)一，對(duì)基因組藥物學(xué)期盼過(guò)早。盲目追求時(shí)髦的新概念 2000年《自然》雜志對(duì)人類(lèi)基因組研究現(xiàn)狀與展望的評(píng)述第一階段:2000年測(cè)定全部DNA序列；第二階段:2010年識(shí)別所有基因；第三階段:2050年確定所有基因功能；第四階段:2100年確定基因變異與疾病關(guān)系 ”不少所謂專家學(xué)者“正根據(jù)基因變異設(shè)計(jì)藥物”,短期內(nèi)根本不可能.誤區(qū)二，對(duì)中醫(yī)藥開(kāi)發(fā)潛力指望太高。死守傳統(tǒng)和古老的概念 “中醫(yī)藥發(fā)展靠不斷研究，而不是過(guò)頭的輿論宣傳”。“中華民族的繁衍生息靠的是中醫(yī)藥”、“西醫(yī)治病、中醫(yī)治本”、“西藥有毒副作用，中藥沒(méi)有毒副作用”、“西醫(yī)對(duì)疑難雜癥沒(méi)有辦法，中醫(yī)有辦法”。

過(guò)高指望中醫(yī)不實(shí)際?！安簧贆z查、治療手段需要西醫(yī)，中醫(yī)不能相比?！闭`區(qū)三，傳統(tǒng)的新藥研發(fā)途徑過(guò)時(shí)了。

傳統(tǒng)新藥研發(fā)途徑包括:經(jīng)驗(yàn)積累、偶然機(jī)遇、藥物普篩、綜合篩選、天然物提取、定向合成、代謝與藥理研究、毒副作用、老藥新用等。 現(xiàn)在新藥研發(fā)的團(tuán)隊(duì)都想“一口氣吃個(gè)胖娃娃”、“跨越發(fā)展”,不符合發(fā)展規(guī)律。 很多研究人員都沒(méi)有“蹲下去找靶點(diǎn)調(diào)研。我國(guó)藥物創(chuàng)新和研發(fā)存在的問(wèn)題

中和藥業(yè)1．研發(fā)經(jīng)費(fèi)不足。全國(guó)藥物研發(fā)總投入少于美國(guó)的輝瑞公司。2．技術(shù)水平有限,研發(fā)團(tuán)隊(duì)建設(shè)不力。藥物行業(yè)是技術(shù)密集型行業(yè)。 沒(méi)有幾個(gè)企業(yè)真正投入技術(shù)力量研發(fā)新藥,無(wú)研發(fā)部門(mén)或研發(fā)部門(mén)轉(zhuǎn)行。 國(guó)外藥企研發(fā)人員占從業(yè)員30%,我國(guó)不到4%,且大多從事技術(shù)型改造。3．主流研發(fā)機(jī)構(gòu)與藥企合作不成熟。研究機(jī)構(gòu)重文章,企業(yè)重市場(chǎng)。4.宏觀政策影響大,缺乏總體規(guī)劃,高稅收和逐年降價(jià)使企業(yè)瀕臨停產(chǎn)。

5.知識(shí)產(chǎn)權(quán)問(wèn)題日益突出。外國(guó)藥企紛紛加大在中國(guó)的知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)。在國(guó)外上市的新藥中幾乎不可能有新藥供國(guó)內(nèi)藥企仿制。美國(guó)、日本、歐盟批準(zhǔn)的新藥在化合物專利、制備工藝專利、適應(yīng)癥專利、用法用量專利都獲得相應(yīng)的保護(hù)。藥物研究與開(kāi)發(fā)是我國(guó)

最有發(fā)展?jié)摿Φ男袠I(yè)之一藥物開(kāi)發(fā)途徑的變化傳統(tǒng)的藥物篩選途徑化合物→組織,細(xì)胞,動(dòng)物→分子(作用靶)→人體現(xiàn)代藥物篩選途徑分子(作用靶)→化合物→細(xì)胞,組織,動(dòng)物,人體二.藥靶(DrugTargets)1藥靶的定義:

存在于組織細(xì)胞內(nèi),與疾病發(fā)生有因果關(guān)系或參與疾病發(fā)展,與藥物相互作用,并可通過(guò)藥物對(duì)其進(jìn)行調(diào)節(jié)而實(shí)現(xiàn)治療目的的特定生物分子2藥靶的條件:與疾病相關(guān),有適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)特性和親和力結(jié)合小分子物,在病變細(xì)胞或組織中表達(dá),在細(xì)胞培養(yǎng)體系中可通過(guò)調(diào)節(jié)靶標(biāo)活性產(chǎn)生特定效應(yīng),在動(dòng)物模型中再現(xiàn),藥物在人體內(nèi)有效。3.藥靶的化學(xué)成分:

絕大多數(shù)(98%以上)為蛋白質(zhì)。50%以上屬G蛋白耦聯(lián)受體,絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸蛋白激酶,鋅金屬肽酶,絲氨酸蛋白酶,核激素受體及磷酸二酯酶等6個(gè)家族。4.藥靶的意義:

藥物發(fā)現(xiàn)從依賴動(dòng)物篩選逐漸轉(zhuǎn)變到“一病一靶”。是高通量藥物篩選及其模型建立的基礎(chǔ).

5.最成的例:

膽固醇合成抑制劑HMG(3-羥基-3甲基戊二酸單酰)輔酶A還原酶為靶點(diǎn)的選擇性抑制劑,已有系列他汀類(lèi)降脂藥物,全球銷(xiāo)售量最大藥,最有效降膽固醇藥.

三.藥靶的發(fā)現(xiàn)

靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)主要通過(guò)基因,蛋白質(zhì)和藥物三個(gè)方面.

1.基因水平上的靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)

1) 人類(lèi)遺傳學(xué),生物信息學(xué),表達(dá)圖譜,代謝途徑分析,基因芯片,mRNA差異顯示,消減雜交等,結(jié)合表型變化發(fā)現(xiàn)大量候選靶標(biāo).(重要和關(guān)鍵基因)2)宿主和病原菌或正常細(xì)胞與病理細(xì)胞之間的基因差異表達(dá)和基因序列分析,找出疾病相關(guān)基因.

3)疾病相關(guān)基因(靶基因)功能分析,包括基因敲除,過(guò)量表達(dá),RNA干擾,反義mRNA和核酶抑制及計(jì)算機(jī)模擬基因產(chǎn)物結(jié)構(gòu)和功能分析,確認(rèn)藥物靶點(diǎn).2.以蛋白質(zhì)組學(xué)為基礎(chǔ)發(fā)現(xiàn)藥物靶標(biāo)

人體內(nèi)可能的藥靶約3000～15000個(gè),目前發(fā)現(xiàn)的

不到500個(gè),多數(shù)藥靶是蛋白質(zhì),如酶、受體、激素。1)差異蛋白質(zhì):

差異蛋白組學(xué)法比較疾病和正常狀態(tài)蛋白表達(dá)差異,找可能藥靶.常用技術(shù):蛋白質(zhì)芯片,二維凝膠電泳,同位素親和標(biāo)簽,雙向熒光差異凝膠電泳等技術(shù)及它們和質(zhì)譜鑒定的結(jié)合。應(yīng)用較多的:

二維凝膠電泳和質(zhì)譜分析。 急性淋巴細(xì)胞白血病中的高表達(dá)多肽Op18有磷酸化和非磷酸化兩種形式,抑制Op18及其表達(dá)或磷酸化能有效抑制腫瘤細(xì)胞增殖,有望以O(shè)p18為靶開(kāi)發(fā)藥物。2)蛋白質(zhì)相互作用:

蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用。

常用方法:有酵母雙雜交,噬菌體展示,表面等離子共振,串聯(lián)親和純化和雙分子熒光互補(bǔ)等。 酵母雙雜交是發(fā)現(xiàn)藥靶的重要途徑。通過(guò)報(bào)告基因表達(dá)產(chǎn)物可敏感地檢測(cè)蛋白質(zhì)之間相互作用路徑及藥物干擾阻止其相互作用以達(dá)到治療疾病的目的。四.基于靶標(biāo)的藥物設(shè)計(jì)

利用配體-靶標(biāo)復(fù)合物三維結(jié)構(gòu)信息設(shè)計(jì)新藥,基本過(guò)程:①確定藥物作用靶標(biāo)(如蛋白質(zhì)、核酸等);②對(duì)靶標(biāo)進(jìn)行分離純化;

③確定靶標(biāo)三維結(jié)構(gòu),提出系列假定配體與靶分子復(fù)合物的三維結(jié)構(gòu);④依據(jù)這些結(jié)構(gòu)信息,利用相關(guān)計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行配體分子設(shè)計(jì),模擬出最佳配體結(jié)構(gòu)模型;⑤合成模擬結(jié)構(gòu)物,測(cè)試活性。若滿意可進(jìn)入前臨床實(shí)驗(yàn).重復(fù)以上過(guò)程,直至滿意為止.需要的條件:X射線衍射和核磁共振(NMR)等結(jié)構(gòu)研究手段,研究靶蛋白分子結(jié)構(gòu),計(jì)算機(jī)輔助的靶蛋白結(jié)構(gòu)模型建立和藥物設(shè)計(jì)。 如治療艾滋病的安瑞那韋(amprenavir,Agenerase)和奈非那韋(nelfinavir,viracept)就是用HIV蛋白酶的晶體結(jié)構(gòu)開(kāi)發(fā)的藥物.藥物研發(fā)需要生物學(xué),化學(xué),電腦

物理,儀器分析等多個(gè)領(lǐng)域合作1.上市藥物的靶標(biāo)數(shù)量Drews等(1997)粗略推定為483個(gè)分子藥物靶標(biāo)。Hopkins和Groom(2002)根據(jù)藥物起效的5條原則,目前藥物僅通過(guò)120個(gè)靶標(biāo)起主要作用。Golden(2003):所有上市藥物對(duì)應(yīng)了273種蛋白。Imming(2006)等對(duì)藥物靶標(biāo)作了明確界定,認(rèn)為藥物靶標(biāo)是一種能夠與化學(xué)試劑特異結(jié)合并產(chǎn)生臨床療效的分子結(jié)構(gòu)。不包括藥理學(xué)和生物化學(xué)研究工具以及相關(guān)技術(shù)。得出的結(jié)論：目前的分子藥物靶點(diǎn)數(shù)目為218個(gè)。Overington等(2006)提出有價(jià)值的評(píng)估:藥物數(shù)量減至1357種。所有藥物通過(guò)324個(gè)靶標(biāo)起作用,其中266個(gè)為人類(lèi)基因衍生的,其余為病原體靶標(biāo)。小分子藥物作用于248種蛋白,其中207個(gè)靶標(biāo)由人體基因組編碼;口服小分子藥物靶標(biāo)227個(gè),其中186個(gè)為人類(lèi)基因靶標(biāo)。OveringtonJP,Al-LazikanIB,Hopkinsal.Howmanydrugtargetsarethere?NatRevDrugDiscov,2006,5(12):993-996.2.上市藥物靶點(diǎn)的類(lèi)別生物化學(xué)分類(lèi):上市小分子和生化藥靶點(diǎn),50%以上屬4個(gè)關(guān)鍵生化類(lèi)別:G-蛋白偶聯(lián)受體(26.8%),核受體(13%),配體門(mén)控性離子通道(7.9%)及電壓門(mén)控離子通道(5.5%)。其他包括青霉素結(jié)合蛋白,髓過(guò)氧化酶,神經(jīng)遞質(zhì),DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶,纖維結(jié)合蛋白,細(xì)胞色素P450等。生物結(jié)構(gòu)位點(diǎn):細(xì)胞膜表面(60%),細(xì)胞質(zhì)(16%),細(xì)胞核(10%),胞外分泌(8%),線粒體(3%),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(2%),過(guò)氧化酶體(1%)。約1/3的靶點(diǎn)是膜本身疾病領(lǐng)域分布:268個(gè)上市藥物靶點(diǎn),依次是腫瘤,傳染病和寄生蟲(chóng)病,神經(jīng)系統(tǒng),感覺(jué)器官病及循環(huán)系統(tǒng)疾病等。這些疾病都有代表性靶點(diǎn)藥物化學(xué)分類(lèi):腫瘤和抗感染領(lǐng)域的主要藥物靶點(diǎn)是酶。中樞神經(jīng)系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)疾病通常靶向G-蛋白偶聯(lián)受體、離子通道或載體等。不同化學(xué)特征藥物所靶向的靶點(diǎn):

合成藥物通常靶向G-蛋白偶聯(lián)受體、酶、離子通道和載體等。天然產(chǎn)物主要靶向N-末端重復(fù)序列,而生物制品(抗體或重組制劑)主要靶向其他膜受體。DistributionofTargetsbyBiochemicalCriteriaDistributionofTargetsinTherapeuticAreas六.多靶點(diǎn)藥物多靶點(diǎn)藥物定義:同時(shí)作用于某一疾病相關(guān)或病原體的多個(gè)分子靶,具有多種藥理活性。比單靶藥物的療效顯著、作用全面、副作用少。原因:

疾病起因多因素性:

單一靶基因異常引起的疾病只占少數(shù),多數(shù)疾病由多基因或多靶點(diǎn)引起,如心血管病,腫瘤及神經(jīng)退行性疾病等,糖尿病等.信號(hào)傳導(dǎo)途徑的多樣化:

如癌癥等,有多條信號(hào)傳遞途徑,并有互通性。

平衡機(jī)制與旁路系統(tǒng):

1)同一靶作用多樣,過(guò)分抑制導(dǎo)致嚴(yán)重毒副作用； 2)代謝，信號(hào)或調(diào)控途徑多樣性,抑制一條途徑會(huì)激活另外的途徑/旁路; 3)疾病的適應(yīng)/耐藥性,如病毒的突變等.

理論基礎(chǔ):按照拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)模型理論:一個(gè)系統(tǒng)中對(duì)3～5個(gè)因素(相當(dāng)于藥靶)的部分抑制可以達(dá)到對(duì)單一最重要因素的完全抑制。疾病網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)研究:單獨(dú)對(duì)某一靶點(diǎn)調(diào)節(jié),在復(fù)雜疾病治療中有局限性。多靶點(diǎn)藥物可同時(shí)作用于疾病網(wǎng)絡(luò)中多個(gè)靶點(diǎn),對(duì)各靶點(diǎn)產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng),使總效應(yīng)大于各單效應(yīng)之和,達(dá)到最佳治療效果.多靶點(diǎn)藥物的分類(lèi)及作用方式按藥物組分不同分三種形式:1）多種藥聯(lián)合用藥(Multidrugcombination):最為常見(jiàn),為抗艾滋病和腫瘤主要策略。缺點(diǎn)是所含藥物彼此易發(fā)生相互作用而產(chǎn)生不良反應(yīng).2）多組分藥物(Multicomponentdrug):藥劑中含多種活性組分,效果較好的聯(lián)合用藥被制成多組分藥,如抗艾滋病藥Atripla,抗哮喘藥Advair和丙肝藥Rebetron。3）單組分藥同時(shí)選擇性作用于多個(gè)靶點(diǎn):即嚴(yán)格意義上的多靶點(diǎn)藥物(multitargetdrug).優(yōu)化一個(gè)多靶點(diǎn)藥使之同時(shí)產(chǎn)生多靶點(diǎn)選擇性而不是非選擇性難度很大.

按靶間關(guān)系的作用方式分三類(lèi):

①影響不同靶而產(chǎn)生組合作用:各靶存在于特定組織、細(xì)胞或細(xì)胞間液中的相同或不同部位,代謝或信號(hào)通路;②藥物對(duì)第一個(gè)靶點(diǎn)的作用可對(duì)第二個(gè)靶點(diǎn)產(chǎn)生影響:如改變藥物代謝、抑制外排泵或阻斷其他抗性機(jī)制;③作用于某一靶分子或分子復(fù)合物上的不同位點(diǎn)發(fā)揮聯(lián)合作用進(jìn)而增強(qiáng)藥理活性.多靶點(diǎn)藥物設(shè)計(jì)

主要策略:平衡藥物對(duì)多個(gè)靶點(diǎn)之間的效應(yīng)。

1)連接配體:

用接頭將獨(dú)立的藥效基團(tuán)連接起來(lái).但產(chǎn)生的多靶點(diǎn)分子往往較大,很難口服給藥和吸收。

2)重疊配體:

各藥效團(tuán)間重疊或高度整合,產(chǎn)生的分子量較小。 如:基于血管緊張素1受體的配體和內(nèi)皮素A受體的配體所共有的聯(lián)芳核所設(shè)計(jì)的重疊配體有更好的抗高血壓活性。

3)改善疾病耐藥性:

艾滋病靶點(diǎn)逆轉(zhuǎn)錄酶的一個(gè)氨基酸突變就可產(chǎn)生耐藥性.設(shè)計(jì)可對(duì)野生型和耐藥性突變體逆轉(zhuǎn)錄酶均有抑制作用的化合物。七.基于分子靶點(diǎn)的天然藥物開(kāi)發(fā)優(yōu)勢(shì):

1)選材多樣性是新藥篩選關(guān)鍵,植物含天然物種類(lèi)多是實(shí)驗(yàn)室無(wú)法完成的。2)中醫(yī)強(qiáng)調(diào)整體性和協(xié)調(diào)性,中藥活性組分作用于多靶點(diǎn)共同發(fā)揮療效,屬多靶點(diǎn)藥物治療。3)中藥復(fù)方原料和成分復(fù)雜,用于多個(gè)靶點(diǎn)時(shí)比合成藥物有天然優(yōu)勢(shì)。4)有些中藥單體通過(guò)多靶點(diǎn)起作用。如姜黃素有強(qiáng)抗腫瘤活性和高安全性,為最受關(guān)注的多靶點(diǎn)藥之一。它可影響多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移和血管新生,臨床藥效評(píng)價(jià)進(jìn)行中.問(wèn)題:

1)與合成藥比,中藥作用機(jī)制更復(fù)雜,尋找中藥靶點(diǎn)進(jìn)展困難。傳統(tǒng)的板藍(lán)根的作用靶點(diǎn)至今沒(méi)找到。2)有專家認(rèn)為,很多植物藥找不到靶點(diǎn),可是作用于小分子無(wú)機(jī)鹽而被忽視.小分子靶點(diǎn)研究技術(shù)少,但可能給開(kāi)發(fā)植物藥類(lèi)靶點(diǎn)藥物打開(kāi)一扇大門(mén)。1.腫瘤分子靶向藥物1997年美國(guó)FDA批準(zhǔn)首個(gè)單抗藥物利妥昔單抗用于NHL.已有近20種分子靶向藥物上市,在研藥物100余種。大致分以下幾類(lèi):1)大分子單克隆抗體.如:表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)與腫瘤增殖,生長(zhǎng),浸潤(rùn),轉(zhuǎn)移等關(guān)系密切。2)小分子化合物.靶點(diǎn)為代謝關(guān)鍵酶或酪氨酸激酶。3)多靶點(diǎn)作用藥物。索拉非尼(05年上市):口服小分子雙通道多激酶抑制劑,靶向腫瘤細(xì)胞及血管上的酪氨酸激酶。拉帕替尼(07年上市):口服小分子酪氨酸激酶抑制劑,對(duì)EGFR雙重抑制。重要的腫瘤藥物靶點(diǎn)1.信號(hào)傳導(dǎo):如酪氨酸激酶.打仗時(shí)不打郵遞員2.腫瘤生長(zhǎng)因子:如表皮和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體.3.代謝酶類(lèi):如核酸代謝,激素代謝,能量代謝等相關(guān)酶.1)核酸代謝相關(guān)酶類(lèi).復(fù)制與(逆)轉(zhuǎn)錄及核苷酸代謝等酶.拓樸異構(gòu)酶Ⅰ(DNAtopoisomeraseI):參與DNA復(fù)制。其抑制劑阻止復(fù)制和鏈重新組裝,引起DNA雙鏈斷裂,腫瘤細(xì)胞死亡。靶點(diǎn)藥有喜樹(shù)堿、羥基喜樹(shù)堿、依立替康、拓?fù)涮婵?、貝洛替康等。核糖核苷酸還原酶:四種NDP還原成dNDP,DNA合成與修復(fù),雙縮尿.腺苷脫氨酶:維持腺苷水平,抗白血病,提高腺苷類(lèi)藥物作用.

2)激素代謝酶類(lèi).

芳香氨酶(Aromatase):細(xì)胞色素P450與黃素蛋白組成的膜結(jié)合復(fù)合酶,為雄激素合成所必須的,也催化雄激素向雌激素轉(zhuǎn)化,是雌激素合成限速酶。 乳癌治療的兩種主要選擇:(1)雌激素及其受體拮抗劑;(2)抑制芳香氨酶活性而切斷雌激素合成。乳腺癌的治療1.針對(duì)激素內(nèi)分泌治療:絕大多數(shù)乳腺癌是激素依賴性腫瘤。

1).抗雌激素類(lèi):三苯氧胺(競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合雌激素受體),氟維司群(阻滯雌激素受體). 2).芳香化酶抑制劑:抑制雄激素向雌激素轉(zhuǎn)化,如CYP19已成功應(yīng)用. 3).孕激素類(lèi)(多靶點(diǎn)):抑制促黃體生成素和雌激素產(chǎn)生;與孕激素受體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合 4).促性腺激素釋放激素類(lèi)似物:減少雌激素產(chǎn)生,常用藥有g(shù)oserelin等。2.針對(duì)癌相關(guān)基因及其產(chǎn)物的靶分子治療

1)腫瘤生長(zhǎng)因子及其受體靶向:生長(zhǎng)因子及受體的單抗和酪氨酸激酶抑制劑2)腫瘤血管生成分子靶向:Avastin單抗,抑血管生成的Endostar和Thalidomide3.其它靶分子治療:法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑阻斷Ras介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)多靶點(diǎn)的小分子酪氨酸激酶抑制劑sunitinib抑制磷酸肌醇-3-激酶和癌細(xì)胞生長(zhǎng)的雷帕霉素胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)及其受體或磷酸化的拮抗和抑制劑凋亡抑制物的抑制劑與腫瘤侵襲有關(guān)的磷脂依賴的絲氨酸/蘇氨酸酶PKC-α抑制劑良性前列腺增生(BPH)藥物作用靶點(diǎn)

老年男性常見(jiàn)病臨床藥物主要針對(duì)2個(gè)較成熟靶點(diǎn):1)5α-還原酶:前列腺是雄激素依賴器官,雄激素代謝異常可導(dǎo)致BPH。作用最強(qiáng)的雄激素二氫睪酮由該酶催化而成。該酶為治療BPH的關(guān)鍵靶點(diǎn).已有數(shù)種酶抑制劑用于BPH治療。2)腎上腺素受體:前列腺增生引起膀胱出口梗阻,導(dǎo)致膀胱甚至腎功能損害。其治療原則是先盡快減輕或解除梗阻,保護(hù)膀胱和腎功能。其抑制劑為治療BPH及下尿路癥首選藥。新靶點(diǎn):

1).磷酸二酯酶5:特異性裂解胞內(nèi)第二信使cGMP。最初是治療心絞痛和高血壓的靶點(diǎn)藥,其抑制劑后來(lái)成為治療男性功能障礙一線藥;也能治療前列腺增生伴下尿路癥狀。如西地那菲Viagra。2).糖酵解酶:前列腺能量代謝很獨(dú)特,其上皮中積聚大量檸檬酸和鋅,高濃度鋅抑制/阻斷三羧酸循環(huán)。只能依賴于糖酵解獲取能量。糖酵解酶抑制劑可治療BPH。3).芳香化酶:雌激素在前列腺增生發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。男性體內(nèi)雌激素主要由雄激素轉(zhuǎn)化來(lái),芳香化酶P450是其關(guān)鍵和限速酶。其抑制劑有治療良性前列腺增生等激素依賴疾病。4).生長(zhǎng)因子:一些肽類(lèi)生長(zhǎng)因子與前列腺增生有關(guān)。其抑制劑可治療BPH。5).內(nèi)皮素:強(qiáng)烈平滑肌收縮因子,可使前列腺平滑肌收縮,參與梗阻。其受體拮抗劑改善尿道梗阻2.艾滋病HIV1).

免疫預(yù)防和治療:醫(yī)學(xué)史上,天花等傳染病的消滅依靠疫苗,而不是抗病毒藥物。人們期待有效的抗HIV疫苗的誕生,但目前尚未取得突破性進(jìn)展.2).HIV-1化療治療：抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(antiretroviraltherapy,ART)是醫(yī)學(xué)史上發(fā)展最快的治療方法。96年前稱“艾滋病雞尾酒”(AIDScocktails)。96年世界艾滋病會(huì)議決定用HAART(highlyactiveanti-retroviraltherapy)代替,它使AIDS死亡率大大下降HAART指3種或以上HIV病毒酶抑制劑聯(lián)合應(yīng)用,常用1種蛋白酶抑制劑與2種核苷類(lèi)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTI)聯(lián)合使用,或用1種非核苷類(lèi)的逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTI)與2種NRTI聯(lián)合使用。但HAART易產(chǎn)生抗藥性,對(duì)潛伏病毒不起作用等問(wèn)題。3).抗藥性.HIV非常容易產(chǎn)生抗藥性。其逆轉(zhuǎn)錄酶的“不忠實(shí)性”和缺乏“校正機(jī)制”,使每個(gè)基因組在1個(gè)復(fù)制周期就產(chǎn)生1個(gè)突變。突變是抗藥性產(chǎn)生的遺傳基礎(chǔ)。 完全抑制病毒復(fù)制可使抗藥性產(chǎn)生的機(jī)會(huì)大大減少。不恰當(dāng)治療,特別是部分抑制病毒,給病毒抗藥性形成提供選擇壓力,加速抗藥性的形成。 中藥對(duì)藥物副作用的舒緩可增加用藥的持久性和藥物對(duì)病毒的抑制度,可望有助于解決抗藥性問(wèn)題。此外,期待中藥成分的多樣性能產(chǎn)生多靶點(diǎn)作用。4).HIV的潛伏是徹底清除HIV的最大障礙

“潛伏”(latency):病毒以可逆的非復(fù)制狀態(tài)存在宿主體內(nèi),在宿主內(nèi)長(zhǎng)期存在.HIV感染者即使在長(zhǎng)期無(wú)癥狀期,血漿中RNA拷貝都維持在104-105個(gè)/ml。低水平復(fù)制使病毒演變,形成新的免疫逃脫和抗藥株.

HIV潛伏庫(kù)衰減速度非常慢,1/2清除需44個(gè)月,清除含106的潛伏細(xì)胞庫(kù)要花費(fèi)73年。HAART可使血漿病毒降到50個(gè)/ml拷貝以下,并維持達(dá)6-7年,而潛伏庫(kù)絲毫沒(méi)有清除跡象。有患者治療后,血漿病毒降到50個(gè)/mlRNA拷貝以下長(zhǎng)達(dá)3年,但一旦停藥,幾星期內(nèi)血漿病毒立即回升到治療前水平.HIV與其他病毒不同之處:1)逆轉(zhuǎn)錄病毒;2)感染的靶細(xì)胞為CD4+HTL,3)潛伏細(xì)胞頻率太低,缺乏分離技術(shù)。目前沒(méi)有直接針對(duì)潛伏HIV的藥物。當(dāng)前的策略是激活有潛伏HIV的休止細(xì)胞,把它們從潛伏庫(kù)里“沖洗”出來(lái)。從南太平洋薩摩亞島植物中分離出的佛波醇酯(phorbolester)的物質(zhì)prostratin,在體內(nèi)能誘導(dǎo)休止的CD4+HTL表達(dá)潛伏HIV,且不激發(fā)細(xì)胞增殖。待解決的問(wèn)題:HIV潛伏記憶藏在那里?有什么標(biāo)記性特征?能否把它們分離?能否證明細(xì)胞的基因組里存在HIV原病毒DNA?能否激活原病毒使它成為能感染活化的CD4+HTL?能否在體外或小動(dòng)物建立HIV潛伏模型?HIV研究受條件的局限性較大。

(1)三個(gè)病毒催化酶.

逆轉(zhuǎn)錄酶,整合酶和蛋白酶,為較理想的靶點(diǎn)。逆轉(zhuǎn)錄酶:把病毒單鏈RNA變成原病毒雙鏈DNA,為主要的藥物靶點(diǎn)。核苷類(lèi)(NRTI)與酶競(jìng)爭(zhēng)而抑制酶活;非核苷類(lèi)NNRTI與酶結(jié)合使其變構(gòu)而失活。以它為靶點(diǎn)的藥物最多,高效新藥不斷出現(xiàn)。整合酶:把原病毒雙鏈DNA整合到宿主基因組中,為抑制病毒復(fù)制和阻止病毒潛伏的理想藥靶,因種種原因此類(lèi)藥物目前還沒(méi)有上市。蛋白酶:把長(zhǎng)多肽鏈切成較小片段,成為有功能的成熟核蛋白,蛋白酶抑制劑抑制蛋白酶活性,也抑制了病毒的成熟。(2)阻止融合的蛋白質(zhì).與抑制復(fù)制比,阻止與宿主融合,從而阻止病毒進(jìn)入細(xì)胞,似乎更加“棋高一著”。病毒與宿主細(xì)胞融合抑制劑一直是抗艾滋藥物研究的重點(diǎn)。與病毒蛋白結(jié)合,阻止融合.臨床上與抗逆轉(zhuǎn)錄藥物聯(lián)合用于對(duì)其他藥物無(wú)效患者。與宿主蛋白結(jié)合,阻斷融合.細(xì)胞表面分子CD4及趨化因子受體CCR5和CXCR4是HIV進(jìn)入靶細(xì)胞的受體分子。針對(duì)這些分子的單克隆抗體及小分子物可能成為新藥。5).HIV-1感染藥物研發(fā)的新靶點(diǎn).抗HIV藥物研發(fā)不僅促進(jìn)了藥物研發(fā)和研發(fā)速度,還改變了從藥物到藥靶的傳統(tǒng)研發(fā)模式,發(fā)展了從藥靶到藥物的現(xiàn)代研發(fā)模式:根據(jù)HIV分子資料,確定逆轉(zhuǎn)錄酶、蛋白酶等為藥靶,基因工程表達(dá)藥靶蛋白,X線衍射等繪制晶體圖像,計(jì)算機(jī)分子建模,候選藥物設(shè)計(jì)和修飾,最后進(jìn)行藥理,藥物,臨床前及臨床研究。3.阿爾茨海默病阿爾茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD):老年癡呆中首病之一,以認(rèn)知障礙和記憶力損害為特征的慢性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,病因未完全闡明發(fā)病率:65歲以上約10%,85歲以上約47%。全球2600萬(wàn),我國(guó)700萬(wàn);無(wú)阻止,延緩或防止發(fā)生和發(fā)展的藥。目前多用單靶向藥物，療效不佳。AD產(chǎn)生的原因:

①乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活性降低或膽堿攝取能力低下,引起神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)營(yíng)養(yǎng)缺乏、功能受損等,導(dǎo)致神經(jīng)元系統(tǒng)功能衰退;②谷氨酸受體活性過(guò)高、活性氧水平過(guò)高、炎癥和病毒感染等,導(dǎo)致代謝通路受損、線粒體能量產(chǎn)生減少；③β-淀粉樣蛋白(β-amyloid,Aβ)團(tuán)塊聚集,在胞質(zhì)沉積后有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性④由Tau蛋白(神經(jīng)系統(tǒng)廣泛表達(dá)的微管蛋白)異常磷酸化:導(dǎo)致神經(jīng)纖維纏結(jié)、細(xì)胞核或線粒體DNA突變、蛋白質(zhì)折疊錯(cuò)誤,及RNA或蛋白質(zhì)加工不正確等。

1)癥狀控制藥.常用藥為乙酰膽堿酯酶抑制劑及其受體調(diào)節(jié)劑.雖不能扭轉(zhuǎn)但能控制癥狀.是重要藥物。乙酰膽堿酯酶也是昆蟲(chóng)神經(jīng)系統(tǒng)中最重要的酶,用于農(nóng)殘檢測(cè).2)癥狀改善藥:以Aβ為靶的抗AD藥為研究熱點(diǎn)。包括Aβ形成和聚集抑制劑及清除劑。在研的有tarenflurbil(Aβ免疫疫苗),tau聚集抑制劑亞甲藍(lán)等.3)多靶點(diǎn)藥物.開(kāi)發(fā)中的藥物不僅調(diào)節(jié)乙酰膽堿,對(duì)多個(gè)AD特征性病變(如神經(jīng)元凋亡、Aβ沉積、tau蛋白過(guò)磷酸化等)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)或神經(jīng)再生也有作用。

4)中藥多靶向抗AD藥物:姜黃素:抗氧化和抗炎,高效阻止Aβ纏結(jié),還是很好的Cu2+等金屬離子螯合劑。對(duì)AD有預(yù)防作用,長(zhǎng)期食姜黃食物的印度農(nóng)民,65歲以上AD患率僅1%。石杉?jí)A甲:選擇性抑制乙酰膽堿酯酶,有保護(hù)神經(jīng)線粒體等多重作用。含6味中藥的新復(fù)方參烏膠囊及其有效成分二苯乙烯苷:在多種擬AD動(dòng)物模型上對(duì)AD發(fā)病的多個(gè)靶點(diǎn)和環(huán)節(jié)起作用,有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)作用.植物雌激素替代治療:

雌激素有抗AD作用,絕經(jīng)期開(kāi)始進(jìn)行雌激素替代治療可減少AD風(fēng)險(xiǎn)。黃酮類(lèi)植物雌激素(ERβ激動(dòng)劑松果菊苷,甘草苷,甘草素,染料木黃酮、染料木苷、大豆黃素、大豆黃苷、芒柄花素和牛尿酚)有神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用,一定程度上對(duì)抗谷氨酸和Aβ引起的海馬神經(jīng)元損傷.AD靶向治療藥物4.糖尿病藥物作用靶點(diǎn)主要酶靶:α-葡萄糖苷酶(小腸內(nèi)水解α-1,4-糖苷鍵 生成單糖):競(jìng)爭(zhēng)性和可逆性抑制劑.葡萄糖激酶(GK):葡萄糖-6-磷酸酶醛糖還原酶(AR)二肽肽激酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)蛋白激酶C(PKC)蛋白酪氨酸激酶(PTK)和蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)糖原合酶激酶3(GSK-3)一氧化氮合酶(NOS)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)肉堿酯酰轉(zhuǎn)移酶Ⅰ、Ⅱ(CPTⅠ、Ⅱ)過(guò)氧化物酶增殖激活受體γ(PPARγ)糖代謝酶蛋白磷酸化酶天然靶點(diǎn)藥物研究模式靶點(diǎn)(已知)確立篩選系統(tǒng)與檢測(cè)方法確立大量提取物的篩選(~幾百種),可組合活性成分分離純化結(jié)構(gòu)解分析活性比較,找出作用強(qiáng)的幾中細(xì)胞,組織,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(可委托)臨床試驗(yàn)酶活性測(cè)定九.天然藥物提取分離與新靶點(diǎn)藥物篩選1.天然藥物提取,分離與制備提取分離新方法:柱層析提取法,電泳提取法濃縮新方法:樹(shù)脂濃縮法天然藥物制備:蟲(chóng)草素,喜樹(shù)堿,姜黃素,二苯乙烯類(lèi),河豚素,中藥提取物基因工程生產(chǎn)藥用成分:白藜蘆醇,神秘果素(糖尿病輔助藥)和豆豉激酶(溶栓藥)的微生物與植物基因工程生產(chǎn)2.天然靶點(diǎn)藥物:核苷酸代謝有關(guān)的靶點(diǎn)藥物篩選腺苷脫氨酶抑制劑:篩選出4種有效的提取物,鑒定2種有效成分拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑:喜樹(shù)堿的提取分離與結(jié)構(gòu)修飾、轉(zhuǎn)化核糖核苷酸還原酶抑制劑:篩選模型的構(gòu)建(基因克隆與基因工程菌表達(dá))通過(guò)靶點(diǎn)研究中藥有效成分天然藥物制備方法提取濃縮分離,純化鑒定,定性定量分析植物種類(lèi),器官,發(fā)育期,地點(diǎn),前處理(固定,干燥,粉碎)等目標(biāo)物質(zhì):種類(lèi),性質(zhì),含量,分布等提取方法,溶劑,提取時(shí)間,用量,溫度,次數(shù)等離心,沉淀,酸堿度,萃取,重溶,結(jié)晶,膜過(guò)濾等層析分離:大孔樹(shù)脂,聚酰胺,離子交換,凝膠/分子篩,硅膠等LC,HPLC,沉淀,結(jié)晶/重結(jié)晶UV,IR,HPLC,GC,MS,NMR,電泳,特殊化學(xué)反應(yīng),顏色反應(yīng)濃縮干燥生物材料產(chǎn)物最新的提取方法柱層析提取法提取活性成分原理和理論：提取=溶解+洗脫技術(shù)浸泡瀝濾動(dòng)態(tài)逆流循環(huán)重力+層析洗脫分離蟲(chóng)草素的提取與分離制備Columnchromatographicextractionandpreparationofcordycepinfrom

Cordycepsmilitaris

wastermedium Largeamountsofsolidmediumcontainingcordycepin,usedintheindustrialproductionof

Cordycepsmilitaris

throughsolidfermentation,arediscardedaswasteandcontaminatetheenvironment.DrHai-HangLiandhisteamfromtheGuangdongProvincialKeyLabofBiotechnologyforPlantDevelopmentattheSouthChinaNormalUniversityinGuangzhou,China,havedevelopedanewcolumnchromatographicextraction(CCE)methodfortheextractionofcordycepinfromthiswasteandapreparationmethodforfurtherseparationandpurification.

Thestudy,whichwaspublishedintheJournalofChromatographyB[877(22),2135-2141(2009)],formedpartofalargerresearchprojecton“TechnologiesforProfitableEnvironmentalWasteTreatments”,whichincludedfindingthevaluesandusageofenvironmentalwasteanddevelopingtechnologiestousethemprofitably. “Thekeypointforprofitabletreatmentofwasteistodevelopasimpleandusefultechnologyormethod,withhighefficiencyandlowcosts,”DrLiexplained.Thenewextractionmethod,basedonchromatographictheoryandpractice,combinedrecentnewtechnologiesintheextractionfield,suchasmixing,dynamic,countercurrentandcirculation.“TheCCEmethodusesaslittleasfourvolumesofsolventtoreachmorethan97%extractionefficiency.Thismethodhashighextractionefficiency,usesaminimumvolumeandminimumconcentrationofsolvent,thepreparationmethodissimple,highlyefficient,energy-saving,environmentallyfriendly,andhasbeendemonstratedtobeeffectiveforlargepreparationsofcordycepinfromwastewithlowequipmentandoperatingcosts.Thisworkalsoexpandedtheapplicationofchromatographictechnologyinnaturalchemicalindustry,”Liadded. Accordingtohim,thenewextractionmethodisbeingusedforbothquantitativeanalysisandlargepreparationsofbioactivesubstancesfrombiologicalwastesinagricultural,foodandbeveragesandmedicalindustries,aswellasforthepreparationofextractsoftraditionalChinesemedicines. Formoreinformation,contacttheauthoron

li_haihang@英國(guó)SeparationScience,09年9月發(fā)表專題報(bào)道(英文版)China英國(guó)<分離科學(xué)>09年專題報(bào)道本研究

中文版Merck公司高級(jí)藥物化學(xué)家發(fā)文贊揚(yáng)本工作

Cordycepsmilitaris

ByHeinzSarter,Ph.D.PharmaceuticalChemist,GermanyTheintentionofthisarticleistogiveanoverviewonrecentdevelopmentsinthefieldofCordycepsmilitaris.First,IwanttomentionanexcellentpaperofHeNi,Xiao-HongZhou,Hai-HangLiandWen-FangHuang:ColumnchromatographicextractionandpreparationofcordycepinfromCordycepsmilitariswastermedium,publishedinJournalofChromatographyB,877(2009),2135-2141CordycepsmilitariscanbeaverygoodsubstitudeforCordycepssinensis.EspeciallycordycepincanbeisolatedfromCordycepsmilitaris.CordycepinisunderclinicaltestsastherapeuticagentfortreatmentofTdT-positiveacutelymphocyticleukemia(grantedbytheFDA).Furthermorecordycepinhasantibacterial,antifungalandantiviralproperties.Thecurrentpaperdescribesacolumnchromatographicextractionofcordycepinwithapurityofmorethan98%.蟲(chóng)草素的柱層析與提取分離連續(xù)生產(chǎn)的工藝流程圖中試生產(chǎn)產(chǎn)品及其分析結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)的高純度蟲(chóng)草素產(chǎn)品喜樹(shù)堿的柱層析循環(huán)與非循環(huán)提取的比較喜樹(shù)堿的超聲波輔助的浸泡提取結(jié)晶后氯仿萃取后粗提液喜樹(shù)堿純品兩種柱層析提取法獲得的茶提取物比較白色為水提取:70oC,超聲1h,徑高比1:10,流速為2BV/h,收集前20倍。30%乙醇提?。菏覝兀瑥礁弑?:10，流速2BV/h，收集前12倍。提取液減壓濃縮，65oC真空干燥，得到固體粉末稱重。烘干后相對(duì)提取率

提取液中提取率

聚酰胺柱茶多酚大孔樹(shù)脂咖啡因茶氨酸提取柱溶解吸脹超聲波等處理茶葉活性物提取分離工藝流程茶葉/粉碎/過(guò)篩水/水處理器95%食用酒精茶多酚咖啡因濃縮干燥純化離子交換茶氨酸茶多糖連續(xù)柱層析提取分離的產(chǎn)物茶多酚咖啡因茶氨酸EGCG圖8.柱層析循環(huán)提取、非循環(huán)提取和超聲提取姜黃素的比較柱層析提取法（白）超聲提取法（條紋）循環(huán)柱層析提取法（黑）07級(jí)本科畢業(yè)論文(詹佩茵)

表1不同提取液稀釋四倍后二苯乙烯苷的含量表3不同提取液中蒽醌類(lèi)含量對(duì)比何首烏提取液與有效成份研究07級(jí)本科畢業(yè)論文純化二苯乙烯苷二苯乙烯苷標(biāo)準(zhǔn)品40%乙醇提取液50%乙醇提取液水煮提取液甲醇提取液二苯乙烯苷mg/ml0.38070.33180.03230.123140%乙醇提取80%乙醇提取水煮法提取甲醇提取大黃素(mg/ml)5.7856×10-35.556×10-3－3.45×10-3大黃素甲醚mg/ml1.013×10-42.562×10-3－4.458×10-4微生物與植物基因工程生產(chǎn)藥用成分白藜蘆醇，變味蛋白，納豆激酶，多酚氧化酶等樹(shù)脂吸液濃縮法濃縮3倍樹(shù)脂濃縮蛋白質(zhì)溶液表3.4樹(shù)脂吸液法濃縮多糖提取液效果材料蟲(chóng)草多糖蟲(chóng)草多糖甘薯多糖甘薯多糖濃縮倍數(shù)1.03.081.03.23回收率92.2±3.991.3±4.691.8±5.787.8±4.2表3.5樹(shù)脂濃縮蛋白提取液的效果材料蟲(chóng)草蛋白蟲(chóng)草蛋白甘薯蛋白甘薯蛋白牛血清牛血清濃縮倍數(shù)1.03.01.03.01.03.0回收率95.0±0.790.0±4.791.8±6.790.9±5.496.8±0.895.2±0.8圖3.29濃縮前后溶液中蟲(chóng)草素的HPLC檢測(cè)蟲(chóng)草素標(biāo)準(zhǔn)品蟲(chóng)草提取液濃縮3倍濃縮前截留分子量500截留分子量100圖3.31濃縮前后溶液中酪氨酸的HPLC檢測(cè)酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液酪氨酸提取液濃縮3倍濃縮前截留500截留100靶點(diǎn)藥物與藥物添加劑

腺苷脫氨酶抑制劑的篩選與提取分離鑒定圖9.腺苷脫氨酶對(duì)蟲(chóng)草素的降解.●蟲(chóng)草素,■蟲(chóng)草素降解產(chǎn)物(3’-脫氧次黃苷)圖10.腺苷脫氨酶對(duì)腺苷的降解.●腺苷,▲腺苷降解產(chǎn)物(次黃苷)I,■腺苷降解產(chǎn)物(次黃苷)II.

圖11.蟲(chóng)草素+腺苷脫氨酶抑制劑處理癌細(xì)胞48小時(shí)后蟲(chóng)草素含量.黑柱為蟲(chóng)草素純品(98%),白柱和斜線柱為蟲(chóng)草素+提取物處理.

圖12.HPLC測(cè)定癌細(xì)胞中蟲(chóng)草素降解.A為蟲(chóng)草素純品,B為蟲(chóng)草素+提取物(蟲(chóng)草素濃度均為25μg/ml).

圖11.蟲(chóng)草素(98%,黑柱)與蟲(chóng)草+活性提取物(斜線柱和白柱)癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響.各處理中的蟲(chóng)草素濃度相等.A:24hours,B:48hours,C:72hours.篩選出4種有活性的提取物分離鑒定了2種成分發(fā)表的部分文章LiuSR,LiHH.2010.Preparationofsuperabsorbentresinanditsapplicationinconcentrationofextractionsolutions.BioresourceTechnology,

SCI,insubmission.

Pan,LP,Li,HH.Cloningofresveratrolsynthasegenefrompeanutanditstransformationinto