《微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)》名師教案

PAGE11課時(shí)教學(xué)設(shè)計(jì)首頁(yè)授課教師：韓曉靜課題純化大腸桿菌課型新課第幾課時(shí)1課時(shí)教學(xué)目標(biāo)（三維）知識(shí)目標(biāo)：1說(shuō)明純化大腸桿菌的基本原理。2應(yīng)用無(wú)菌技術(shù)的操作。能力目標(biāo)：能夠使用平板劃線法和稀釋涂布平板法純化大腸桿菌。情感態(tài)度與價(jià)值觀目標(biāo)：形成勇于實(shí)踐、嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的科學(xué)態(tài)度和科學(xué)精神。教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn)無(wú)菌技術(shù)的操作教學(xué)方法與手段討論法實(shí)驗(yàn)法演示法多媒體使用教材構(gòu)想本節(jié)課是在學(xué)習(xí)了微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的無(wú)菌技術(shù)，如消毒和滅菌、培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上進(jìn)行的。學(xué)生已經(jīng)有了無(wú)菌操作的意識(shí)。這節(jié)課要學(xué)習(xí)的平板劃線操作和稀釋涂布平板操作，其操作的每一步都需要做到無(wú)菌，只有熟悉、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，才可能培養(yǎng)出純凈的微生物，本節(jié)課充分發(fā)揮學(xué)生的主動(dòng)性，親自動(dòng)手進(jìn)行平板劃線操作，從中體會(huì)培養(yǎng)物純凈對(duì)于微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的重要性。課時(shí)教學(xué)設(shè)計(jì)流程教師行為學(xué)生行為設(shè)計(jì)意圖【導(dǎo)入】今天這節(jié)課我們學(xué)習(xí)微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的第二課時(shí)——純化大腸桿菌（引出標(biāo)題板書(shū)）情景創(chuàng)設(shè)：教師：大家看我手里拿了一個(gè)什么【展示】大平板教師：對(duì)，一個(gè)超大的培養(yǎng)基，大到可以把我的手放進(jìn)去。大家猜猜，我用手按一下培養(yǎng)基，幾天后培養(yǎng)基會(huì)發(fā)生什么變化呢教師：是不是大家想的這樣呢我們一起看一張圖片。PPT展示手印圖片教師：在手接觸過(guò)的地方長(zhǎng)滿了各種顏色不同、形態(tài)大小不同的什么呢教師：那平板上這些菌落是怎么來(lái)的呢（此時(shí)板書(shū)：菌落及平板，先畫(huà)平板再寫(xiě)“菌落”）教師：沒(méi)錯(cuò)，菌落是有一個(gè)細(xì)胞或同種細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體（板書(shū)：平板上畫(huà)一個(gè)點(diǎn)，涂大一點(diǎn)）從圖上還可以看出我們生活中的微生物經(jīng)常混雜生活在一起，菌落不僅可以使其呈現(xiàn)，還能將不同的微生物區(qū)分開(kāi)來(lái)。因此菌落具有分離純化微生物的作用。（此時(shí)板書(shū)：“分離純化”）教師：同學(xué)們注意到?jīng)]，在你們的桌上有幾個(gè)試管，這些試管里面放的是大腸桿菌菌液。（板書(shū)：試管及菌液）怎么判斷這管是否為純的大腸桿菌教師：這個(gè)同學(xué)的意思是要讓菌液變成菌落（板書(shū)：畫(huà)空箭頭），從液體培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基上的過(guò)程稱為接種（板書(shū)：接種），微生物接種的方法有很多種，常見(jiàn)的有平板劃線法和稀釋涂布平板法。（板書(shū)“平板劃線法”、“稀釋涂布平板法”）什么叫平板劃線法呢哪個(gè)同學(xué)來(lái)回答？

教師：我聽(tīng)到幾個(gè)關(guān)鍵詞，分別是接種環(huán)、固體培養(yǎng)基、連續(xù)劃線、稀釋分散。是這樣吧很好，請(qǐng)坐。這幾個(gè)詞就涵蓋了平板劃線的原理，我們來(lái)具體分析。首先我們用接種環(huán)沾取菌液，接種在固體培養(yǎng)基上，然后畫(huà)出三條水平線，（板書(shū)：貼第一次劃線的磁貼）思考：為什么要畫(huà)線，還不是點(diǎn)點(diǎn)？

教師：嗯，線首和線尾哪個(gè)部分菌數(shù)少教師：好，請(qǐng)坐，那么一次劃線還不足以稀釋成單菌落，需要再次劃線，第二次劃線我們?cè)趺磩澓线m教師：（板書(shū)：貼第二次劃線的磁貼）之后重復(fù)以上操作，連續(xù)進(jìn)行3次劃線，最后劃線結(jié)束時(shí)，我們看第五區(qū)域的線能否和第一區(qū)域的線首尾相連教師：嗯，第一區(qū)域菌數(shù)最多，第五區(qū)域菌數(shù)最少，通過(guò)連續(xù)劃線起到了稀釋分散的作用，最終可以產(chǎn)生單菌落，達(dá)到了分離純化的目的。好，請(qǐng)坐。教師：了解了原理，那我們來(lái)看一段平板劃線操作的教學(xué)視頻，在看的時(shí)候大家注意觀察操作的每一個(gè)細(xì)節(jié)，仔細(xì)聽(tīng)里面的每一句話，通過(guò)觀看視頻思考學(xué)案上的幾個(gè)問(wèn)題。（展示平板劃線視頻）學(xué)生活動(dòng)：看完視頻后分析討論學(xué)案上的思考題計(jì)時(shí)2分鐘。教師：時(shí)間到，我們來(lái)分析第一個(gè)問(wèn)題，數(shù)一數(shù)，本次操作共灼燒接種環(huán)幾次每次目的是否相同，為什么教師：這位同學(xué)觀察很細(xì)致，回答沒(méi)毛病，請(qǐng)坐。第二個(gè)問(wèn)題：為什么每次灼燒完都要冷卻了再劃線教師：第三個(gè)問(wèn)題：平板劃線時(shí)，不能劃破培養(yǎng)基的原因教師：即使在劃破處有單個(gè)細(xì)胞，也無(wú)法形成規(guī)則的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，形成一個(gè)條狀的菌落。學(xué)生活動(dòng)：按照教學(xué)視頻的演示，進(jìn)行學(xué)生實(shí)驗(yàn)，注意事項(xiàng)提前說(shuō)：酒精燈無(wú)菌區(qū)、接種環(huán)燒紅、倒置培養(yǎng)（5-8分鐘）教師：操作結(jié)束，我們放到37°下恒溫培養(yǎng)12-24小時(shí)結(jié)果分析：這是咱們以前同學(xué)做出的結(jié)果，怎么樣教師：那這個(gè)結(jié)果呢教師：那么大家思考雜菌污染可能的原因有哪些教師：好，以上是平板劃線法分離純化大腸桿菌的方法，接下來(lái)我們學(xué)習(xí)稀釋涂布平板法。稀釋涂布平板法分為稀釋和涂布（板書(shū)：用不同顏色的粉筆標(biāo)出下劃線）原理是這樣的：取1ml菌液放入含有9ml無(wú)菌水的試管中，稀釋10倍，然后10倍試管中取1ml轉(zhuǎn)移至9ml無(wú)菌水中，相當(dāng)于稀釋了102倍，以此類(lèi)推，稀釋到106倍。然后取10的4、5、6菌液進(jìn)行涂布，在稀釋度合適的平板上可以長(zhǎng)出單菌落。接下來(lái)，我們還是來(lái)看一段本操作的演示視頻。學(xué)生活動(dòng)：通過(guò)視頻回答學(xué)案上的幾個(gè)思考題教師：第一個(gè)問(wèn)題：進(jìn)行系列稀釋操作時(shí)應(yīng)如何確定恰當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)教師：第2個(gè)問(wèn)題：在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中我們應(yīng)該如何保證無(wú)菌操作教師：第3個(gè)問(wèn)題：操作結(jié)束后，為什么要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基和一個(gè)接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)？

教師：結(jié)果分析：這是一個(gè)純化成功的平板，可以看出單菌落分布均勻，可以用于計(jì)數(shù)，同時(shí)可以定量的計(jì)算出原始菌液中大腸桿菌的數(shù)目這是一個(gè)學(xué)生做出的結(jié)果，看怎么樣教師：這個(gè)是被污染了的，操作中任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)失誤都會(huì)出現(xiàn)雜菌污染的情況，所以在微生物實(shí)驗(yàn)中一定要具備無(wú)菌操作的意識(shí)。通過(guò)這節(jié)課的學(xué)習(xí)我們獲得了純種的大腸桿菌，因此我們可以把它儲(chǔ)存起來(lái)了，儲(chǔ)存方法可以是4°冷藏臨時(shí)儲(chǔ)存也可以是-20°冷凍長(zhǎng)期保存。教師：同學(xué)們經(jīng)過(guò)這節(jié)課的學(xué)習(xí)，我們掌握了純化大腸桿菌的兩種方法。平板劃線法和稀釋涂布平板法，那這兩種方法有什么相同點(diǎn)和不同點(diǎn)呢各自的優(yōu)缺點(diǎn)是什么誰(shuí)來(lái)說(shuō)一下。最后我們要學(xué)以致用：請(qǐng)大家結(jié)合本節(jié)課所學(xué)知識(shí)，嘗試設(shè)計(jì)一個(gè)分離純化泡菜中乳酸菌的實(shí)驗(yàn)。（要求：可行性強(qiáng)，可適當(dāng)創(chuàng)新，體現(xiàn)對(duì)照和重復(fù)原則，但必須以遵循接種的基本原理和無(wú)菌操作為前提，以獲得純化的乳酸菌為目標(biāo)，并以安全為第一保障。）

平板，培養(yǎng)基

學(xué)生：變臟、長(zhǎng)菌

學(xué)生：菌落

學(xué)生：手上微生物生長(zhǎng)繁殖來(lái)的

學(xué)生：平板上看菌落，是否是一種，是的話就是純的，有不同菌落說(shuō)明是不純的

學(xué)生：平板劃線法是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體．．培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。

學(xué)生回答：劃線相當(dāng)于稀釋

學(xué)生：線尾學(xué)生：在第一次劃線的線尾開(kāi)始再畫(huà)平行線學(xué)生：不可以，這樣起不到稀釋的目的

學(xué)生：共灼燒了6次，第一次是在取菌液之前，目的是殺死接種環(huán)上的雜菌。中間的4次都是為了燒死接種環(huán)上殘留的菌種，最后一次是在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，防止細(xì)菌污染環(huán)境和操作者。學(xué)生：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。學(xué)生：劃破培養(yǎng)基會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的。

學(xué)生：好，分離出單菌落學(xué)生：不好，雜菌污染了。學(xué)生：培養(yǎng)基、接種工具、消毒、瓶口不灼燒、培養(yǎng)基全部打開(kāi)、每次用完接種環(huán)要灼燒，沒(méi)有倒置培養(yǎng)，等等。

學(xué)生：不同稀釋度都涂布，通過(guò)觀察菌落數(shù)目，30-300個(gè)就是合適的稀釋倍數(shù)學(xué)生：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如：①酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適②吸管頭不要接觸任何其他物體③吸管要在酒精燈火焰周?chē)鹊葘W(xué)生：培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對(duì)照。未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1—2天后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，若有菌落形成，則說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不徹底，或培養(yǎng)基被污染了，需要重新制備。學(xué)生：涂布不均勻，不可計(jì)數(shù)

學(xué)生：相同點(diǎn)是稀釋?zhuān)煌c(diǎn)是平板劃線是先接種后稀釋?zhuān)♂屚坎计桨宸ㄊ窍认♂尯笸坎迹桨鍎澗€優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單，缺點(diǎn)是不可計(jì)數(shù)，稀釋涂布平板法優(yōu)點(diǎn)是可計(jì)數(shù)，缺點(diǎn)是操作復(fù)雜。

通過(guò)視頻、圖片讓學(xué)生直觀的認(rèn)識(shí)微生