（浙教版）高二生物選修一知識：第一部分 實驗2 分離以尿素為氮源的微生物 （共26）

Word文檔下載后可自行編輯7/7（浙教版）高二生物選修一知識：第一部分實驗2分離以尿素為氮源的微生物（共26）。實驗2分離以尿素為氮

源的微生物任務(wù)1：怎么從土壤中分離出能分解尿素并將其作為氮源的微生物呢？利用以尿素為唯一氮源

的培養(yǎng)基進行篩選。（1）將土壤中的固氮菌分離出來（2）將土壤中自養(yǎng)微生物分離出來舉一反三（3）篩選出抗青霉素的微生物（4）篩選出耐高濃度食鹽的微生物……配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基25ml

葡萄糖0.025g

NaCl0.12g

K2HPO40.12g

水15ml

尿素10ml

功能上是選擇培養(yǎng)基瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定量的含氮化合物瓊脂糖不含氮元素，但有固化作用。物理性質(zhì)（形態(tài)）上是固體培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制和阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基25ml

葡萄糖0.025g

NaCl0.12g

K2HPO40.12g

水15ml

尿素10ml

瓊脂糖0.5g

瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定量的含氮化合物瓊脂糖不含氮元素，但有固化作用。1、通過什么方法可以判斷細(xì)菌確實能將尿素分解成氨。思考：方法：在以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,接種培養(yǎng)該細(xì)菌，若指示劑變紅，說明該種菌能將尿素分解成氨。尿素培養(yǎng)基

葡萄糖0.025g

NaCl0.12g

K2HPO40.12g

瓊脂糖0.5g

酚紅0.25g

尿素10ml

水15ml細(xì)菌

尿素NH3

中性堿性

酚紅顏色：黃色紅色(變色范圍pH6.4-8.2)任務(wù)1：怎么從土壤中分離出它們呢？利用以尿素為唯一氮源

的培養(yǎng)基進行篩選。2、要驗證以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基

對土壤中的細(xì)菌確實具有選擇作用，你

該如何設(shè)計實驗。思考：配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基

葡萄糖0.025g

NaCl0.12g

K2HPO40.12g

瓊脂糖0.5g

酚紅0.25g

尿素10ml

選擇培養(yǎng)基實驗組二、實驗?zāi)康?使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離細(xì)菌(有脲酶)通過指示劑（酚紅）顏色的變化檢知培養(yǎng)基pH的變化(脲酶催化的化學(xué)反應(yīng))統(tǒng)計被檢測的土壤中含有的以尿素為氮源的微生物的數(shù)量三、實驗中涉及到的一些問題：（一）哪些土壤中含有這種以尿素為氮源的微生物多？（選材的問題）（二）此實驗用到的選擇培養(yǎng)基必需含有哪些物質(zhì)？（三）可用什么指標(biāo)認(rèn)定不同土壤中選擇出的微生物對尿素分解能力的高低？（四）統(tǒng)計微生物的數(shù)量可用哪些方法？沒硬化，腐殖質(zhì)豐富的土壤碳源、尿素、無機鹽、水、酚紅培養(yǎng)基紅色的深淺和區(qū)域的大小稀釋涂布平板法，顯微鏡直接計數(shù)法三、實驗中涉及到的一些問題：（五）用稀釋涂布平板法計數(shù)時，菌落數(shù)在30-300計數(shù)。重復(fù)性原則對照原則（排除實驗組中非測驗因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗的可信度）做一系列濃度梯度實驗，探究合適的稀釋度（六）實驗設(shè)計要遵循的原則：過濾滅菌后的尿素（二）制備細(xì)菌懸液

制備成10-2、10-3、10-4、10-5

土壤稀釋液配制菌懸液1個99ml無菌水2個4.5ml無菌水得10-2,10-3,10-4的菌懸液1g土壤倒平板需要倒3個LB平板，9個尿素平板每個稀釋度1個LB對照平板

3個尿素平板(平行重復(fù)組)接種取0.1ml菌懸液涂布分離涂布分離37℃倒置培養(yǎng)按濃度捆成一摞恒溫37℃培養(yǎng)10-4、10-3,、10-2利用血球計數(shù)板的缺點:不能區(qū)分死菌與活菌不適于對運動的細(xì)菌計數(shù)需要相對高的細(xì)菌濃度個體小的細(xì)菌在顯微鏡底下難以觀察練習(xí)題1、選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許種類的微生物生長，同時和其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。阻止特定抑制2、常用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目。當(dāng)樣品的足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在的平板進行計數(shù)。此外，測定微生物數(shù)量的常用方法還有直接計數(shù)。顯微鏡稀釋度細(xì)菌30-3003、在同一稀釋度下，至少對3個平板進行重復(fù)計數(shù)，然后求出，并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。平均數(shù)4、用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中．得到以下幾種統(tǒng)計結(jié)果，正確的是

A．涂布了一個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是230

B．涂布了兩個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是215和260，取平均值238

C．涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163

D．涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是2l0、240和250，取平均值233D5.在做分離分解尿素的細(xì)菌實驗時，A同學(xué)從對應(yīng)106培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個菌落。A同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生原因可能有(