免疫學(xué)原理與應(yīng)用課件

第一節(jié)海水魚類及其他動物的免疫概念一、水產(chǎn)動物免疫及其主要功能1.水產(chǎn)動物免疫1）免疫（ImmunisImmune,Immunity）：指生物機體識別自身和異己物質(zhì)，對自身物質(zhì)形成天然免疫耐受，對異己物質(zhì)產(chǎn)生清除作用的一種生理反應(yīng).

簡單說，免疫是機體對病原產(chǎn)生抵抗力，使其免受感染的過程。正常：免疫對機體有利，可產(chǎn)生抗感染、抗腫瘤等維持機體生理平衡和穩(wěn)定的免疫保護反應(yīng)；異常：免疫可對機體造成傷害，如超敏反應(yīng)、自身免疫疾病和腫瘤等。2）水產(chǎn)動物免疫學(xué)（Immunology）：指研究水產(chǎn)養(yǎng)殖動物免疫系統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)與生理功能的一門新興學(xué)科。Chapter3.

免疫學(xué)原理在疾病診斷和防治中的應(yīng)用第一節(jié)海水魚類及其他動物的免疫概念Chapter3.12.抗原與抗體的概念1)抗原：

凡是能夠刺激機體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細胞，并能與之結(jié)合引起特異性免疫反應(yīng)的物質(zhì)，稱為抗原。2)抗體：機體免疫活性細胞受抗原刺激后，在體液中出現(xiàn)的由漿細胞產(chǎn)生的一類能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白。簡單說，抗體是一種免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)Chapter2.

免疫學(xué)原理在疾病診斷和防治中的應(yīng)用2.抗原與抗體的概念Chapter2.免疫學(xué)原理在疾23.免疫反應(yīng)的功能1)免疫防御：為機體清除異己物質(zhì)的一種免疫保護功能。

正常：抗感染（消滅病原生物、中和毒素）

異常：

（過高）變態(tài)反應(yīng)(超敏反應(yīng))；（過低）免疫缺陷癥變態(tài)反應(yīng)：某些抗原或半抗原再次進入致敏機體，在體內(nèi)引起特異性體液或細胞免疫反應(yīng)，由此導(dǎo)致組織損傷或生理功能紊亂。免疫缺陷癥：指機體免疫系統(tǒng)由于先天性發(fā)育不良或后天遭受損傷所致的免疫功能降低或缺乏的系統(tǒng)綜合癥。Chapter2.

免疫學(xué)原理在疾病診斷和防治中的應(yīng)用3.免疫反應(yīng)的功能Chapter2.免疫學(xué)原理在疾病32)免疫穩(wěn)定：機體免疫系統(tǒng)維持內(nèi)環(huán)境相對穩(wěn)定的一種生理功能。

正常：消除體內(nèi)衰老的和被破壞的細胞

異常：（過高）自身免疫病自身免疫病：自身抗體或自身致敏淋巴細胞攻擊自身靶抗原細胞和組織，使其產(chǎn)生的病理性改變或功能障礙。3)免疫監(jiān)督：機體免疫系統(tǒng)識別、清除體內(nèi)突變、畸形的細胞和病毒感染細胞的一種生理保護作用。

正常：

識別和消除突變細胞

異常：

（過低）易生惡性腫瘤、病毒持續(xù)感染。免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念2)免疫穩(wěn)定：機體免疫系統(tǒng)維持內(nèi)環(huán)境相對穩(wěn)定的一種生理功能4二、免疫系統(tǒng)的組成

中樞免疫器官：骨髓、胸腺、法氏囊（禽類）

免疫器官

外周免疫器官：淋巴結(jié)、脾、黏膜相關(guān)的淋巴組織

造血干細胞

淋巴細胞：T淋巴細胞、B淋巴細胞、第三淋巴細胞群

[自然殺傷細胞(NK細胞)、淋巴因子激活的殺傷細胞(LAK細胞)]免疫

免疫細胞抗原提呈細胞：單核吞噬細胞、樹突細胞、并指細胞、系統(tǒng)

朗罕細胞、B細胞

其他免疫細胞：中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、肥大細胞、紅細胞

抗體免疫分子補體

細胞因子：淋巴因子和單核因子

5（一）免疫器官1、中樞免疫器官1）骨髓(Bonemarrow)樣組織：魚類無淋巴造血的骨髓，但在軟骨魚的眶區(qū)和顱下區(qū)存在淋巴組織或骨髓樣組織，可形成血細胞，具有與高等脊椎動物骨髓相似的結(jié)構(gòu)與功能。真骨魚的腎臟也屬骨髓樣組織，是重要的淋巴器官，具造血功能。它分為頭腎（前腎）和中腎（后腎、體腎）二部分。其中頭腎失去排泄功能而成為免疫器官和造血組織，為魚類中第二個發(fā)育的免疫器官，免疫細胞的發(fā)源地(產(chǎn)生B細胞和紅細胞等，相當于哺乳類骨髓)；此外，受抗原刺激后，頭腎增生并存在抗體產(chǎn)生細胞，說明其為魚類重要的抗體產(chǎn)生器官(相當于哺乳類的淋巴結(jié))。2）胸腺(Thymus)：真骨魚類的胸腺位于？，它無皮質(zhì)與髓質(zhì)的分界線，胸腺由結(jié)締組織被膜環(huán)繞，實質(zhì)由上皮細胞網(wǎng)組成，在上皮細胞網(wǎng)中分布由淋巴細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞和成熟的漿細胞等。魚類的胸腺是T細胞分化成熟為具免疫活性的T細胞的場所，T細胞移至外周免疫器官后，可接受抗原刺激增殖分化產(chǎn)生免疫效能。魚類胸腺的結(jié)構(gòu)與功能隨著季節(jié)和年齡的變化而變化。免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念（一）免疫器官免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念62、外周免疫器官外周淋巴器官為捕捉抗原、加工處理抗原和呈遞抗原的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。1）脾(Spleen)：為人體最大的淋巴器官，具有造血、貯血和過濾作用，也是成熟T、B細胞移居和接受抗原刺激后產(chǎn)生免疫應(yīng)答的主要場所。

A.人類1)脾的結(jié)構(gòu)和細胞組成：

a.脾表面由結(jié)締組織包裹，被膜向?qū)嵸|(zhì)內(nèi)延伸成若干小梁，脾實質(zhì)由紅髓和白髓組成，兩者交界處為邊緣區(qū)（又稱為移行區(qū)）。b.白髓：由小動脈周圍淋巴鞘和鞘內(nèi)淋巴泡兩部分組成。小動脈淋巴鞘主要含T細胞，當抗原引起細胞免疫應(yīng)答時，此區(qū)明顯增大。淋巴濾泡主要由B細胞構(gòu)成，接受抗原刺激后可出現(xiàn)生發(fā)中心，內(nèi)含增殖分化的B細胞。c.紅髓：分布在白髓周圍，由脾索和脾竇組成。脾索主要是B細胞集居區(qū)，也有巨噬細胞和樹突狀細胞。脾竇又稱血竇，有大量的巨噬細胞和血細胞。d.邊緣區(qū)：紅髓和白髓交界處為邊緣區(qū)，內(nèi)含T細胞、B細胞和巨噬細胞。免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念2、外周免疫器官免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念7第三章免疫學(xué)原理與應(yīng)用課件8

2)脾的功能：

a.在胚胎期為造血干細胞增殖分化的場所，具有造血功能；b.是血液的濾過器，可以清除血中的病原微生物和自身衰老損傷的血細胞。c.為T、B細胞移居和接受抗原刺激后發(fā)生免疫應(yīng)答、產(chǎn)生免疫效應(yīng)等重要場所。脾中的淋巴細胞60%為B淋巴細胞。B.魚類脾的結(jié)構(gòu)與功能

a.有頜類才有真正的脾，軟骨魚類脾較大，分化為紅髓和白髓，為造血器官；硬骨魚類無明顯紅髓和白髓分化，但同時有造血和免疫功能。b.與頭腎相比，脾在體液免疫反應(yīng)中處于相對次要的地位，其受抗原刺激后的增殖反應(yīng)以彌散的方式發(fā)生在整個器官上。c.硬骨魚類受免疫接種后，其脾、腎和肝等器官的黑色素巨噬細胞增多，并與淋巴細胞和抗體生成細胞聚集在一起形成黑色素巨噬細胞中心，它的作用有：參與體液免疫和炎癥反應(yīng)；對異物進行貯存、破壞和脫毒；記憶細胞原發(fā)中心；保護組織免受自由基損傷。免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念2)脾的功能：免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念92）粘膜淋巴組織(MucosaAssociatedLymphaticTissue,MALT)：

a.魚類皮膚、鰓和消化道等器官的上皮組織中存在的淋巴細胞、巨噬細胞和各類粒細胞等都屬于MALT。當機體受到抗原刺激后，巨噬細胞可對抗原進行處理和呈遞，抗體分泌細胞(Antibodysecretingcell,ASC)會分泌抗體，與粘液中的溶菌酶和補體等非特異性的保護組織一道組成抵御病原感染的防線。b.魚類MALT相對于其系統(tǒng)免疫系統(tǒng)有一定自主性，在其免疫接種方法選擇和改進中有實際意義：口服免疫后，頭腎、血液和腸都出現(xiàn)ASC，但鰓中和皮膚粘液中無；肛門插管接種抗原后可誘導(dǎo)腸、皮膚粘液和膽汁中產(chǎn)生特異性抗體，但血清中無；腹腔免疫4周后，頭腎、血液和鰓中抗體分泌同時達到峰值，而腸只有到第7周才有顯著反應(yīng)；顆?？乖菝庖邥r，皮膚攝取能力遠大于鰓，因此，口腔和腹腔免疫可明顯刺激系統(tǒng)免疫應(yīng)答，浸泡和肛門免疫更適宜于誘導(dǎo)粘膜免疫反應(yīng)。c.教材中的腸道淋巴組織也屬于MALT的范疇。免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念2）粘膜淋巴組織(MucosaAssociatedLym10（二）免疫細胞免疫細胞：泛指所有參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答有關(guān)的細胞及其前體細胞，包括：淋巴細胞、單核吞噬細胞及其它抗原提呈細胞、粒細胞、紅細胞和肥大細胞等。

魚類免疫細胞主要存在于免疫器官、組織以及血液和淋巴液中。1。T淋巴細胞：它由一群功能不同的異質(zhì)性淋巴細胞組成，在胸腺內(nèi)分化成熟，為胸腺依賴性淋巴細胞(Thymusdependentlymphocyte)的簡稱。成熟的T細胞隨血流分布于外周免疫器官，并通過血液與組織間的淋巴細胞再循環(huán)游走于全身，執(zhí)行其免疫功能。其在外周血中所占淋巴細胞總數(shù)的65~80%。2。B淋巴細胞：在骨髓（骨髓樣組織）中分化成熟，稱骨髓依賴淋巴細胞。成熟的B細胞隨血流分布于外周淋巴組織，主要功能為產(chǎn)生抗體，執(zhí)行體液免疫。外周血中占淋巴細胞總數(shù)的10~15%。免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念（二）免疫細胞免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念113.NK細胞它為發(fā)現(xiàn)較晚的一群淋巴細胞，最主要功能為非特異性殺傷靶細胞，對多種腫瘤細胞和病毒感染的細胞具較強殺傷作用。約占5~10%。4.單核吞噬細胞它包括血液中的單核細胞（Monocyte,MC）和組織中的巨噬細胞。它不僅在非特異性免疫中發(fā)揮重要作用，在特異性免疫中也是不可缺少的細胞，有吞噬殺傷、抗原遞呈和合成分泌細胞因子等作用。5.其他免疫細胞除上述免疫細胞外，血液中許多細胞均直接或間接參與免疫應(yīng)答過程，如中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、肥大細胞和血小板等。免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念3.NK細胞免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念12（三）免疫因子免疫因子：

由機體細胞產(chǎn)生，與免疫應(yīng)答有關(guān)的、分泌到體液中或存在于細胞膜表面的分子統(tǒng)稱為免疫因子。

組成：它主要包括抗體、補體系統(tǒng)各成分、細胞因子及免疫細胞膜分子等。細胞因子(Cytokines)：由免疫細胞和某些非免疫細胞（如纖維母細胞、內(nèi)皮細胞等）合成和分泌的，具有調(diào)節(jié)多種細胞生理功能的可溶性小分子蛋白質(zhì)。細胞因子種類繁多，具有多種生物學(xué)活性，在免疫系統(tǒng)的調(diào)控中作用重大。免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念（三）免疫因子免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念13三、免疫的主要類型1.天然免疫定義：

指機體先天具有的正常生理防御功能，對各種不同的病原微生物與異物都有排斥和屏障作用，也稱非特異性免疫。如：皮膚和粘液、粘液中的溶菌酶、吞噬細胞等2.獲得性免疫定義：指機體對某一種或一類微生物或其產(chǎn)物所產(chǎn)生的特異性抵抗力，它是后天的，是生物體在生長發(fā)育過程中由于自然感染或預(yù)防接種后產(chǎn)生的。也稱特異性免疫。

1)自動免疫：因感染病原或注射抗原（疫苗）而獲得的免疫

抗原：凡能刺激機體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細胞，并能與之結(jié)合引起特異性免疫反應(yīng)的物質(zhì)。

2)被動免疫：從母體獲得抗體或因人工注射抗體而獲得的免疫

免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念三、免疫的主要類型免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念143)自動免疫和被動免疫的區(qū)別：a.發(fā)生作用時間：

自動免疫：慢（1-4周）；被動免疫：快（立即）b.效果：

自動免疫：可刺激機體持續(xù)產(chǎn)生抗體，再次接收抗原刺激將表現(xiàn)出再次反應(yīng)或反應(yīng)增強

被動免疫：體內(nèi)抗體數(shù)量不會增多，再次接觸抗原也不出現(xiàn)增強反應(yīng)c.維持時間：

自動免疫：長（半年至終生）；被動免疫：短（2-3周）d.用途：

自動免疫：預(yù)防感染；

被動免疫：應(yīng)急治療

免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念3)自動免疫和被動免疫的區(qū)別：免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念15四、水產(chǎn)動物免疫的特點1.水產(chǎn)動物病原與人類疾病關(guān)系不大，不易引起重視；2.水產(chǎn)動物免疫機制依賴于外界環(huán)境變化較為明顯；3.水產(chǎn)動物抗體與人等高等生物的已知抗體不同，其疾病的免疫學(xué)防治方法尚在探索中；4.水產(chǎn)動物是變溫動物，其免疫學(xué)研究必須在同一條件下進行五、水產(chǎn)動物免疫在病害防治中的意義1.通過人工免疫或?qū)Σ『笥忻庖吡€體篩選，培育免疫新品種(SPR)；2.通過人工免疫，可有效預(yù)防流行病的發(fā)生；3.免疫防治可有效避免藥物殘留及化學(xué)藥物對水體的污染；4.免疫防治可避免長期使用抗生素等而產(chǎn)生的耐藥性；5.疫苗防治可維持較長的藥效時間。免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念四、水產(chǎn)動物免疫的特點免疫：水產(chǎn)動物免疫的基本概念16第二節(jié)水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的非特異性免疫魚蝦貝類的非特異性免疫因子外部屏障：皮膚和粘膜屏障作用內(nèi)部屏障：血腦屏障(血胎屏障)非特異性免疫細胞：吞噬細胞（粒細胞等）細胞和體液作用體液：補體、溶菌酶等Chapter2.免疫原理及應(yīng)用第二節(jié)水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的非特異性免疫Chapter2.17一、魚蝦貝類的非特異性免疫1.外部屏障

1)作用：a.機械阻擋和排除作用b.具非特異性抗菌物質(zhì)：溶菌酶、皮脂腺產(chǎn)乳酸等c.正常菌群的拮抗作用

2)種類

A.粘液:a.屏障保護作用(可限制病原菌運動，阻止其侵入)b.含有溶菌和殺菌的多糖類和蛋白類，如溶菌酶等

B.甲殼、皮膚和鱗片等：機械屏障作用2.體內(nèi)屏障

血腦屏障：由腦膜、脈絡(luò)叢和腦血管等組成。為大腦與軀干屏障

作用：防止病原和其他異物進入大腦

免疫：非特異性免疫一、魚蝦貝類的非特異性免疫免疫：非特異性免疫183.非特異性免疫細胞

1)吞噬細胞：包括粒細胞、巨噬細胞和單核細胞

作用：

受病原和宿主產(chǎn)生的趨化因子作用接近并吞噬

或殺傷病原

2)非特異性細胞毒細胞：主要存在于腎臟和腹腔，血中少。

作用：與哺乳動物NK細胞類似，能夠殺傷病毒感染的

靶細胞，從而具有抗感染作用

免疫：非特異性免疫3.非特異性免疫細胞免疫：非特異性免疫194.非特異性體液因子

1)補體：

A.來源與成分：存在于血清中，由多種非特異性血清蛋白

組成，它對熱敏感，45℃20min失活

B.作用：a.在抗原抗體反應(yīng)中通過補體第二激活通路補充

抗體作用；

b.激活后的補體能溶解細胞膜，殺滅病毒；

c.激活后的補體可促進吞噬細胞的吞噬和釋放組

胺等多種功能，協(xié)助殺滅病原.

免疫：非特異性免疫4.非特異性體液因子免疫：非特異性免疫202)干擾素：

A.定義：是一類在同種細胞上具有抗病毒活性的蛋白質(zhì).

(其活性的發(fā)揮受細胞基因組的調(diào)節(jié)和控制，涉及RNA和DNA的合成)

B.來源與成分：主要為由巨噬細胞和淋巴細胞分泌的蛋白質(zhì)；

機體產(chǎn)生干擾素的數(shù)量產(chǎn)生受溫度影響明顯。如：

硬頭鱒感染病毒后，10℃下，4d產(chǎn)生；15℃下，2d產(chǎn)生

C.作用：

干擾素為重要的抗病毒感染因子

a.抗病毒增殖活性；b.免疫調(diào)節(jié)活性；c.細胞分裂抑制活性；d.抑制腫瘤生長活性；e.改變細胞生物學(xué)特性等。

免疫：非特異性免疫2)干擾素：免疫：非特異性免疫213)溶菌酶

A.來源與成分：存在于粘液、血清和巨噬細胞中，是一種

水解酶（低分子堿性多肽）

B.作用：

可直接溶解殺死G+菌等病原微生物4)C反應(yīng)性蛋白

A.來源與成分：為存在于鰈科魚類中的一種蛋白質(zhì)

B.作用：

a.作為調(diào)理素可增加吞噬細胞的吞噬量

b.能使真菌、細菌乃至寄生蟲中的糖類和磷酸酯

產(chǎn)生沉淀，從而殺滅病原體。5)備解素：為-球蛋白，可在補體協(xié)助下殺死許多細菌、原

蟲甚至某些病毒等免疫：非特異性免疫3)溶菌酶免疫：非特異性免疫22二、影響非特異性免疫的因素1.環(huán)境因素

1)DO：

缺氧可引起水生動物抗病力下降

據(jù)此，有時可采用沖水、換水和充氣等方法緩解病情

2)水質(zhì)：水體有毒物質(zhì)可妨礙機體正常機能，免疫力下降

3)水溫：適宜的溫度變化可抑制疾病的暴發(fā)2.營養(yǎng)因素

1)營養(yǎng)不足，體質(zhì)下降，機體抗菌力降低2)營養(yǎng)不足，機體細胞代謝下降，病毒感染率降低3.個體差異和年齡影響免疫：非特異性免疫二、影響非特異性免疫的因素免疫：非特異性免疫23第三節(jié)特異性免疫一、抗原（Antigen,Ag）1.抗原的概念

1)抗原：是一種能夠刺激機體免疫系統(tǒng)使之發(fā)生特異性免疫應(yīng)答，并能與相應(yīng)免疫應(yīng)答產(chǎn)物或效應(yīng)體細胞在體外或體內(nèi)發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)。2)抗原的兩種性能：

a.免疫原性：指抗原分子能刺激機免疫細胞，并使之活化、增殖、分化，最終產(chǎn)生效應(yīng)分子（抗體）或細胞體（致敏T細胞）的性能。

b.免疫反應(yīng)性：指抗原分子能與相應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)物在體外或體內(nèi)發(fā)生特異性結(jié)合產(chǎn)生免疫反應(yīng)的性能。

免疫原性和免疫反應(yīng)性統(tǒng)稱為抗原性。Chapter2.免疫原理及應(yīng)用第三節(jié)特異性免疫Chapter2.免疫原理及應(yīng)用243)抗原的主要種類：

a.完全抗原（completeantigen）：

既有免疫原性又有免疫反應(yīng)性的抗原稱為完全抗原。

大多異種蛋白質(zhì)、細菌、病毒、細菌外毒素和動物免疫血清等都為完全抗原

b.不完全抗原(incompleteantigen)：

那些本身沒有免疫原性而只有免疫反應(yīng)性的物質(zhì),又稱半抗原（hapten）半抗原大多為小分子物質(zhì)，如大多數(shù)多糖、脂類、某些藥物和簡單化合物等、

半抗原單獨作用無免疫原性，當與大分子蛋白質(zhì)載體結(jié)合形成半抗原—載體復(fù)合物使，便可獲得免疫原性。該復(fù)合物不但可刺激機體產(chǎn)生針對半抗原的抗體，也可刺激機體產(chǎn)生針對蛋白質(zhì)載體的抗體。

4)特殊抗原：

a.變應(yīng)原(allergen)：能刺激機體產(chǎn)生病理性免疫應(yīng)答(超敏反應(yīng))的抗原。b.耐受原(tolerangen)：能誘導(dǎo)機體對其表現(xiàn)無免疫應(yīng)答(免疫耐受)的抗原。免疫類型：特異性免疫3)抗原的主要種類：免疫類型：特異性免疫252.抗原的特性

1)特異性：具有與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性反應(yīng)的能力；

2)異物性：正常情況下，能引起機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的抗原都是異種或異體物質(zhì)，機體本身的物質(zhì)或細胞不能刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答；并且，親緣關(guān)系越遠、組織結(jié)構(gòu)間差異越大，抗原性越強。

3)大分子膠體性：抗原的分子量較大(1萬Da以上)，分子量小于4000Da的物質(zhì)一般不具抗原性。同一類物質(zhì)，其抗原性隨分子量增大而增強

4)結(jié)構(gòu)復(fù)雜性：抗原要有一定的化學(xué)組成和復(fù)雜的結(jié)構(gòu)

抗原性：芳香類Pr.>非芳香類Pr>多糖>核酸>類脂

5)完整性：抗原必須保持完整的化學(xué)活性基團才能具有抗原性，否則，將不能刺激機體產(chǎn)生抗體免疫：特異性免疫2.抗原的特性免疫：特異性免疫263.決定抗原免疫原性的因素

某物質(zhì)是否具有免疫原性，能否作為免疫原誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，與其本身的性質(zhì)、機體對該物質(zhì)的反應(yīng)性及免疫的方式等直接相關(guān)。

1)分子大?。悍簿哂忻庖咴缘奈镔|(zhì)均為大分子的有機物質(zhì)（無機物不能作為免疫原，分子量低于4000的物質(zhì)通常也無免疫原性）；

為什么大分子物質(zhì)免疫原性較強呢？

a.分子量越大，其表面攜帶的抗原決定簇越多，因而對淋巴細胞刺激也越強；

b.大分子膠體物質(zhì)，化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，在體內(nèi)不易被破壞和清除，存留時間較長，使淋巴細胞得到較持久的刺激，有利于免疫應(yīng)答的發(fā)生。

2)化學(xué)結(jié)構(gòu)與組成：大分子物質(zhì)并不都有良好免疫原性，還與組成與結(jié)構(gòu)有關(guān)如：明膠分子量雖達10萬，但其組分為直鏈a.a.，易被分解破壞，免疫原性弱;

若明膠分子上連接少量酪氨酸或谷氨酸等芳香族a.a.，免疫原性顯著增強;以芳香族a.a.為主的Pr.，其免疫原性要明顯高于非芳香族a.a.為主的Pr.免疫：特異性免疫3.決定抗原免疫原性的因素免疫：特異性免疫273)異物性：

免疫系統(tǒng)能識別自己和異己物質(zhì)，對自身物質(zhì)免疫耐受；對異己物質(zhì)免疫應(yīng)答

。免疫原性與抗原和宿主種系關(guān)系遠近有關(guān)，種系關(guān)系越遠，免疫原性越強。

具有異物性的物質(zhì)包括以下三類：

a.異種物質(zhì)：如細菌、病毒、異種血清、植物蛋白等；

b.同種異體物質(zhì)：如人類紅細胞表面血型抗原（A、B、O、Rh）等；c.改變和隱蔽的自身物質(zhì)：主要包括在外傷、感染、輻射或藥物作用下，組織結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的“自身”物質(zhì)和釋放入血的自身抗原，如甲狀腺蛋白，等。4)免疫途徑：相同抗原因免疫途徑不同，產(chǎn)生的免疫效果也不同多數(shù)抗原須經(jīng)非消化道(皮下、肌肉、體表或血液等)途徑才能產(chǎn)生良好免疫效果；有些抗原(如須刺激腸粘膜相關(guān)淋巴組織的抗原)，只有口服免疫才有良好效果。5)機體應(yīng)答性：抗原物質(zhì)能否產(chǎn)生免疫原性還與機體的免疫應(yīng)答能力有關(guān)。如：純化多糖對人和小鼠有良好免疫原性，而對豚鼠則不能引起免疫應(yīng)答。

此外，抗原的免疫原性還與抗原劑量、佐劑、機體年齡與生理狀態(tài)等因素有關(guān)。免疫：特異性免疫3)異物性：免疫：特異性免疫284.抗原的特異性與交叉反應(yīng)

抗原的特異性既表現(xiàn)在免疫原性上，也表現(xiàn)在免疫反應(yīng)性上。

表現(xiàn)在免疫原性：指某一抗原分子只能誘導(dǎo)相應(yīng)淋巴細胞發(fā)生專一應(yīng)答；

表現(xiàn)在免疫反應(yīng)性：指某一抗原分子只能與相應(yīng)抗體或淋巴細胞發(fā)生專一結(jié)合。

抗原的特異性是由抗原分子表面的抗原決定簇決定的。1)抗原決定簇（antigenicdeterminant）：指位于抗原分子表面、決定抗原特異性的特定化學(xué)基團，它是決定抗原反應(yīng)性呈現(xiàn)高度特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)。又稱表位（epitope）

具體說，抗原決定簇就是與相應(yīng)淋巴細胞上的抗原受體結(jié)合的部位，并且，只有兩者結(jié)合才能激活淋巴細胞并引起免疫反應(yīng)

免疫：特異性免疫4.抗原的特異性與交叉反應(yīng)免疫：特異性免疫292)抗原決定簇的種類與組成

a.種類：一個抗原表面可以有一種或多種不同的抗原決定簇；

功能性(抗原)決定簇：指位于抗原分子表面易被相應(yīng)淋巴細胞識別、啟動免疫應(yīng)答，同時能與相應(yīng)抗體或致敏T細胞特異性結(jié)合發(fā)生免疫反應(yīng)的決定簇。

隱蔽性(抗原)決定簇：位于抗原分子內(nèi)部，不能被淋巴細胞識別，無法觸發(fā)免疫應(yīng)答的抗原決定簇。它若經(jīng)理化因素處理或經(jīng)抗原提呈細胞加工后，也可將隱藏與抗原分子內(nèi)部的決定簇暴露，稱為功能性決定簇而發(fā)揮免疫作用。b.抗原結(jié)合價：一個抗原分子上能與相應(yīng)抗體分子結(jié)合的抗原決定簇的總數(shù)

單價抗原：有些半抗原只能和抗體分子中一個抗原結(jié)合部位結(jié)合，為單價抗原

多價抗原：多數(shù)抗原有多個相同和不同抗原決定簇，能和多個抗體分子結(jié)合。c.組成：不同類型的抗原決定簇組成不同，一般有5-7個單體組成

如：Pr類抗原：其抗原決定簇有5個左右氨基酸多糖類抗原：其抗原決定簇有6個左右單糖核酸類抗原：其抗原決定簇有6-8個左右核苷酸殘基

免疫：特異性免疫2)抗原決定簇的種類與組成免疫：特異性免疫303)抗原決定簇對抗原特異性的影響

抗原決定簇的化學(xué)組成、排列及空間結(jié)構(gòu)決定著抗原的特異性。天然抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，同種抗原有多種不同抗原決定簇，不同抗原也具有不同的抗原決定簇，因而各具特異性。4)共同抗原與交叉反應(yīng)共同抗原：指具有相同的抗原決定簇的抗原。其中：

類屬抗原：存在于同一種屬或近緣種屬中的共同抗原稱類屬抗原；

異嗜性抗原：存在于不同種屬生物間的共同抗原稱異嗜性抗原。交叉反應(yīng)：由共同抗原決定簇刺激機體產(chǎn)生的抗體可和兩種抗原結(jié)合發(fā)生反應(yīng)。

交叉反應(yīng)有時也在兩種抗原決定簇構(gòu)型相似時發(fā)生。免疫：特異性免疫3)抗原決定簇對抗原特異性的影響免疫：特異性免疫31免疫：特異性免疫免疫：特異性免疫325.抗原的分類

根據(jù)分類方法不同，可以將抗原分為不同的類型。A.根據(jù)抗原的來源及與機體的親緣關(guān)系分類(1)異種抗原：指來自另一物種的抗原物質(zhì)。如各種微生物及其代謝產(chǎn)物、(2)同種異體抗原：指來自同種而基因型不同的個體的抗原物質(zhì)，如人血型抗原；(3)自身抗原：指能引起自身免疫應(yīng)答的自身組織成分，如改變和隱蔽的自身物質(zhì)。B.根據(jù)抗原激活B細胞是否依賴T細胞輔助來分類(1)胸腺依賴性抗原（thymusdependantantigen,TD-Ag）：

TD抗原：含T細胞抗原決定簇、需T細胞協(xié)助才能激活B細胞產(chǎn)生Ab的抗原。

如：病毒、細菌、細胞及各種蛋白質(zhì)等抗原都屬TD抗原(2)胸腺非依賴性抗原（thymusindependantantigen,TI-Ag）：TI抗原：只含B細胞抗原決定簇、不需T細胞協(xié)助可直接激活B細胞產(chǎn)生Ab的抗原

如：革蘭氏陰性菌的LPS、莢膜多糖等。

C.抗原的其它分類方法：如依性能分完全抗原和半抗原，依組分分蛋白質(zhì)抗原、脂蛋白抗原、糖蛋白抗原、多糖抗原和核蛋白抗原等，依獲得方式分天然、人工和合成抗原等。免疫：特異性免疫5.抗原的分類免疫：特異性免疫336.細菌抗原

細菌是重要的病原體，其成分十分復(fù)雜，每種結(jié)構(gòu)及其代謝產(chǎn)物均有不同的抗原成分，每種細菌都是一個由多種抗原組成的復(fù)合體。

細菌抗原的種類：

a.表面抗原：包括莢膜抗原和微莢膜抗原；

b.菌體抗原：指位于細菌細胞壁、細胞膜和細胞質(zhì)上的抗原；

c.鞭毛抗原：存在于鞭毛上的抗原；

d.菌毛抗原：存在于菌毛上的抗原；

e.外毒素和類毒素：毒素是Pr，具很強免疫原性，可刺激機體產(chǎn)生抗毒素

外毒素：為細菌產(chǎn)生的一類蛋白質(zhì)，具強抗原性

類毒素：為外毒素經(jīng)0.3-0.4%甲醛脫毒而成，具強抗原性外毒素和類毒素均能刺激機體產(chǎn)生抗毒素

免疫：特異性免疫6.細菌抗原免疫：特異性免疫347.佐劑（adjuvant）

1)定義：指與抗原同時或預(yù)先注入機體后，能夠非特異性地增強機體對抗原的免疫應(yīng)答能力的物質(zhì)。

2)種類：

a.無機佐劑：主要為含鋁化合物，如：銨明礬、氫氧化鋁、磷酸鋁等

b.有機佐劑：主要為微生物及其代謝產(chǎn)物，如分枝桿菌(結(jié)核桿菌)、LPS等

c.合成佐劑：一些合成物質(zhì)，如PolyI:C、PolyA:U等

d.油劑：如礦物油（石蠟油）、植物油、花生油乳化佐劑、弗氏佐劑等

3)弗氏佐劑：由礦物油(石蠟油)、乳化劑(羊毛脂或吐溫80)和殺死的分支桿菌(如結(jié)核桿菌)等組成的佐劑。a.完全氟氏佐劑：以上三種成分俱全的佐劑b.不完全氟氏佐劑：不含分支桿菌的氟氏佐劑，其對機體刺激作用較弱免疫：特異性免疫7.佐劑（adjuvant）免疫：特異性免疫354)作用：

a.增加抗原的免疫原性（增加抗原的表面積）；b.增強抗體對抗原的免疫應(yīng)答能力；c.改變抗體產(chǎn)生的類型；d.引起或增強IV型超敏反應(yīng)。5)作用機制：（作用機制尚未完全了解，主要可能有以下原因）主要是促進淋巴細胞的增殖、分化，改變抗原的物理形狀，使抗原在體內(nèi)維持較長時間，易于巨噬細胞的攝取、處理并提呈給淋巴細胞，從而提高抗原的免疫原性，增強機體對抗原的應(yīng)答能力。6)使用方法：預(yù)先使用或與抗原同時使用免疫：特異性免疫4)作用：免疫：特異性免疫36二、免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)1.免疫球蛋白與抗體的基本概念(1)免疫球蛋白：指具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白。

Ig過去稱為球蛋白，主要存在于血液和其他分泌液中。(2)膜表面免疫球蛋白(Surfacemembraneimmunoglobulin,SmIg)：B細胞膜上可作為抗原識別受體的免疫球蛋白。(3)抗體(Antibody,Ab)：機體免疫細胞被抗原激活后，由分化成熟的終末B細（漿細胞）所合成與分泌的一類能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。

抗體是重要的免疫分子，主要存在于血液、體液和粘膜分泌液中。

細胞免疫：由免疫細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。

體液免疫：由抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。

抗體=免疫球蛋白？Why?免疫：特異性免疫二、免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)免疫：37抗體都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不都是抗體。

如：骨髓瘤蛋白的化學(xué)結(jié)構(gòu)與Ab相似(屬Ig)，但無抗體活性，無免疫功能；

SmIg的化學(xué)結(jié)構(gòu)與Ab相似，能與Ag特異性結(jié)合，但它不是激活的B細胞產(chǎn)生。

免疫球蛋白是化學(xué)結(jié)構(gòu)上的概念，但抗體是生物學(xué)功能上的概念。2.作為抗體必須具備的條件：

1)只有脊椎動物的漿細胞才能產(chǎn)生；2)必須有抗原刺激；3)能與相應(yīng)抗原產(chǎn)生特異性結(jié)合；4)其化學(xué)本質(zhì)是一種具免疫功能的球蛋白。免疫：特異性免疫抗體都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不都是抗體。免383.Ig的化學(xué)結(jié)構(gòu)

H鏈V區(qū)

Ig分子是由一個或多個單體組成；L鏈V區(qū)

如：IgG、IgD和IgE均為單體分子

L鏈C區(qū)每個Ig單體呈Y形對稱結(jié)構(gòu)。H鏈C區(qū)每個單體是由二硫鍵連接的四條肽鏈組成；四條肽鏈包括2條重鏈(H鏈)和2條輕鏈(L鏈)；Ig單體的結(jié)構(gòu)

重鏈：約由450個或570個氨基酸組成，它包括5類：、、、、。Ig因重鏈的種類不同分為5類：IgG(鏈)，IgA(鏈)，IgM(鏈)，IgD(鏈)，IgE(鏈)

輕鏈：約由214個氨基酸組成，以二硫鍵與重鏈相連。它有2類：型和型每條肽鏈包括可變區(qū)(V區(qū))和穩(wěn)定區(qū)(C區(qū))。重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)都是抗原特異性結(jié)合部位。在結(jié)構(gòu)上與抗原結(jié)構(gòu)互補(因而又稱互補決定區(qū))免疫：特異性免疫3.Ig的化學(xué)結(jié)構(gòu)39第三章免疫學(xué)原理與應(yīng)用課件404.不同動物中Ig的類型

根據(jù)CH上同種型決定簇的不同，將Ig分為5種：IgA、IgG、IgM、IgD和IgE.其中，IgG、IgA和IgM又依CH氨基酸組成和H鏈間二硫鍵數(shù)目的差異，分成若干亞類：

IgG1、IgG2、IgG3、IgG4；IgA1、IgA2；IgM1和IgM2。1)哺乳類：a.人、鼠：IgG,IgA,IgM,IgD,IgE;b.兔：IgG,IgA,IgM;c.其他：IgG,IgA,IgM,IgE;

2)鳥類：IgG,IgA,IgM;

3)兩棲類：IgG,IgM;

4)魚類：IgM;5)無脊椎動物：無Ig免疫：特異性免疫4.不同動物中Ig的類型免疫：特異性免疫415.各種Ig的特性與功能1)IgG：

a.來源與性質(zhì)：主要由脾和淋巴結(jié)的漿細胞合成，常以單體形式存在于血清和其他血清中。它在人體的含量最高(3/4)、半衰期最長(23d)、易透過毛細血管，因而可廣泛分布到組織和其他體液中。分子量15萬Da.

b.作用：(1)抗感染作用，抗毒素及大多抗菌和抗病毒抗體均屬IgG；IgG還是唯一能通過胎盤的Ig，是新生兒抗感染的重要因素。(2)不少自身抗體和引起II、III型變態(tài)反應(yīng)的抗體也屬IgG;(3)IgG與補體結(jié)合后可通過傳統(tǒng)途徑激活補體；(4)IgG能與巨噬細胞、中性粒細胞和NK細胞表面相應(yīng)受體結(jié)合，從而發(fā)揮調(diào)理吞噬和ADCC效應(yīng)。免疫：特異性免疫5.各種Ig的特性與功能免疫：特異性免疫422)IgM：

a.來源與性質(zhì)：

(1)主要由脾的漿細胞合成，它是由5個IgM單體借一個J鏈和若干個二硫鍵連接而成的五聚體，是5類Ig中分子量最大的(95萬Da)，故稱巨球蛋白。(2)它不能透過血管壁，主要分布于血液中，占血清Ig總量的10%左右；(3)為個體發(fā)育中合成最早的Ig，在胎兒晚期已能合成，但它不能通過胎盤；(4)是人體免疫后最早出現(xiàn)的抗體；(5)IgM是目前魚類中唯一確認的抗體類型。

b.作用：

其作用與IgG類似，具有殺菌、溶菌、調(diào)理吞噬及凝集作用等，不過，由于IgM抗原結(jié)合效價最高，是高效能的抗菌抗體，它的上述作用均比IgG強。免疫：特異性免疫2)IgM：免疫：特異性免疫43單體單體443)IgA：

(1)分為血清型IgA和分泌型IgA(SIgA)兩種類型。前者85%為單體，少數(shù)為含J鏈的二聚體，主要由腸系膜淋巴組織漿細胞產(chǎn)生；后者為二聚體(雙體)。(2)人體含量僅次于IgG(占10-15%)，分子量為18-20萬Da。(3)是少數(shù)在消化道中不被消化的Pr之一；(4)嬰兒出生4-6個月后才能合成，但可從母乳中獲得SIgA(5)SIgA主要分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道粘膜表面以及唾液、淚液、初乳和與粘膜相關(guān)的分泌液中，是局部粘膜防御感染的重要因素；(6)血清型IgA具有中和毒素、調(diào)理吞噬的作用。免疫：特異性免疫3)IgA：免疫：特異性免疫454)IgD：(1)以單體形式存在于血清中，含量低，僅占人體血清Ig總量的1%。(2)結(jié)構(gòu)與IgG類似，不能通過胎盤，也不能激活補體。(3)血清中的IgD功能尚不清楚，但B細胞表面的IgD(SIgD)是成熟B細胞的重要標志，它是B細胞的抗原識別受體，在接受抗原刺激后對B細胞活化、增生和分化其調(diào)節(jié)作用；

5)IgE：

(1)以單體形式存在于血清中，是系統(tǒng)進化最晚出現(xiàn)的Ig，也是含量最低的Ig，僅占血清Ig總量的0.001%.(2)在過敏性疾病和某些寄生蟲感染病人血清中其含量顯著增高；(3)產(chǎn)生部位與SIgA相似，主要由呼吸道（如鼻咽、扁桃體、支氣管)和胃腸道粘膜固有層的漿細胞產(chǎn)生。免疫：特異性免疫4)IgD：免疫：特異性免疫46第三章免疫學(xué)原理與應(yīng)用課件47第四節(jié)免疫學(xué)方法及其應(yīng)用一、基本概念1.血清學(xué)反應(yīng)：抗原與相應(yīng)抗體在體外發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng);2.免疫學(xué)反應(yīng)：抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng);3.抗原抗體反應(yīng)：抗原與相應(yīng)抗體在體外或體內(nèi)發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)；4.免疫診斷學(xué)：用體液免疫和細胞免疫的方法來診斷有關(guān)疾病的科學(xué)。

二、血清學(xué)反應(yīng)的特點

1.特異性與交叉性：a.特異性：一種抗原一般只能與其相應(yīng)的抗體結(jié)合；

b.交叉性：當不同抗原具有相同抗原決定簇時，其結(jié)合又具有交叉性2.表面性與可逆性：a.表面性：抗原與抗體分子結(jié)合是分子表面的結(jié)合；

b.可逆性：抗原抗體結(jié)合后，在一定條件下仍可分開，且其性質(zhì)不變。可逆性是免疫吸附層析法提取免疫純抗原或抗體的理論基礎(chǔ)。Chapter2.免疫原理及應(yīng)用第四節(jié)免疫學(xué)方法及其應(yīng)用Chapter2.免疫原483.定比性：抗原與抗體需按一定的比例結(jié)合

一般情況下，抗原表面的抗原決定簇是多價的，而抗體上的抗原受體通常是單價的或二價的，二者只有以一定比例結(jié)合才能出現(xiàn)可見的血清學(xué)反應(yīng)。4.階段性:

抗原抗體反應(yīng)具有明顯的階段性1)抗原抗體的特異性結(jié)合階段：時間短（數(shù)秒），不可見2)抗原與抗體反應(yīng)的可見階段：慢（數(shù)分至數(shù)天），有凝集、沉淀等5.高度敏感性：可用于檢測極微量的抗原與抗體。如：

血清中和試驗可用于檢測含量低至10-3

g/ml的魚類病毒；ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)可檢測含量為10-3

g/ml的細菌性病原6.條件依賴性：抗原抗體間出現(xiàn)可見反應(yīng)要提供最適的條件，如：

pH值(一般為6-8)；溫度(37-45℃)；適當?shù)碾娊赓|(zhì)(如生理鹽水)；震蕩(增加抗原抗體相互接觸的機會)等。免疫：免疫學(xué)方法及其應(yīng)用3.定比性：抗原與抗體需按一定的比例結(jié)合免疫：免疫學(xué)方法及49三、主要的抗原抗體反應(yīng)（一）凝集反應(yīng)（Agglutination）1.定義：顆粒性抗原(如完整的紅細胞或細菌)與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下，經(jīng)過一定時間形成肉眼可見的凝集物，稱為凝集反應(yīng)。用于凝集反應(yīng)的抗原稱為凝集原；用于凝集反應(yīng)的抗體稱凝集素2.種類:

(1)直接凝集反應(yīng)(directagglutination)：顆粒性抗原直接與相應(yīng)抗體結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。玻片法：屬定性試驗，常用于細菌和ABO血型鑒定試管法：屬定量試驗，用已知Ag測定血清中相應(yīng)Ab及其數(shù)量。在該試驗中，將出現(xiàn)明顯凝集反應(yīng)的血清最高稀釋度稱為該抗體的效價或滴度。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法三、主要的抗原抗體反應(yīng)免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法50

(2)間接凝集反應(yīng)(indirectorpassiveagglutination)：將可溶性抗原先吸附于一種與免疫無關(guān)的載體顆粒表面，再與相應(yīng)抗體作用，在合適電解質(zhì)存在時，出現(xiàn)載體顆粒被動凝集現(xiàn)象。常用載體有人O型紅細胞、乳膠顆粒、活性炭等，并因載體不同而分別稱為間接血凝試驗、間接乳凝試驗和間接炭凝試驗。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法(2)間接凝集反應(yīng)(indirectorpassiv51（二）沉淀反應(yīng)(precipitation)1.定義：可溶性抗原(如血清蛋白、多糖和細菌抽提液等)與其相應(yīng)抗體在合適條件下出現(xiàn)肉眼可見沉淀物的現(xiàn)象。

用于沉淀反應(yīng)的抗原稱為沉淀原；用于沉淀反應(yīng)的抗體稱沉淀素

沉淀反應(yīng)包括環(huán)狀沉淀反應(yīng)、絮狀沉淀反應(yīng)以及由此派生出來的瓊脂擴散免疫試驗等。其中，前兩者敏感性不高，已少用，派生方法現(xiàn)仍廣泛應(yīng)用。2.沉淀反應(yīng)的種類與應(yīng)用：

1)經(jīng)典方法：

a.環(huán)狀沉淀反應(yīng)：在小試管中加入抗血清+緩慢加入待測抗原(數(shù)分鐘)結(jié)果：陽性—白色沉淀環(huán)；陰性—無

b.絮狀沉淀反應(yīng)：將已知抗體與待測抗原混勻于試管或凹玻片結(jié)果：

陽性—絮狀沉淀；陰性—無免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法（二）沉淀反應(yīng)(precipitation)免疫應(yīng)用：免疫學(xué)522)現(xiàn)代方法：

a.單免疫擴散(singleimmunodiffusion)：將適當濃度的已知抗體預(yù)先混在1~1.5%瓊脂內(nèi)制成凝膠板，再以適當距離在板上打孔，孔中加入待測抗原，當抗原向周圍擴散時，與板上的抗體相遇，并在最合適的比例處形成白色沉淀環(huán)。因沉淀環(huán)直徑與抗原濃度成正比，因此，若先用已知濃度的抗原制作標準曲線，便可依沉淀環(huán)直徑測定待測抗原濃度。結(jié)果：陽性—白色沉淀環(huán)；陰性—無

b.雙向免疫擴散(doubleimmunodiffusion)：預(yù)先制備瓊脂板，根據(jù)需要在瓊脂板上打孔，再將抗原、抗體分別加入不同孔內(nèi)，使兩者相互擴散，若抗原抗體相對應(yīng)，則二者在合適比例處形成白色沉淀線。若反應(yīng)中有兩種或兩種以上抗原抗體系統(tǒng)，在瓊脂中即可出現(xiàn)兩條或兩條以上的沉淀線。該方法可用來分析和鑒定復(fù)雜的抗原成分，或測定抗原、抗體提取物的純度。缺點是所需時間較長和靈敏度不高。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法2)現(xiàn)代方法：免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法53c.對流免疫電泳(Counterimmunoelectrophoresis,CIE)：為在雙向瓊脂擴散的基礎(chǔ)上進行電泳的方法。將瓊脂板置于電泳槽內(nèi)，在負極端孔內(nèi)加抗原，正極端孔內(nèi)加抗體，然后通電?？乖趐H8.6的緩沖液中帶負電荷，故向正極移動；抗體為大分子球蛋白，移動慢，并受瓊脂電滲影響由正極向負極移動，在兩者相遇的合適比例處出現(xiàn)白色沉淀線。因該法使抗原抗體相向而行，提高了敏感性，缺點是多組抗原抗體存在時沉淀線易重疊在一起，缺乏分辨力。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法c.對流免疫電泳(Counterimmunoelectr54（三）補體結(jié)合試驗1.定義：有補體參與，以綿羊紅細胞和溶血素作指示系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng)2.組成：有2個系統(tǒng)共5種成分

1)檢測系統(tǒng)：包括已知抗原(或抗體)和待測抗體(或抗原)

2)指示系統(tǒng)：包括綿羊紅細胞和溶血素(綿羊紅細胞的特異性抗體)3)補體：取自豚鼠的新鮮血清3.補體結(jié)合反應(yīng)的基本原理

1)補體可與任何抗原抗體復(fù)合物相結(jié)合；2)指示系統(tǒng)遇補體后就出現(xiàn)明顯的溶血反應(yīng)免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法（三）補體結(jié)合試驗免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法554.操作過程和結(jié)果1)

陽性反應(yīng)：+補體抗原(體)+待測抗體(原)抗原抗體復(fù)合物抗原抗體和補體復(fù)合物+指示系統(tǒng)(綿羊紅細胞和溶血素復(fù)合物)結(jié)果：（因此時無游離的補體與指示系統(tǒng)結(jié)合）不發(fā)生溶血2)陰性反應(yīng)：+補體抗原(體)+待測抗體(原)抗原+抗體抗原+抗體+補體(游離)+指示系統(tǒng)(綿羊紅細胞和溶血素復(fù)合物)

發(fā)生溶血綿羊紅細胞、溶血素及補體復(fù)合物免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法4.操作過程和結(jié)果免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法56（四）中和反應(yīng)定義：特異性抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，能抑制抗原的多種生物學(xué)活性（如：毒性、酶活性和病毒感染性等）的反應(yīng)。免疫：免疫學(xué)方法及其應(yīng)用（四）中和反應(yīng)免疫：免疫學(xué)方法及其應(yīng)用57四、現(xiàn)代免疫標記技術(shù)（immunolabellingtechnique）

定義：將抗原或抗體用熒光素、酶、放射性同位素或電子致密物質(zhì)等加以標記，以提高抗原抗體反應(yīng)以及抗原或抗體檢測靈敏度的一類新技術(shù)。免疫標記技術(shù)敏感性高、特異性強、應(yīng)用范圍廣(抗原或抗體定量、定性、定位)（一）免疫熒光技術(shù)（immunofluorecencetechnique）1.定義：用熒光物標記抗體來檢測細胞或組織中相應(yīng)抗原或抗體的技術(shù)，又稱熒光抗體技術(shù)。2.熒光物種類：異硫氰酸熒光素、羅丹明熒光素、二氯三嗪基氨基熒光素等3.種類：包括直接法、間接法和補體法免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法四、現(xiàn)代免疫標記技術(shù)（immunolabellingtec58例：直接法：將待測標本固定于玻片表面，滴加已知熒光抗體后再以緩沖液沖洗，干燥后于熒光顯微鏡下觀察。

(1)過程：

+待測抗原

熒光素+抗體熒光抗體(一段時間后沖洗)熒光鏡檢測結(jié)果：

(2)結(jié)果：陽性—可見帶熒光的抗原抗體復(fù)合物；

陰性—無熒光(因為帶熒光的抗體不能與抗原結(jié)合，被沖洗掉)

(3)用途：用以檢測病毒感染細胞、細菌和沉積于組織中的免疫復(fù)合物等。

(4)特點：簡單、特異性高；敏感性低、同時檢測多種抗原時較復(fù)雜。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法例：直接法：將待測標本固定于玻片表面，滴加已知熒光抗體后再以59(二)免疫酶技術(shù)(immunoenzymatictechnique)or酶免疫測定1.定義：用酶標記抗體或抗原來檢測抗原或抗體的方法.應(yīng)用范圍極廣。2.顯示方法：用酶的特殊底物來處理反應(yīng)后的標本，通過酶催化底物的顯色反應(yīng)來測定抗原或抗體的存在。以酶標依作定量或定性分析。3.標記酶：辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶；它們與抗原或抗體結(jié)合后活性不受影響。4.底物：鄰苯二胺和對硝基苯磷酸酯。5.特點：敏感性高、特異性強，既可定性又可定量。6.常用方法：目前應(yīng)用最多的為酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmusorbentassay,ELISA)：是利用抗原或抗體能非特異性吸附于聚苯乙烯等固相載體表面的特性，使抗原-抗體反應(yīng)在固相載體表面進行的一種免疫酶技術(shù)。它目前包括直接法、間接法、雙抗體夾心法、雙夾心法、抗原競爭法、抑制性測定法和橋聯(lián)法等多種。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法(二)免疫酶技術(shù)(immunoenzymatictechn60例1.

直接法：用于檢測抗原或抗體（特別是總抗體濃度）a.用于檢測抗原時：以不同稀釋毒的待測樣品(Ag)包被酶標板反應(yīng)板，孵育后洗滌封閉酶標板，孵育后洗滌加入酶標抗體，孵育后洗滌加入底物，測定酶促反應(yīng)強度。b.用于檢測抗體（待測樣品中的總抗體）時：以不同稀釋毒的待測樣品(Ab)包被酶標板反應(yīng)板，孵育后洗滌封閉酶標板，孵育后洗滌加入酶標抗抗體，孵育后洗滌加入底物，測定酶促反應(yīng)強度。

免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法例1.直接法：用于檢測抗原或抗體（特別是總抗體濃度）免61例2.雙抗體夾心法：主要用于測定大分子抗原過程：以純化的特異性抗體或含抗體的血清包被酶標反應(yīng)板，孵育后洗滌封閉液封閉酶標板，孵育后洗滌加入待測樣品，孵育后洗滌加入酶標抗體，孵育后洗滌加入酶底物，測定酶促反應(yīng)強度。加待測抗原

加酶標抗體

已知抗體吸附抗原抗體復(fù)合物酶聯(lián)抗體抗原抗體復(fù)合物免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法例2.雙抗體夾心法：主要用于測定大分子抗原免疫應(yīng)用：免62（三）放射免疫測定技術(shù)(Radioimmunoassay,RIA)

1.

定義：用放射性同位素標記來檢測抗原抗體反應(yīng)的高靈敏度的技術(shù)。2.

原理與方法：其基本原理為：待測抗原和標記抗原對有限量抗體存在競爭性結(jié)合：Ag*+Ab?Ag*-Ab；Ag

+Ab?Ag-Ab

(1)抗原用同位素(如131I、3H等)標記后仍能與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合；(2)將兩類抗原與抗體混合后，兩類抗原均能與抗體結(jié)合，當Ag*和Ab數(shù)量恒定，且Ag*與Ag之和大于Ab上結(jié)合點數(shù)目時，Ag*與Ag存在競爭抑制：Ag數(shù)量增加，Ab-Ab生成量增加，Ag*-Ab數(shù)量就減少，游離的Ag*就增多。

(3)用層析等方法將Ag*-Ab和Ag-Ab復(fù)合物(B)與游離Ag*和Ag(F)分離，測定B和F的放射活性。計算B/F值，繪制B/F和Ag量的關(guān)系曲線圖。(4)預(yù)先用一系列已知濃度的未標記抗原和一定量的標記抗原及抗體混合，以相同方法繪制B/F和Ag量的關(guān)系的標準競爭抑制曲線圖。(5)試驗時，在同樣條件下，根據(jù)待測Ag的放射性結(jié)合率，依標準曲線查出Ag量。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法（三）放射免疫測定技術(shù)(Radioimmunoassay,63（四）熒光和化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)

A.熒光免疫技術(shù)1.

定義：用熒光素（如異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明和四甲基異硫氰酸羅丹明）標記來檢測抗原抗體反應(yīng)的免疫分析技術(shù)。2.

種類：包括熒光免疫組織化學(xué)(如熒光抗體)技術(shù)和熒光免疫測定。B.發(fā)光免疫分析定義：利用物質(zhì)的發(fā)光特征(如輻射光波長、發(fā)光的光子數(shù))與產(chǎn)生輻射的物質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)常數(shù)、構(gòu)型、數(shù)量等密切相關(guān)，通過受激分子發(fā)射的光譜，發(fā)光衰減常數(shù)、發(fā)光方向等來判斷該分子的屬性；通過發(fā)光強度來判斷物質(zhì)的量的免疫分析技術(shù)。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法（四）熒光和化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法64（五）免疫電鏡技術(shù)1.

定義：在保持抗體免疫性的前提下，用高電子密度的標記物（如鐵蛋白、金等），或用經(jīng)細胞化學(xué)方法處理使電子密度增高的標記物（如辣根過氧化物酶等酶類）標記抗體后，將標記抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合，然后用電子顯微鏡觀察的技術(shù)。又稱電子顯微鏡免疫細胞化學(xué)技術(shù)。

2.

種類：

(1)非包埋法免疫染色：該法是以超薄冷凍切片免疫染色。因該法不經(jīng)脫水和包埋等步驟，抗原保護較好，且有利于免疫試劑在組織中的滲透；但在技術(shù)上困難較多，需配制專用設(shè)備。

(2)包埋前免疫染色：組織固定厚切片免疫染色包埋超薄切片投射電鏡觀察。(3)包埋后免疫染色：組織固定包埋超薄切片免疫染色EM觀察。免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法（五）免疫電鏡技術(shù)免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法65免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法第五節(jié)免疫學(xué)原理在魚蝦病害防治中的應(yīng)用一、用于疾病的診斷

（免疫診斷方法有二類）1.用已知抗原診斷病原：用已知抗原與從患病動物中提取的抗體進行血清學(xué)反應(yīng)，以確定病原種類。該法只能用于病體已產(chǎn)生抗體的診斷。2.用已知抗體診斷病原：將已知抗體與從病體中分離的病原進行血清學(xué)反應(yīng)，以確定病原的種類，該法適于所有被診斷動物。診斷方法特點抗體檢測量應(yīng)用范圍血清中和試驗靈敏度高，費時≥10-3g/ml病毒病沉淀反應(yīng)方便可靠，靈敏度低≥20細菌病補體結(jié)合試驗靈敏度高，存在干擾≥10-1細菌病凝集反應(yīng)快速準確，應(yīng)用局限≥310-2部分細菌病免疫熒光快速方便，需特殊儀器≥20細菌病放射免疫測定快速靈敏，需特殊儀器≥10-3病毒病ELISA快速靈敏，應(yīng)用前景好≥10-3細菌病免疫應(yīng)用：免疫學(xué)方法第五節(jié)免疫學(xué)原理在魚蝦病害防治中的66二、用于疾病的治療利用被動免疫，即給患病動物接種抗體進行應(yīng)急治療。過程：先將抗原（疫苗）注入同種或其他種動物機體，1-4周后從接種動物的血液等部位提取抗體（或制備卵黃抗體），并將提取的抗體接種到患病動物中進行疾病治療。三、用于疾病的預(yù)防水產(chǎn)動物免疫最重要的應(yīng)用方向為研制疫苗進行疾病的預(yù)防在水產(chǎn)養(yǎng)殖動物中，由于只有魚類、兩棲類和爬行類等脊椎動物才能在接種抗原后產(chǎn)生抗體，目前因此也認為只有這些動物才能用免疫學(xué)方法進行疾病的預(yù)防。免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用二、用于疾病的治療免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用67（一）魚用疫苗的種類

A.根據(jù)疫苗的獲得方法來分：

1.死疫苗(滅活疫苗)：熱滅活、化學(xué)滅活、紫外線滅活、超聲滅活等優(yōu)點：安全性好，制造簡單；缺點：免疫劑量大，免疫持久性差。

2.活疫苗：包括弱毒疫苗和異種疫苗優(yōu)點：弱毒疫苗—免疫原性好，免疫劑量少，持續(xù)時間長異種疫苗—安全性好，免疫時間長。缺點：弱毒疫苗—安全性差異種疫苗—獲得比較困難

3.化學(xué)疫苗：以化學(xué)方法提取病菌有效成分(如LPS)制成優(yōu)點：免疫劑量小，免疫原性強，作用穩(wěn)定；缺點：制造較復(fù)雜，成本稍高。免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用（一）魚用疫苗的種類免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用68

4.亞單位疫苗：病原微生物中能使機體產(chǎn)生免疫保護力的成分只占病原體小部分，將這些成分分離出來制成的疫苗為亞單位疫苗。優(yōu)點：可除去有害成分，減少異常反應(yīng)，提高免疫效果；缺點：制造過程復(fù)雜、成本高。5.基因工程疫苗：將病原的主要免疫原性蛋白的密碼基因DNA轉(zhuǎn)移、重組后獲得優(yōu)點：易于規(guī)模生產(chǎn)，成本低；缺點：研究周期長，免疫原成分單一，產(chǎn)生抗體量小。6.合成疫苗：將具有保護性免疫力的人工合成肽與適當載體結(jié)合后，再加入佐劑制成的疫苗稱為合成疫苗優(yōu)點：作用效果好，易于規(guī)模生產(chǎn)；缺點：研究難度大。免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用4.亞單位疫苗：病原微生物中能使機體產(chǎn)生免疫保護力的成分69B.根據(jù)疫苗的性質(zhì)和組成成分來分：

1.單價疫苗：由單一病菌培養(yǎng)制備的疫苗

2.多價疫苗：由同一種病菌的不同型或不同株培養(yǎng)制備的疫苗

3.聯(lián)苗(混合疫苗)：由一種以上的病菌或其代謝產(chǎn)物制備的疫苗如：二聯(lián)疫苗、三聯(lián)疫苗……C.根據(jù)抗原類別來分：

1.病毒疫苗：如草魚出血病疫苗

2.細菌疫苗：如石斑魚創(chuàng)傷弧菌疫苗

3.寄生蟲疫苗：如小瓜蟲疫苗免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用B.根據(jù)疫苗的性質(zhì)和組成成分來分：免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用70（二）魚用疫苗的接種方法

1.注射法：將疫苗直接注射到肌肉、腹腔或心臟的免疫接種方法。

優(yōu)點：免疫效果好；缺點：操作困難，易損傷接種魚類，幼魚無法使用。

2.口服法：將疫苗通過投喂的方法接種到魚類機體優(yōu)點：操作簡單；缺點：免疫效果不穩(wěn)定（因消化液對疫苗的消化分解）

3.浸泡法：將魚類浸泡于疫苗溶液中以達到免疫接種目的優(yōu)點：操作簡單；缺點：免疫效果不穩(wěn)定（因浸泡進入機體的疫苗數(shù)量有限）免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用（二）魚用疫苗的接種方法免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用71

4.噴霧法：將疫苗以高壓噴射到接種生物體表以進行免疫的方法。

優(yōu)點：操作簡單；缺點：免疫效果差。

5.其他方法：如超聲免疫法等，該法是在浸泡法基礎(chǔ)上外加超聲作用而實施的接種方法，目前尚在探索中。（三）幾種常見魚類疫苗的制備方法

1.病毒性疫苗（組織苗）的制備方法

勻漿,3000rpm,30min上清液+(800單位青霉素+800單位鏈霉素)/ml病魚組織+生理鹽水

沉淀

加1‰福爾馬林，32℃72h安全檢測冷凍保存組織苗效力檢測免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用4.噴霧法：將疫苗以高壓噴射到接種生物體表以進行免疫722.細菌滅活疫苗的制備方法

擴大培養(yǎng)5000rpm,30min,PBS配制

病原菌大量病菌1%菌懸液

活菌檢測

安全檢測

4-10‰福爾馬林

毒性檢測

4℃,24h

疫苗

抗體效價檢測

免疫效果檢測0.1‰疊氮鈉

攻毒試驗4℃保存

免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用2.細菌滅活疫苗的制備方法免疫：免疫學(xué)原理的應(yīng)用733.脂多糖(LPS)疫苗的制備(主要針對G-)

0.5-1%formalin,上清液

加PBS病菌擴大培養(yǎng)5000rpm,30min沉淀滅活菌懸液

4℃,透析3d

90%苯酚(1:1)

LPS水溶液

水層