實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)課件

第二章實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)第一節(jié)血液檢驗(yàn)一、血樣的采集第二章實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)第一節(jié)血液檢驗(yàn)一、血樣的采集一、血樣的采集

(一)末梢采血

(二)靜脈采血

(三)心臟采血

一、血樣的采集一、血樣的采集

根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目及采血量的多少，以及動(dòng)物的特點(diǎn)，可以選用末稍采血、靜脈采血和心臟采血。(一)末梢采血

適用于采血量少，血液不加抗凝劑而且直接在現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)的項(xiàng)目。如涂血片，血紅蛋白測(cè)定、血細(xì)胞計(jì)數(shù)等。馬、?？稍诙獠?，豬，羊，兔等在耳背邊緣小靜脈，雞則在冠或肉髯。

一、血樣的采集根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目及采血量的多少，以及動(dòng)物的特(二)靜脈采血

適用于采血量較多，或在現(xiàn)場(chǎng)不便檢查的項(xiàng)目。如血沉測(cè)定，紅細(xì)胞壓積容量測(cè)定及全面的血常規(guī)檢查等。除制備血清外，靜脈血均應(yīng)置于盛有抗凝劑的容器中，混勻后以備檢查。馬，牛、羊的采血一般多在頸靜脈.豬可在耳靜脈或斷尾采血，．如果小豬在耳靜脈采血困難，必要時(shí)可在前腔靜脈采血。使豬仰臥保定，把兩前肢向后方拉直，同時(shí)將頭向下壓，使頭頸伸展，充分暴露胸前窩.禽可在內(nèi)側(cè)的翅靜脈.狗，貓及肉食獸可在四肢的靜脈采血.血樣的采集(二)靜脈采血

適用于采血量較多，或在現(xiàn)場(chǎng)不便檢查的項(xiàng)目。(三)心臟采血

禽和實(shí)驗(yàn)小動(dòng)物需要血量較多時(shí)可用本法。如雞的心臟采血，

右側(cè)臥保定，左胸部向上，用l0ml注射器接上5cm長(zhǎng)的20號(hào)針頭，在胸骨脊前端與背部下凹處聯(lián)線的中點(diǎn)，垂直或稍向前內(nèi)方刺入2—3cm，可采得心血，成年雞每次可抽5一l0ml。兔的心臟采血，在固定板上仰臥保定，局部剪毛消毒，用左手后4個(gè)手指按緊兔的右側(cè)胸壁，拇指感觸兔左側(cè)胸壁心臟搏動(dòng)最強(qiáng)處，右手持注射器垂直刺入，邊刺邊回抽，如刺中右心室可得暗紅色的靜脈血，刺中左心室則抽出鮮紅色的動(dòng)脈血。成年兔每次可抽血10—20m1。血樣的采集(三)心臟采血

禽和實(shí)驗(yàn)小動(dòng)物需要血量較多時(shí)可用本法。如雞二、血樣的抗凝及處理(一)血樣的抗凝

1.雙草酸鹽合劑2．乙二胺四乙酸二鈉(簡(jiǎn)稱EDTA二鈉)3．檸檬酸鈉。4．肝素。(二)血樣的處理

二、血樣的抗凝及處理(一)血樣的抗凝

二、血樣的抗凝及處理(一)血樣的抗凝

除需分離血清外，自靜脈或心臟采出的血液均應(yīng)加入抗凝劑，以防血樣凝固。臨床常用的抗凝劑除肝素(具有抗凝血酶的作用)外，多數(shù)是以脫鈣作用而使血液不能凝固。常用的抗凝劑有下列幾種。1.雙草酸鹽合劑。草酸銨1.2g，草酸鉀0.8g，蒸餾水100ml。取此液0.5ml(分裝于小瓶中，在60℃以下的烘箱中烘干)，可使5ml血液不凝固。由于草酸鉀使紅細(xì)胞皺縮，草酸銨則使紅細(xì)胞膨脹，二者按比例混合，可使紅細(xì)胞大小不致改變，適用于血液檢驗(yàn)尤其是紅細(xì)胞壓積容量測(cè)定。但由于其具有一定毒性并可使血小板聚集，因此不宜作輸血及血小板計(jì)數(shù)的抗凝劑。2．乙二胺四乙酸二鈉(簡(jiǎn)稱EDTA二鈉)。常用10％水溶液，按每5ml血液加入一至二滴使用，也可以將其水溶液二滴置小瓶中，在60℃以下烘干備用。此劑抗凝作用強(qiáng)，能保持血細(xì)胞的形態(tài)，可防止血小板聚集，最適于血液學(xué)尤其是血液有形成分的檢驗(yàn)。但輸血時(shí)不能用。二、血樣的抗凝及處理(一)血樣的抗凝

除需分離血清外，自靜3．檸檬酸鈉。配成3.8％溶液，每0.5ml可使5m1血液不凝固，主要用于輸血和血沉測(cè)定。不適用于血液化學(xué)檢驗(yàn)。4．肝素。配成1％水溶液放冰箱內(nèi)保存，用0.1ml可抗凝5ml血液，用此液濕潤(rùn)注射器筒，采血5ml可不致凝固。此劑抗凝作用強(qiáng)，適用于血液有機(jī)和無(wú)機(jī)成分的分析，缺點(diǎn)是價(jià)格貴，抗凝時(shí)間短，其抗凝血作白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)時(shí)，血細(xì)胞著色不佳。(二)血樣的處理

血涂片應(yīng)先預(yù)以固定。血樣最好立即進(jìn)行檢驗(yàn)，否則，必須密封后放入冰箱內(nèi)保存。用抗凝血作有關(guān)化驗(yàn)項(xiàng)目的最長(zhǎng)保存時(shí)限。白細(xì)胞計(jì)數(shù)是2—3h，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)是24h，紅細(xì)胞壓積容量測(cè)定是24h血紅蛋白測(cè)定是2—3天，血沉測(cè)定是2—3h，血小板計(jì)數(shù)約1h，網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)是2—3h。血樣的抗凝及處理3．檸檬酸鈉。配成3.8％溶液，每0.5ml可使5m1血三、血液常規(guī)檢驗(yàn)（一）紅細(xì)胞沉降速度測(cè)定（二）血紅蛋白含量測(cè)定（三）紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（四）白細(xì)胞計(jì)數(shù)（五）白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)三、血液常規(guī)檢驗(yàn)（一）紅細(xì)胞沉降速度測(cè)定紅細(xì)胞沉降速度測(cè)定(一)原理

(二)測(cè)定方法(三)注意事項(xiàng)

(四)正常參考值

(五)臨床意義

紅細(xì)胞沉降速度測(cè)定(一)原理

紅細(xì)胞沉降速度測(cè)定

血液加入抗凝劑后，吸入特制的測(cè)定管中，在一定時(shí)間內(nèi)紅細(xì)胞下沉的毫米數(shù)，稱為紅細(xì)胞沉降速度，簡(jiǎn)稱血沉。(一)原理

抗凝血中的紅細(xì)胞沉降速度的快慢，是一個(gè)復(fù)雜的物理化學(xué)和膠體化學(xué)過(guò)程，其原理至今仍未完全闡明。一般認(rèn)為，與血中電荷的含量有關(guān)。紅細(xì)胞與血漿白蛋白帶負(fù)電荷，而血漿球蛋白，纖維蛋白原和膽固醇卻帶正電荷，在正常時(shí)保持著正、負(fù)電荷相對(duì)的穩(wěn)定性，紅細(xì)胞不易形成串錢狀，其沉降速度在正常范圍內(nèi)。在疾病過(guò)程中，上述任何一方的數(shù)目或含量改變，直接影響正負(fù)電荷相對(duì)穩(wěn)定性。假如正電荷增多，則負(fù)電荷相對(duì)減少，紅細(xì)胞互相吸附，形成串錢狀而血沉加快，反之，紅細(xì)胞互相排斥，則血沉變慢。此外，認(rèn)為與紅細(xì)胞的下沉力和血漿的阻逆力之間是否保持一定的平衡狀態(tài)有關(guān)。紅細(xì)胞沉降速度測(cè)定血液加入抗凝劑后，吸入特制的測(cè)定管中(二)測(cè)定方法

測(cè)定血沉的方法很多，有六五型血沉管法，魏氏法，潘氏法、溫氏法、微量法等。我國(guó)獸醫(yī)臨床上主要應(yīng)用魏氏法。魏(Westergren)氏法：魏氏血沉管全長(zhǎng)30cm，內(nèi)徑2.5mm，管壁有200個(gè)刻度，每一刻度距離為1mm，自上而下標(biāo)有0--200，其容量為1m1，附有特制的血沉架。操作時(shí)，先取3.8％檸檬酸鈉溶液1m1，加入小試管內(nèi)，然后靜脈采血4m1，混勻。用魏氏管吸此抗凝血至“0”刻度處，然后在室溫下將血沉管垂直放于血沉架上，其觀察時(shí)間與上法相同。也可用5m1注射器吸取滅菌的3.8％檸檬酸鈉溶液1m1，再采血4m1，混勻后，從魏氏管下部將抗凝血注至“0”刻度處，立于血沉架上，進(jìn)行觀察。紅細(xì)胞沉降速度測(cè)定(二)測(cè)定方法

測(cè)定血沉的方法很多，有六五型血沉管法，魏氏(三)注意事項(xiàng)

血沉管必須垂直靜立，否則會(huì)使血沉加快。但由于黃牛，奶牛，羊的血沉極為緩慢，為盡快測(cè)出結(jié)果，可將血沉架傾斜60’角放置。溫度高低，能影響血沉速度。溫度越高，血沉越快，反之，可使其減慢，故血沉測(cè)定以室溫20℃左右為宜。冷藏的血液，應(yīng)先把血溫回升至室溫啟再做檢查。采血后應(yīng)在3h內(nèi)測(cè)完，如放置時(shí)間延長(zhǎng)，可使血沉減慢。魏氏法中血液與抗凝劑的比例為4：1，應(yīng)準(zhǔn)確，如比例增加，血沉減慢，反之則血沉加快。紅細(xì)胞沉降速度測(cè)定(三)注意事項(xiàng)

血沉管必須垂直靜立，否則會(huì)使血沉加快。但由動(dòng)物種類血沉值測(cè)定方法資料來(lái)源15304560馬馬騾驢黃牛奶牛水牛山羊豬31.220.723.032.00.150.39.803.849.070.747.075.00.630.730.80.58.453.095.052.096.71.10.7565.01.620.055.0115.654.0110.71.41.291.64.230.0魏氏法六五型法魏氏法魏氏法魏氏法魏氏魏氏法，傾斜60°魏氏法中國(guó)人民解放軍獸醫(yī)大學(xué)中國(guó)農(nóng)科院中獸醫(yī)研究所中國(guó)人民解放軍獸醫(yī)大學(xué)甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)云南農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇農(nóng)學(xué)院西北農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)(四)正常參考值

各種方法測(cè)得的血沉值不同，故在報(bào)告測(cè)定結(jié)果時(shí)應(yīng)注明所用方法。家畜的血沉正常參考值見(jiàn)表。

動(dòng)物種類血沉值測(cè)定方法資料來(lái)源15304560馬31.249(五)臨床意義

血沉測(cè)定是一項(xiàng)非特異性的試驗(yàn)，僅能說(shuō)明體內(nèi)存在病理過(guò)程，并不能單獨(dú)據(jù)此來(lái)確診疾病。如前所述，影響血沉的因素，主要是紅細(xì)胞數(shù)和血漿蛋白質(zhì)的含量和組成，因此，其臨床意義主要涉及以下方面。1.血沉加快。常見(jiàn)于各種貧血及白血病時(shí)(由于紅細(xì)胞數(shù)減少，血沉加快)，目前仍把它作為普檢馬傳染性貧血的重要指標(biāo)之一，亦見(jiàn)于急性全身性感染，各種炎癥，組織損傷及壞死時(shí)(由于血漿球蛋白或纖維蛋白原相對(duì)或絕對(duì)增高，均可使血沉加快)，惡性腫瘤(由于上述二方面的原因)，而使血沉加快。2．血沉減慢。主要見(jiàn)于各種原因所致的脫水而血液濃縮時(shí)，以及某些引起纖維蛋白原含量嚴(yán)重減低的肝臟疾患。紅細(xì)胞沉降速度測(cè)定(五)臨床意義

血沉測(cè)定是一項(xiàng)非特異性的試驗(yàn)，僅能說(shuō)明體內(nèi)血紅蛋白含量測(cè)定

血紅蛋白(簡(jiǎn)稱Hb)測(cè)定方法很多，最常用的是沙利(Sahli)氏目視比色法，雖然精確度有一定誤差，但方法簡(jiǎn)便快速，目前仍被獸醫(yī)臨床廣泛應(yīng)用。(一)原理

紅細(xì)胞遇酸溶解，釋出血紅蛋白，并被酸化成褐色的酸性血紅素，稀釋后與標(biāo)準(zhǔn)色柱比色，即可測(cè)定每100ml血液中血紅蛋白的克數(shù)或百分?jǐn)?shù)。血紅蛋白含量測(cè)定血紅蛋白(簡(jiǎn)稱Hb)測(cè)定方法很多，最常(二)器械和試劑

1．器械。沙利氏血紅蛋白計(jì)一套(內(nèi)有測(cè)定管一支，裝有標(biāo)準(zhǔn)褐色玻璃比色板的比色座一個(gè)，刻有10mm3和20mm3容積的吸血管一支)，在測(cè)定管上有兩種刻度，從下往上，一側(cè)有2—24的刻度，表示100m1血液中所含血紅蛋白克數(shù)，另一側(cè)有20—160的刻度，表示100ml血液中血紅蛋白的百分?jǐn)?shù)。國(guó)產(chǎn)的血紅蛋白計(jì)是以每100ml血液含14.5g血紅蛋白為100％而設(shè)制。

2．試劑。1／10mol／L鹽酸(亦可用1％鹽酸代替)。取濃鹽酸8.5m1于1000m1容量瓶中，然后加蒸餾水至刻度。血紅蛋白含量測(cè)定(二)器械和試劑

血紅蛋白含量測(cè)定

(三)方法

于測(cè)定管內(nèi)加入1／10mol／L鹽酸至刻度“2”處。用吸血管吸抗凝血(或耳尖血)至刻度20mm3處，擦凈管外壁的血跡，將血液吹入測(cè)定管的鹽酸液中，再吸取上清的鹽酸液至刻度處反復(fù)洗滌數(shù)次，輕輕搖動(dòng)測(cè)定管(或用玻棒攪拌)，使血液與鹽酸混合，靜置10min。

慢慢沿測(cè)定管壁逐滴加入蒸餾水(或1／10m01／L鹽酸)，邊加邊混勻，邊觀察，直至液體顏色與標(biāo)準(zhǔn)色柱一致時(shí)為止。讀取測(cè)定管內(nèi)液體凹面的刻度數(shù)，即為100m1血液中血紅蛋白的克數(shù)或百分?jǐn)?shù)。血紅蛋白含量測(cè)定(三)方法

于測(cè)定管內(nèi)加入1／10mol／L鹽酸至刻

(四)注意事項(xiàng)

要注意保持血紅蛋白計(jì)原套用具，不要隨意掉換?？鼓獡u勻，吸血要準(zhǔn)。不要向測(cè)定管中用力吹吸，以防產(chǎn)生氣泡，萬(wàn)一產(chǎn)生了氣泡，可用小玻棒沾少量95％酒精，然后接觸氣泡，即可消除。靜置時(shí)間以10min為準(zhǔn)，否則結(jié)果可能偏高或偏低。為使結(jié)果更為準(zhǔn)確，在讀數(shù)后再加蒸餾水1滴，然后讀數(shù)，如液體色澤變淡，以前一次的讀數(shù)為準(zhǔn)，如液體色澤不變淡，則以后一次的讀數(shù)為準(zhǔn)。血紅蛋白含量測(cè)定(四)注意事項(xiàng)

要注意保持血紅蛋白計(jì)原套用具，不要隨動(dòng)物平均值±標(biāo)準(zhǔn)差資料來(lái)源馬騾驢黃牛奶牛水牛奶山羊綿羊豬127.7±20.5127.4±21.8109.9±30.295.5±10.0129.0±22.8120.0±4.978.2±4.5118.0±8.7116.0±9.9中國(guó)人民解放軍獸醫(yī)大學(xué)中國(guó)人民解放軍獸醫(yī)大學(xué)甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)延邊農(nóng)學(xué)院江蘇農(nóng)學(xué)院江蘇農(nóng)學(xué)院西北農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古農(nóng)牧學(xué)院河北農(nóng)業(yè)大學(xué)(五)正常參考值

一般家畜的正常值。

(六)臨床意義

與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的臨床意義相一致。

血紅蛋白含量測(cè)定平均值±標(biāo)準(zhǔn)差資料來(lái)源馬127.7±20.5中國(guó)人民解放軍獸紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

計(jì)算每mm3血液內(nèi)所含紅細(xì)胞數(shù)目，稱為紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(Redbloodcellcount，簡(jiǎn)稱RBCcount)。其計(jì)數(shù)方法有顯微鏡計(jì)數(shù)法，光電比濁法，電子計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)法等，目前臨床多采用在試管內(nèi)稀釋血液后的顯微鏡計(jì)數(shù)法。

(一)原理

用適當(dāng)?shù)南♂屢簩⒀鹤?00倍稀釋，滴入計(jì)算室后，在顯微鏡下計(jì)數(shù)，經(jīng)過(guò)換算即可求得每mm3血液內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。經(jīng)稀釋液作用雖仍保留白細(xì)胞，但對(duì)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)影響不大，因?yàn)橐话闱闆r下紅細(xì)胞與白細(xì)胞之比約為1000：1。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)算每mm3血液內(nèi)所含紅細(xì)胞數(shù)目，稱為紅細(xì)胞(二)器械和稀釋液1．器械

器械包括以下方面。

(1)血細(xì)胞計(jì)中的計(jì)算板。

(2)血細(xì)胞計(jì)中的紅細(xì)胞吸管。

(3)血蓋片。(4)沙利氏吸血管，2m1刻度吸管，小試管，顯微鏡。

2．稀釋液

稀釋液主要有以下兩種。(1)0.85％氯化鈉溶液。(2)赫姆(Hayem)氏液。由氯化鈉1.0g，結(jié)晶硫酸鈉5.0g，氯化高汞0.5g,蒸餾水加至200ml，溶解后過(guò)濾備用。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(二)器械和稀釋液紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(三)方法

試管稀釋法；用2ml刻度吸管吸取紅細(xì)胞稀釋液2ml，置于小試管中用沙利氏吸血管吸血10mm3(0.01m1)，擦去管外余血，輕輕吹入試管內(nèi)稀釋液底部，再吸上清液沖洗吸管3次，然后立即搖勻。把血蓋片覆蓋于計(jì)算室上，用小玻棒沾取已混勻的紅細(xì)胞懸液一滴，輕輕接觸兩者結(jié)合處，使懸液自然流入計(jì)算室內(nèi)。靜置3min后，即可計(jì)數(shù)。在鏡下計(jì)數(shù)時(shí)，先用低倍(10X)物鏡找到計(jì)算室中央的大方格(紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū))，然后轉(zhuǎn)用高倍(40X)物鏡，計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)四角的4個(gè)和中央的一個(gè)中方格，共計(jì)5個(gè)中方格(80個(gè)小方格)內(nèi)的全部紅細(xì)胞數(shù)(或用對(duì)角線的方法數(shù)5個(gè)中方格)。為避免重復(fù)和遺漏，計(jì)數(shù)時(shí)要按一定的順序進(jìn)行。并且對(duì)壓在方格左邊和上邊線上的紅細(xì)胞均計(jì)在本格內(nèi)，數(shù)左不數(shù)右”的計(jì)數(shù)原則。

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(三)方法試管稀釋法；用2ml刻度吸管吸取紅細(xì)胞計(jì)數(shù)完畢，可按下列公式計(jì)算：R/80*400*200*10=1mm3

血液中紅細(xì)胞總數(shù)R為5個(gè)中方格(即80個(gè)小方格)內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)，400為一個(gè)大方格(即1mm3面積)內(nèi)共分400個(gè)小方格，200為稀釋倍數(shù)(實(shí)際稀釋201倍，即稀釋液2m1，吸血0.0lml。為方便起見(jiàn)，可忽略不計(jì))，為了換算成1mm'容積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)，因?yàn)樯w片與計(jì)算室之間的深度為0.1mm,所以要乘10。上式簡(jiǎn)化后為：R*l0，000=紅細(xì)胞數(shù)／mm3血液紅細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)完畢，可按下列公式計(jì)算：R/80*400*

(五)正常參考值

我國(guó)幅原遼闊，各地環(huán)境條件，海拔高度不同，又受家畜年齡，性別等因素的限制，即使同一品種的動(dòng)物，紅細(xì)胞數(shù)亦有一定差異。各地報(bào)道數(shù)據(jù)有所不同。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)動(dòng)物平均值±標(biāo)準(zhǔn)差資料來(lái)源馬騾驢黃牛水牛奶牛綿羊奶山羊豬7.93±1.407.55±1.305.42±0.237.24±1.575.91±0.985.97±0.868.42±1.2017.20±3.036.90±0.50中國(guó)人民解放軍獸醫(yī)大學(xué)中國(guó)人民解放軍獸醫(yī)大學(xué)甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)延邊農(nóng)學(xué)院江蘇農(nóng)學(xué)院南京農(nóng)業(yè)大學(xué)新疆八一農(nóng)學(xué)院西北農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇農(nóng)學(xué)院

(五)正常參考值

我國(guó)幅原遼闊，各地環(huán)境條件，海拔高(六)臨床意義

紅細(xì)胞數(shù)與血紅蛋白含量的病理變化通常是平行一致的，表現(xiàn)為增多或減少，因而其臨床意義基本相同。只是在某些類型貧血時(shí)，兩者的減少程度可能不相一致，需要計(jì)算紅細(xì)胞平均指數(shù)才能準(zhǔn)確鑒別。

1．紅細(xì)胞數(shù)增多和血紅蛋白含量增多。臨床上絕大多數(shù)為相對(duì)性增多，而絕對(duì)性增多較少見(jiàn)。(1)相對(duì)性增多。是由于機(jī)體脫水，造成血液濃縮的緣故。如劇烈腹瀉，嘔吐，大出汗，多尿，大面積燒傷，滲出液和漏出液大量形成、飲水不足等。(2)絕對(duì)性增多。由于各種生理或病理性因素(如缺氧)刺激骨髓使造血機(jī)能增強(qiáng)，導(dǎo)致紅細(xì)胞絕對(duì)數(shù)增多，見(jiàn)于高原地區(qū)的動(dòng)物和嚴(yán)重的慢性心肺病以及真性紅細(xì)胞增多癥。

2．紅細(xì)胞數(shù)減少和血紅蛋白含量減少。主要是由于紅細(xì)胞損失過(guò)多或生成不足二方面的原因，見(jiàn)于各種類型的貧血。這二項(xiàng)指標(biāo)的改變是確定貧血程度以及觀察療效的主要依據(jù)，但要進(jìn)一步確定貧血原因和類型，還應(yīng)配合其他血液檢查(如紅細(xì)胞壓積容量測(cè)定和血片染色觀察等)和臨床癥狀綜合分析。貧血的分類，通常有形態(tài)學(xué)分類(參閱紅細(xì)胞平均指數(shù)的計(jì)算一節(jié))和病因?qū)W分類兩種方法，二者互相結(jié)合則有助于貧血的診斷和治療。現(xiàn)按病因?qū)W分類法簡(jiǎn)述如下：(1)失血性貧血。

(2)溶血性貧血。

(3)營(yíng)養(yǎng)不良性貧血。(4)再生障礙性貧血。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(六)臨床意義

紅細(xì)胞數(shù)與血紅蛋白含量的病理變化通常是平行白細(xì)胞計(jì)數(shù)

計(jì)算每mm3血液內(nèi)白細(xì)胞的總數(shù)，稱為白細(xì)胞計(jì)數(shù)(，簡(jiǎn)稱WBC)。目前獸醫(yī)臨床仍以試管稀釋后經(jīng)顯微鏡計(jì)數(shù)的方法為主。

(一)原理

用稀酸溶液破壞紅細(xì)胞，保留白細(xì)胞，再行計(jì)數(shù)。

(二)器械與稀釋液

1．器械：除白細(xì)胞吸管外，其他與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相同。

2．稀釋液：1—3％冰醋酸溶液，內(nèi)加數(shù)滴結(jié)晶紫使呈淡紫色，以便與紅細(xì)胞稀釋液相區(qū)別，并可使白細(xì)胞核略為著色。白細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)算每mm3血液內(nèi)白細(xì)胞的總數(shù)，稱為白

(三)方法

試管稀釋法的操作過(guò)程大體上與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相同。在小試管內(nèi)加入白細(xì)胞稀釋液0.4m1(實(shí)際應(yīng)為0.38m1)吸血20mm3，立即吹入稀釋液中，混勻。用小玻棒蘸取已混勻的檢液一滴充填入計(jì)算室內(nèi)，靜置3min后計(jì)數(shù)。

用低倍鏡將計(jì)算室四角4個(gè)大方格內(nèi)的全部白細(xì)胞按順序計(jì)數(shù)，對(duì)壓線細(xì)胞的取舍原則同紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。最后，可按下列公式計(jì)算：

W/4（四個(gè)大方格）*10（換算為1mm3）*20（稀釋倍數(shù)）=1mm3血液中白細(xì)胞總數(shù)

白細(xì)胞計(jì)數(shù)

(三)方法

試管稀釋法的操作過(guò)程大體上與紅細(xì)胞計(jì)數(shù)相同。動(dòng)物平均值±標(biāo)準(zhǔn)差資料來(lái)源馬騾驢黃牛水牛奶牛綿羊奶山羊豬9.50（5.40-13.5）8.70（4.60-12.0）10.72±2.728.43±2.088.04±0.779.41±2.138.45±1.9013.20±1.8814.92±0.93中國(guó)人民解放軍獸醫(yī)大學(xué)中國(guó)人民解放軍獸醫(yī)大學(xué)甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)延邊農(nóng)學(xué)院江蘇農(nóng)學(xué)院南京農(nóng)業(yè)大學(xué)新疆八一農(nóng)學(xué)院西北農(nóng)業(yè)大學(xué)云南農(nóng)業(yè)大學(xué)（四）正常參考值家畜白細(xì)胞數(shù)正常參考值白細(xì)胞計(jì)數(shù)動(dòng)物平均值±標(biāo)準(zhǔn)差資料來(lái)源馬9.50（5.40-13.5）中(五)臨床意義

1．白細(xì)胞增多。在大多數(shù)急性細(xì)菌性感染，尤其是金黃色溶血性葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌等感染時(shí)，白細(xì)胞數(shù)明顯升高。當(dāng)組織器官發(fā)生急性炎癥，如肺炎，胃腸炎，子宮炎、乳房炎，創(chuàng)傷性心包炎等，特別是化膿性炎癥，可引起白細(xì)胞明顯增多。在嚴(yán)重的組織損傷，急性大出血，急性溶血，某些中毒(酸中毒，敵敵畏中毒，尿毒癥等)以及注射異體蛋白(血清、疫苗等)后，白細(xì)胞數(shù)均可增多。白血病時(shí)，白細(xì)胞數(shù)持久性，進(jìn)行性增多。2．白細(xì)胞減少。見(jiàn)于病毒性感染時(shí)，如豬瘟，流行性感冒，馬傳染性貧血等，伴有再生障礙性貧血的疾病，此外，在嚴(yán)重感染、高度衰竭以及內(nèi)毒素性休克時(shí)，可見(jiàn)白細(xì)胞數(shù)減少。白細(xì)胞計(jì)數(shù)(五)臨床意義白細(xì)胞計(jì)數(shù)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

通過(guò)顯微鏡觀察染色血片，計(jì)算血液中各類白細(xì)胞的百分率，稱為白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)（簡(jiǎn)稱DC）。利用白細(xì)胞總數(shù)和各類白細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)率，即可計(jì)算出每mm3血液中各類白細(xì)胞的絕對(duì)值。白細(xì)胞分類技術(shù)對(duì)疾病的診斷、預(yù)后及療效觀察具有重要意義。（一）器械和染色液

1．器械器械包括以下方面。（1）載玻片。(2)染色盆、染色架，顯微鏡及鏡油等。

2．染色液瑞氏(Wright)染液。瑞氏染料1.0g，甲醇(分析純)600ml。將染料置于研缽中，加少量甲醇研磨，使其溶解，將已溶解的染液傾入棕色瓶中。對(duì)未溶解的染料再加入少量甲醇研磨，直至染料溶完，甲醇全部用完為止。在室溫中保存一周，過(guò)濾后備用。新配染液偏堿，如放置越久，則天青形成越多，染色越好。配制時(shí)可在染液中加中性甘油30m1，以防止染色時(shí)甲醇揮發(fā)過(guò)快，并使細(xì)胞著色清晰。白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)通過(guò)顯微鏡觀察染色血片，計(jì)(二)方法1．涂片用左手的拇指與中指夾持一張載玻片，先以細(xì)玻棒取血一小滿(最好是未加抗凝劑的新鮮血)置載玻片的一端，然后右手持另一張邊緣平滑的推片(最好此載玻片稍窄或磨去兩角)，傾斜30—45角，由血滴的前方向后接觸血滴，待血液擴(kuò)散成線狀后，立即以均等的速度輕而平穩(wěn)地向前推進(jìn)，直至血液推盡為止。涂片時(shí)，血滴越大，角度越大，推片速度越快，則血膜越厚，反之則血膜越薄。白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的血片宜稍厚，進(jìn)行紅細(xì)胞形態(tài)及血原蟲檢查的血片宜稍薄。一張良好的血片，要求厚薄適宜，血液分布均勻，邊緣整齊，能明顯分出頭，體，尾三部分，兩側(cè)留有空隙(以寫明畜別，編號(hào)、日期)。血膜分布不勻，主要是由于推片不齊，用力不勻，玻片不潔所致。推好的血片可在空氣中揮動(dòng)，使其迅速干燥，以防細(xì)胞皺縮變形，并盡快固定染色。2．染色瑞氏染色法：用蠟筆在血膜兩端劃線，以防染液外溢。將血片平置于染色架上，滴加瑞氏染液，并計(jì)其滴數(shù)，以蓋滿血膜為度。約1min后，再滴加等量的磷酸鹽緩沖液，輕搖玻片或吹氣，使之混勻。約5—10min后，用蒸餾水直接沖洗(切勿先傾去染液再?zèng)_洗，否則沉淀物附于血膜上而不易除去)，干燥后可供鏡檢。白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

(二)方法白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)涂片涂片

3．分類計(jì)數(shù)先用低倍鏡全面觀察血片上細(xì)胞分布情況及染色質(zhì)量，然后選擇染色良好，細(xì)胞分布均勻的部分，用油鏡進(jìn)行分類。由于比重大的細(xì)胞(粒細(xì)胞，單核細(xì)胞等)多分布在血片的邊緣和尾部，比重小的細(xì)胞(如小淋巴細(xì)胞等)則多分布在血片的頭部和中間。為減少這種細(xì)胞分布的固有誤差并避免重復(fù)計(jì)數(shù)，血片必須按一定方向曲折移動(dòng)而分類計(jì)數(shù)，并且分類計(jì)數(shù)的白細(xì)胞總數(shù)至少要達(dá)100個(gè)(如果計(jì)數(shù)200—300個(gè)白細(xì)胞，當(dāng)然其百分率更為準(zhǔn)確)。記錄時(shí)，可用白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)器，或設(shè)計(jì)一個(gè)表格，用畫“正”字的方法加以記錄。某種白細(xì)胞絕對(duì)值；白細(xì)胞總數(shù)／mm3某種白細(xì)胞的百分率白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

3．分類計(jì)數(shù)先用低倍鏡全面觀察血片上細(xì)胞分布情(三)各類白細(xì)胞的形態(tài)特征

在鏡下辨認(rèn)各種白細(xì)胞時(shí)，必須掌握其主要特征，如細(xì)胞大小，核的形狀結(jié)構(gòu)及染色性，胞漿顏色、有無(wú)顆粒及顆粒特點(diǎn)等。在同一張血片上對(duì)照比較，互相鑒別。1．嗜中性白細(xì)胞。圓形，直徑約10—15μm。胞漿淡紅色，胞漿內(nèi)有多量紫紅色細(xì)小顆粒(染色不佳時(shí)則看不清楚)。核染成深紫色，其形狀多樣，核微呈腎形，染色稍淡的稱幼年核，呈帶形或S形，兩邊平行的稱桿狀核，分成2—3葉，在葉之間有細(xì)絲相連的稱分葉核。有時(shí)因核葉重疊看不到細(xì)絲，但核量較多，染色質(zhì)致密，也可認(rèn)為是分葉核。2．嗜酸性白細(xì)胞。大小，形態(tài)與嗜中性白細(xì)胞大體相似，唯胞漿內(nèi)含有粗大的鮮紅色顆粒(馬的這種嗜酸性顆粒明顯大于其它家畜)。核多數(shù)為兩葉。3．嗜堿性白細(xì)胞。大小、形態(tài)與嗜中性白細(xì)胞相似，但胞漿內(nèi)含有粗大的深藍(lán)色顆粒，常遮蓋在核上。核分葉不明顯。4．淋巴細(xì)胞。分大小兩種，小淋巴細(xì)胞圓形，直徑約7—10μm，核染成深紫色，圓形或腎形。胞漿很少，常僅呈一小片月牙狀，染成藍(lán)色。大淋巴細(xì)胞直徑約10—19μm，核圓形或腎形。胞漿相對(duì)較多，染成天藍(lán)色，在胞漿與核之間有淡染帶。有時(shí)內(nèi)含少數(shù)紫紅色大顆粒。5．單核細(xì)胞。是外周血液中最大的細(xì)胞，直徑約為12—24m。核染成紫色，其染色質(zhì)疏松，核形不規(guī)則，呈腎形，多角形，折疊狀等。胞漿較多，染成淺灰藍(lán)色，有時(shí)內(nèi)含少量灰塵樣淡紅色小顆粒。白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

(三)各類白細(xì)胞的形態(tài)特征

在鏡下辨認(rèn)各種白細(xì)胞時(shí)，必須掌馬牛羊駱駝雞豬馬牛羊駱駝雞豬動(dòng)物嗜堿性白細(xì)胞嗜酸性白細(xì)胞嗜中性白細(xì)胞淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞

資料來(lái)源幼年核

桿狀核分葉核馬騾驢黃牛奶牛水牛綿羊奶山羊豬0.420.450.170.140.120.450.200.700.234.715.965.373.107.8010.452.900.703.030.190.211.40—0.720.39——0.555.135.161.774.109.522.873.1—3