溶血性貧血的試驗(yàn)檢測課件

臨床醫(yī)學(xué)五年制

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)續(xù)薇教授博士生導(dǎo)師

1臨床醫(yī)學(xué)五年制

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)1第二節(jié)溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢測22概述定義:是由于各種原因使紅細(xì)胞生存時(shí)間縮短、紅細(xì)胞破壞加快、紅細(xì)胞破壞增多，超過骨髓的代償造血能力時(shí)所發(fā)生的一類貧血。溶血性疾?。汗撬柙煅δ苣軌虼鷥敿t細(xì)胞破壞。3概述3按部位分類：

血管內(nèi)溶血-紅細(xì)胞破壞在血液中

血管外溶血-紅細(xì)胞破壞在單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)

原位溶血-紅細(xì)胞破壞在骨髓中4按部位分類：4按原因分類：

膜缺陷酶缺陷血紅蛋白缺陷免疫因素物理因素化學(xué)因素感染因素脾功能亢進(jìn)內(nèi)在因素

外在因素5按原因分類：內(nèi)在因素外在因素5一、溶血性貧血的篩查檢測（一）血漿游離血紅蛋白檢測（二）血清結(jié)合珠蛋白檢測（三）血漿高鐵血紅素清蛋白檢測（四）含鐵血黃素尿試驗(yàn)(Rous試驗(yàn))（五）紅細(xì)胞壽命測定6一、溶血性貧血的篩查檢測（一）血漿游離血紅蛋白檢測6原理

大量Hb游離在血漿中大量Hb小分子>腎閾值與珠蛋白結(jié)合后被運(yùn)輸?shù)礁闻K分解一部分Hb轉(zhuǎn)變?yōu)楦哞FHb＋白蛋白Hb被腎小管上皮細(xì)胞重吸收Hb在血漿中游離紅細(xì)胞破壞2、血紅蛋白尿高Hb血癥4、高鐵血紅素白蛋白（+）3、血漿中結(jié)合珠蛋白（減低）1、血漿游離Hb測定(增高）在細(xì)胞內(nèi)代謝成含鐵血黃素6、血結(jié)素減低結(jié)合珠蛋白耗盡時(shí)剩余的Hb與血結(jié)素結(jié)合5、尿含鐵血黃素試驗(yàn)(+)隨細(xì)胞脫落至尿中，鐵染色（＋）7原理二、紅細(xì)胞膜缺陷的檢測（一）紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)（EOFT）—初篩試驗(yàn)原理：紅細(xì)胞置于等滲鹽水中，膜不破壞。紅細(xì)胞置于不同濃度NaCl溶液中，水分通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),紅細(xì)胞膨脹至破裂而溶血。不同濃度時(shí)，紅細(xì)胞膜對低滲溶液的抵抗力不同，破壞程度不同。8二、紅細(xì)胞膜缺陷的檢測（一）紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)（EOFT）—試管號濃度差0.540.520.500.480.460.440.420.400.380.360.340.320.300.280.260.240.221234567891011121314151617開始溶血完全溶血

意義：紅細(xì)胞對低滲鹽水的抵抗力降低

→滲透脆性增高，如遺傳球。紅細(xì)胞對低滲鹽水的抵抗力增強(qiáng)

→滲透脆性減低，如HS、IDA。9試管號濃度差0.540.520.500.480.46（二）自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)參考值：正常人紅細(xì)胞孵育48h，輕微溶血、溶血度＜3.5%。加葡萄糖和加ATP孵育，溶血糾正，溶血度＜1%。臨床意義：作為遺傳球和先天性非球形細(xì)胞性溶貧的鑒別診斷。糾正試驗(yàn)：加葡萄糖和ATP糾正：1型加葡萄糖不糾正、加ATP糾正：2型10（二）自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)10三、紅細(xì)胞酶缺陷的檢測(一)高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)（MRT）—篩選試驗(yàn)原理：在足量的NADPH存在下，高鐵血紅蛋白能被還原成亞鐵血紅蛋白。當(dāng)G6PD含量正常時(shí)，由磷酸戊糖途徑生成的NADPH的數(shù)量足以完成上述還原反應(yīng)。如果G6PD缺乏，則高鐵血紅蛋白還原速度較正常人減慢。參考值：正常人試驗(yàn)結(jié)果呈陰性（紅色）G-6-PD缺陷癥呈陽性（棕色）11三、紅細(xì)胞酶缺陷的檢測(一)高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)（MRT）—（二）氰化物-抗壞血酸試驗(yàn)臨床意義：正常血液要在幾小時(shí)后才變成暗色。純合子G6PD缺乏的血液變成棕色，在2h內(nèi)即變色，雜合子要3-4h變色。12（二）氰化物-抗壞血酸試驗(yàn)12（三）變性珠蛋白小體生成試驗(yàn)臨床意義：G6PD缺乏癥，不穩(wěn)定Hb、HbH病等＞45%。13（三）變性珠蛋白小體生成試驗(yàn)13

(四)G-6-PD熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測定——確證試驗(yàn)原理：紅細(xì)胞中的G6PD催化G-6-P轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖酸時(shí)，使氧化型輔酶（NADP）生成還原型NADPH，NADPH在340nm處有一吸收峰，在紫外線激發(fā)下可產(chǎn)生熒光。參考值：正常人有甚強(qiáng)熒光，酶活性4.97±1.43U/gHb。臨床意義:G6PD缺乏者熒光很弱或無熒光。14(四)G-6-PD熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測定14（五）丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定原理：在ADP存在下，丙酮酸激酶催化烯醇式磷酸丙酮酸變?yōu)楸?，在NADH存在下，丙酮酸被乳酸脫氫酶作用轉(zhuǎn)變?yōu)槿樗?，若熒光?biāo)記于NADH上此時(shí)有熒光的NADH變?yōu)闊o熒光的NAD.參考值：正常PK活性熒光在20min內(nèi)消失。酶活性15.1±4.99U/gHb。臨床意義：PK嚴(yán)重缺乏（純合子）熒光60min不消失；雜合子熒光在25-60min消失15（五）丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定15四、珠蛋白生成異常的檢測血紅蛋白?。菏怯捎谘t蛋白分子結(jié)構(gòu)或珠蛋白肽鏈合成速率異常所引起的一組遺傳性血液病。16四、珠蛋白生成異常的檢測血紅蛋白病：是由于血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)或（一）血紅蛋白電泳原理：

各種Hb的等電點(diǎn)不同，在一定的pH緩沖條件下帶電荷數(shù)不同，電泳速率不同，出現(xiàn)不同的Hb區(qū)帶。如HbA、HbA2、HbF、HbH等。參考值：正常人電泳圖譜顯示4條區(qū)帶：從陽極開始依次為：HbA→HbA2→NH1→NH2且含量也依次減少。17（一）血紅蛋白電泳17臨床意義：HbA:96％－98％正常人HbA2:1％－3%

↑地中海貧血/巨幼貧/HbS病

↓缺鐵性貧血及鐵粒幼細(xì)胞貧血HbA2減低18臨床意義：18（二）胎兒血紅蛋白酸洗脫試驗(yàn)（三）胎兒血紅蛋白測定或HbF堿變性試驗(yàn)（四）HbA2定量測定19（二）胎兒血紅蛋白酸洗脫試驗(yàn)19五、自身免疫性溶血性貧血檢測(一)抗人球蛋白試驗(yàn)(Coombs試驗(yàn))原理：患者RBC與多個不完全抗體的Fc段結(jié)合RBC凝集現(xiàn)象正常人RBC抗人球蛋白直接反應(yīng)(+)抗人球蛋白間接反應(yīng)(＋)

完全抗體(抗人球蛋白)致敏RBC血清中不完全抗體（IgG、IgM、IgA、C3）＋＋20五、自身免疫性溶血性貧血檢測(一)抗人球蛋白試驗(yàn)(Coomb臨床意義：直接反應(yīng)(+)：AIHA、SLE、類風(fēng)濕(溫抗體、37℃反應(yīng)強(qiáng))間接反應(yīng)(+)：Rh或ABO妊娠免疫性新生兒溶血病，母體血清中不完全抗體的檢測21臨床意義：21（二）冷凝集素試驗(yàn)原理：冷凝集素（主要是IgM）在低溫時(shí)與自身RBC、O型RBC、同型RBC發(fā)生凝集（0-4℃），當(dāng)溫度升高時(shí)凝集消失。參考值：效價(jià)<1:40意義：AIHA、傳單、支原體肺炎、MM22（二）冷凝集素試驗(yàn)22(三)冷熱雙相溶血試驗(yàn)原理：血清中雙相溶血素（主要是IgG）存在，0-20℃與RBC結(jié)合，并附合補(bǔ)體，但不溶血。30-37℃發(fā)生溶血參考值:陰性意義：PCH、病毒感染、傳單23(三)冷熱雙相溶血試驗(yàn)23陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（paroxysmalnocturnalhemoglobinuria，PNH）為獲得性紅細(xì)胞膜缺陷引起的慢性血管內(nèi)溶血，常在睡眠時(shí)加重，可伴發(fā)作性血紅蛋白尿和全血細(xì)胞減少癥。六、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥檢測24陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥六、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥檢測24(一)酸溶血試驗(yàn)（Ham試驗(yàn)）原理：PNH病人異常RBC共同特點(diǎn)是細(xì)胞膜表面缺乏一組膜蛋白，這些膜蛋白通過GPI（糖肌醇磷脂）連接在膜上，統(tǒng)稱為GPI連接蛋白，屬于補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白。RBC膜缺少這種蛋白，因此對補(bǔ)體敏感，是溶血的主要原因。病人RBC37℃1hpH6.6-6.8易破壞溶血25(一)酸溶血試驗(yàn)（Ham試驗(yàn)）病人RBC37℃1hpH6參考值：陰性臨床意義：PNH常為陽性26參考值：陰性26重點(diǎn)內(nèi)容溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)診斷程序紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)抗人球蛋白試驗(yàn)酸溶血試驗(yàn)27重點(diǎn)內(nèi)容溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)診斷程序27第四節(jié)血型鑒定及交叉配血2828

一、血型

血型（bloodgroup）是人體血液的一種遺傳形狀，各種血液成分包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板及某些血漿蛋白在個體之間均具有抗原成分的差別，受獨(dú)立的遺傳基因控制。29一、血型血型（bloodgroup）是人體血液的一種遺一、紅細(xì)胞血型系統(tǒng)（一）ABO血型系統(tǒng)ABO血型系統(tǒng)的抗原和抗體ABO血型的亞型ABO血型鑒定和交叉配血試驗(yàn)ABO血型系統(tǒng)的臨床意義30一、紅細(xì)胞血型系統(tǒng)（一）ABO血型系統(tǒng)30（二）RH血型系統(tǒng)Rh血型系統(tǒng)的抗原和抗體Rh血型系統(tǒng)的鑒定Rh血型系統(tǒng)的臨床意義31（二）RH血型系統(tǒng)31二、其他血型系統(tǒng)

白細(xì)胞抗原系統(tǒng)血小板抗原及抗體血清蛋白成分的抗原特性32二、其他血型系統(tǒng)白細(xì)胞抗原系統(tǒng)32謝謝！33謝謝！33臨床醫(yī)學(xué)五年制

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)續(xù)薇教授博士生導(dǎo)師

34臨床醫(yī)學(xué)五年制

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)1第二節(jié)溶血性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢測352概述定義:是由于各種原因使紅細(xì)胞生存時(shí)間縮短、紅細(xì)胞破壞加快、紅細(xì)胞破壞增多，超過骨髓的代償造血能力時(shí)所發(fā)生的一類貧血。溶血性疾?。汗撬柙煅δ苣軌虼鷥敿t細(xì)胞破壞。36概述3按部位分類：

血管內(nèi)溶血-紅細(xì)胞破壞在血液中

血管外溶血-紅細(xì)胞破壞在單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)

原位溶血-紅細(xì)胞破壞在骨髓中37按部位分類：4按原因分類：

膜缺陷酶缺陷血紅蛋白缺陷免疫因素物理因素化學(xué)因素感染因素脾功能亢進(jìn)內(nèi)在因素

外在因素38按原因分類：內(nèi)在因素外在因素5一、溶血性貧血的篩查檢測（一）血漿游離血紅蛋白檢測（二）血清結(jié)合珠蛋白檢測（三）血漿高鐵血紅素清蛋白檢測（四）含鐵血黃素尿試驗(yàn)(Rous試驗(yàn))（五）紅細(xì)胞壽命測定39一、溶血性貧血的篩查檢測（一）血漿游離血紅蛋白檢測6原理

大量Hb游離在血漿中大量Hb小分子>腎閾值與珠蛋白結(jié)合后被運(yùn)輸?shù)礁闻K分解一部分Hb轉(zhuǎn)變?yōu)楦哞FHb＋白蛋白Hb被腎小管上皮細(xì)胞重吸收Hb在血漿中游離紅細(xì)胞破壞2、血紅蛋白尿高Hb血癥4、高鐵血紅素白蛋白（+）3、血漿中結(jié)合珠蛋白（減低）1、血漿游離Hb測定(增高）在細(xì)胞內(nèi)代謝成含鐵血黃素6、血結(jié)素減低結(jié)合珠蛋白耗盡時(shí)剩余的Hb與血結(jié)素結(jié)合5、尿含鐵血黃素試驗(yàn)(+)隨細(xì)胞脫落至尿中，鐵染色（＋）40原理二、紅細(xì)胞膜缺陷的檢測（一）紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)（EOFT）—初篩試驗(yàn)原理：紅細(xì)胞置于等滲鹽水中，膜不破壞。紅細(xì)胞置于不同濃度NaCl溶液中，水分通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),紅細(xì)胞膨脹至破裂而溶血。不同濃度時(shí)，紅細(xì)胞膜對低滲溶液的抵抗力不同，破壞程度不同。41二、紅細(xì)胞膜缺陷的檢測（一）紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)（EOFT）—試管號濃度差0.540.520.500.480.460.440.420.400.380.360.340.320.300.280.260.240.221234567891011121314151617開始溶血完全溶血

意義：紅細(xì)胞對低滲鹽水的抵抗力降低

→滲透脆性增高，如遺傳球。紅細(xì)胞對低滲鹽水的抵抗力增強(qiáng)

→滲透脆性減低，如HS、IDA。42試管號濃度差0.540.520.500.480.46（二）自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)參考值：正常人紅細(xì)胞孵育48h，輕微溶血、溶血度＜3.5%。加葡萄糖和加ATP孵育，溶血糾正，溶血度＜1%。臨床意義：作為遺傳球和先天性非球形細(xì)胞性溶貧的鑒別診斷。糾正試驗(yàn)：加葡萄糖和ATP糾正：1型加葡萄糖不糾正、加ATP糾正：2型43（二）自身溶血試驗(yàn)及糾正試驗(yàn)10三、紅細(xì)胞酶缺陷的檢測(一)高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)（MRT）—篩選試驗(yàn)原理：在足量的NADPH存在下，高鐵血紅蛋白能被還原成亞鐵血紅蛋白。當(dāng)G6PD含量正常時(shí)，由磷酸戊糖途徑生成的NADPH的數(shù)量足以完成上述還原反應(yīng)。如果G6PD缺乏，則高鐵血紅蛋白還原速度較正常人減慢。參考值：正常人試驗(yàn)結(jié)果呈陰性（紅色）G-6-PD缺陷癥呈陽性（棕色）44三、紅細(xì)胞酶缺陷的檢測(一)高鐵血紅蛋白還原試驗(yàn)（MRT）—（二）氰化物-抗壞血酸試驗(yàn)臨床意義：正常血液要在幾小時(shí)后才變成暗色。純合子G6PD缺乏的血液變成棕色，在2h內(nèi)即變色，雜合子要3-4h變色。45（二）氰化物-抗壞血酸試驗(yàn)12（三）變性珠蛋白小體生成試驗(yàn)臨床意義：G6PD缺乏癥，不穩(wěn)定Hb、HbH病等＞45%。46（三）變性珠蛋白小體生成試驗(yàn)13

(四)G-6-PD熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測定——確證試驗(yàn)原理：紅細(xì)胞中的G6PD催化G-6-P轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖酸時(shí)，使氧化型輔酶（NADP）生成還原型NADPH，NADPH在340nm處有一吸收峰，在紫外線激發(fā)下可產(chǎn)生熒光。參考值：正常人有甚強(qiáng)熒光，酶活性4.97±1.43U/gHb。臨床意義:G6PD缺乏者熒光很弱或無熒光。47(四)G-6-PD熒光斑點(diǎn)試驗(yàn)和活性測定14（五）丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定原理：在ADP存在下，丙酮酸激酶催化烯醇式磷酸丙酮酸變?yōu)楸?，在NADH存在下，丙酮酸被乳酸脫氫酶作用轉(zhuǎn)變?yōu)槿樗?，若熒光?biāo)記于NADH上此時(shí)有熒光的NADH變?yōu)闊o熒光的NAD.參考值：正常PK活性熒光在20min內(nèi)消失。酶活性15.1±4.99U/gHb。臨床意義：PK嚴(yán)重缺乏（純合子）熒光60min不消失；雜合子熒光在25-60min消失48（五）丙酮酸激酶熒光篩選試驗(yàn)和活性測定15四、珠蛋白生成異常的檢測血紅蛋白?。菏怯捎谘t蛋白分子結(jié)構(gòu)或珠蛋白肽鏈合成速率異常所引起的一組遺傳性血液病。49四、珠蛋白生成異常的檢測血紅蛋白病：是由于血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)或（一）血紅蛋白電泳原理：

各種Hb的等電點(diǎn)不同，在一定的pH緩沖條件下帶電荷數(shù)不同，電泳速率不同，出現(xiàn)不同的Hb區(qū)帶。如HbA、HbA2、HbF、HbH等。參考值：正常人電泳圖譜顯示4條區(qū)帶：從陽極開始依次為：HbA→HbA2→NH1→NH2且含量也依次減少。50（一）血紅蛋白電泳17臨床意義：HbA:96％－98％正常人HbA2:1％－3%

↑地中海貧血/巨幼貧/HbS病

↓缺鐵性貧血及鐵粒幼細(xì)胞貧血HbA2減低51臨床意義：18（二）胎兒血紅蛋白酸洗脫試驗(yàn)（三）胎兒血紅蛋白測定或HbF堿變性試驗(yàn)（四）HbA2定量測定52（二）胎兒血紅蛋白酸洗脫試驗(yàn)19五、自身免疫性溶血性貧血檢測(一)抗人球蛋白試驗(yàn)(Coombs試驗(yàn))原理：患者RBC與多個不完全抗體的Fc段結(jié)合RBC凝集現(xiàn)象正常人RBC抗人球蛋白直接反應(yīng)(+)抗人球蛋白間接反應(yīng)(＋)

完全抗體(抗人球蛋白)致敏RBC血清中不完全抗體（IgG、IgM、IgA、C3）＋＋53五、自身免疫性溶血性貧血檢測(一)抗人球蛋白試驗(yàn)(Coomb臨床意義：直接反應(yīng)(+)：AIHA、SLE、類風(fēng)濕(溫抗體、37℃反應(yīng)強(qiáng))間接反應(yīng)(+)：Rh或ABO妊娠免疫性新生兒溶血病，母體血清中不完全抗體的檢測54臨床意義：21（二）冷凝集素試驗(yàn)原理：冷凝集素（主要是IgM）在低溫時(shí)與自身RBC、O型RBC、同型RBC發(fā)生凝集（0-4℃），當(dāng)溫度升高時(shí)凝集消失。參考值：效價(jià)<1:40意義：AIHA、傳單、支原體肺炎、MM55（二）冷凝集素試驗(yàn)22(三)冷熱雙相溶血試驗(yàn)原理：血清中雙相溶血素（主要是IgG）存在，0-20℃與RBC結(jié)合，并附合補(bǔ)體，但不溶血。30-37℃發(fā)生溶血參考值:陰性意義：