十二章-免疫學檢驗的質(zhì)量保證(與“測定”有關(guān)文檔共47張)

免疫檢驗質(zhì)量控制相關(guān)的基本概念。標準品的分類及特性。定量、半定量和定性實驗的質(zhì)量控制方法檢測試劑免疫學檢測試劑的批間差異和穩(wěn)定性。免疫學實驗常用評價指標。本章要點第1頁，共47頁。返回總目錄目錄

免疫檢驗質(zhì)量控制的概念1免疫檢驗質(zhì)量控制的特殊性2免疫學實驗常用評價指標和質(zhì)控方法3第2頁，共47頁。前言免疫學檢驗是臨床檢驗中一大類重要的常規(guī)檢查,對疾病的診斷、篩查、監(jiān)測疾病的發(fā)展過程和觀察患者對治療的反應(yīng)等方面發(fā)揮著重要的作用。如何保證檢驗結(jié)果的質(zhì)量，在日常檢測中如何貫徹實施質(zhì)量保證是免疫學檢驗的一個重要內(nèi)容。第3頁，共47頁。第一節(jié)免疫檢驗質(zhì)量控制的概念免疫檢驗要保證檢驗結(jié)果的準確、可靠、及時、有效，并盡可能使各實驗室間檢驗結(jié)果有可比性，這是免疫檢驗質(zhì)量保證的基本目的。只有明確了免疫檢驗質(zhì)量控制的概念，才能真正理解免疫檢驗的質(zhì)量控制，并準確、有效地完成質(zhì)控工作。4第4頁，共47頁。一、基本概念準確度（accuracy）

待測物的測定值與其真值的一致性程度。精密度（precision）

在一定條件下進行多次測定，所得結(jié)果之間的符合程度。第5頁，共47頁。（二）Cutoff值批間差異的控制由二級標準品的比對而來的，通常由實驗室自己或試劑生產(chǎn)廠家制備。酶標記抗體在應(yīng)用防腐劑時要注意不能用NaN3。免疫學檢驗方法的種類較多，其測定方法的靈敏度和特異性要比生化方法高得多，因此進行質(zhì)量控制的手段不能照搬生化模式。免疫檢驗室在進購試劑時，要選擇質(zhì)量有保障的正規(guī)試劑產(chǎn)商，建立完善的實驗室內(nèi)質(zhì)量控制體系，盡量減少批間差異使其在規(guī)定的范圍內(nèi)（一般CV<15%），這對長期控制免疫檢測結(jié)果的可靠性大有裨益?？购丝贵w血清(均質(zhì)型)待測物的測定值與客觀存在的真值之間的差異。正態(tài)分布的基本統(tǒng)計學含義可用均數(shù)（）、標準差（s）和概率來說明，均數(shù)是位于曲線的正中線所對應(yīng)的值。本指標是用于評價測定方法的臨床應(yīng)用價值，理想測定方法的診斷特異度應(yīng)為100%。第三節(jié)免疫學實驗常用評價指標三、檢測試劑的批間差異測定多份陰性血清，設(shè)定Cutoff值恰好高于95％的陰性血清的測定值。誤差（error）

待測物的測定值與客觀存在的真值之間的差異。包括系統(tǒng)誤差和隨機誤差兩類。偏差（deviation）

待測物的測定值與多次測量平均值之間的差異。第6頁，共47頁。重復性條件（repeatabilityconditions）

在同一實驗室內(nèi)，由相同的操作者使用同一儀器設(shè)備，在短的間隔時間內(nèi)對相同的測試項目使用同一方法相互獨立進行的測試條件。批（run）

在相同條件下所獲得的一組測定。第7頁，共47頁。均值（mean）

一組測定值中所有值的平均值，也稱均數(shù)。標準差（standarddeviation，SD或S）

用于表示一組測定數(shù)據(jù)的分布情況。第8頁，共47頁。變異系數(shù)（coefficientofvariation，CV）

標準差與平均值之比用百分數(shù)表示。CV是相對比，沒有單位，更便于資料間的分析比較。第9頁，共47頁。正態(tài)分布(gaussiandistribution)

當一質(zhì)控物用同一方法在不同的時間重復多次測定，以橫軸表示測定值，縱軸表示在大量測定中相應(yīng)測定值的個數(shù)，則可得到一個兩頭低，中間高，中為所有測定值的均值，左右對稱的“鐘形”曲線，亦即正態(tài)分布，又稱高斯分布。正態(tài)分布的基本統(tǒng)計學含義可用均數(shù)（）、標準差（s）和概率來說明，均數(shù)是位于曲線的正中線所對應(yīng)的值。第10頁，共47頁。正態(tài)分布是質(zhì)量控制圖的理論依據(jù)，也是許多統(tǒng)計方法的理論基礎(chǔ)，正常情況下測量（或?qū)嶒灒┱`差服從正態(tài)分布。第11頁，共47頁。第三節(jié)免疫學實驗常用評價指標抗核抗體血清(均質(zhì)型)質(zhì)控品（物）（qualitytestingmaterisls）（externalqualityassessment，EQA）由于批間差異的影響，室內(nèi)質(zhì)控只能是一個批號的試劑盒使用一個質(zhì)控框架圖。診斷特異度（specificityofdiagnosis）FITC—綿羊抗人Ig質(zhì)控品（物）（qualitytestingmaterisls）由實驗室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室從收取樣本至獲得測定結(jié)果，并對結(jié)果進行分析的整個測定過程可靠性程度的措施。室內(nèi)質(zhì)控則應(yīng)選擇特定試劑盒或方法的測定范圍內(nèi)的高、中和低三種濃度的質(zhì)控品，以監(jiān)測不同濃度標本測定結(jié)果的變化。FITC—綿羊抗人Ig待測物的測定值與客觀存在的真值之間的差異。是專門用于質(zhì)量控制目的的特性明確的物質(zhì)，其含量已知并處于與實際標本相同的基質(zhì)中，故質(zhì)控物必須按患者標本一樣對待進行檢測。定性測定判斷陰、陽性時有一個“判斷值”（cutoff值），其質(zhì)控的目的是考察檢測結(jié)果是否準確和穩(wěn)定。在保存過程中發(fā)生聚合反應(yīng)等分子結(jié)構(gòu)的變化，可使標準品失活。又稱真陰性，是指一項試驗?zāi)軐嶋H上未患某病的人正確地判定為未患某病的能力。二、質(zhì)量保證的有關(guān)概念質(zhì)量保證（qualityassurance，QA）致力于為某一產(chǎn)品或服務(wù)滿足特定的質(zhì)量要求，提供充分信任性所要求的而采取一系列有效的措施。第12頁，共47頁。室內(nèi)質(zhì)量控制（internalqualitycontrol，IQC）由實驗室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室從收取樣本至獲得測定結(jié)果，并對結(jié)果進行分析的整個測定過程可靠性程度的措施。旨在監(jiān)測和控制本室常規(guī)工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性，以確定測定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報告的一項工作。第13頁，共47頁。室間質(zhì)量評價（externalqualityassessment，EQA）

為客觀地比較某一實驗室的測定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機構(gòu)，采取一定的方法，連續(xù)、客觀地評價實驗室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實驗室之間的結(jié)果具有可比性。又稱為實驗室能力驗證（proficiencytesting，PT）。第14頁，共47頁。質(zhì)控品（物）（qualitytestingmaterisls）

是專門用于質(zhì)量控制目的的特性明確的物質(zhì)，其含量已知并處于與實際標本相同的基質(zhì)中，故質(zhì)控物必須按患者標本一樣對待進行檢測。一般包括室內(nèi)質(zhì)控物和室間質(zhì)評物兩類。第15頁，共47頁。第二節(jié)免疫檢驗質(zhì)量控制的特殊性免疫學檢驗方法的種類較多，其測定方法的靈敏度和特異性要比生化方法高得多，因此進行質(zhì)量控制的手段不能照搬生化模式。免疫檢驗質(zhì)量控制包括定量實驗、半定量實驗和定性實驗三個方面。第16頁，共47頁。標準品（standard）

指性質(zhì)純的處于一定基質(zhì)中已知含量或成分，且特性明確的物質(zhì)，通常用于比較檢測未知的物質(zhì)或成分。標準品質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響樣品的測定結(jié)果。一、標準品（一）標準品的分類第17頁，共47頁。根據(jù)標準品性質(zhì)的差異，可分為三級：一級標準品二級標準品

三級標準品

為凍干品，內(nèi)含載體蛋白，數(shù)量有限，可使用10~20年。通常為國際標準品，由WHO指定的實驗室制備

即國家標準品，是由國家的有關(guān)權(quán)威機構(gòu)制備，供國家內(nèi)部使用，其效價單位與國際標準品一致由二級標準品的比對而來的，通常由實驗室自己或試劑生產(chǎn)廠家制備。

第18頁，共47頁。標準品IU/支建立的年份Mg/IU類風濕關(guān)節(jié)炎血清10019650.1710抗核抗體血清(均質(zhì)型)10019700.1860人血清IgG、IgA、IgM10019700.1847人血清IgD10019710.8100人血清IgE1150019730.06562人AFP10000019750.001399人CEA10019750.0236FITC—綿羊抗人Ig10019760.0594FITC—綿羊抗人IgMμ鏈10019780.0447血清蛋白(白蛋白、α1-抗胰蛋白酶、C3銅藍蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白)10019781.1140人補體成分(C4、C5、Clq、B因子)10019801.1070FITC—綿羊抗人IgGγ鏈10019810.0923過氧化物酶標記綿羊抗人Ig10019820.0316抗RNP抗體-1983-平滑肌抗體-1983-線粒體抗體-1983-免疫學檢驗質(zhì)控常用國際標準品第19頁，共47頁。（二）標準品的特性與被測物具有相同的特性，活性穩(wěn)定

所用基質(zhì)對測定結(jié)果無明顯影響，通常為含蛋白質(zhì)的緩沖液。

無已知傳染危險性，物理性能均一，能準確重溶為澄清液體。對標準品的要求第20頁，共47頁?；|(zhì)中的酶、細菌污染、pH變化、氧化、等因素都可導致標準品變性，高溫和光照可加速這些變化。容器內(nèi)壁的吸附作用和溶劑的蒸發(fā)可造成標準品濃度的改變。在保存過程中發(fā)生聚合反應(yīng)等分子結(jié)構(gòu)的變化，可使標準品失活。保存條件不適當也可以影響標準品的穩(wěn)定性，如反復的凍融可降低標準品的免疫活性等。標準品穩(wěn)定性的影響因素第21頁，共47頁。定量免疫實驗通常需要使用全自動免疫分析儀，在測定時須用校準品對儀器進行校準。室內(nèi)質(zhì)控則應(yīng)選擇特定試劑盒或方法的測定范圍內(nèi)的高、中和低三種濃度的質(zhì)控品，以監(jiān)測不同濃度標本測定結(jié)果的變化。二、定量、半定量和定性實驗（一）定量實驗

第22頁，共47頁。定量實驗的質(zhì)量控制比較復雜，通常是根據(jù)室內(nèi)質(zhì)控物的測定結(jié)果，采用統(tǒng)計學的原理方法判斷所進行的臨床常規(guī)標本測定是否在控。目前多采用的質(zhì)控方法主要包括：Levey-Jennings（L-J）質(zhì)控圖方法、基線測定、Levey-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法、“即刻法”質(zhì)控方法以及累積和質(zhì)控方法等。第23頁，共47頁。Levey-Jennings質(zhì)控圖第24頁，共47頁。符號意義判定標準12S一個質(zhì)控測定值超出±2s質(zhì)控限。發(fā)出警告，在控13S一個質(zhì)控測定值超出±3s質(zhì)控限。隨機誤差，失控22S兩個連續(xù)質(zhì)控測定值同時超出它們各自的+2s或－2s質(zhì)控限。系統(tǒng)誤差，失控R4S同一批內(nèi)，兩個不同濃度質(zhì)控物的測定值之間的差值超出4s質(zhì)控限。隨機誤差，失控41S四個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時超出+1s或－1s質(zhì)控限。系統(tǒng)誤差，失控10十個連續(xù)的質(zhì)控測定值同時處于均值（）的同一側(cè)。系統(tǒng)誤差，失控Westgard多規(guī)則常用質(zhì)控標準第25頁，共47頁。半定量實驗在免疫檢驗中比較少用，此類實驗主要有酶免疫試驗、熒光免疫試驗等，測定結(jié)果通常以抗體的滴度、效價等表示。半定量免疫檢驗質(zhì)控要點在于采用多個相應(yīng)滴度或效價的抗體作為室內(nèi)質(zhì)控品，與臨床標本同時測定，當然還需要有陰性質(zhì)控。（二）半定量實驗

第26頁，共47頁。定性實驗是免疫學檢驗的重點，其測定方法有很多，常以“有”或“無”也即“陽性”或“陰性”來表達測定結(jié)果。定性測定的室內(nèi)質(zhì)控以低值的質(zhì)控品最為重要，設(shè)置臨界于cutoff值（CO值）的低值弱陽性質(zhì)控物是定性室內(nèi)質(zhì)控的關(guān)鍵。（三）定性實驗

第27頁，共47頁。定性測定判斷陰、陽性時有一個“判斷值”（cutoff值），其質(zhì)控的目的是考察檢測結(jié)果是否準確和穩(wěn)定。定性測定不僅檢測項目多，而且方法類型也多，因此決定采取何種質(zhì)控方法必須要考慮檢測方法的特點，1定性測定質(zhì)控的特點第28頁，共47頁。

三、檢測試劑的批間差異

不同廠家

不同批號

產(chǎn)品的質(zhì)量、技術(shù)含量的區(qū)別

原料來源、純度不同以及生產(chǎn)條件變動對購入的試劑盒應(yīng)進行性能檢測，利用可靠的定值血清檢測試劑盒批間差異的大小，只有質(zhì)量符合實驗要求方可用于實際工作。第29頁，共47頁。引起試劑盒批間變異原因是多方面的。試劑盒的原材料是依靠生物工程技術(shù)生產(chǎn)的，生產(chǎn)技術(shù)要求難度大，工藝提純方法不好掌握，質(zhì)量控制要求較高，產(chǎn)品質(zhì)量不易穩(wěn)定，使每批原材料的純度和活性都有所差別。用不同的提純方法及不同批號的抗原或抗體所制備的試劑質(zhì)量不一樣；同一批號的的原料，不同組裝工藝，其結(jié)果也不盡一樣，組裝工藝相同，質(zhì)量標準控制稍有欠缺，其結(jié)果也會有所差異。第30頁，共47頁。生產(chǎn)技術(shù)難度大

提純方法不好掌握

質(zhì)量控制要求較高產(chǎn)品質(zhì)量不易穩(wěn)定

每批原材料的純度和活性都有所差別

引起試劑盒批間變異原因是多方面的

第31頁，共47頁。由于批間差異的影響，室內(nèi)質(zhì)控只能是一個批號的試劑盒使用一個質(zhì)控框架圖。根據(jù)中、小型檢驗科的工作特點，不利于室內(nèi)質(zhì)控的開展和穩(wěn)定。免疫檢驗室在進購試劑時，要選擇質(zhì)量有保障的正規(guī)試劑產(chǎn)商，建立完善的實驗室內(nèi)質(zhì)量控制體系，盡量減少批間差異使其在規(guī)定的范圍內(nèi)（一般CV<15%），這對長期控制免疫檢測結(jié)果的可靠性大有裨益。第32頁，共47頁。

四、檢測試劑的穩(wěn)定性

由于所用的儀器種類繁多，試劑盒品牌不一，實驗室工作人員業(yè)務(wù)能力的差異等，造成不同實驗室間的測定結(jié)果差異較大。目前臨床免疫檢驗用的試劑盒保質(zhì)期一般為6個月以上，有些檢驗機構(gòu)為了節(jié)約成本，分數(shù)次使用試劑盒，勢必會使酶標抗原處于溶解狀態(tài)保存一定的時間，最后影響試驗結(jié)果。第33頁，共47頁。試劑盒抗體儲存容器應(yīng)由不吸附蛋白質(zhì)的材料制成抗體濃度越高（濃度大于10mg/ml），越穩(wěn)定，易保存；濃度低時，應(yīng)加0.1%~1.5%的牛血清白蛋白作保護劑。酶標記抗體在應(yīng)用防腐劑時要注意不能用NaN3。抗體濃縮液應(yīng)在-20℃保存，避免反復凍融。第34頁，共47頁。35第三節(jié)免疫學實驗常用評價指標臨床上實驗室免疫學檢驗的方法越來越多，如何對各種免疫學實驗的方法進行對比，以評價各種檢測方法的優(yōu)劣，這需要通過一些有效的評價指標來鑒定。第35頁，共47頁。診斷靈敏度（sensitivityofdiagnosis）

反映一項試驗?zāi)軐嶋H有病的人判定為患病的百分率，其值越大，則漏診的可能性愈小。一、診斷靈敏度、特異度和正確診斷指數(shù)

本指標可用于評價測定方法的臨床應(yīng)用價值，理想測定方法的診斷敏感度應(yīng)為100%。第36頁，共47頁。診斷特異度（specificityofdiagnosis）

又稱真陰性，是指一項試驗?zāi)軐嶋H上未患某病的人正確地判定為未患某病的能力。其值越大，則誤診的可能性愈小。本指標是用于評價測定方法的臨床應(yīng)用價值，理想測定方法的診斷特異度應(yīng)為100%。第37頁，共47頁。正確診斷指數(shù)（Youden’sindex）

又稱約登指數(shù)，指將靈敏度和特異度結(jié)合的評價某種免疫學實驗的綜合指標。其值是靈敏度與特異度之和減去1，大小范圍從0到1

正確診斷指數(shù)愈大，實驗的真實性亦愈好。理想實驗方法的正確診斷指數(shù)為1。第38頁，共47頁。Cutoff值是被檢分析物的量值，用于確定結(jié)果高于還是低于臨床或分析決斷點。在選擇Cutoff值和報告檢測結(jié)果時應(yīng)該考慮敏感性和特異性哪個更重要。理想的Cutoff值是實驗室自己在的人群中確定。二、Cutoff值第39頁，共47頁。大多數(shù)免疫分析，來自感染和非感染人群的標本之間有一個檢測結(jié)果的重疊區(qū)，即“灰區(qū)”第40頁，共47頁。使用陰性血清測定結(jié)果均值的2或3倍作為陽性判斷值。測定大量（數(shù)千）正常人血清樣本，然后將所得到的吸光度均值增加2或3個SD作為陽性判斷值。在測定大量正常人血清樣本的同時，測定大量陽性血清樣本，根據(jù)