單胞藻類的實驗室培養(yǎng)課件

微藻的實驗室培養(yǎng)微藻的實驗室培養(yǎng)1藻類的概述培養(yǎng)的方式實驗室培養(yǎng)藻類的概述2綠藻裸藻黃藻藍藻門綠藻裸藻黃藻藍藻門3一、藻類的概述微藻（Microalgae），是原生生物界一類真核生物。藻類植物共約為2100屬,27000種。根據(jù)所含色素、細胞構造、生殖方法和生殖器官構造的不同，分為綠藻門、裸藻門、輪藻門、金藻門、黃藻門、硅藻門、甲藻門、藍藻門、褐藻門和紅藻門。色素的顏色劃分，藻可分為3類：綠藻、褐藻和紅藻單胞藻具有利用太陽光能效率高、營養(yǎng)豐富、生長繁殖迅速、對環(huán)境的適應性強和容易培養(yǎng)等重要特性，因而受到重視。一、藻類的概述微藻（Microalgae），是原生生物界一類4二、微藻的營養(yǎng)模式和生長模式二、微藻的營養(yǎng)模式和生長模式5（二）、微藻的生長模式

藻類在培養(yǎng)過程中，生長繁殖的速度，出現(xiàn)一定的起伏，這種生長模式可劃分為五個時期（延緩期、指數(shù)生長期、相對生長下降期、靜止期、死亡期）（二）、微藻的生長模式藻類在培養(yǎng)過程中，生長繁殖的速度，6三、培養(yǎng)方式按培養(yǎng)的場所分室內(nèi)培養(yǎng)和室外培養(yǎng)按培養(yǎng)基的形態(tài)分固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)按培養(yǎng)的純度分

純種培養(yǎng)

和

單種培養(yǎng)按藻液的流動情況分靜止培養(yǎng)和循環(huán)流動水培養(yǎng)按氣體交換情況分充氣培養(yǎng)和不充氣培養(yǎng)按藻液與外界接觸程度分封閉式培養(yǎng)和開放式培養(yǎng)按培養(yǎng)規(guī)模和目的分小型培養(yǎng)、中繼培養(yǎng)和大量培養(yǎng)三、培養(yǎng)方式按培養(yǎng)的場所分室內(nèi)培養(yǎng)和室外培養(yǎng)7（1）純培養(yǎng)和單種培養(yǎng)純培養(yǎng)（axenicculture）：是無菌培養(yǎng)，指排除了包括細菌在內(nèi)的一切生物的條件下進行的培養(yǎng)。純培養(yǎng)操作要求十分嚴格，要求有無菌室、超凈臺等設備，容器、工具、培養(yǎng)液等均須徹底滅菌。培養(yǎng)成功率很高，是進行科學研究不可缺少的技術。單種培養(yǎng)（single-speciesculture）：指區(qū)別于純培養(yǎng)的不排除細菌存在的培養(yǎng)（可以是生產(chǎn)性的，也可以是非生產(chǎn)性的）（1）純培養(yǎng)和單種培養(yǎng)純培養(yǎng)（axenicculture）8（2）封閉式培養(yǎng)和開放式培養(yǎng)封閉式培養(yǎng)（closedculture）：指把培養(yǎng)液密封在透明的容器中，與外界空氣隔離，暴露在陽光中，CO2完全采用人工供給的方法。各種反應器等開放式培養(yǎng)：指把藻類培養(yǎng)在開敞容器中，如廣口玻璃瓶、水族箱、玻璃鋼水槽、水泥池等。封閉式薄膜裝置（2）封閉式培養(yǎng)和開放式培養(yǎng)封閉式培養(yǎng)（closedcul9單胞藻類的實驗室培養(yǎng)課件10封閉式塑料薄膜袋培養(yǎng)，方法簡單，成本低、培養(yǎng)的藻細胞密度大，不易污染且生產(chǎn)周期短，效果很好單胞藻類的實驗室培養(yǎng)課件11（3）小型培養(yǎng)、中繼培養(yǎng)和大量培養(yǎng)小型培養(yǎng)：一級培養(yǎng)，目的是培養(yǎng)和供應藻種，用于科研等。一般采用封閉式不充氣一次性培養(yǎng)方式，培養(yǎng)容器一般采用100～3000ml的三角燒瓶。中繼培養(yǎng)：又稱二級培養(yǎng)，目的是藻種擴大培養(yǎng)，供應生產(chǎn)性大量培養(yǎng)的藻種。一般在室內(nèi)大的玻璃容器或塑料大袋中進行。（3）小型培養(yǎng)、中繼培養(yǎng)和大量培養(yǎng)小型培養(yǎng)：一級培養(yǎng)，目的是12大量培養(yǎng)：也叫三級培養(yǎng)，目的是為培養(yǎng)動物提供大量單胞藻餌料。有室內(nèi)和室外兩種。目前主要采取室內(nèi)、開放式、通氣、一次性或半連續(xù)培養(yǎng)法，培養(yǎng)容器有大型玻璃鋼水槽、大型水泥池或塑料薄膜袋等（也有用土池）。大量培養(yǎng)：也叫三級培養(yǎng)，目的是為培養(yǎng)動物提供大量單胞藻餌料。13單胞藻生產(chǎn)性擴大培養(yǎng)常用流程500mL藻種5000mL三角燒瓶細口玻璃瓶塑料桶封閉式塑料薄膜水泥池一級培養(yǎng)二級培養(yǎng)三級培養(yǎng)單胞藻生產(chǎn)性擴大培養(yǎng)常用流程500mL藻種5000mL三角燒14實驗室培養(yǎng)過程消毒配制培養(yǎng)液接種培養(yǎng)管理收獲實驗室培養(yǎng)過程消毒151容器、工具和水消毒方法總結一級培養(yǎng)（實驗室的培養(yǎng)）：金屬器具和試管口、瓶口：直接灼燒玻璃器皿：洗液+烘箱紙、棉花、紗布：烘箱培養(yǎng)用水：砂濾水→脫脂棉→煮沸→冷卻洗液：15g重鉻酸鉀+200mg濃硫酸混勻1容器、工具和水消毒方法總結一級培養(yǎng)（實驗室的培養(yǎng)）：16

粒徑厚度細砂0.1mm60～80cm

2～3層網(wǎng)目<0.1mm的篩絹網(wǎng)布粗砂3～4mm8～10cm

1層網(wǎng)目1mm的膠絲網(wǎng)布碎石2.5～3.5cm5～8cm

1層網(wǎng)目1～2mm膠絲網(wǎng)布篩板篩孔2cm5cm粒徑厚17培養(yǎng)用水海水沉淀砂濾脫脂棉燒開冷卻過濾器水消毒池一級培養(yǎng)二、三級培養(yǎng)培養(yǎng)用水海水沉淀砂濾脫脂棉燒開冷卻過濾器水消毒池一級培養(yǎng)二、18培養(yǎng)液的配制

配方極多，每種配方主要適用于一定藻種，這里介紹比較常用的幾種：水生4號和克諾普（Knop）培養(yǎng)液，一般用于綠藻；藍藻可用朱氏10號或水生105號無氮培養(yǎng)基（后者適于固氮藍藻）；硅藻可用朱氏10號和水生硅1號培養(yǎng)基；另外還有海產(chǎn)綠藻、硅藻的培養(yǎng)基。常用培養(yǎng)基配方見下表。培養(yǎng)液的配制配方極多，每種配方主要適用于一定藻種，這19以上用水量都是加至1000mL，海藻培養(yǎng)液用海水，如無海水可用淡水1000mL加30克食鹽代替。如配制固體培養(yǎng)基，可在培養(yǎng)液內(nèi)加入1.5％的瓊脂。以上用水量都是加至1000mL，海藻培養(yǎng)液用海水，如無海水可20藻種的獲得1購買2自行分離藻種的獲得21分離主要有以下幾種方法離心法微吸管（毛細管）分離：將稀釋適度藻液水樣，置淺凹載玻片上，鏡檢。用微吸管挑選要分離的藻體，認真仔細地吸出，放入另一淺凹載片上，鏡檢這一滴水中是否達到純分離的目的稀釋分離法：把含有需要分離的藻類而又混雜有其他生物的水樣，取其一定量，用培養(yǎng)液稀釋。通過稀釋到適宜程度的方法，達到把原混雜生物單個分離培養(yǎng)的目的。平板分離法：這個方法的培養(yǎng)基制備和分離方法，與菌類的平板分離法基本相同，只是培養(yǎng)基配方不同。分離主要有以下幾種方法離心法22稀釋分離法平板分離法稀釋分離法平板分離法231．藻種的選擇：特征：⑴生長迅速；⑵對極端的溫度和輻射條件的耐性范圍大；⑶蛋白質(zhì)，脂類和糖類含量高，或有選擇地積累一種特殊的代謝產(chǎn)物（如甘油）；⑷無毒性，且易于收獲。根據(jù)系統(tǒng)的要求和特殊的方法，還可有其他要求。1．藻種的選擇：242．接種：在分離到單純藻群后，就可接種到培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，進而移養(yǎng)擴大培養(yǎng)。

液體接種：是將藻液直接加入培養(yǎng)液中進行攪拌，水溫較低（10℃以內(nèi)）時，多加；約占培養(yǎng)液總量的30～40％左右，水溫適宜時（25～30℃左右），可加5～8％左右。2．接種：25按種后瓶口用滅菌紙包扎，放在適宜光、溫條件下培養(yǎng)，每天輕輕搖動二次。大約二周后進行一次移植。藻種在培養(yǎng)過程中必須定期用顯微鏡檢查，保持不受其他生物污染。按種后瓶口用滅菌紙包扎，放在適宜光、溫條件下培養(yǎng)，每天輕輕搖263．藻種的保存：

一旦藻種分離得到，就要保存好以便在一定的時間內(nèi)供接種用。為此，要將藻種消毒，避免其他來源的污染。給以適當?shù)墓庹蘸蜏囟?。在液體培養(yǎng)中，為了快速增殖，可用5400lx。再得到良好生長后（1～2周），培養(yǎng)液移到更低的光照條件（540～1100lx），以求緩慢生長及儲藏。3．藻種的保存：274.培養(yǎng)管理：主要是使已接種培養(yǎng)物在相對穩(wěn)定適宜環(huán)境中大量繁殖生長。要注意以下因素：1）二氧化碳濃度在開放式不通氣方法培養(yǎng)中，攪拌是十分必要的，可以增加水和空氣的接觸面，使空氣中二氧化碳溶解到培養(yǎng)液中，而且?guī)椭恋碓孱惣毎细～@得光照。在通氣培養(yǎng)中，培養(yǎng)液內(nèi)應維持二氧化碳濃度在0.1～5％之間。

4.培養(yǎng)管理：主要是使已接種培養(yǎng)物在相對穩(wěn)定適宜環(huán)境中大量繁282）光照強度利用太陽光源培養(yǎng)時，一般在室內(nèi)培養(yǎng)可放在近窗口地方，防止強直射光照射?；蚶萌斯す庠矗?0～100瓦電燈或日光燈），需1500～3000勒克斯/厘米2。3）溫度適溫一般在10～30℃之間，最適溫常為20～25℃。若在室外培養(yǎng)，夏季中午高溫，冬季早晚低溫，常造成不利影響，需設法調(diào)節(jié)。2）光照強度利用太陽光源培養(yǎng)時，一般在室內(nèi)培養(yǎng)可放在近窗口294）無機營養(yǎng)應不斷添加新鮮培養(yǎng)液，及時補充被藻吸收后減少了的某些元素。5）注意pH變化如變動過大，可用酸、堿調(diào)節(jié)。6）適當控制培養(yǎng)物中藻細胞濃度過高會引起光照和無機營養(yǎng)不足，并導致pH上升。一般控制在0.3g（干重）/L范圍內(nèi)。4）無機營養(yǎng)應不斷添加新鮮培養(yǎng)液，及時補充被藻吸收后減少了30收獲根據(jù)水色的由淺變深綠藻類：由嫩綠色變?yōu)樯罹G色硅藻類：由淺褐色變?yōu)樯詈稚鹪孱悾航瘘S色靜止期后的老化藻對擴大培養(yǎng)或投喂都不利收獲根據(jù)水色的由淺變深31thankyou！thankyou！32微藻的實驗室培養(yǎng)微藻的實驗室培養(yǎng)33藻類的概述培養(yǎng)的方式實驗室培養(yǎng)藻類的概述34綠藻裸藻黃藻藍藻門綠藻裸藻黃藻藍藻門35一、藻類的概述微藻（Microalgae），是原生生物界一類真核生物。藻類植物共約為2100屬,27000種。根據(jù)所含色素、細胞構造、生殖方法和生殖器官構造的不同，分為綠藻門、裸藻門、輪藻門、金藻門、黃藻門、硅藻門、甲藻門、藍藻門、褐藻門和紅藻門。色素的顏色劃分，藻可分為3類：綠藻、褐藻和紅藻單胞藻具有利用太陽光能效率高、營養(yǎng)豐富、生長繁殖迅速、對環(huán)境的適應性強和容易培養(yǎng)等重要特性，因而受到重視。一、藻類的概述微藻（Microalgae），是原生生物界一類36二、微藻的營養(yǎng)模式和生長模式二、微藻的營養(yǎng)模式和生長模式37（二）、微藻的生長模式

藻類在培養(yǎng)過程中，生長繁殖的速度，出現(xiàn)一定的起伏，這種生長模式可劃分為五個時期（延緩期、指數(shù)生長期、相對生長下降期、靜止期、死亡期）（二）、微藻的生長模式藻類在培養(yǎng)過程中，生長繁殖的速度，38三、培養(yǎng)方式按培養(yǎng)的場所分室內(nèi)培養(yǎng)和室外培養(yǎng)按培養(yǎng)基的形態(tài)分固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)按培養(yǎng)的純度分

純種培養(yǎng)

和

單種培養(yǎng)按藻液的流動情況分靜止培養(yǎng)和循環(huán)流動水培養(yǎng)按氣體交換情況分充氣培養(yǎng)和不充氣培養(yǎng)按藻液與外界接觸程度分封閉式培養(yǎng)和開放式培養(yǎng)按培養(yǎng)規(guī)模和目的分小型培養(yǎng)、中繼培養(yǎng)和大量培養(yǎng)三、培養(yǎng)方式按培養(yǎng)的場所分室內(nèi)培養(yǎng)和室外培養(yǎng)39（1）純培養(yǎng)和單種培養(yǎng)純培養(yǎng)（axenicculture）：是無菌培養(yǎng)，指排除了包括細菌在內(nèi)的一切生物的條件下進行的培養(yǎng)。純培養(yǎng)操作要求十分嚴格，要求有無菌室、超凈臺等設備，容器、工具、培養(yǎng)液等均須徹底滅菌。培養(yǎng)成功率很高，是進行科學研究不可缺少的技術。單種培養(yǎng)（single-speciesculture）：指區(qū)別于純培養(yǎng)的不排除細菌存在的培養(yǎng)（可以是生產(chǎn)性的，也可以是非生產(chǎn)性的）（1）純培養(yǎng)和單種培養(yǎng)純培養(yǎng)（axenicculture）40（2）封閉式培養(yǎng)和開放式培養(yǎng)封閉式培養(yǎng)（closedculture）：指把培養(yǎng)液密封在透明的容器中，與外界空氣隔離，暴露在陽光中，CO2完全采用人工供給的方法。各種反應器等開放式培養(yǎng)：指把藻類培養(yǎng)在開敞容器中，如廣口玻璃瓶、水族箱、玻璃鋼水槽、水泥池等。封閉式薄膜裝置（2）封閉式培養(yǎng)和開放式培養(yǎng)封閉式培養(yǎng)（closedcul41單胞藻類的實驗室培養(yǎng)課件42封閉式塑料薄膜袋培養(yǎng)，方法簡單，成本低、培養(yǎng)的藻細胞密度大，不易污染且生產(chǎn)周期短，效果很好單胞藻類的實驗室培養(yǎng)課件43（3）小型培養(yǎng)、中繼培養(yǎng)和大量培養(yǎng)小型培養(yǎng)：一級培養(yǎng)，目的是培養(yǎng)和供應藻種，用于科研等。一般采用封閉式不充氣一次性培養(yǎng)方式，培養(yǎng)容器一般采用100～3000ml的三角燒瓶。中繼培養(yǎng)：又稱二級培養(yǎng)，目的是藻種擴大培養(yǎng)，供應生產(chǎn)性大量培養(yǎng)的藻種。一般在室內(nèi)大的玻璃容器或塑料大袋中進行。（3）小型培養(yǎng)、中繼培養(yǎng)和大量培養(yǎng)小型培養(yǎng)：一級培養(yǎng)，目的是44大量培養(yǎng)：也叫三級培養(yǎng)，目的是為培養(yǎng)動物提供大量單胞藻餌料。有室內(nèi)和室外兩種。目前主要采取室內(nèi)、開放式、通氣、一次性或半連續(xù)培養(yǎng)法，培養(yǎng)容器有大型玻璃鋼水槽、大型水泥池或塑料薄膜袋等（也有用土池）。大量培養(yǎng)：也叫三級培養(yǎng)，目的是為培養(yǎng)動物提供大量單胞藻餌料。45單胞藻生產(chǎn)性擴大培養(yǎng)常用流程500mL藻種5000mL三角燒瓶細口玻璃瓶塑料桶封閉式塑料薄膜水泥池一級培養(yǎng)二級培養(yǎng)三級培養(yǎng)單胞藻生產(chǎn)性擴大培養(yǎng)常用流程500mL藻種5000mL三角燒46實驗室培養(yǎng)過程消毒配制培養(yǎng)液接種培養(yǎng)管理收獲實驗室培養(yǎng)過程消毒471容器、工具和水消毒方法總結一級培養(yǎng)（實驗室的培養(yǎng)）：金屬器具和試管口、瓶口：直接灼燒玻璃器皿：洗液+烘箱紙、棉花、紗布：烘箱培養(yǎng)用水：砂濾水→脫脂棉→煮沸→冷卻洗液：15g重鉻酸鉀+200mg濃硫酸混勻1容器、工具和水消毒方法總結一級培養(yǎng)（實驗室的培養(yǎng)）：48

粒徑厚度細砂0.1mm60～80cm

2～3層網(wǎng)目<0.1mm的篩絹網(wǎng)布粗砂3～4mm8～10cm

1層網(wǎng)目1mm的膠絲網(wǎng)布碎石2.5～3.5cm5～8cm

1層網(wǎng)目1～2mm膠絲網(wǎng)布篩板篩孔2cm5cm粒徑厚49培養(yǎng)用水海水沉淀砂濾脫脂棉燒開冷卻過濾器水消毒池一級培養(yǎng)二、三級培養(yǎng)培養(yǎng)用水海水沉淀砂濾脫脂棉燒開冷卻過濾器水消毒池一級培養(yǎng)二、50培養(yǎng)液的配制

配方極多，每種配方主要適用于一定藻種，這里介紹比較常用的幾種：水生4號和克諾普（Knop）培養(yǎng)液，一般用于綠藻；藍藻可用朱氏10號或水生105號無氮培養(yǎng)基（后者適于固氮藍藻）；硅藻可用朱氏10號和水生硅1號培養(yǎng)基；另外還有海產(chǎn)綠藻、硅藻的培養(yǎng)基。常用培養(yǎng)基配方見下表。培養(yǎng)液的配制配方極多，每種配方主要適用于一定藻種，這51以上用水量都是加至1000mL，海藻培養(yǎng)液用海水，如無海水可用淡水1000mL加30克食鹽代替。如配制固體培養(yǎng)基，可在培養(yǎng)液內(nèi)加入1.5％的瓊脂。以上用水量都是加至1000mL，海藻培養(yǎng)液用海水，如無海水可52藻種的獲得1購買2自行分離藻種的獲得53分離主要有以下幾種方法離心法微吸管（毛細管）分離：將稀釋適度藻液水樣，置淺凹載玻片上，鏡檢。用微吸管挑選要分離的藻體，認真仔細地吸出，放入另一淺凹載片上，鏡檢這一滴水中是否達到純分離的目的稀釋分離法：把含有需要分離的藻類而又混雜有其他生物的水樣，取其一定量，用培養(yǎng)液稀釋。通過稀釋到適宜程度的方法，達到把原混雜生物單個分離培養(yǎng)的目的。平板分離法：這個方法的培養(yǎng)基制備和分離方法，與菌類的平板分離法基本相同，只是培養(yǎng)基配方不同。分離主要有以下幾種方法離心法54稀釋分離法平板分離法稀釋分離法平板分離法551．藻種的選擇：特征：⑴生長迅速；⑵對極端的溫度和輻射條件的耐性范圍大；⑶蛋白質(zhì)，脂類和糖類含量高，或有選擇地積累一種特殊的代謝產(chǎn)物（如甘油）；⑷無毒性，且易于收獲。根據(jù)系統(tǒng)的要求和特殊的方法，還可有其他要求。1．藻種的選擇：562．接種：在分離到單純藻群后，就可接種到培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，進而移養(yǎng)擴大培養(yǎng)。

液體接種：是將藻液直接加入培養(yǎng)液中進行攪拌，水溫較低（10℃以內(nèi)）時，多加；約占培養(yǎng)液總量的30～40％左右，水溫適宜時（25～30℃左右），可加5～8％左右。2．接種：57按種后瓶口用滅菌紙包扎，放在適宜光、溫條件下培養(yǎng)，每天輕輕搖動二次。大約二周后進行一次移植。藻種在培養(yǎng)過程中必須定期用顯微鏡檢查，保持不受其他生物污染。按種后瓶口用滅菌紙包扎，放在適宜光、溫條件下培養(yǎng)，每天輕輕搖583．藻種的保存：

一旦藻