菊花的組織培養(yǎng)

關(guān)于菊花的組織培養(yǎng)第1頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六課題1菊花的組織培養(yǎng)第2頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六第3頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六1、熟悉植物組織培養(yǎng)的基本過程2、了解植物組織培養(yǎng)的影響因素3、掌握植物組織培養(yǎng)的操作過程

示標(biāo)第4頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六什么是細(xì)胞分化？細(xì)胞分化的原因和結(jié)果？.植物組織培養(yǎng)應(yīng)用的理論基礎(chǔ)是什么?愈傷組織是怎樣形成的？有什么特點？組織培養(yǎng)的過程？脫分化、再分化？植物組織培養(yǎng)的基本過程影響組織培養(yǎng)的因素？菊花組織培養(yǎng)的過程，及注意的問題？躬學(xué)第5頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六1、細(xì)胞分化2、細(xì)胞的全能性3、愈傷組織4、脫分化5、再分化6、外植體需要了解的幾個概念第6頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六1、細(xì)胞分化：植物的個體發(fā)育過程中，細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上都會出現(xiàn)穩(wěn)定性的差異，形成這些差異的過程就叫做細(xì)胞分化。細(xì)胞分化是基因選擇性表達(dá)的結(jié)果。2、細(xì)胞的全能性：已分化的植物細(xì)胞仍然具有發(fā)育成為完整個體的潛能。3、愈傷組織：由離體的植物器官、組織或細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下經(jīng)過脫分化過程形成的組織，就叫愈傷組織，愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。4、脫分化：由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為脫分化，又叫去分化。5、再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個過程叫做再分化。6、外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。第7頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六愈傷組織：離體的植物器官、組織或細(xì)胞通過脫分化形成的疏松而無規(guī)則的，高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的,未分化的薄壁細(xì)胞2-3周，愈傷組織開始形成。第8頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六再分化：愈傷組織繼續(xù)培養(yǎng)，重新分化成根和芽等器官的過程。

3-5周之后，誘導(dǎo)出的新葉片和芽。第9頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六離體的植物器官、組織、細(xì)胞脫分化愈傷組織再分化根芽植物體植物組織培養(yǎng)的基本過程第10頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六（二）影響植物組織培養(yǎng)的因素

材料的選擇、營養(yǎng)成分、激素、一定的外界因素（溫度、空氣、無菌環(huán)境、適合的PH、適時光照等）。第11頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六MS固體培養(yǎng)基成分及比例同微生物培養(yǎng)基相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？第12頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六

微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng)，無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。閱讀課文，思考以下問題1.同微生物培養(yǎng)基相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同？2、你認(rèn)為組織培養(yǎng)過程中，成功的關(guān)鍵有哪些？這些步驟的適宜條件是什么？

組織的脫分化及愈傷組織的再分化。

植物組織培養(yǎng)過程中，影響植物細(xì)胞脫分化、再分化的最重要因素是植物激素。第13頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六激素配比對組織培養(yǎng)的影響在培養(yǎng)基中需要添加生長素和細(xì)胞分裂素等植物激素，其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。

高利于根分化、抑制芽的形成生長素/細(xì)胞分裂素低利于芽的形成適中利于愈傷組織的形成

第14頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六活動2：用自己的話把菊花組織培養(yǎng)的操作流程給描述出來?（提示：怎樣配制MS培養(yǎng)基?外植體消毒應(yīng)如何進(jìn)行?接種、培養(yǎng)、移栽時應(yīng)注意什么問題?）第15頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六二、實驗操作（一）制備MS培養(yǎng)基（二）外植體消毒（三）接種（四）培養(yǎng)（五）移栽（六）栽培實驗操作流程：第16頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六2、實驗具體操作二、實驗操作（1）制備MS固體培養(yǎng)基

實驗室一般使用_____℃保存的配制好的培養(yǎng)基母液來制備①配制各種母液

配制母液時，大量元素濃縮__________，微量元素濃縮__________，常溫保存。激素類、維生素類以及用量比較小的有機物可以按照__________的質(zhì)量濃度單獨配制母液。

用母液配制培養(yǎng)基時，需要根據(jù)各種母液的濃縮倍數(shù)，計算用量。1mg/ml410倍100倍第17頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六二、實驗操作②配制培養(yǎng)基。2、實驗具體操作（1）.制備MS固體培養(yǎng)基實驗室一般使用_____℃保存的配制好的培養(yǎng)基母液來制備4植物激素在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加_________________，原因是菊花莖段組織培養(yǎng)___________________。比較容易配制培養(yǎng)液調(diào)PH培養(yǎng)基的分裝第18頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六二、實驗操作③滅菌將分裝好的培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行_________________。2、實驗具體操作（1）.制備MS固體培養(yǎng)基實驗室一般使用_____℃保存的配制好的培養(yǎng)基母液來制備4高壓蒸汽滅菌第19頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六2、實驗具體操作二、實驗操作（2）外植體消毒

①選取菊花莖段時，要取________________。流水沖洗酒精無菌水氯化汞無菌水②消毒流程：濃度______搖動_____次時間_____s濃度______時間_____min至少清洗___次漂凈_______生長旺盛的嫩枝70%2～36～70.1%1～23消毒液第20頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六不是。對外植體進(jìn)行表面消毒時，既要考慮到消毒效果，又要考慮到植物的耐受能力。

在外植體消毒過程中，是不是強度越大越好，為什么？

思考？第21頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六2、實驗具體操作二、實驗操作（3）接種

①前期準(zhǔn)備：用_________________消毒工作臺，點燃酒精燈。所有工作都必須在酒精燈旁進(jìn)行，器械使用前后都要用_________________滅菌。②接種操作：插入外植體時_________________端朝上，每個錐形瓶接種_________________個外植體。70％的酒精火焰灼燒形態(tài)學(xué)上6～8第22頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六你打算做幾組重復(fù)？你打算設(shè)置對照實驗嗎？思考？

每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對照實驗可以取用一個經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng)，用以說明培養(yǎng)基制作合格，沒有被雜菌污染。第23頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六2、實驗具體操作二、實驗操作（4）培養(yǎng)

接種后的錐形瓶最好放在__________中培養(yǎng)。培養(yǎng)期間定期進(jìn)行_________，溫度控制在_________℃，并且每天用日光燈光照_________h。無菌箱18～2212消毒了解：光照條件第24頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六2、實驗具體操作二、實驗操作（5）移栽

移栽生根的試管苗之前，應(yīng)先打開封口膜，在培養(yǎng)間生長幾日；然后用流水清洗___________，將幼苗移植到____________________等環(huán)境中生活一段時間，進(jìn)行壯苗。最后進(jìn)行露天栽培。根部培養(yǎng)基消過毒的蛭石或珍珠巖第25頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈——灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時間。在整個操作過程中，是如何來實現(xiàn)無菌環(huán)境的？思考？第26頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六三、結(jié)果分析與評價（一）對接種操作中污染情況的分析（二）是否完成了對植物組織的脫分化和再分化（三）是否進(jìn)行了統(tǒng)計、對照與記錄（四）生根苗的移栽是否合格第27頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六外植體在培養(yǎng)過程中可能會被污染，你認(rèn)為造成污染的原因有哪些？污染物如何處理？思考？第28頁，共32頁，2022年，5月20日，7點34分，星期六1、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底3、接種操作時帶入4、環(huán)境不清潔結(jié)合錄像外植體滅菌與接種操作，談?wù)劷M織培養(yǎng)污染的主要途徑及怎樣預(yù)防污