XXXX年版藥典附錄無菌檢查和微生物限度檢查法增修訂內(nèi)容

2010年版藥典附錄無菌檢查和微生物

限度檢查方法增修定內(nèi)容起草的指導思想一、以科學發(fā)展觀為統(tǒng)領，服務于資源節(jié)約型社會、環(huán)境友好型社會的要求；落實科學監(jiān)管理念，著力解決發(fā)展中的問題。二、與時俱進，廣泛吸納先進技術(shù)與成果；堅持自主與創(chuàng)新；積極推進藥品標準化戰(zhàn)略，提高我國藥品標準總體水平，著力提升《中國藥典》在國際社會中的地位和作用，提高綜合競爭力，促進醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，為構(gòu)建社會主義和諧社會作出貢獻。2010年版無菌檢查法增修訂內(nèi)容一、進一步確定了無菌檢查法的定義：無菌檢查法系用于檢查要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料、及其他品種是否無菌的一種方法。二、進一步明確了無菌檢查保障1、檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染，但采用的措施不得影響微生物的生長。2、無菌檢查要進行環(huán)境檢測增加了日常檢驗還需進行環(huán)境檢測。3、無菌檢查人員必須具備微生物專業(yè)知識，并經(jīng)過無菌技術(shù)的培訓。無菌檢查儀器無菌檢查儀無菌濾杯三、培養(yǎng)基增修訂內(nèi)容⒈刪去硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基的使用范圍。⒉刪去選擇性培養(yǎng)基使用的表面活性劑種類對氨基苯甲酸、聚山梨酯-80等

培養(yǎng)基適用性檢查增修訂內(nèi)容

3、培養(yǎng)基靈敏度試驗⑴菌懸液制備中黑曲霉菌懸液的制備修改為“用適宜的方法吸出孢子懸液”。⑵在稀釋液0.9%無菌氯化鈉溶液中加入0.05％v/v）聚山梨酯80。

四、試驗稀釋液、沖洗液增修訂為⒈增加根據(jù)供試品的特性，可選用其他經(jīng)驗證過的適宜的溶液作為稀釋液、沖洗液。⒉試驗中使用的中和劑、滅活劑和表面活性劑除證明其有效性外還應證明對污染的微生物無影響修改為無毒性。五、方法驗證試驗增修訂內(nèi)容

⒈試驗菌株刪除銅綠假單胞菌增加大腸埃希菌及大腸埃希菌菌液的制備(同金黃色葡萄球菌)。⒉薄膜過濾法供試品用量將規(guī)定量供試品按薄膜過濾法過濾修改為取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量。六、供試品的無菌檢查增修訂內(nèi)容⒈檢驗量直接接種法除另有規(guī)定外，每份培養(yǎng)基接種的供試品量按表2、表3規(guī)定刪除，采用直接接種法時的規(guī)定。2.陰性對照無菌試驗中若使用表面活性劑等應證明其有效性且對微生物生長無影響修改為無毒性。⒊薄膜過濾法①增加了抗生素供試品濾膜選擇的指導應選擇低吸附的濾器及濾膜。②若需要沖洗濾膜,每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，且沖洗量不宜過大修改為總沖洗量不得超過1000ml。⑴水溶液供試品含抑菌成分需用適量的沖洗液沖洗膜修改為所用的沖洗量、沖洗方法同方法驗證試驗.微生生物物限限度度檢檢查查增增修修定定內(nèi)內(nèi)容容修改改內(nèi)內(nèi)容容1、培培養(yǎng)養(yǎng)條條件件控控制制菌菌培培養(yǎng)養(yǎng)溫溫度度35℃～～37℃修改改為為30℃～～35℃。限度度檢檢查查（（薄膜膜過過濾濾儀儀器器））2、檢檢驗驗量量增增修修訂訂內(nèi)內(nèi)容容⑴中中藥藥膜膜劑劑檢檢驗驗量量50cm2修改改為為100cm2。⑵沙沙門門菌菌檢檢驗驗量量修修改改為為檢檢驗驗量量為為20g或20ml并注注明明（（其其中中10g用于于陽陽性性對對照照））。。3、供供試試液液的的制制備備增增修修訂訂內(nèi)內(nèi)容容⑴供供試試品品檢檢查查時時使使用用表表面面活活性性劑劑應應證證明明其其對對微微生生物物生生長長和和存存活活無無影影響響修修改改為為無無毒毒性性。。⑵供供試試液液的的制制備備若若需需加加溫溫時時，，可可采采用用其其他他經(jīng)經(jīng)驗驗證證的的方方法法，，但但應應均均勻勻加加熱熱，，且且溫溫度度不不應應超超過過45℃。。4.具具抑抑菌菌活活性性的的供供試試品品增增修修訂訂內(nèi)內(nèi)容容刪除除應應消消除除供供試試液液的的抑抑菌菌活活性性修修改改為為當當供供試試品品具具有有抑抑菌菌活活性性時時，，應應盡盡量量選選擇擇操操作作簡簡便便、、快快速速的的方方法法，，應應避避免免損損傷傷供供試試品品中中污污染染的的微微生生物物。。在在供供試試品品溶溶液液性性狀狀允允許許的的情情況況下下，，應應盡盡量量選選用用薄薄膜膜過過濾濾法法。。①離離心心沉沉淀淀集集菌菌法法兩次次離離心心修修改改為為一一次次離離心心；；500轉(zhuǎn)/分離心心，不不超過過3分鐘，，取全全部上上清液液用于于檢查查。適用范范圍⒈僅使使用于于微生生物限限度檢檢查供供試液液的制制備。。⒉盡量量避免免使用用，不不可使使用快快速離離心。。5.細細菌、、霉菌菌及酵酵母菌菌計數(shù)數(shù)增修修訂內(nèi)內(nèi)容⒈新增增計數(shù)數(shù)培養(yǎng)養(yǎng)基的的適用用性檢檢查⑴菌種種大腸埃埃希菌菌（Escherichiacoli）〔CMCC（B）44102〕金黃色色葡萄萄球菌菌（Staphylococcusaureus）〔CMCC（B）26003〕枯草芽芽孢桿桿菌（Bacillussubtilis）〔CMCC（B）63501〕白色念念珠菌菌（Candidaalbicans）〔CMCC（F）98001〕黑曲霉霉（Aspergillusniger）〔CMCC（F）98003〕①增加加了菌菌懸液液的制制備及及保存存條件件。菌懸液液制備備后在在室溫溫下放放置應應在2小時內(nèi)內(nèi)使用用，若若保存存在2～8℃可以在在24小時內(nèi)內(nèi)使用用。黑黑曲霉霉孢子子懸液液可保保存在在2～8℃，在驗驗證過過的貯貯存期期內(nèi)使使用，，每株株試驗驗菌平平行制制備2個平皿皿，混混勻，，凝固固，按按規(guī)定定條件件培養(yǎng)養(yǎng)計數(shù)數(shù)，同同時用用相應應的對對照培培養(yǎng)基基替代代被檢檢培養(yǎng)養(yǎng)基進進行上上述試試驗。。②增加加了對對照培培養(yǎng)。。6、供試試品檢檢查增增修訂訂內(nèi)容容⑴平皿皿法刪刪去采采用平平皿法法進行行菌數(shù)數(shù)測定定時，，連續(xù)續(xù)2～3個稀釋釋級的的供試試液。。修改為為按計計數(shù)方方法的的驗證證試驗驗確認認的程程序進進行供供試液液制備備。⑵培養(yǎng)養(yǎng)時間間修改改內(nèi)容容除另有有規(guī)定定外，，細菌菌培養(yǎng)養(yǎng)48小時改改為3天，霉霉菌、、酵母母菌培培養(yǎng)72小時改改為5天，必必要時時，可可適當當延長長培養(yǎng)養(yǎng)時間間至7天進行行菌落落計數(shù)數(shù)并報報告。。⑶菌數(shù)數(shù)報告告規(guī)則則增修修訂內(nèi)內(nèi)容⒈若同同稀釋釋級兩兩個平平板的的菌落落平均均數(shù)不不小于于15，則兩兩個平平板的的菌落落數(shù)不不能相相差1倍或以以上。。⒉細菌菌、酵酵母菌菌和霉霉菌平平均菌菌落數(shù)數(shù)在30～300、30～100之間的的稀釋釋級修修改為為選取取菌落落數(shù)小小于300cfu和100cfu的稀釋釋級作作為菌菌數(shù)報報告的的依據(jù)據(jù)。⑷薄膜膜過濾濾法增增修訂訂內(nèi)容容新增內(nèi)內(nèi)容采采用其其它直直徑的的濾膜膜，沖沖洗量量應相相應的的進行行調(diào)整整（如如使用用膜直直徑增增大沖沖洗液液量也也應相相應增增加，，可保保證沖沖洗液液覆蓋蓋整個個濾膜膜）。。增加了了白色色念珠珠菌檢檢驗方方法增菌培培養(yǎng)沙氏葡葡萄糖糖肉湯湯培養(yǎng)養(yǎng)基。。分離培培養(yǎng)劃線接接種于于沙氏氏葡萄萄糖瓊瓊脂培培養(yǎng)基基平板板上。。鑒定試試驗典型菌菌落⒈沙氏葡葡萄糖糖瓊脂脂培養(yǎng)養(yǎng)基菌落呈呈乳白白色偶偶見淡淡黃色色，表表面光光滑有有濃酵母氣氣味，，時間間稍久久則菌菌落增增大，，顏色色變深、質(zhì)質(zhì)地變變硬或或有皺皺摺。。⒉念珠菌菌顯色色培養(yǎng)養(yǎng)基菌落呈呈綠色色或翠翠綠色色菌落落生長長。⒋確認認試驗驗取1%吐溫80-玉米瓊瓊脂培培養(yǎng)基基培養(yǎng)養(yǎng)物進進行染染色，，鏡檢檢及芽芽管試試驗。。結(jié)果判判斷非革蘭蘭陽性性菌，，顯微微鏡下下未見見厚膜膜孢子子、假假菌絲絲、芽芽管判判未檢檢出白白色念念珠菌菌三、藥品微微生物物檢驗驗替代代方法法驗證證指導導原則則⒈目的的⑴是為為所采采用的的試驗驗方法法能否否替代代藥典典規(guī)定定的方法用用于藥藥品微微生物物的檢檢驗提提供指指導。。⑵在控控制藥藥品微微生物物質(zhì)量量中，，需要要采用用替代代方法時，，應進進行方方法的的驗證證，確確認其其應用用效果果優(yōu)于或等同于于藥典的的方法法。⒉微生生物檢檢驗的的類型型及驗驗證參參數(shù)藥品微微生物物檢驗驗方法法主要要分兩兩種類類型定性試試驗定定量試試驗⒊生物物試驗驗的特特殊性性抽樣誤誤差操操作誤誤差稀稀釋誤誤差培培養(yǎng)誤誤差計量誤誤差計計數(shù)誤誤差藥品質(zhì)質(zhì)量標標準分分析方方法驗驗證指指導原原則不不完全全宜于微微生物物替代代方法法的驗驗證。。培養(yǎng)基基培養(yǎng)基基是微微生物物試驗驗的基基礎，，直接接影響微生生物試試驗結(jié)結(jié)果。。適宜宜的培培養(yǎng)基基制備備方法法、貯貯藏條條件和和質(zhì)量量控制制試驗驗是提提供優(yōu)優(yōu)質(zhì)培培養(yǎng)基基的保保證。。該指導導原則則對培培養(yǎng)基基的制制備、、儲存存、滅滅菌及及質(zhì)量量控制制進行行了指指導。。培養(yǎng)基基的制制備⒈容器器⒉溶劑劑⒊管理理應形形成程程序化化管理理培養(yǎng)基基的制制備方方法稱量配配制制分分裝pH應應確定定培養(yǎng)養(yǎng)基滅滅菌后后的pH（（冷卻卻至室室溫25℃℃測定定）。。PH的范范圍不不能超超過規(guī)規(guī)定的的0.2。。培養(yǎng)基基的貯貯藏⒈商品品化培培養(yǎng)基基應根根據(jù)使使用說說明書書上的的要求求進行行儲存存。脫脫水培培養(yǎng)基基或單單獨配配方組組分應應在適適當?shù)牡臈l件件下貯貯存，，如低低溫、、干燥燥和避避光，，所有有的容容器應應密閉閉，尤尤其是是盛有有脫水水培養(yǎng)養(yǎng)基的的容器器.⒉自配配的培培養(yǎng)基基應標標記名名稱、、批號號、配配制日日期等等信息息，并并在已已驗證證的條條件下下貯藏藏。⒊培養(yǎng)養(yǎng)基滅滅菌后后應立立即取取出，，不得得儲藏藏在高高壓滅滅菌器器中，，避免免影響響培養(yǎng)養(yǎng)基的的質(zhì)量量。⒋保存存于密密閉容容器中中，避避光保保存，，可防防止水水分流流失以以延長長保存存時間間。瓊瓊脂平平板最最好現(xiàn)現(xiàn)配現(xiàn)現(xiàn)用，，如置置冰箱箱保存存，一一般不不超過過一周周，且且應密密閉包包裝，，若延延長保保存，，保存存期需需經(jīng)驗驗證確確定。。⒌固體體培養(yǎng)養(yǎng)基滅滅菌后后的再再融化化應在在加熱熱的水水浴中中或采采用流流通蒸蒸汽進進行，，只允允許一一次，，融化化的培培養(yǎng)基基應放放在45～～50℃的的水浴浴中，，不得得超過過8小小時。。⒍使用用過的的培養(yǎng)養(yǎng)基（（包括括失效效的培培養(yǎng)基基）應應按照照國家家污染染廢物物