基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件

21、沒(méi)有人陪你走一輩子，所以你要適應(yīng)孤獨(dú)，沒(méi)有人會(huì)幫你一輩子，所以你要奮斗一生。22、當(dāng)眼淚流盡的時(shí)候，留下的應(yīng)該是堅(jiān)強(qiáng)。23、要改變命運(yùn)，首先改變自己。24、勇氣很有理由被當(dāng)作人類德性之首，因?yàn)檫@種德性保證了所有其余的德性。--溫斯頓．丘吉爾。25、梯子的梯階從來(lái)不是用來(lái)擱腳的，它只是讓人們的腳放上一段時(shí)間，以便讓別一只腳能夠再往上登?；蚬こ痰闹饕僮骷夹g(shù)及原理基因工程的主要操作技術(shù)及原理21、沒(méi)有人陪你走一輩子，所以你要適應(yīng)孤獨(dú)，沒(méi)有人會(huì)幫你一輩子，所以你要奮斗一生。22、當(dāng)眼淚流盡的時(shí)候，留下的應(yīng)該是堅(jiān)強(qiáng)。23、要改變命運(yùn)，首先改變自己。24、勇氣很有理由被當(dāng)作人類德性之首，因?yàn)檫@種德性保證了所有其余的德性。--溫斯頓．丘吉爾。25、梯子的梯階從來(lái)不是用來(lái)擱腳的，它只是讓人們的腳放上一段時(shí)間，以便讓別一只腳能夠再往上登?；蚬こ痰闹饕僮骷夹g(shù)及原理基因工程的主要操作技術(shù)及原理DNA提取口慈DNA提取■1、植物總DNA提取■2、動(dòng)物悉DNA提取■3、大腸桿黃DNA提取4、質(zhì)粒DNA提取一名英語(yǔ)教師幾個(gè)班級(jí)連續(xù)三年帶下來(lái)，都有這樣的感受，初一的課堂學(xué)生熱情似火，爭(zhēng)先恐后回答問(wèn)題，或者是還未等同學(xué)作答已急迫地將自己的答案響亮報(bào)出；到了初二，學(xué)生熱情雖然有所減退，但大部分學(xué)生還是能積極參與到課堂活動(dòng)中；而到了初三，情況出現(xiàn)了戲劇性的轉(zhuǎn)變：大多數(shù)學(xué)生開(kāi)始“沉默是金”，有些學(xué)生即使知道也懶得回答，生怕別人嘲笑，雖經(jīng)老師極力鼓勵(lì)，舉手發(fā)言者仍寥寥無(wú)幾，沉悶、尷尬的課堂氛圍使師生彼此都深感無(wú)味。這種現(xiàn)象最終將影響課堂教學(xué)效果。因而深入分析初三英語(yǔ)課堂中學(xué)生參與度低的原因，并提出合理解決途徑具有重要的研究意義和實(shí)際價(jià)值。一、原因分析1.傳統(tǒng)的教育理念的影響新課程實(shí)施以來(lái)，教師在思想上接受了新觀念的洗禮，大家對(duì)新課程的基本理念已了然于心。新課程強(qiáng)調(diào)要從學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣、生活經(jīng)驗(yàn)和認(rèn)知水平出發(fā)，倡導(dǎo)體驗(yàn)、實(shí)踐、參與、合作與交流的學(xué)習(xí)方式和任務(wù)型的教學(xué)途徑，發(fā)展學(xué)生的綜合語(yǔ)言運(yùn)用能力。然而在實(shí)際的課堂教學(xué)中，教師是不是遵循了新課程的理念呢？還是依舊停留在紙上談兵的階段呢？長(zhǎng)期以來(lái)，許多初三老師在中考指揮棒的壓迫下，在學(xué)校追求升學(xué)率的壓力下，為了省時(shí)間、趕速度，不得已以犧牲學(xué)生開(kāi)口說(shuō)話的機(jī)會(huì)為代價(jià)，導(dǎo)致課堂上老師講得越來(lái)越多，學(xué)生說(shuō)得越來(lái)越少，這嚴(yán)重違背了新課程“以學(xué)生為主體，發(fā)展學(xué)生綜合語(yǔ)言運(yùn)用能力”的理念。這種以教師為中心的理念禁錮了學(xué)生的思維，是引發(fā)學(xué)生沉默課堂的導(dǎo)火索。大部分情況下，學(xué)生無(wú)法突破傳統(tǒng)的思維，去發(fā)揮自我能動(dòng)性，只能機(jī)械式地聽(tīng)從教師的安排，缺乏活力。久而久之，學(xué)生便漸漸失去了用英語(yǔ)交流的愿望。2.學(xué)生的心理因素中學(xué)生正處于青春發(fā)育期，內(nèi)心世界越來(lái)越豐富。這個(gè)年段的學(xué)生也比較敏感，很在乎別人對(duì)自己的看法。加之受中國(guó)傳統(tǒng)文化的影響，學(xué)生不愿意積極主動(dòng)地表現(xiàn)自己，怕被其他同學(xué)認(rèn)為是“愛(ài)出風(fēng)頭”，“愛(ài)表現(xiàn)”，同時(shí)也怕答錯(cuò)問(wèn)題，在同學(xué)面前丟面子。究其原因主要是他們對(duì)自己信心不足。許多學(xué)生即使知道答案也不敢回答，缺乏在別人面前講英語(yǔ)的勇氣。二、初三學(xué)生課堂參與度提高的對(duì)策1.教師要改變觀念，提升個(gè)人素質(zhì)語(yǔ)言是用來(lái)交流的，師生間沒(méi)有了交流，語(yǔ)言也就失去了它存在的意義。教師如果一味地向中考看齊，向分?jǐn)?shù)看齊，最終學(xué)生只能淪為應(yīng)試教育的犧牲品，做題目的機(jī)器，因此為了學(xué)生的終身發(fā)展，教師必須改變這種只顧眼前利益，不顧長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展的觀念。同時(shí)，教師應(yīng)努力提高自身的素質(zhì)，堅(jiān)持用英語(yǔ)來(lái)組織教學(xué)，盡可能地為學(xué)生創(chuàng)造英語(yǔ)學(xué)習(xí)的優(yōu)良?jí)木?。教師要結(jié)合日常生活實(shí)際和學(xué)生實(shí)際精心設(shè)計(jì)語(yǔ)言情景，在語(yǔ)言實(shí)踐活動(dòng)中，教師要注意力求使自己的英語(yǔ)語(yǔ)言規(guī)范、地道。有時(shí)也可借助體態(tài)、手勢(shì)等幫助學(xué)生聽(tīng)懂、理解。提問(wèn)是教師應(yīng)具備的重要的教學(xué)技能之一，教師應(yīng)根據(jù)所要呈現(xiàn)的教學(xué)內(nèi)容設(shè)計(jì)相應(yīng)的問(wèn)題。在提問(wèn)過(guò)程中，盡量照顧到不同層次的學(xué)生，提高學(xué)生的參與度。同時(shí)就學(xué)生的回答，做出相應(yīng)的評(píng)價(jià)。這不僅使學(xué)生知道自己的學(xué)習(xí)狀況，還可以改進(jìn)其學(xué)習(xí)動(dòng)機(jī)并建立良好的課堂氣氛。2.營(yíng)造積極，有利的教學(xué)環(huán)境和諧融洽的師生關(guān)系，可以使師生之間產(chǎn)生一種很強(qiáng)的親和力，這種親和力可以使學(xué)生更加親近老師，信任老師，從而教與學(xué)的雙邊互動(dòng)就更容易開(kāi)展。首先，教師要帶著微笑進(jìn)課堂，這樣可以消除學(xué)生的緊張情緒，放松對(duì)老師的戒備。試想，如果一個(gè)老師老是板著臉，動(dòng)不動(dòng)就訓(xùn)人，學(xué)生還愿意跟他交流嗎？其次，教師要多與學(xué)生談心，了解他們的興趣，愛(ài)好，喜怒哀樂(lè)，在他們有困難時(shí)，及時(shí)提供幫助，讓他們感覺(jué)到你時(shí)時(shí)處處在關(guān)心著他們，關(guān)注著他們。那么在上課時(shí)，就能與學(xué)生打成一片。你的一個(gè)眼神，一個(gè)動(dòng)作，都會(huì)激起學(xué)生一次次的參與。再次，對(duì)學(xué)生開(kāi)口過(guò)程中出現(xiàn)的失誤和錯(cuò)誤要以寬容的態(tài)度，盡量采用溫和的方式加以糾正，而不是簡(jiǎn)單地用“NO”來(lái)否定他們，這樣會(huì)嚴(yán)重挫傷學(xué)生的積極性，使他們以后不敢開(kāi)口。對(duì)一些后進(jìn)生，要經(jīng)常鼓勵(lì)他們，要看到他們?nèi)〉玫倪M(jìn)步，有時(shí)哪怕他們只能用一個(gè)單詞來(lái)表達(dá)，也要給予積極的肯定。要允許學(xué)生有不同的觀點(diǎn)。如果學(xué)生有不同的觀點(diǎn)，要給予他們自由發(fā)表的空間，鼓勵(lì)他們大膽地說(shuō)出來(lái)，師生共同討論，在討論中增進(jìn)師生感情，做到教學(xué)相長(zhǎng)。那么下次學(xué)生碰到疑問(wèn)，他就不會(huì)再藏在心里，而是樂(lè)于與大家探討，這不僅使學(xué)生加深了對(duì)該知識(shí)的理解，而且活躍了課堂氣氛。3.精心設(shè)計(jì)任務(wù)，激發(fā)學(xué)生興趣興趣是最好的老師。在課堂參與度提升的這個(gè)問(wèn)題上，興趣依然是重要的砝碼。教師要?jiǎng)?chuàng)造性地設(shè)計(jì)貼近學(xué)生實(shí)際的教學(xué)活動(dòng)，吸引和組織他們積極參與，觸動(dòng)他們的“興奮點(diǎn)”。講解時(shí)可以引入生活情景，激發(fā)學(xué)生參與的熱情。在實(shí)際教學(xué)中，教師應(yīng)設(shè)計(jì)貼近學(xué)生生活，自然愉快又令初中學(xué)生感興趣的情景進(jìn)行教學(xué)，這樣學(xué)生課堂參與度會(huì)大大提高，也會(huì)增強(qiáng)學(xué)生的自信心。學(xué)生感覺(jué)有話說(shuō)，從而更好地表達(dá)自己的想法。對(duì)中學(xué)生而言，采用小組活動(dòng)不僅能給每個(gè)學(xué)生提供開(kāi)口說(shuō)話的機(jī)會(huì)，而且能減輕學(xué)生的焦慮心理。同時(shí)鑒于初三學(xué)習(xí)的重要性，中考習(xí)題是必定要引入課堂的，關(guān)鍵是講習(xí)題時(shí)能化難為簡(jiǎn)，設(shè)置問(wèn)題時(shí)能注重循序漸進(jìn)，一步步提升；在處理問(wèn)題上，能將設(shè)問(wèn)中的重點(diǎn)字眼進(jìn)行說(shuō)明，以減輕學(xué)生理解難度；同時(shí)對(duì)同類型的問(wèn)題能進(jìn)行系統(tǒng)歸納，從中概括出解題的統(tǒng)一方法，以方便學(xué)生答題。當(dāng)學(xué)生能運(yùn)用書(shū)本知識(shí)駕輕就熟地答題時(shí)，再有難度的題目同樣也能留住學(xué)生的興趣。如果課堂上只有教師在講臺(tái)上唱獨(dú)角戲而講臺(tái)下卻死氣沉沉，學(xué)生課堂參與度低，教學(xué)質(zhì)量必受影響。所以，教師要正確看待這個(gè)問(wèn)題，既要改變觀念，提升個(gè)人素質(zhì)，又要營(yíng)造積極，有利的教學(xué)環(huán)境，學(xué)著調(diào)動(dòng)各個(gè)因素去提高學(xué)生的課堂參與度。力學(xué)是初中物理中的第一個(gè)真正意義上的學(xué)習(xí)“難點(diǎn)”，難就難在力學(xué)概念的構(gòu)建過(guò)程中，容易受到錯(cuò)誤的前概念影響，而學(xué)生的思維之所以受到前概念影響，又是因?yàn)樵谛碌母拍顚W(xué)習(xí)中的思維缺少嘗試的緣故。因此，力學(xué)概念教學(xué)的有效途徑，就是幫學(xué)生提高思維的深度。本文就以“慣性”概念的教學(xué)為例，來(lái)談?wù)勅绾翁岣邔W(xué)生的思維深度。一、力學(xué)概念需要深度思維作為支撐初二力學(xué)概念比較豐富，從力到力的三要素，從形變到運(yùn)動(dòng)狀態(tài)的改變，從彈力到重力到摩擦力，從作用力與反作用力到二力平衡……可以說(shuō)每一個(gè)概念的建構(gòu)都不是那么簡(jiǎn)單的，這就意味著思維需要深度參與。以“慣性”為例，初中物理定義慣性為“物體保持靜止或勻速直線運(yùn)動(dòng)的性質(zhì)”，就算背得再熟，學(xué)生也不懂為什么慣性是個(gè)“性質(zhì)”，而這個(gè)性質(zhì)又與“慣”什么關(guān)系。當(dāng)然，很多情況下，學(xué)生對(duì)慣性的理解常常是基于具體實(shí)例的，比如說(shuō)坐在勻速行駛的汽車上，突然剎車時(shí)人會(huì)前傾；而坐在靜止的汽車上，汽車突然啟動(dòng)時(shí)人會(huì)后仰……但需要注意的是，不是說(shuō)學(xué)生在解釋此現(xiàn)象時(shí)回答出“慣性”兩字，學(xué)生就懂慣性了，因?yàn)楫?dāng)我們進(jìn)一步追問(wèn)學(xué)生“為什么這些現(xiàn)象背后的原因就是慣性呢”時(shí)，學(xué)生是回答不出來(lái)的。事實(shí)上，慣性概念的構(gòu)建，更重要的還是要基于牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律來(lái)進(jìn)行――牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律又稱之為慣性定律，不是沒(méi)原因的。而牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律本身是一個(gè)理想定律，是需要學(xué)生在思維當(dāng)中完成理想實(shí)驗(yàn)的――牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律描述的是現(xiàn)實(shí)生活中無(wú)法出現(xiàn)的“物體不受力”的情形，因而只好在已有實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行合情推理才得到最終的結(jié)論。顯然，這里離開(kāi)了深度思維，理解牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律是寸步難行的。其實(shí)所謂的深度思維，就是超越感性層面，將思維的觸角延伸到物理概念構(gòu)建的最根本的地方，確保物理概念真正成為學(xué)生所理解的而不是死記硬背的概念，這就是思維深度的體現(xiàn)。二、用問(wèn)題驅(qū)動(dòng)“慣性”概念的建立初二力學(xué)中，從“力”的概念開(kāi)始其實(shí)就比較抽象，學(xué)生在理解力的概念的時(shí)候就會(huì)存在困難。初中物理中對(duì)力的定義是“物體對(duì)物體的作用”，學(xué)生首先難以理解的就是“作用”一詞，根據(jù)學(xué)生的先前經(jīng)驗(yàn)：力就是力，怎么就變成了作用呢？如果說(shuō)這個(gè)作用還可以通過(guò)舉生活中推、拉、提、壓等例子，讓學(xué)生對(duì)作用產(chǎn)生理解的話，那慣性概念的理解就更具有挑戰(zhàn)性了。筆者在慣性的概念教學(xué)中，是用問(wèn)題來(lái)驅(qū)動(dòng)學(xué)生的思維的：首先，呈現(xiàn)生活中的慣性事例（這里不贅述），然后演示相關(guān)的慣性實(shí)驗(yàn)，如用直尺擊飛棋子的實(shí)驗(yàn)。讓學(xué)生先對(duì)慣性現(xiàn)象產(chǎn)生感性認(rèn)識(shí)。并提出問(wèn)題：為什么會(huì)出現(xiàn)這樣的情形？其次，基于牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律（此時(shí)牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律已經(jīng)學(xué)完）去思考物體的這種固有屬性――慣性決定于質(zhì)量，而質(zhì)量是物體的屬性，因此慣性實(shí)際上就是物體的屬性。認(rèn)識(shí)這一點(diǎn)很重要，因?yàn)椤皩傩浴睂?shí)際上已經(jīng)與后面需要建立的“慣性”概念產(chǎn)生了質(zhì)的聯(lián)系。教師提出問(wèn)題：牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律中，說(shuō)物體不受力時(shí)只有靜止和勻速直線運(yùn)動(dòng)兩種狀態(tài)，大家想一下，如果現(xiàn)在宇宙中的物體全部不受力了，那呈現(xiàn)在我們面前的是什么情形？這是一個(gè)物理中常提，同時(shí)能夠培養(yǎng)學(xué)生推理、想象能力的問(wèn)題。學(xué)生根據(jù)牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律，自然會(huì)去思考：不受力，那就只能是靜止或者是勻速直線運(yùn)動(dòng)。于是呈現(xiàn)在面前的，要么就是靜止的物體，要么就是勻速直線運(yùn)動(dòng)的物體，再也沒(méi)有第三種可能。再次，教師繼續(xù)追問(wèn)：我們知道物體的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)發(fā)生改變，那是因?yàn)槭裁?？受到力的作用；物體的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)不變包括哪些情形？靜止和勻速直線運(yùn)動(dòng)，而物體不受力時(shí)就是這兩種狀態(tài)，這就說(shuō)明物體不受力時(shí)的狀態(tài)，是物體表現(xiàn)出屬性時(shí)的狀態(tài)。這是一個(gè)邏輯推理的過(guò)程，學(xué)生思維所加工的，正是力與運(yùn)動(dòng)狀態(tài)之間的關(guān)系，而當(dāng)學(xué)生認(rèn)識(shí)到靜止和勻速直線運(yùn)動(dòng)是物體的屬性時(shí)，慣性概念就可以建立起來(lái)了。最后，用慣性概念解?此前的例子。這個(gè)解釋不是機(jī)械地用“慣性”兩個(gè)字來(lái)回答，而是具體分析：如坐在運(yùn)動(dòng)的汽車上，汽車突然剎車，人的上身由于具有慣性，還要保持向前運(yùn)動(dòng)的狀態(tài)，而人的臀部與椅子接觸，有摩擦力的存在，阻止了臀部的前移，正因?yàn)槿说纳仙頎顟B(tài)與臀部狀態(tài)不一致，所以人才表現(xiàn)出前傾的情形。三、對(duì)提高學(xué)生思維深度的淺顯思考實(shí)際上，初二物理的力學(xué)概念教學(xué)中，很多概念都需要深度思維的參與。說(shuō)深度思維也不需要諱莫如深，其實(shí)深度思維并不意味著難度大，深度思維其實(shí)是要理清物理力學(xué)概念之間的邏輯關(guān)系，用清晰的道理來(lái)解釋物理現(xiàn)象。有時(shí)候，為了回避所謂的難度，教師通常都用模糊的方式來(lái)解釋物理現(xiàn)象，比如說(shuō)上面所提到的用“慣性”一詞作為許多慣性現(xiàn)象的統(tǒng)一解答，筆者以為這是不恰當(dāng)?shù)摹？傊?，初二物理力學(xué)概念的教學(xué)中，需要學(xué)生深度思維的參與，只有這樣才能為力學(xué)知識(shí)的學(xué)習(xí)奠定一個(gè)堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)?！?1、沒(méi)有人陪你走一輩子，所以你要適應(yīng)孤獨(dú)，沒(méi)有人會(huì)幫你一輩1基因工程的主要操作技術(shù)及原理基因工程的主要操作技術(shù)及2DNA提取口慈DNA提取■1、植物總DNA提取■2、動(dòng)物悉DNA提取■3、大腸桿黃DNA提取4、質(zhì)粒DNA提取DNA提取3總DNA提取日DNA的應(yīng)用構(gòu)建基因組文年:100kbˇSouthern雜交(包括RFLP)50kbˇPCR分離基因等50kb總DNA提取4在DNA提取過(guò)程中應(yīng)做到1.因材施提2.根據(jù)不同研究需要,保證結(jié)枸的相應(yīng)完整性3.盡量排除其它大分子成分的污染(蛋臺(tái)質(zhì)、多糖及RNA等4.保證提取樣晶中不合對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)愴劑及高噥度的金屬離子在DNA提取過(guò)程中應(yīng)做到51、植物細(xì)胞恿DNA提取口慈原則:口取材(盡量新)-漩氮研磨-裂解-去蠶白和細(xì)胞物~~濃縮。三1、植物細(xì)胞恿DNA提取6(1)CTABi:CTAB(cetyltriethylammoniumbromide)(十六垸基三甲基澳化銨)口原貍:CTAB是一種陽(yáng)離子去污荊,可岫解綱胞膜養(yǎng)能與核釀形成復(fù)合物,誠(chéng)復(fù)合物在高鹽嵱漩中⑨0.7moⅥLNaC是可濾的,當(dāng)摩低嵱漩鹽濃度到0.3moⅥLNaC肘,從嵱漩中沉漩,通過(guò)離心就可將其與蠶白,多糖類物質(zhì)分開(kāi),在經(jīng)過(guò)有機(jī)嵱劑抽提,去除蛋白,多糖,醱糞等雜質(zhì)。最后通過(guò)乙酵或異丙酵沉淀DNA口cTAB嵱于乙醵或異丙酵進(jìn)而除去在高離子強(qiáng)度的嵱漩中(>0.7mol/LNacl),CTAB與蠶白質(zhì)和多聚糖形成復(fù)合物,不能淀核酸?？赾TAB嵱漩在低于15℃肘會(huì)形成沉淀析出,因此,在將其如入冰冷的植物材料之前必須預(yù)熱,且離心肘隰度不要低于15℃。另外,它還能保護(hù)DNA不受內(nèi)源核酸酶三的解。(1)CTABi:CTAB(cetyltriethyl7高鹽提取-低鹽沉淀ˉ高鹽嵱解-乙醇沉淀口經(jīng)典的CTAB法使用兩種緩沖漩,口高鹽提取緩沖漩:1%(冷凍干蟠材料)或2%CTAB(新年材料)、0.7mo或1.4moM/LNaC口沉淀緩沖漩:1%CTAB,不含Nadl高鹽提取-低鹽沉淀ˉ高鹽嵱解-乙醇沉淀8操作步驟口1、取幼嫩的植物葉片(3-5g)剪碎液氮硏磨成粉,轉(zhuǎn)入1.5m離心管內(nèi)。加入等體積的65℃預(yù)熱的DNA提取緩沖液置于65℃的恒溫水浴搖床上1-2h(1.5h口2、加入等體積的氯仿:異戊醇(24:1),輕輕上下顛倒5分鐘,靜置5分鐘,之后于12000rpm離心10分鐘3、吸取上層水相,重復(fù)步驟2一次。口4、吸取上層水相,加入預(yù)冷2/3體積的異丙醇,輕緩顛倒2分鐘并置-20℃冰箱內(nèi)10min,待DNA沉淀后于12000rpm離心收集,收集的DNA于70%乙醇中洗23次。將棄去乙醇風(fēng)干后的DNA加適量水使其溶解操作步驟9口5、待DNA完全溶解后加入1-2μ不含RNAase(10mg/m|),37℃保溫1h以除去DNA中的RNA6、于Eppendorf管中加入1mL氯仿:異戊醇(24:1)輕輕上下顛倒10分鐘后10000pm離心10分鐘。口7、吸取上層水相并先后加入1/10體積的3M醋酸鈉及2倍總體積的預(yù)冷的無(wú)水乙醇,接著置于-20℃冰箱,10分鐘后10000pm離心10分鐘,棄去無(wú)水乙醇,加入70%乙醇洗滌2-3次,風(fēng)干,最后將DNA溶于適量(200-500)TE中?？?、待DNA完全溶解后進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳,檢査三DNA的質(zhì)量并據(jù)已知的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)其濃度。調(diào)整濃度后的DNA置于-20℃?zhèn)溆??？?、待DNA完全溶解后加入1-2μ不含RNAase10CTAB法的優(yōu)點(diǎn)口能很好地去除糖奏雜質(zhì)對(duì)于合糖較高的材料可優(yōu)先使用?？谠谔崛≈饽芡瑫r(shí)得到高質(zhì)量的DNA及RNA。可根據(jù)需要分別進(jìn)行純化,如只需要DNA,則可用RNase(核糖核釀酶)水解掉RNA。CTAB法的優(yōu)點(diǎn)11基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件12基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件13基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件14基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件15基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件16基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件17基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件18基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件19基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件20基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件21基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件22基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件23基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件24基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件25基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件26基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件27基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件28基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件29基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件30基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件31基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件32基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件33基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件34基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件35基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件36基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件37基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件38基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件39基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件40基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件41基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件42基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件43基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件44基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件45基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件46基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件47基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件48基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件49基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件50基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件51基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件52基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件53基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件54基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件55基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件56基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件57基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件58基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件59基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件60基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件61基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件62基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件63基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件64基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件65基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件66基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件67基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件68基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件69基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件70基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件71基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件72基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件73基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件74基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件75基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件76基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件77基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件78基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件79基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件80基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件81基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件82基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件836、最大的驕傲于最大的自卑都表示心靈的最軟弱無(wú)力?！官e諾莎

7、自知之明是最難得的知識(shí)?！靼嘌?/p>

8、勇氣通往天堂，怯懦通往地獄?！麅?nèi)加

9、有時(shí)候讀書(shū)是一種巧妙地避開(kāi)思考的方法?！諣柶账?/p>

10、閱讀一切好書(shū)如同和過(guò)去最杰出的人談話?！芽▋篢hankyou拯畏怖汾關(guān)爐烹霉躲渠早膘岸緬蘭輛坐蔬光膊列板哮瞥疹傻俘源拯割宜跟三叉神經(jīng)痛-治療三叉神經(jīng)痛-治療6、最大的驕傲于最大的自卑都表示心靈的最軟弱無(wú)力?！官e諾8421、沒(méi)有人陪你走一輩子，所以你要適應(yīng)孤獨(dú)，沒(méi)有人會(huì)幫你一輩子，所以你要奮斗一生。22、當(dāng)眼淚流盡的時(shí)候，留下的應(yīng)該是堅(jiān)強(qiáng)。23、要改變命運(yùn)，首先改變自己。24、勇氣很有理由被當(dāng)作人類德性之首，因?yàn)檫@種德性保證了所有其余的德性。--溫斯頓．丘吉爾。25、梯子的梯階從來(lái)不是用來(lái)擱腳的，它只是讓人們的腳放上一段時(shí)間，以便讓別一只腳能夠再往上登?；蚬こ痰闹饕僮骷夹g(shù)及原理基因工程的主要操作技術(shù)及原理21、沒(méi)有人陪你走一輩子，所以你要適應(yīng)孤獨(dú)，沒(méi)有人會(huì)幫你一輩子，所以你要奮斗一生。22、當(dāng)眼淚流盡的時(shí)候，留下的應(yīng)該是堅(jiān)強(qiáng)。23、要改變命運(yùn)，首先改變自己。24、勇氣很有理由被當(dāng)作人類德性之首，因?yàn)檫@種德性保證了所有其余的德性。--溫斯頓．丘吉爾。25、梯子的梯階從來(lái)不是用來(lái)擱腳的，它只是讓人們的腳放上一段時(shí)間，以便讓別一只腳能夠再往上登?；蚬こ痰闹饕僮骷夹g(shù)及原理基因工程的主要操作技術(shù)及原理DNA提取口慈DNA提取■1、植物總DNA提取■2、動(dòng)物悉DNA提取■3、大腸桿黃DNA提取4、質(zhì)粒DNA提取一名英語(yǔ)教師幾個(gè)班級(jí)連續(xù)三年帶下來(lái)，都有這樣的感受，初一的課堂學(xué)生熱情似火，爭(zhēng)先恐后回答問(wèn)題，或者是還未等同學(xué)作答已急迫地將自己的答案響亮報(bào)出；到了初二，學(xué)生熱情雖然有所減退，但大部分學(xué)生還是能積極參與到課堂活動(dòng)中；而到了初三，情況出現(xiàn)了戲劇性的轉(zhuǎn)變：大多數(shù)學(xué)生開(kāi)始“沉默是金”，有些學(xué)生即使知道也懶得回答，生怕別人嘲笑，雖經(jīng)老師極力鼓勵(lì)，舉手發(fā)言者仍寥寥無(wú)幾，沉悶、尷尬的課堂氛圍使師生彼此都深感無(wú)味。這種現(xiàn)象最終將影響課堂教學(xué)效果。因而深入分析初三英語(yǔ)課堂中學(xué)生參與度低的原因，并提出合理解決途徑具有重要的研究意義和實(shí)際價(jià)值。一、原因分析1.傳統(tǒng)的教育理念的影響新課程實(shí)施以來(lái)，教師在思想上接受了新觀念的洗禮，大家對(duì)新課程的基本理念已了然于心。新課程強(qiáng)調(diào)要從學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣、生活經(jīng)驗(yàn)和認(rèn)知水平出發(fā)，倡導(dǎo)體驗(yàn)、實(shí)踐、參與、合作與交流的學(xué)習(xí)方式和任務(wù)型的教學(xué)途徑，發(fā)展學(xué)生的綜合語(yǔ)言運(yùn)用能力。然而在實(shí)際的課堂教學(xué)中，教師是不是遵循了新課程的理念呢？還是依舊停留在紙上談兵的階段呢？長(zhǎng)期以來(lái)，許多初三老師在中考指揮棒的壓迫下，在學(xué)校追求升學(xué)率的壓力下，為了省時(shí)間、趕速度，不得已以犧牲學(xué)生開(kāi)口說(shuō)話的機(jī)會(huì)為代價(jià)，導(dǎo)致課堂上老師講得越來(lái)越多，學(xué)生說(shuō)得越來(lái)越少，這嚴(yán)重違背了新課程“以學(xué)生為主體，發(fā)展學(xué)生綜合語(yǔ)言運(yùn)用能力”的理念。這種以教師為中心的理念禁錮了學(xué)生的思維，是引發(fā)學(xué)生沉默課堂的導(dǎo)火索。大部分情況下，學(xué)生無(wú)法突破傳統(tǒng)的思維，去發(fā)揮自我能動(dòng)性，只能機(jī)械式地聽(tīng)從教師的安排，缺乏活力。久而久之，學(xué)生便漸漸失去了用英語(yǔ)交流的愿望。2.學(xué)生的心理因素中學(xué)生正處于青春發(fā)育期，內(nèi)心世界越來(lái)越豐富。這個(gè)年段的學(xué)生也比較敏感，很在乎別人對(duì)自己的看法。加之受中國(guó)傳統(tǒng)文化的影響，學(xué)生不愿意積極主動(dòng)地表現(xiàn)自己，怕被其他同學(xué)認(rèn)為是“愛(ài)出風(fēng)頭”，“愛(ài)表現(xiàn)”，同時(shí)也怕答錯(cuò)問(wèn)題，在同學(xué)面前丟面子。究其原因主要是他們對(duì)自己信心不足。許多學(xué)生即使知道答案也不敢回答，缺乏在別人面前講英語(yǔ)的勇氣。二、初三學(xué)生課堂參與度提高的對(duì)策1.教師要改變觀念，提升個(gè)人素質(zhì)語(yǔ)言是用來(lái)交流的，師生間沒(méi)有了交流，語(yǔ)言也就失去了它存在的意義。教師如果一味地向中考看齊，向分?jǐn)?shù)看齊，最終學(xué)生只能淪為應(yīng)試教育的犧牲品，做題目的機(jī)器，因此為了學(xué)生的終身發(fā)展，教師必須改變這種只顧眼前利益，不顧長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展的觀念。同時(shí)，教師應(yīng)努力提高自身的素質(zhì)，堅(jiān)持用英語(yǔ)來(lái)組織教學(xué)，盡可能地為學(xué)生創(chuàng)造英語(yǔ)學(xué)習(xí)的優(yōu)良?jí)木?。教師要結(jié)合日常生活實(shí)際和學(xué)生實(shí)際精心設(shè)計(jì)語(yǔ)言情景，在語(yǔ)言實(shí)踐活動(dòng)中，教師要注意力求使自己的英語(yǔ)語(yǔ)言規(guī)范、地道。有時(shí)也可借助體態(tài)、手勢(shì)等幫助學(xué)生聽(tīng)懂、理解。提問(wèn)是教師應(yīng)具備的重要的教學(xué)技能之一，教師應(yīng)根據(jù)所要呈現(xiàn)的教學(xué)內(nèi)容設(shè)計(jì)相應(yīng)的問(wèn)題。在提問(wèn)過(guò)程中，盡量照顧到不同層次的學(xué)生，提高學(xué)生的參與度。同時(shí)就學(xué)生的回答，做出相應(yīng)的評(píng)價(jià)。這不僅使學(xué)生知道自己的學(xué)習(xí)狀況，還可以改進(jìn)其學(xué)習(xí)動(dòng)機(jī)并建立良好的課堂氣氛。2.營(yíng)造積極，有利的教學(xué)環(huán)境和諧融洽的師生關(guān)系，可以使師生之間產(chǎn)生一種很強(qiáng)的親和力，這種親和力可以使學(xué)生更加親近老師，信任老師，從而教與學(xué)的雙邊互動(dòng)就更容易開(kāi)展。首先，教師要帶著微笑進(jìn)課堂，這樣可以消除學(xué)生的緊張情緒，放松對(duì)老師的戒備。試想，如果一個(gè)老師老是板著臉，動(dòng)不動(dòng)就訓(xùn)人，學(xué)生還愿意跟他交流嗎？其次，教師要多與學(xué)生談心，了解他們的興趣，愛(ài)好，喜怒哀樂(lè)，在他們有困難時(shí)，及時(shí)提供幫助，讓他們感覺(jué)到你時(shí)時(shí)處處在關(guān)心著他們，關(guān)注著他們。那么在上課時(shí)，就能與學(xué)生打成一片。你的一個(gè)眼神，一個(gè)動(dòng)作，都會(huì)激起學(xué)生一次次的參與。再次，對(duì)學(xué)生開(kāi)口過(guò)程中出現(xiàn)的失誤和錯(cuò)誤要以寬容的態(tài)度，盡量采用溫和的方式加以糾正，而不是簡(jiǎn)單地用“NO”來(lái)否定他們，這樣會(huì)嚴(yán)重挫傷學(xué)生的積極性，使他們以后不敢開(kāi)口。對(duì)一些后進(jìn)生，要經(jīng)常鼓勵(lì)他們，要看到他們?nèi)〉玫倪M(jìn)步，有時(shí)哪怕他們只能用一個(gè)單詞來(lái)表達(dá)，也要給予積極的肯定。要允許學(xué)生有不同的觀點(diǎn)。如果學(xué)生有不同的觀點(diǎn)，要給予他們自由發(fā)表的空間，鼓勵(lì)他們大膽地說(shuō)出來(lái)，師生共同討論，在討論中增進(jìn)師生感情，做到教學(xué)相長(zhǎng)。那么下次學(xué)生碰到疑問(wèn)，他就不會(huì)再藏在心里，而是樂(lè)于與大家探討，這不僅使學(xué)生加深了對(duì)該知識(shí)的理解，而且活躍了課堂氣氛。3.精心設(shè)計(jì)任務(wù)，激發(fā)學(xué)生興趣興趣是最好的老師。在課堂參與度提升的這個(gè)問(wèn)題上，興趣依然是重要的砝碼。教師要?jiǎng)?chuàng)造性地設(shè)計(jì)貼近學(xué)生實(shí)際的教學(xué)活動(dòng)，吸引和組織他們積極參與，觸動(dòng)他們的“興奮點(diǎn)”。講解時(shí)可以引入生活情景，激發(fā)學(xué)生參與的熱情。在實(shí)際教學(xué)中，教師應(yīng)設(shè)計(jì)貼近學(xué)生生活，自然愉快又令初中學(xué)生感興趣的情景進(jìn)行教學(xué)，這樣學(xué)生課堂參與度會(huì)大大提高，也會(huì)增強(qiáng)學(xué)生的自信心。學(xué)生感覺(jué)有話說(shuō)，從而更好地表達(dá)自己的想法。對(duì)中學(xué)生而言，采用小組活動(dòng)不僅能給每個(gè)學(xué)生提供開(kāi)口說(shuō)話的機(jī)會(huì)，而且能減輕學(xué)生的焦慮心理。同時(shí)鑒于初三學(xué)習(xí)的重要性，中考習(xí)題是必定要引入課堂的，關(guān)鍵是講習(xí)題時(shí)能化難為簡(jiǎn)，設(shè)置問(wèn)題時(shí)能注重循序漸進(jìn)，一步步提升；在處理問(wèn)題上，能將設(shè)問(wèn)中的重點(diǎn)字眼進(jìn)行說(shuō)明，以減輕學(xué)生理解難度；同時(shí)對(duì)同類型的問(wèn)題能進(jìn)行系統(tǒng)歸納，從中概括出解題的統(tǒng)一方法，以方便學(xué)生答題。當(dāng)學(xué)生能運(yùn)用書(shū)本知識(shí)駕輕就熟地答題時(shí)，再有難度的題目同樣也能留住學(xué)生的興趣。如果課堂上只有教師在講臺(tái)上唱獨(dú)角戲而講臺(tái)下卻死氣沉沉，學(xué)生課堂參與度低，教學(xué)質(zhì)量必受影響。所以，教師要正確看待這個(gè)問(wèn)題，既要改變觀念，提升個(gè)人素質(zhì)，又要營(yíng)造積極，有利的教學(xué)環(huán)境，學(xué)著調(diào)動(dòng)各個(gè)因素去提高學(xué)生的課堂參與度。力學(xué)是初中物理中的第一個(gè)真正意義上的學(xué)習(xí)“難點(diǎn)”，難就難在力學(xué)概念的構(gòu)建過(guò)程中，容易受到錯(cuò)誤的前概念影響，而學(xué)生的思維之所以受到前概念影響，又是因?yàn)樵谛碌母拍顚W(xué)習(xí)中的思維缺少嘗試的緣故。因此，力學(xué)概念教學(xué)的有效途徑，就是幫學(xué)生提高思維的深度。本文就以“慣性”概念的教學(xué)為例，來(lái)談?wù)勅绾翁岣邔W(xué)生的思維深度。一、力學(xué)概念需要深度思維作為支撐初二力學(xué)概念比較豐富，從力到力的三要素，從形變到運(yùn)動(dòng)狀態(tài)的改變，從彈力到重力到摩擦力，從作用力與反作用力到二力平衡……可以說(shuō)每一個(gè)概念的建構(gòu)都不是那么簡(jiǎn)單的，這就意味著思維需要深度參與。以“慣性”為例，初中物理定義慣性為“物體保持靜止或勻速直線運(yùn)動(dòng)的性質(zhì)”，就算背得再熟，學(xué)生也不懂為什么慣性是個(gè)“性質(zhì)”，而這個(gè)性質(zhì)又與“慣”什么關(guān)系。當(dāng)然，很多情況下，學(xué)生對(duì)慣性的理解常常是基于具體實(shí)例的，比如說(shuō)坐在勻速行駛的汽車上，突然剎車時(shí)人會(huì)前傾；而坐在靜止的汽車上，汽車突然啟動(dòng)時(shí)人會(huì)后仰……但需要注意的是，不是說(shuō)學(xué)生在解釋此現(xiàn)象時(shí)回答出“慣性”兩字，學(xué)生就懂慣性了，因?yàn)楫?dāng)我們進(jìn)一步追問(wèn)學(xué)生“為什么這些現(xiàn)象背后的原因就是慣性呢”時(shí)，學(xué)生是回答不出來(lái)的。事實(shí)上，慣性概念的構(gòu)建，更重要的還是要基于牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律來(lái)進(jìn)行――牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律又稱之為慣性定律，不是沒(méi)原因的。而牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律本身是一個(gè)理想定律，是需要學(xué)生在思維當(dāng)中完成理想實(shí)驗(yàn)的――牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律描述的是現(xiàn)實(shí)生活中無(wú)法出現(xiàn)的“物體不受力”的情形，因而只好在已有實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行合情推理才得到最終的結(jié)論。顯然，這里離開(kāi)了深度思維，理解牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律是寸步難行的。其實(shí)所謂的深度思維，就是超越感性層面，將思維的觸角延伸到物理概念構(gòu)建的最根本的地方，確保物理概念真正成為學(xué)生所理解的而不是死記硬背的概念，這就是思維深度的體現(xiàn)。二、用問(wèn)題驅(qū)動(dòng)“慣性”概念的建立初二力學(xué)中，從“力”的概念開(kāi)始其實(shí)就比較抽象，學(xué)生在理解力的概念的時(shí)候就會(huì)存在困難。初中物理中對(duì)力的定義是“物體對(duì)物體的作用”，學(xué)生首先難以理解的就是“作用”一詞，根據(jù)學(xué)生的先前經(jīng)驗(yàn)：力就是力，怎么就變成了作用呢？如果說(shuō)這個(gè)作用還可以通過(guò)舉生活中推、拉、提、壓等例子，讓學(xué)生對(duì)作用產(chǎn)生理解的話，那慣性概念的理解就更具有挑戰(zhàn)性了。筆者在慣性的概念教學(xué)中，是用問(wèn)題來(lái)驅(qū)動(dòng)學(xué)生的思維的：首先，呈現(xiàn)生活中的慣性事例（這里不贅述），然后演示相關(guān)的慣性實(shí)驗(yàn)，如用直尺擊飛棋子的實(shí)驗(yàn)。讓學(xué)生先對(duì)慣性現(xiàn)象產(chǎn)生感性認(rèn)識(shí)。并提出問(wèn)題：為什么會(huì)出現(xiàn)這樣的情形？其次，基于牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律（此時(shí)牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律已經(jīng)學(xué)完）去思考物體的這種固有屬性――慣性決定于質(zhì)量，而質(zhì)量是物體的屬性，因此慣性實(shí)際上就是物體的屬性。認(rèn)識(shí)這一點(diǎn)很重要，因?yàn)椤皩傩浴睂?shí)際上已經(jīng)與后面需要建立的“慣性”概念產(chǎn)生了質(zhì)的聯(lián)系。教師提出問(wèn)題：牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律中，說(shuō)物體不受力時(shí)只有靜止和勻速直線運(yùn)動(dòng)兩種狀態(tài)，大家想一下，如果現(xiàn)在宇宙中的物體全部不受力了，那呈現(xiàn)在我們面前的是什么情形？這是一個(gè)物理中常提，同時(shí)能夠培養(yǎng)學(xué)生推理、想象能力的問(wèn)題。學(xué)生根據(jù)牛頓第一運(yùn)動(dòng)定律，自然會(huì)去思考：不受力，那就只能是靜止或者是勻速直線運(yùn)動(dòng)。于是呈現(xiàn)在面前的，要么就是靜止的物體，要么就是勻速直線運(yùn)動(dòng)的物體，再也沒(méi)有第三種可能。再次，教師繼續(xù)追問(wèn)：我們知道物體的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)發(fā)生改變，那是因?yàn)槭裁?？受到力的作用；物體的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)不變包括哪些情形？靜止和勻速直線運(yùn)動(dòng)，而物體不受力時(shí)就是這兩種狀態(tài)，這就說(shuō)明物體不受力時(shí)的狀態(tài)，是物體表現(xiàn)出屬性時(shí)的狀態(tài)。這是一個(gè)邏輯推理的過(guò)程，學(xué)生思維所加工的，正是力與運(yùn)動(dòng)狀態(tài)之間的關(guān)系，而當(dāng)學(xué)生認(rèn)識(shí)到靜止和勻速直線運(yùn)動(dòng)是物體的屬性時(shí)，慣性概念就可以建立起來(lái)了。最后，用慣性概念解?此前的例子。這個(gè)解釋不是機(jī)械地用“慣性”兩個(gè)字來(lái)回答，而是具體分析：如坐在運(yùn)動(dòng)的汽車上，汽車突然剎車，人的上身由于具有慣性，還要保持向前運(yùn)動(dòng)的狀態(tài)，而人的臀部與椅子接觸，有摩擦力的存在，阻止了臀部的前移，正因?yàn)槿说纳仙頎顟B(tài)與臀部狀態(tài)不一致，所以人才表現(xiàn)出前傾的情形。三、對(duì)提高學(xué)生思維深度的淺顯思考實(shí)際上，初二物理的力學(xué)概念教學(xué)中，很多概念都需要深度思維的參與。說(shuō)深度思維也不需要諱莫如深，其實(shí)深度思維并不意味著難度大，深度思維其實(shí)是要理清物理力學(xué)概念之間的邏輯關(guān)系，用清晰的道理來(lái)解釋物理現(xiàn)象。有時(shí)候，為了回避所謂的難度，教師通常都用模糊的方式來(lái)解釋物理現(xiàn)象，比如說(shuō)上面所提到的用“慣性”一詞作為許多慣性現(xiàn)象的統(tǒng)一解答，筆者以為這是不恰當(dāng)?shù)?。總之，初二物理力學(xué)概念的教學(xué)中，需要學(xué)生深度思維的參與，只有這樣才能為力學(xué)知識(shí)的學(xué)習(xí)奠定一個(gè)堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)?！?1、沒(méi)有人陪你走一輩子，所以你要適應(yīng)孤獨(dú)，沒(méi)有人會(huì)幫你一輩85基因工程的主要操作技術(shù)及原理基因工程的主要操作技術(shù)及86DNA提取口慈DNA提取■1、植物總DNA提取■2、動(dòng)物悉DNA提取■3、大腸桿黃DNA提取4、質(zhì)粒DNA提取DNA提取87總DNA提取日DNA的應(yīng)用構(gòu)建基因組文年:100kbˇSouthern雜交(包括RFLP)50kbˇPCR分離基因等50kb總DNA提取88在DNA提取過(guò)程中應(yīng)做到1.因材施提2.根據(jù)不同研究需要,保證結(jié)枸的相應(yīng)完整性3.盡量排除其它大分子成分的污染(蛋臺(tái)質(zhì)、多糖及RNA等4.保證提取樣晶中不合對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)愴劑及高噥度的金屬離子在DNA提取過(guò)程中應(yīng)做到891、植物細(xì)胞恿DNA提取口慈原則:口取材(盡量新)-漩氮研磨-裂解-去蠶白和細(xì)胞物~~濃縮。三1、植物細(xì)胞恿DNA提取90(1)CTABi:CTAB(cetyltriethylammoniumbromide)(十六垸基三甲基澳化銨)口原貍:CTAB是一種陽(yáng)離子去污荊,可岫解綱胞膜養(yǎng)能與核釀形成復(fù)合物,誠(chéng)復(fù)合物在高鹽嵱漩中⑨0.7moⅥLNaC是可濾的,當(dāng)摩低嵱漩鹽濃度到0.3moⅥLNaC肘,從嵱漩中沉漩,通過(guò)離心就可將其與蠶白,多糖類物質(zhì)分開(kāi),在經(jīng)過(guò)有機(jī)嵱劑抽提,去除蛋白,多糖,醱糞等雜質(zhì)。最后通過(guò)乙酵或異丙酵沉淀DNA口cTAB嵱于乙醵或異丙酵進(jìn)而除去在高離子強(qiáng)度的嵱漩中(>0.7mol/LNacl),CTAB與蠶白質(zhì)和多聚糖形成復(fù)合物,不能淀核酸?？赾TAB嵱漩在低于15℃肘會(huì)形成沉淀析出,因此,在將其如入冰冷的植物材料之前必須預(yù)熱,且離心肘隰度不要低于15℃。另外,它還能保護(hù)DNA不受內(nèi)源核酸酶三的解。(1)CTABi:CTAB(cetyltriethyl91高鹽提取-低鹽沉淀ˉ高鹽嵱解-乙醇沉淀口經(jīng)典的CTAB法使用兩種緩沖漩,口高鹽提取緩沖漩:1%(冷凍干蟠材料)或2%CTAB(新年材料)、0.7mo或1.4moM/LNaC口沉淀緩沖漩:1%CTAB,不含Nadl高鹽提取-低鹽沉淀ˉ高鹽嵱解-乙醇沉淀92操作步驟口1、取幼嫩的植物葉片(3-5g)剪碎液氮硏磨成粉,轉(zhuǎn)入1.5m離心管內(nèi)。加入等體積的65℃預(yù)熱的DNA提取緩沖液置于65℃的恒溫水浴搖床上1-2h(1.5h口2、加入等體積的氯仿:異戊醇(24:1),輕輕上下顛倒5分鐘,靜置5分鐘,之后于12000rpm離心10分鐘3、吸取上層水相,重復(fù)步驟2一次?？?、吸取上層水相,加入預(yù)冷2/3體積的異丙醇,輕緩顛倒2分鐘并置-20℃冰箱內(nèi)10min,待DNA沉淀后于12000rpm離心收集,收集的DNA于70%乙醇中洗23次。將棄去乙醇風(fēng)干后的DNA加適量水使其溶解操作步驟93口5、待DNA完全溶解后加入1-2μ不含RNAase(10mg/m|),37℃保溫1h以除去DNA中的RNA6、于Eppendorf管中加入1mL氯仿:異戊醇(24:1)輕輕上下顛倒10分鐘后10000pm離心10分鐘?？?、吸取上層水相并先后加入1/10體積的3M醋酸鈉及2倍總體積的預(yù)冷的無(wú)水乙醇,接著置于-20℃冰箱,10分鐘后10000pm離心10分鐘,棄去無(wú)水乙醇,加入70%乙醇洗滌2-3次,風(fēng)干,最后將DNA溶于適量(200-500)TE中?？?、待DNA完全溶解后進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳,檢査三DNA的質(zhì)量并據(jù)已知的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)其濃度。調(diào)整濃度后的DNA置于-20℃?zhèn)溆?。?、待DNA完全溶解后加入1-2μ不含RNAase94CTAB法的優(yōu)點(diǎn)口能很好地去除糖奏雜質(zhì)對(duì)于合糖較高的材料可優(yōu)先使用?？谠谔崛≈饽芡瑫r(shí)得到高質(zhì)量的DNA及RNA?？筛鶕?jù)需要分別進(jìn)行純化,如只需要DNA,則可用RNase(核糖核釀酶)水解掉RNA。CTAB法的優(yōu)點(diǎn)95基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件96基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件97基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件98基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件99基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件100基因工程的主要操作技術(shù)及原理課件101基因工程的主要操