病毒感染的檢查方法與防治原則課件(同名90)

病毒感染的檢查檢測內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶電鏡直接觀察光鏡檢查包含體分離培養(yǎng)病毒感染的檢查檢測內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒電鏡1一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：

1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理

2.低溫保存，盡快送檢

3.血清學(xué)診斷采雙份血清一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：2二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)（cell

culture）

雞胚接種（egginoculation）

動物接種（animalinoculation）二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)3二、病毒的分離與鑒定一般程序：標(biāo)本無菌處理動物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)指標(biāo)陽性指標(biāo)陰性

病毒鑒定

盲傳2～3代指標(biāo)陰性病毒陰性二、病毒的分離與鑒定一般程序：標(biāo)本無菌處理動物接種指標(biāo)陽性4（一）病毒的分離培養(yǎng)

1.細(xì)胞培養(yǎng)

單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayercellculture）

分類懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspendedcellculture）原代細(xì)胞（primarycell）細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞（diploidcell）傳代細(xì)胞系（continuouscellline）（一）病毒的分離培養(yǎng)5病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞61.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織

組織塊

分散的單個細(xì)胞單層細(xì)胞

剪碎

培養(yǎng)基(原代細(xì)胞)單層細(xì)胞(次代細(xì)胞)傳代培養(yǎng)蛋白酶

1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織組織7卵黃囊（yolksac）培養(yǎng)基接種部位流感病毒、腮腺炎病毒（50％tissueculture應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），羊膜腔（amnioticcavity）（三）病毒數(shù)量與感染性測定——多種病毒鑒定CPE(-)—風(fēng)疹病毒(+)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗）(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）特點：①對多種病毒敏感重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）痘苗病毒、人類皰疹病毒核酸擴(kuò)增技術(shù)②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒中和試驗（neutralizingtest）特點：①對多種病毒敏感②生長能力有限,獲取成本高③可攜帶潛伏病毒1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)卵黃囊（yolksac）特點：①對多種病毒敏感1.細(xì)胞培養(yǎng)8(2)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)

體外分裂50～100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。特點：①對多種病毒敏感

②不帶異種蛋白(人源性)

③不帶病毒，無致瘤潛能

④可傳50代左右1.細(xì)胞培養(yǎng)(2)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)特點：①對多種病毒敏感1.細(xì)胞培養(yǎng)9(3)傳代細(xì)胞培養(yǎng)特點：①對多種病毒敏感性高

②繁殖能力高，傳代時間長

③有致癌危險，不能用于疫苗生產(chǎn)1.細(xì)胞培養(yǎng)(3)傳代細(xì)胞培養(yǎng)特點：①對多種病毒敏感性高1.細(xì)胞培養(yǎng)102.雞胚培養(yǎng)

采用孵化9～14天的雞胚

絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）

嗜神經(jīng)病毒

2.雞胚培養(yǎng)11病毒感染的檢查方法與防治原則課件(同名90)122、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低缺點：操作程序復(fù)雜2、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低13病毒感染的檢查方法與防治原則課件(同名90)143.動物接種

應(yīng)用：尚無敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)

動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物體內(nèi)常帶有潛伏病毒3.動物接種151．病毒增殖鑒定

(1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,

CPE）

①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；

②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鑒定

1．病毒增殖鑒定（二）病毒的鑒定16病毒感染的檢查方法與防治原則課件(同名90)17①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cyt18麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱融19③形成包涵體(inclusionbody)(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)③形成包涵體(inclusionbody)(1)細(xì)胞病變效20腮腺炎病毒感染細(xì)胞(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋紅細(xì)胞表面HA受體腮腺炎病毒感染細(xì)胞(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorptio21CPE(-)—風(fēng)疹病毒(+)核苷類藥物③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。IFN-α、β、γ中草藥培養(yǎng)基②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）中草藥特點：特異性高，抗體維持時間長?？刹《?+)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)特點：特異性高，抗體維持時間長①采取標(biāo)本分離病毒為時已晚細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）②繁殖能力高，傳代時間長(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防②不帶異種蛋白(人源性)補(bǔ)體結(jié)合試驗

（complementfixationtest）分離病毒的標(biāo)本和作血清學(xué)診斷的標(biāo)本各有何要求？(3)干擾現(xiàn)象（interference）風(fēng)疹病毒＋人胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋人胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚腎細(xì)胞風(fēng)疹病毒？埃可病毒CPE(-)—風(fēng)疹病毒(+)?？刹《?-)CPE(+)—風(fēng)疹病毒(-)?？刹《?+)CPE(-)—風(fēng)疹病毒(+)(3)干擾現(xiàn)象（interfer22(4)細(xì)胞代謝改變

細(xì)胞代謝變慢

pH變化減慢(4)細(xì)胞代謝改變232.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），對一般病毒檢測意義不大2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限243.病毒血清學(xué)鑒定

鑒定病毒種、型、亞型

(1)血凝抑制試驗（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型與亞型鑒定

病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗）

病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞＝不凝集

（血凝抑制試驗）

3.病毒血清學(xué)鑒定鑒定病毒種、型、亞型25(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）——多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(gelimmuno-

diffusion

test)

——多種病毒鑒定3.病毒血清學(xué)鑒定(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）3.病毒血清學(xué)鑒定264.病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴(kuò)增核酸雜交基因芯片基因測序4.病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定27（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.蝕斑形成試驗

（plaqueformationtest）

3.50％組織細(xì)胞感染量

（50％tissueculture

infectiousdose,

TCID50）感染性病毒量（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死28抗原變異病毒基因的鑒定宿主細(xì)胞激酶NA三磷酸④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型④可傳50代左右風(fēng)疹病毒＋人胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(－)病毒囊膜表面血凝素(HA)病毒囊膜表面血凝素(HA)③形成包涵體(inclusionbody)光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），雞胚接種（egginoculation）第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防病毒在組織細(xì)胞中增殖的指標(biāo)是什么？組織組織塊分散的單個細(xì)胞單層細(xì)胞尿囊腔（allantoiccavity）③形成包涵體(inclusionbody)呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞接種部位流感病毒、腮腺炎病毒（血凝抑制試驗）(四)新病毒的鑒定核酸類型的測定理化性狀的檢測形態(tài)學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定基因測序和生物對比抗原變異病毒基因的鑒定(四)新病毒的鑒定核酸類型的測定29三、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：①采取標(biāo)本分離病毒為時已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實所分離的病毒的臨床意義④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等三、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：301.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和抗體

病毒失去感染性

特點：特異性高，抗體維持時間長應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查臨床診斷少用1.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和312.補(bǔ)體結(jié)合試驗

（complementfixationtest）

用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體

特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快

應(yīng)用：近期感染指標(biāo)。2.補(bǔ)體結(jié)合試驗

（complementfixatio32四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗體檢測（IgM）四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時內(nèi)出結(jié)果33（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查普通光學(xué)顯微鏡檢查

包涵體（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查34痘苗病毒、人類皰疹病毒核酶（ribozyme）病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶?？刹《荆伺吣I細(xì)胞病毒增殖，CPE(＋)④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：核酸擴(kuò)增技術(shù)③可攜帶潛伏病毒——多種病毒鑒定特點：①對多種病毒敏感病毒在組織細(xì)胞中增殖的指標(biāo)是什么？光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），滅活疫苗（inactivatedvaccine）特點：①對多種病毒敏感(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）③形成包涵體(inclusionbody)體外分裂50～100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測免疫標(biāo)記技術(shù)2.病毒核酸檢測核酸擴(kuò)增技術(shù)核酸雜交技術(shù)基因芯片技術(shù)

基因測序痘苗病毒、人類皰疹病毒（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測35（三）早期抗體檢測可診斷急性感染

特異性IgM抗體：孕婦感染風(fēng)疹病毒

EBV早期抗原抗體

EAV核心抗原抗體

早期抗原的抗體

EAV衣殼抗原抗體（三）早期抗體檢測可診斷急性感染36第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防微生物及其代謝產(chǎn)物生物制品動物免疫血清（biologicalproducts）

免疫細(xì)胞細(xì)胞因子

防治和診斷感染性疾病第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防37滅活疫苗（inactivatedvaccine）活疫苗（livingvaccine）重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）亞單位疫苗（subunitvaccine）化學(xué)提取或人工合成疫苗重組疫苗（recombinantvaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）一、人工主動免疫常用生物制品滅活疫苗（inactivatedvaccine）一、人工主38二、人工被動免疫常用生物制品

免疫球蛋白血清丙種球蛋白

細(xì)胞免疫制劑

IFN-α、β、γ細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF

淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞

——LAK細(xì)胞

二、人工被動免疫常用生物制品免疫球蛋白39第三節(jié)病毒感染的治療

核苷類藥物

非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑蛋白酶抑制劑其他抗病毒藥物

干擾素和干擾素誘生劑

中草藥

基因治療劑

治療性疫苗

抗病化學(xué)制劑反義寡核苷酸干擾RNA核酶（ribozyme）

第三節(jié)病毒感染的治療40核苷類藥物作用機(jī)制

HSV/VZV

無環(huán)鳥苷（NA）病毒胸苷激酶NA一磷酸宿主細(xì)胞激酶

NA三磷酸

（缺乏糖環(huán)3’-OH基）病毒DNA聚合酶核酸鏈延伸被迫終止核苷類藥物作用機(jī)制HSV/VZV無環(huán)41思考題分離病毒的標(biāo)本和作血清學(xué)診斷的標(biāo)本各有何要求？常用組織培養(yǎng)法有幾種？各有何應(yīng)用？病毒在組織細(xì)胞中增殖的指標(biāo)是什么？病毒性感染的快速診斷方法有哪些？預(yù)防病毒性感染有哪些人工自動免疫制劑？診斷病毒的核酸技術(shù)有哪些？

思考題分離病毒的標(biāo)本和作血清學(xué)診斷的標(biāo)本各有何要求？421.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織

組織塊

分散的單個細(xì)胞單層細(xì)胞

剪碎

培養(yǎng)基(原代細(xì)胞)單層細(xì)胞(次代細(xì)胞)傳代培養(yǎng)蛋白酶

1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織組織43特點：①對多種病毒敏感②生長能力有限,獲取成本高③可攜帶潛伏病毒1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)特點：①對多種病毒敏感1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)44痘苗病毒、人類皰疹病毒病毒在組織細(xì)胞中增殖的指標(biāo)是什么？宿主細(xì)胞激酶NA三磷酸（三）病毒數(shù)量與感染性測定(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-12臨床診斷少用(3)干擾現(xiàn)象（interference）組織組織塊分散的單個細(xì)胞單層細(xì)胞應(yīng)用：近期感染指標(biāo)。一、人工主動免疫常用生物制品?？刹《荆伺吣I細(xì)胞病毒增殖，CPE(＋)光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）infectiousdose,TCID50）采用孵化9～14天的雞胚②生長能力有限,獲取成本高重組疫苗（recombinantvaccine）(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)早期抗體檢測（IgM）1．病毒增殖鑒定

(1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,

CPE）

①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；

②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鑒定

痘苗病毒、人類皰疹病毒1．病毒增殖鑒定（二）病毒的鑒定45③形成包涵體(inclusionbody)(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)③形成包涵體(inclusionbody)(1)細(xì)胞病變效462.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），對一般病毒檢測意義不大2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限47(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）——多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(gelimmuno-

diffusion

test)

——多種病毒鑒定3.病毒血清學(xué)鑒定(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）3.病毒血清學(xué)鑒定48（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.蝕斑形成試驗

（plaqueformationtest）

3.50％組織細(xì)胞感染量

（50％tissueculture

infectiousdose,

TCID50）感染性病毒量（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死49infectiousdose,TCID50）③可攜帶潛伏病毒宿主細(xì)胞激酶NA三磷酸④可傳50代左右電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限早期抗體檢測（IgM）③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。接種部位流感病毒、腮腺炎病毒病毒在組織細(xì)胞中增殖的指標(biāo)是什么？③形成包涵體(inclusionbody)病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體重組疫苗（recombinantvaccine）一、人工主動免疫常用生物制品雞胚接種（egginoculation）分離病毒的標(biāo)本和作血清學(xué)診斷的標(biāo)本各有何要求？淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞特點：①對多種病毒敏感原代細(xì)胞（primarycell）抗原變異病毒基因的鑒定抗原變異病毒基因的鑒定1.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和抗體

病毒失去感染性

特點：特異性高，抗體維持時間長應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查臨床診斷少用infectiousdose,TCID50）1.中和試驗50病毒感染的檢查檢測內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶電鏡直接觀察光鏡檢查包含體分離培養(yǎng)病毒感染的檢查檢測內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒電鏡51一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：

1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理

2.低溫保存，盡快送檢

3.血清學(xué)診斷采雙份血清一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：52二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)（cell

culture）

雞胚接種（egginoculation）

動物接種（animalinoculation）二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)53二、病毒的分離與鑒定一般程序：標(biāo)本無菌處理動物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)指標(biāo)陽性指標(biāo)陰性

病毒鑒定

盲傳2～3代指標(biāo)陰性病毒陰性二、病毒的分離與鑒定一般程序：標(biāo)本無菌處理動物接種指標(biāo)陽性54（一）病毒的分離培養(yǎng)

1.細(xì)胞培養(yǎng)

單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayercellculture）

分類懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspendedcellculture）原代細(xì)胞（primarycell）細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞（diploidcell）傳代細(xì)胞系（continuouscellline）（一）病毒的分離培養(yǎng)55病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞561.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織

組織塊

分散的單個細(xì)胞單層細(xì)胞

剪碎

培養(yǎng)基(原代細(xì)胞)單層細(xì)胞(次代細(xì)胞)傳代培養(yǎng)蛋白酶

1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織組織57卵黃囊（yolksac）培養(yǎng)基接種部位流感病毒、腮腺炎病毒（50％tissueculture應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），羊膜腔（amnioticcavity）（三）病毒數(shù)量與感染性測定——多種病毒鑒定CPE(-)—風(fēng)疹病毒(+)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗）(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）特點：①對多種病毒敏感重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）痘苗病毒、人類皰疹病毒核酸擴(kuò)增技術(shù)②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒中和試驗（neutralizingtest）特點：①對多種病毒敏感②生長能力有限,獲取成本高③可攜帶潛伏病毒1.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)卵黃囊（yolksac）特點：①對多種病毒敏感1.細(xì)胞培養(yǎng)58(2)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)

體外分裂50～100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。特點：①對多種病毒敏感

②不帶異種蛋白(人源性)

③不帶病毒，無致瘤潛能

④可傳50代左右1.細(xì)胞培養(yǎng)(2)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)特點：①對多種病毒敏感1.細(xì)胞培養(yǎng)59(3)傳代細(xì)胞培養(yǎng)特點：①對多種病毒敏感性高

②繁殖能力高，傳代時間長

③有致癌危險，不能用于疫苗生產(chǎn)1.細(xì)胞培養(yǎng)(3)傳代細(xì)胞培養(yǎng)特點：①對多種病毒敏感性高1.細(xì)胞培養(yǎng)602.雞胚培養(yǎng)

采用孵化9～14天的雞胚

絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）

嗜神經(jīng)病毒

2.雞胚培養(yǎng)61病毒感染的檢查方法與防治原則課件(同名90)622、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低缺點：操作程序復(fù)雜2、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低63病毒感染的檢查方法與防治原則課件(同名90)643.動物接種

應(yīng)用：尚無敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)

動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物體內(nèi)常帶有潛伏病毒3.動物接種651．病毒增殖鑒定

(1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,

CPE）

①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；

②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鑒定

1．病毒增殖鑒定（二）病毒的鑒定66病毒感染的檢查方法與防治原則課件(同名90)67①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cyt68麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱融69③形成包涵體(inclusionbody)(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)③形成包涵體(inclusionbody)(1)細(xì)胞病變效70腮腺炎病毒感染細(xì)胞(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)＋紅細(xì)胞表面HA受體腮腺炎病毒感染細(xì)胞(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorptio71CPE(-)—風(fēng)疹病毒(+)核苷類藥物③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。IFN-α、β、γ中草藥培養(yǎng)基②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）中草藥特點：特異性高，抗體維持時間長?？刹《?+)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)特點：特異性高，抗體維持時間長①采取標(biāo)本分離病毒為時已晚細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）②繁殖能力高，傳代時間長(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防②不帶異種蛋白(人源性)補(bǔ)體結(jié)合試驗

（complementfixationtest）分離病毒的標(biāo)本和作血清學(xué)診斷的標(biāo)本各有何要求？(3)干擾現(xiàn)象（interference）風(fēng)疹病毒＋人胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(－)?？刹《荆伺吣I細(xì)胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚腎細(xì)胞風(fēng)疹病毒？?？刹《綜PE(-)—風(fēng)疹病毒(+)埃可病毒(-)CPE(+)—風(fēng)疹病毒(-)?？刹《?+)CPE(-)—風(fēng)疹病毒(+)(3)干擾現(xiàn)象（interfer72(4)細(xì)胞代謝改變

細(xì)胞代謝變慢

pH變化減慢(4)細(xì)胞代謝改變732.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），對一般病毒檢測意義不大2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限743.病毒血清學(xué)鑒定

鑒定病毒種、型、亞型

(1)血凝抑制試驗（hemagglutinationinhibitiontest）—正粘病毒型與亞型鑒定

病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗）

病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞＝不凝集

（血凝抑制試驗）

3.病毒血清學(xué)鑒定鑒定病毒種、型、亞型75(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）——多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(gelimmuno-

diffusion

test)

——多種病毒鑒定3.病毒血清學(xué)鑒定(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）3.病毒血清學(xué)鑒定764.病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴(kuò)增核酸雜交基因芯片基因測序4.病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定77（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.蝕斑形成試驗

（plaqueformationtest）

3.50％組織細(xì)胞感染量

（50％tissueculture

infectiousdose,

TCID50）感染性病毒量（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死78抗原變異病毒基因的鑒定宿主細(xì)胞激酶NA三磷酸④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型④可傳50代左右風(fēng)疹病毒＋人胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(－)病毒囊膜表面血凝素(HA)病毒囊膜表面血凝素(HA)③形成包涵體(inclusionbody)光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），雞胚接種（egginoculation）第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防病毒在組織細(xì)胞中增殖的指標(biāo)是什么？組織組織塊分散的單個細(xì)胞單層細(xì)胞尿囊腔（allantoiccavity）③形成包涵體(inclusionbody)呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞接種部位流感病毒、腮腺炎病毒（血凝抑制試驗）(四)新病毒的鑒定核酸類型的測定理化性狀的檢測形態(tài)學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定基因測序和生物對比抗原變異病毒基因的鑒定(四)新病毒的鑒定核酸類型的測定79三、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：①采取標(biāo)本分離病毒為時已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實所分離的病毒的臨床意義④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等三、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：801.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和抗體

病毒失去感染性

特點：特異性高，抗體維持時間長應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查臨床診斷少用1.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和812.補(bǔ)體結(jié)合試驗

（complementfixationtest）

用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體

特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快

應(yīng)用：近期感染指標(biāo)。2.補(bǔ)體結(jié)合試驗

（complementfixatio82四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗體檢測（IgM）四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時內(nèi)出結(jié)果83（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查普通光學(xué)顯微鏡檢查

包涵體（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查84痘苗病毒、人類皰疹病毒核酶（ribozyme）病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶?？刹《荆伺吣I細(xì)胞病毒增殖，CPE(＋)④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：核酸擴(kuò)增技術(shù)③可攜帶潛伏病毒——多種病毒鑒定特點：①對多種病毒敏感病毒在組織細(xì)胞中增殖的指標(biāo)是什么？光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），滅活疫苗（inactivatedvaccine）特點：①對多種病毒敏感(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）③形成包涵體(inclusionbody)體外分裂50～100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測免疫標(biāo)記技術(shù)2.病毒核酸檢測核酸擴(kuò)增技術(shù)核酸雜交技術(shù)基因芯片技術(shù)

基因測序痘苗病毒、人類皰疹病毒（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測85（三）早期抗體檢測可診斷急性感染

特異性IgM抗體：孕婦感染風(fēng)疹病毒

EBV早期抗原抗體

EAV核心抗原抗體

早期抗原的抗體

EAV衣殼抗原抗體（三）早期抗體檢測可診斷急性感染86第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防微生物及其代謝產(chǎn)物生物制品動物免疫血清（biologicalproducts）

免疫細(xì)胞細(xì)胞因子

防治和診斷感染性疾病第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防87滅活疫苗（inactivatedvaccine）活疫苗（livingvaccine）重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）亞單位疫苗（subunitvaccine）化學(xué)提取或人工合成疫苗重組疫苗（recombinantvaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）一、人工主動免疫常用生物制品滅活疫苗（inactivatedvaccine）一、人工主88二、人工被動免疫常用生物制品

免疫球蛋白血清丙種球蛋白

細(xì)胞免疫制劑

IFN-α、β、γ細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF

淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞

——LAK細(xì)胞

二、人工被動免疫常用生物制品免疫球蛋白89第三節(jié)病毒感染的治療

核苷類藥物

非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑蛋白酶抑制劑其他抗病毒藥物

干擾素和干擾素誘生劑

中草藥

基因治療劑

治療性疫苗

抗病化學(xué)制劑反義寡核苷酸干擾RNA核酶（ribozyme）

第三節(jié)病毒感染的治療90核苷類藥物作用機(jī)制

HSV/VZV

無環(huán)鳥苷（NA）病毒胸苷激酶NA一磷酸宿主細(xì)胞激酶

NA三磷酸

（缺乏糖環(huán)3’-OH基）病毒DNA聚合酶核酸鏈延伸被迫終止核苷類藥物作用機(jī)制HSV/VZV無環(huán)91思考題分離病毒的標(biāo)本和作血清學(xué)診斷的標(biāo)本各有何要求？常用組織培養(yǎng)法有幾種？各有何應(yīng)用？病毒在組織細(xì)胞中增殖的指標(biāo)是什么？病毒性感染的快速診斷方法有哪些？預(yù)防病毒性感染有哪些人工自動免疫制劑？診斷病毒的核酸技術(shù)有哪些？

思考題分離病毒的標(biāo)本和作血清學(xué)診斷的標(biāo)本各有何要求？921.細(xì)胞培養(yǎng)(1)原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)組織

組織塊

分散的單個細(xì)胞單層細(xì)胞

剪碎

培