牛病毒檢驗具體操作方法指導(dǎo)操作者按本程序進行正確_第1頁
牛病毒檢驗具體操作方法指導(dǎo)操作者按本程序進行正確_第2頁
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分發(fā)研發(fā)部[]質(zhì)量管理部[]綜合管理部[]生產(chǎn)管理部[]市場銷售部[]財務(wù)部[]目規(guī)定牛檢驗的具體操作方法，指導(dǎo)操作者按本程序規(guī)定進行正確操適用范本程序包括檢驗的操作前準備、培養(yǎng)法和免疫熒光法的具體操作職操作者執(zhí)行本程序，復(fù)核人復(fù)核具體操作，質(zhì)量檢定室負責監(jiān)督本定無標《中民藥典》三部現(xiàn)行材料及設(shè)供試品：陽性對照：牛腹瀉、牛腺、牛細小、呼腸孤、狂犬病病細胞營養(yǎng)液（包括谷胺酰氨、抗生素、NaOH）400ml長成單層的二倍體細胞（MRC-5）、Vero、MBCK，1010ml、5ml、1ml36℃生物安全柜，使用前記錄型號， 生物安全柜A級，為C級無操作程配制84液，方法參《1:250的84液配制程序供試品表面處后的對照、供試品、75%棉放入緩沖間 進入培養(yǎng)間，參見《進出潔凈廠房程序》，供試品、培養(yǎng)基、滅 點燃燈加配制好的無營養(yǎng)液，4.5ml/瓶其中每種細胞的二瓶補加對照，1.5ml/瓶。六瓶補加供試品血余下的各兩瓶接種相應(yīng)的36℃培養(yǎng)21天，陽性對照出現(xiàn)病變，對照未出現(xiàn)，實驗成立將上述接種供試品的每種細胞取2瓶進行血吸附檢0.2～0.5%2～8℃3020～25℃30品檢查結(jié)果均應(yīng)為。將接種副流感的細胞做陽性對照。取培養(yǎng)21天后未病變的細胞瓶，消化后將細胞懸液滴到96孔細胞CO237℃培養(yǎng)過夜。PBS（0.01MpH7.2～7.4）滴加標記了熒光素的牛腹瀉、牛腺、牛細小、呼腸孤、狂犬病、牛副流感單克隆抗體的直接熒光抗體，熒光顯微鏡下觀察，細胞核和細胞漿不顯示任何熒光灶，結(jié)果為滴加牛腹瀉、牛腺、牛細小、呼腸孤、狂犬病、牛副流感抗或單克隆抗體，置密閉濕盒中37℃作用30～50分鐘，取出飛片，棄去，用PBS反復(fù)沖洗數(shù)次，去離子水沖洗一次，自然晾干滴加與上述抗相應(yīng)的熒光抗體，如抗免IgG熒光或抗鼠IgG熒，置密閉濕盒中37℃作用30～50分鐘，取出飛片，棄去，用熒光顯微鏡下觀察，細胞核和細胞漿不顯示任何熒光灶，結(jié)果 注意事認真檢

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