紅細(xì)胞滲透脆性與白細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)總結(jié)課件

紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)

與

羊血白細(xì)胞染色藥學(xué)2班陳旭宇李佳朋紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)

與

羊血白細(xì)胞染色藥學(xué)2班陳旭講解內(nèi)容實(shí)驗(yàn)概述預(yù)實(shí)驗(yàn)情況正式實(shí)驗(yàn)情況創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)講解內(nèi)容實(shí)驗(yàn)概述實(shí)驗(yàn)概述

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、觀察不同濃度的低滲鹽溶液對紅細(xì)胞的影響，加深理解細(xì)胞外液晶體滲透壓相對穩(wěn)定對維持細(xì)胞正常形態(tài)與功能的重要意義。2、掌握白細(xì)胞染色的方法，理解瑞氏染液的作用。二、實(shí)驗(yàn)原理紅細(xì)胞滲透脆性實(shí)驗(yàn)開始出現(xiàn)溶血現(xiàn)象的低滲鹽溶液濃度為該血液紅細(xì)胞的最小抵抗力開始出現(xiàn)完全溶血時(shí)的低滲鹽溶液的濃度則為該紅細(xì)胞的最大抵抗力實(shí)驗(yàn)概述一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)器材及藥品器材及藥品：

小試管、試管架、微量移液管（1000uL與200uL兩種規(guī)格）顯微鏡、載物玻璃片、170mmol/LNaCl溶液實(shí)驗(yàn)對象：

抗凝羊血（抗凝血劑為檸檬酸鈉）實(shí)驗(yàn)器材及藥品器材及預(yù)實(shí)驗(yàn)情況預(yù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、觀察不同濃度的低滲鹽溶液對紅細(xì)胞的影響，加深理解細(xì)胞外液晶體滲透壓相對穩(wěn)定對維持細(xì)胞正常形態(tài)與功能的重要意義2、熟練白細(xì)胞染色的操作，理解瑞氏染液、吉姆薩染色的作用3、查閱相關(guān)文獻(xiàn)，加深對實(shí)驗(yàn)的理解，掌握更全面信息4、總結(jié)實(shí)驗(yàn)的一些注意事項(xiàng)和操作技巧，預(yù)知實(shí)驗(yàn)可能出現(xiàn)的問題，做好應(yīng)對措施5、清楚實(shí)驗(yàn)的大致結(jié)果，給同學(xué)們作為參考預(yù)實(shí)驗(yàn)情況預(yù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模杭t細(xì)胞滲透脆性與白細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)總結(jié)課件紅細(xì)胞滲透脆性與白細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)總結(jié)課件染色原理：血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細(xì)胞核蛋白、淋巴細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞胞質(zhì)為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色或藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì)；染色原理：血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)紅細(xì)胞滲透脆性與白細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)總結(jié)課件預(yù)習(xí)探究一：

由于開始的兩次實(shí)驗(yàn)，我們都習(xí)慣先將羊血存于冰箱中保存，然后取出再在室溫下實(shí)驗(yàn)。

考慮到正式實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，我們會使用剛?cè)』氐难蜓ㄎ唇?jīng)冰箱冷卻實(shí)驗(yàn)）進(jìn)行試驗(yàn)?？紤]到這些溫度和時(shí)間上的差異，我們有必要進(jìn)行模擬實(shí)驗(yàn)，來探究正式實(shí)驗(yàn)環(huán)境下的合理范圍。

試管號試液12345678910170mmol/LNaCl（ml）1.41.31.21.11.00.90.80.70.60.5蒸餾水（ml）0.60.70.80.91.01.11.21.31.41.5NaCl濃度（mmol/L）12011210495867869605243表1：各種低滲鹽溶液的制備預(yù)習(xí)探究一：

由于開始的兩次實(shí)驗(yàn)，我們都習(xí)慣先將羊血存于冰箱實(shí)驗(yàn)溫度/℃離體時(shí)間/h最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/l）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/l）181769586193769495225678310420858631041912495310417243104表2：第一次取血紅細(xì)胞滲透脆性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)溫度/℃離體時(shí)間/h最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmo

表3：第二次取血紅細(xì)胞滲透脆性實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)溫度/℃離體時(shí)間/h最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/l）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/l）171769586203678495225678310421858631041712495310415243104表3：第二次取血紅細(xì)胞滲透脆性實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)溫度/℃離體

表4：第三次取血紅細(xì)胞滲透脆性實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)溫度/℃離體時(shí)間/h最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/l）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/l）19178658621367849525567849523858631042112586310420243104表4：第三次取血紅細(xì)胞滲透脆性實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)溫度/℃離體時(shí)結(jié)論：1、血紅細(xì)胞離體時(shí)間越長滲透脆脆性越大；2、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)同一天內(nèi)的溫度變化在15℃——28℃范圍內(nèi)，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響不明顯。3、羊血不經(jīng)冰箱儲存冷卻，在實(shí)驗(yàn)室溫度環(huán)境下，離體3——5h,預(yù)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：最小抵抗力濃度：95——104mmol/L最大抵抗力濃度：69——78mmol/L結(jié)論：1、血紅細(xì)胞離體時(shí)間越長滲透脆脆性越大；實(shí)驗(yàn)操作總結(jié)：（供以后實(shí)驗(yàn)同學(xué)們參考）a.溶液用前應(yīng)現(xiàn)配，以免水分蒸發(fā)，改變離子濃度。b.溶血的結(jié)果判斷，應(yīng)首先在室溫下靜置一個小時(shí)湖再觀察結(jié)果，先從高濃度觀察，上層初現(xiàn)透明紅色為開始溶血管，溶液透明深紅色、管底紅細(xì)胞完全消失者為完全溶血。如不易判斷可低速離心1分鐘后觀察。c.器材必須清潔干燥，避免引起其他異物影響所致溶血。d.紅細(xì)胞脆性實(shí)驗(yàn)中，可以先向每個試管中加氯化鈉然后再加蒸餾水，加的時(shí)候還有個小技巧，以氯化鈉為例，先將幾個大于1000uL的試管中都加上1000uL的氯化鈉，然后再按900,800到100uL遞減的順序依次加這樣可以節(jié)省時(shí)間實(shí)驗(yàn)操作總結(jié)：（供以后實(shí)驗(yàn)同學(xué)們參考）a.溶液用前應(yīng)現(xiàn)配，以e.血必須直接注入試劑中，不可沿著管壁。試驗(yàn)中我們直接用的滴管取血，可能試管中的血量有差距，建議后面用微量移液器定量取血排除觀察溶血狀況時(shí)，血量不同帶來的影響f.血液和鹽溶液時(shí)不要用力震蕩，靜置及觀察時(shí)不要移動試管。g.染色必須得等到血片干燥后進(jìn)行，否則染不上色h.血膜的沖洗時(shí)水流不能太急，防止將血膜沖掉，應(yīng)用蒸餾水沖血片的上方，然后滑落下的水流沖洗血膜e.血必須直接注入試劑中，不可沿著管壁。試驗(yàn)中我們直接用的滴實(shí)驗(yàn)2：細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)藥品準(zhǔn)備：緩沖液配制：1%KH2PO4+1%NaHPO4(20ml),加水至1000ml，置室溫黑暗處，瓶口密封，防止霉菌污染。姆薩染液配制：藥品：吉姆薩染料（粉末）0.5g、甲醇（AR）33ml、甘油（AR）33ml方法：先將吉姆薩染料放入研缽中，逐漸到甘油研磨溶于甘油中，置于58℃水溫箱內(nèi)90--120min，然后加入甲醇，搖勻后放置數(shù)天，過濾后或不過濾即可使用。（此染液放置室溫陰暗處，時(shí)間越長越好）實(shí)驗(yàn)2：細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)藥品準(zhǔn)備：(2）實(shí)驗(yàn)過程開始時(shí)，一切從零開始，我們的血片制備很不合格，要么過厚，要么不均勻。在耿姝學(xué)姐手把手講解之后，我們不耐其煩，連續(xù)聯(lián)系制作了近30個血片，終于能夠制作出厚度適宜，效果成功的血涂片，并掌握了制片的技巧。聯(lián)系生物實(shí)驗(yàn)一中白細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)用白細(xì)胞液破壞紅細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn)，我們在染色之前對血液使用白細(xì)胞稀釋液排除干擾，但是染色結(jié)果與不加白細(xì)胞染色液相比反而較差，影響染色效果。分析原因有可能是白細(xì)胞染色液引起了PH的改變，或產(chǎn)生液膜稀釋了染液，最后否定了加白細(xì)胞稀釋液進(jìn)行染色的方案。(2）實(shí)驗(yàn)過程開始時(shí)，一切從零開始，我們的血片制備很不合格，經(jīng)驗(yàn)總結(jié)推片經(jīng)驗(yàn)：用移液槍頭沾取羊血點(diǎn)置于載玻片上，呈米粒大小，將推玻片保持與載玻片約30度角，置于血滴正前方，稍往后移與血滴接觸，即可見血液沿推片下緣散開，再勻速沿載玻片平面平穩(wěn)向后滑動，至血膜鋪勻。經(jīng)驗(yàn)總結(jié)紅細(xì)胞滲透脆性與白細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)總結(jié)課件圖1瑞氏染色法

圖2吉姆薩氏染色法

通過預(yù)實(shí)驗(yàn)總結(jié)出的各染色法染色效果：瑞氏染色法：白細(xì)胞核、細(xì)胞漿層次分明，嗜中性白細(xì)胞漿中可見淡紅色染色顆粒。吉姆薩氏染色法：白細(xì)胞核呈藍(lán)色，層次清楚。瑞—吉復(fù)合染色法：白細(xì)胞層次清晰，細(xì)胞漿中染色顆粒可見。圖1瑞氏染色法圖2吉姆薩氏染色法通正式實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：我們在周三下午將PPT交與李老師征求修改意見，并在當(dāng)天晚上修改完畢。于周四晚上，準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需各項(xiàng)儀器與藥品，并寫好板書。周五早上上課前取回羊血。正式實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)過程：實(shí)驗(yàn)過程無遲到、曠課、早退現(xiàn)象，同學(xué)們熱情度很高，認(rèn)真實(shí)驗(yàn)。對同學(xué)的操作過程進(jìn)行嚴(yán)格把關(guān)，使絕大多數(shù)同學(xué)的實(shí)驗(yàn)取得了預(yù)期的結(jié)果，其中章夢甜、陶倩組白細(xì)胞染色觀察效果非常好，能觀察到多個白細(xì)胞清晰鏡像。白細(xì)胞染色出現(xiàn)問題主要為以下幾點(diǎn)：1、血膜涂得過厚，造成觀察困難；2、對染液進(jìn)行沖洗時(shí)不徹底，造成著色過深，出現(xiàn)一大片藍(lán)的現(xiàn)象；3、沖洗過猛，觀察不到白細(xì)胞。在老師和我們的幫助下，同學(xué)們很好解決了這些問題。實(shí)驗(yàn)過程：實(shí)驗(yàn)過程無遲到、曠課、早退現(xiàn)象，同學(xué)們熱情度很高，掌握好染色時(shí)間、染液量和染液沖洗是關(guān)鍵不好，上圖為典型的染液沖洗不好的結(jié)果掌握好染色時(shí)間、染液量和染液沖洗是關(guān)鍵不好，上圖為典型的染液實(shí)驗(yàn)報(bào)告批改情況存在的問題與不足：漏寫：有些同學(xué)實(shí)驗(yàn)儀器及藥品未寫全;或廠家未標(biāo)注;實(shí)驗(yàn)室溫度濕度等環(huán)境記錄;實(shí)驗(yàn)原理未寫或?qū)懙牟蝗?。討論：?shí)驗(yàn)結(jié)果分析不到位；實(shí)驗(yàn)操作中的討論過于寬泛；文獻(xiàn)內(nèi)容過多引用，缺乏自己的語言；一些討論不夠嚴(yán)謹(jǐn)，理論支持太少。創(chuàng)新：創(chuàng)新方面未結(jié)合實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況，有些不實(shí)用。實(shí)驗(yàn)報(bào)告批改情況存在的問題與不足：有不少同學(xué)在報(bào)告中反映瑞士染色效果好于吉姆薩染色，這可能是由于正式實(shí)驗(yàn)中所使用吉姆薩染液比較新的原因。在吉姆薩染液放置一個月后，染色效果有很大提高，在我組后期染色操作中發(fā)現(xiàn)，吉姆薩染色效果要優(yōu)于瑞氏染液，因此總結(jié)到經(jīng)驗(yàn)：吉姆薩染液最好提前一個月配置，暗處放置。有不少同學(xué)在報(bào)告中反映瑞士染色效果好于吉姆薩染色，這可能是由創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)1、進(jìn)一步探究溫度、離體時(shí)間對紅細(xì)胞形態(tài)及滲透脆性

的影響；2、利用紫外分光光度計(jì)測不同地深鹽溶液中的溶血度；3、探究白細(xì)胞染色片中的藍(lán)紫色小顆粒聚集物來源4、改良白細(xì)胞染色方法創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)1、進(jìn)一步探究溫度、離體時(shí)間對紅細(xì)胞形態(tài)及滲透脆性一、探討離體時(shí)間、溫度對紅細(xì)胞

形態(tài)及滲透脆性的影響紅細(xì)胞滲透脆性受細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、細(xì)胞膜流動性、以及紅細(xì)胞幾何特性及紅細(xì)胞膜抗張強(qiáng)度等多個因素的影響，其中與紅細(xì)胞表面面積和體積的比值有很大關(guān)系。通過批閱報(bào)告，我們發(fā)現(xiàn)大多數(shù)同學(xué)沒有對不同濃度低滲鹽溶液中的血紅細(xì)胞進(jìn)行鏡檢,而且往屆助教也沒有進(jìn)行形態(tài)變化的觀察。一、探討離體時(shí)間、溫度對紅細(xì)胞

形態(tài)及滲透脆性的影響紅細(xì)胞滲1.2方法:對三次取的羊血材料分別進(jìn)行了相同的實(shí)驗(yàn)操作。取適量新鮮羊血（A液）分別置于4個潔凈燒杯，標(biāo)號A1.A2.A3.A4。實(shí)驗(yàn)過程中，各組羊血、低滲鹽溶液、A滴入B、均勻、靜置、觀察各步驟均在各自的恒溫環(huán)境中進(jìn)行。

表6各種低滲鹽溶液(B液）的制備試管號試液12345678910170mmol/LNaCl（mL）1.41.31.21.11.00.90.80.70.60.5蒸餾水（mL）0.60.70.80.91.01.11.21.31.41.5NaCl濃度（mmol/L）120112104958678696052431.2方法:對三次取的羊血材料分別進(jìn)行了相同的實(shí)驗(yàn)操作。取1℃下羊血紅細(xì)胞均出現(xiàn)表面凹凸不平，呈不規(guī)則球形。有萎縮趨勢。紅細(xì)胞變化明顯，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)變形嚴(yán)重，易發(fā)生溶血。聯(lián)系生物化學(xué)知識，降低溫度會抑制細(xì)胞各類酶的活性，如呼吸酶、轉(zhuǎn)氨酶等。導(dǎo)致細(xì)胞生物活性降低。細(xì)胞膜通透性能改變，紅細(xì)胞脆性增大。1℃下羊血紅細(xì)胞均出現(xiàn)表面凹凸不平，呈不規(guī)則球形。有萎縮趨勢室溫下羊血紅細(xì)胞的變化比較明顯，部分細(xì)胞形狀變化嚴(yán)重，大多變癟，甚至有鐮刀狀紅細(xì)胞出現(xiàn)?？梢酝茢嘣谡星闆r下檢測出的紅細(xì)胞脆性肯定與在體的規(guī)則球形紅細(xì)胞的滲透脆性不同。室溫下羊血紅細(xì)胞的變化比較明顯，部分細(xì)胞形狀變化嚴(yán)重，大多變38℃下保存的羊血紅細(xì)胞變化情況不如25℃的明顯，但是依然可以看出紅細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生變形，表面凹凸不平，呈現(xiàn)不規(guī)則塊狀、橢圓狀、三角狀。38℃下保存的羊血紅細(xì)胞變化情況不如25℃的明顯，但是依然可51℃下保存的羊血紅細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的變形。大多數(shù)紅細(xì)胞變癟，呈鐮刀狀或飛碟狀。我們推測高溫使血液蒸發(fā)失水，血液中離子等溶質(zhì)濃度升高，滲透壓增大，導(dǎo)致紅細(xì)胞失水變癟。51℃下保存的羊血紅細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的變形。大多數(shù)紅細(xì)胞變癟，呈在加入少量51℃蒸餾水稀釋后，部分細(xì)胞干癟情況減輕，形狀又恢復(fù)，但仍有許多飛碟狀、鐮刀狀細(xì)胞?？梢娺@種變化是多方面的，高溫對紅細(xì)胞的活性產(chǎn)生了不可逆的影響。在加入少量51℃蒸餾水稀釋后，部分細(xì)胞干癟情況減輕，形狀又

表7.離體3h不同溫度下的羊血紅細(xì)胞脆性標(biāo)號實(shí)驗(yàn)溫度/℃最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/L）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/L）A11678586A225678495A338678586A451678586表7.離體3h不同溫度下的羊血紅細(xì)胞脆性標(biāo)號實(shí)驗(yàn)溫度/℃

表8.離體5h不同溫度下的羊血紅細(xì)胞脆性標(biāo)號實(shí)驗(yàn)溫度/℃最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/L）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/L）A11678495A225678495A338678586A451678586表8.離體5h不同溫度下的羊血紅細(xì)胞脆性標(biāo)號實(shí)驗(yàn)溫度/℃

表9.離體12h不同溫度下的羊血紅細(xì)胞脆性標(biāo)號實(shí)驗(yàn)溫度/℃最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/L）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/L）A11678495A225678495A338678586A451678586表9.離體12h不同溫度下的羊血紅細(xì)胞脆性標(biāo)號實(shí)驗(yàn)溫度/

表10.25℃下探究更準(zhǔn)確的最大最小抵抗力試管號試液12345678170mmol/LNaCl（ml）1.281.261.241.221.081.061.041.02蒸餾水（ml）0.720.740.760.780.920.940.960.98NaCl濃度（mmol/L）10910710510492908887實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、2、3、4、5、6管皆為上層透明紅色，下層渾濁紅7、8管為透明紅色表10.25℃下探究更準(zhǔn)確的最大最小抵抗力試1.4得出結(jié)論：溫度對紅細(xì)胞的形態(tài)有影響，其中高溫（51℃）對紅細(xì)胞形態(tài)影響最大；相同溫度下，紅細(xì)胞的脆性隨時(shí)間的增長而變大；相同時(shí)間下，1℃和51℃下紅細(xì)胞脆性變大速度較室溫和體溫快，溫度偏離體溫程度越大，越容易使紅細(xì)胞脆性增大；保存環(huán)境的溫度對紅細(xì)胞的形態(tài)有很大影響。1.4得出結(jié)論：溫度對紅細(xì)胞的形態(tài)有影響，其中高溫（51℃）實(shí)驗(yàn)2、紅細(xì)胞在不同濃度低滲氯化鈉溶液中溶血率的測定2.1概述：傳統(tǒng)的測定方法采用目測觀察其溶血情況,需要靜置一小時(shí)后觀察,觀察過程中不能晃動。此法僅能觀察到溶血的大致情況,不能量化紅細(xì)胞破裂的程度。本試驗(yàn)采用分光光度法精確測定紅細(xì)胞在低滲氯化鈉溶液中的溶血情況。進(jìn)一步了解血紅蛋白的脆性。實(shí)驗(yàn)2、紅細(xì)胞在不同濃度低滲氯化鈉溶液中溶血率的測定2.1概2.3實(shí)驗(yàn)步驟2.3.1配制不同濃度低滲氯化鈉溶液取口徑相同、清潔干凈的小試管做好編號,制成不同濃度的低滲鹽溶液,每管總量為3.0mL，第11管為蒸餾水,具體配制情況見如下表所示：試管號試液123456789101112170mmol/LNaCl（ml）2.11.951.81.651.51.351.21.050.90.752.70蒸餾水（ml）0.91.051.21.351.51.651.81.952.12.270.33.0NaCl濃度（mmol/L）1201121049586786960524319402.3實(shí)驗(yàn)步驟2.3.1配制不同濃度低滲氯化鈉溶液試管號122.3.2最大吸收波長測定取12管加入0.1mL血液,輕輕顛倒混勻5min,3000r/min離心10min,取上清液至比色皿中,以11管(生理鹽水）為空白對照,754N紫外可見分光光度計(jì)上掃描,測得其最大吸收波長為590nm.2.3.2最大吸收波長測定取12管加入0.1mL血液,2.3.3紅細(xì)胞在不同濃度低滲氯化鈉溶液中溶血率的測定依次向12支試管內(nèi)各加0.1ml血液,輕輕顛倒混勻5min置入干燥離心管中以3000r/min離心10min,取上清在分光光度計(jì)590nm波長處檢測。用11管生理鹽水的上清調(diào)零,測其他每管吸光度。以12管測出的吸光度作最大溶血的吸光度,分別計(jì)算出1-10支管的溶血率。溶血率=（樣品吸光度/最大溶血吸光度）×100%。

2.3.3紅細(xì)胞在不同濃度低滲氯化鈉溶液中溶血率的測定依次

表12不同濃度低滲氯化鈉溶液對

紅細(xì)胞滲透脆性的影響試管標(biāo)號NaCl溶液濃度（mmol/L）OD值溶血率（%）目測法11200.0799.5-21120.0829.8-31040.20724.8-4950.31237.3+5860.62474.6+6780.6678.9+7690.73888.3+8600.75490.2+9520.76791.7+10430.79595.1+11194001200.836100+

(注："-"表示不溶血,"+"表示部分溶血,"+"表示完全溶血)表12不同濃度低滲氯化鈉溶液對

紅細(xì)胞滲透脆性的影響紅細(xì)胞滲透脆性與白細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)總結(jié)課件探究究竟對人體血液的影響，不應(yīng)該想當(dāng)然的在血液中直接加入酒精，而應(yīng)該分析究竟在人體的代謝產(chǎn)物，進(jìn)入血液的代謝產(chǎn)物是什么。酒精進(jìn)入體內(nèi)后在乙醇脫氫酶(ADH)和乙醛脫氫酶(ALDH)的作用下逐步氧化成乙酸,其中間代謝產(chǎn)物乙醛對機(jī)體的毒性作用最大。2.4.2酒精、葡萄糖對紅細(xì)胞滲透脆性的影響酒精代謝過程：乙醇→乙醛→乙酸乙醇→乙醛

2CH3CH2OH+O2

→2

CH3CHO+2H2O乙醛→乙酸

2CH3CHO+O2

→

2CH3COOH探究究竟對人體血液的影響，不應(yīng)該想當(dāng)然的在血液中直接加入酒精探究1：取血方法同上,依次向14支試管內(nèi)各加0.1mL血液后,用加樣器再分別加入0.790g/mL無水乙醛5uL。來模擬人在大量飲酒后代謝在血液中乙醛濃度對血紅細(xì)胞脆性影響。探究2：取血方法同上,依次向14支試管內(nèi)各加0.1mL血液后,用加樣器再分別加入0.05g/mL葡萄糖溶液10UL。來模擬人在大量攝入糖活著患有糖尿病后血液中高糖濃度對血紅細(xì)胞脆性影響。拓展探究探究1：取血方法同上,依次向14支試管內(nèi)各加0.1mL血表13乙醛對紅細(xì)胞滲透脆性的影響試管標(biāo)號NaCl溶液濃度（mmol/L）OD值溶血率（%）11200.0637.221120.0788.831040.12514.44950.25128.95860.58967.86780.67477.67690.76986.38600.78288.69520.79190.210430.80792.911194001200.869100表13乙醛對紅細(xì)胞滲透脆性的影響試管標(biāo)號NaCl溶2.4.2酒精、葡萄糖對紅細(xì)胞滲透脆性的影響表13乙醛對紅細(xì)胞滲透脆性的影響

試管標(biāo)號NaCl溶液濃度（mmol/L）OD值溶血率（%）11200.0637.221120.0788.831040.12514.44950.25128.95860.58967.86780.67477.67690.76986.38600.78288.69520.79190.210430.80792.911194001200.8691002.4.2酒精、葡萄糖對紅細(xì)胞滲透脆性的影響表13表14葡萄糖對紅細(xì)胞滲透脆性的影響試管標(biāo)號NaCl溶液濃度（mmol/L）OD值溶血率（%）11200.0758.421120.0788.631040.0819.14950.19621.95860.33161.86780.64171.87690.68979.18600.77681.99520.7983.510430.79685.211194001200.893100表14葡萄糖對紅細(xì)胞滲透脆性的影響試管標(biāo)號NaCl溶紅細(xì)胞滲透脆性與白細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)總結(jié)課件2.4.3結(jié)果分析在加入乙醛之后羊血紅細(xì)胞對低滲鹽溶液抵抗力略增高，紅細(xì)胞脆性減小。78mmol--118mmol的NaCl溶液內(nèi)紅細(xì)胞的溶血率比不加乙醛前降低5-12個百分點(diǎn),溶血程度降低明顯,說明紅細(xì)胞破裂明顯減少。我們查閱相關(guān)資料，發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞脆性下降的原因可能是乙醇分解后產(chǎn)生的乙醛濃度不斷增加對紅細(xì)胞膜的固化修飾所致[4]。此外，隨著血液中乙醛逐漸被分解,其對紅細(xì)胞的修飾作用解除,紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能恢復(fù)正常;而且乙醇代謝的產(chǎn)物----乙酸濃度比例不斷上升可能會使紅細(xì)膜性增高,這兩種作用的協(xié)調(diào)將使得紅細(xì)胞脆性逐步恢復(fù)正常。參考文獻(xiàn)：[4]郭希超,陳曉剛,陳瑜，等.急性酒精中毒后紅細(xì)胞膜脆性檢查.臨床檢驗(yàn)雜志.2001,19(3):186-188.2.4.3結(jié)果分析在加入乙醛之后羊血紅細(xì)胞對低滲鹽溶液抵抗由于實(shí)驗(yàn)室條件限制，我們有設(shè)計(jì)了一組加葡萄糖的實(shí)驗(yàn)，但做過之后思考發(fā)現(xiàn)，5%的葡萄糖溶液也常作為血漿等滲液使用。通常注射制劑的血漿等滲液的調(diào)配很重要，應(yīng)用NaCl當(dāng)量法,葡萄糖的NaCl當(dāng)量為0.18[5]。加入葡萄糖，從某一角度講相當(dāng)于提高了NaCl低滲夜的濃度，無疑會產(chǎn)生紅細(xì)胞脆性減小的結(jié)果。不過可以大幅度提高葡萄糖濃度，來探究高糖環(huán)境對紅細(xì)胞脆性的影響。有資料顯示[6]，高濃度葡萄糖會誘導(dǎo)的紅細(xì)胞磷脂酰絲氨酸暴露、滲透脆性增高和膜脂質(zhì)過氧化損傷。參考文獻(xiàn)：[5]崔福德.藥劑學(xué)（第五版）.北京：人民衛(wèi)生出版社.

2007，9：455-457[6]權(quán)國波,韓穎,楊超,等.海藻糖抑制高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的紅細(xì)胞磷脂酰絲氨酸暴露、滲透脆性增高和膜脂質(zhì)過氧化損傷的研究.中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志2008;16(6):1442-1446由于實(shí)驗(yàn)室條件限制，我們有設(shè)計(jì)了一組加葡萄糖的實(shí)驗(yàn)，但做過之在加樣中,我們改用微量加樣器加樣,加樣準(zhǔn)確消除了濃度誤差對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。通過其溶血度變化從而證明用分光分度法可以用于臨床初步篩選對紅細(xì)胞膜穩(wěn)定的藥品以及對紅細(xì)胞膜破壞的藥品,對靜脈注射制劑新藥的安全性是一種安全有效準(zhǔn)確的評價(jià)方法。此外，我們還可以依據(jù)本實(shí)驗(yàn)，再加入維生素C（膳食、輔助性藥物）、乳酸（無氧運(yùn)動）、血氨（人體正常數(shù)值不超過60umol/L）、甘油（注射用溶劑的一種）等物質(zhì)來探究因?yàn)轱嬍场⑤斠?、運(yùn)動、疾病等原因?qū)е碌难涵h(huán)境改變對紅細(xì)胞脆性的影響。進(jìn)一步拓展進(jìn)一步拓展三、染色中觀察到的小顆粒藍(lán)色聚集物是什么？猜想：1、制片問題？2、染液殘?jiān)?、紅細(xì)胞干擾？4、白細(xì)胞破裂釋放物質(zhì)？5、細(xì)菌？6、血液中其他物質(zhì)?三、染色中觀察到的小顆粒藍(lán)色聚集物是什么？猜想：1、制片問題？探究過程：我們最開始覺得這種現(xiàn)象的發(fā)生可能是因?yàn)椴僮鞑灰?guī)范，血片制的太厚，重新制薄片后觀察，又出現(xiàn)些許小顆粒聚集現(xiàn)象，猜測可能是染料殘留物或者是破碎的紅細(xì)胞。于是我們又重新做了一遍，將制片洗完全，觀察，仍然在視野中發(fā)現(xiàn)少量聚集物，于是排除染料殘留的可能性。1、制片問題？探究過程：白細(xì)胞破裂？對于白細(xì)胞破裂的猜測，我們的想法是從血液中分離處理白細(xì)胞直接進(jìn)行染色，于是查閱文獻(xiàn)，找尋血液中分離白細(xì)胞的方法:1、簡單離心分離法：直接取樣血液于離心管中3000r/min離心分離10min，取上清液，做成血片，染色觀察；2、Ficoll-泛影鈉（Ficoll-Hypaque）密度梯度及紅細(xì)胞裂解法，首先配制白細(xì)胞緩沖液，漢克斯液配置好。然后提取好白細(xì)胞后，使用對照的方法，對其中一組加不同濃度的低滲鹽溶液，或者加不等量的蒸餾水，將白細(xì)胞脹破。然后制片染色，顯微鏡下觀察，與對照組做對比，觀察是否有相同的聚集現(xiàn)象。白細(xì)胞破裂？對于白細(xì)胞破裂的猜測，我們的想法是從血液中分離處后來，由于實(shí)驗(yàn)室缺乏所需藥品，而且該法對無菌條件的要求嚴(yán)格，我們在進(jìn)行一半時(shí)不得不中途放棄，感到非常遺憾。但這將作為我們今后研究的課題，進(jìn)一步激發(fā)我們對血液細(xì)胞研究的興趣!繼續(xù)征程!!后來，由于實(shí)驗(yàn)室缺乏所需藥品，而且該法對無菌條件的要求嚴(yán)格，四、染色方法的改進(jìn)1、瑞氏染色法的改進(jìn)常規(guī)組：瑞氏染色液3-5滴於血膜染色1~2min后加蒸餾水6-8滴，2-3min鏡檢分類。改進(jìn)組:血膜片在0.85%的生理鹽水溶液中浸泡1-1.5秒然后加入瑞氏染色液3-5滴染色10-15秒后用蒸餾水沖洗，鏡檢分類。四、染色方法的改進(jìn)1、瑞氏染色法的改進(jìn)鏡檢觀察改進(jìn)組染色片在鏡下偶見紅細(xì)胞淡影，白細(xì)胞染色良好。討論：優(yōu)點(diǎn)：①本方法可以縮短染色時(shí)間。②白細(xì)胞清晰地鋪在玻璃片上，偶見紅細(xì)胞淡影。③改進(jìn)組主要是生理鹽水傾溢血膜片上，在血膜外形成一層液態(tài)膜，阻止染色液與紅細(xì)胞直接接觸，延緩了紅細(xì)胞與染色液的結(jié)合。鏡檢觀察改進(jìn)組染色片在鏡下偶見紅細(xì)胞淡影，白細(xì)胞染色良好。討2、姬姆薩染色法改進(jìn)1、染液配制

取分析純姬姆薩氏粉0.5g,甘油2.5ml,甲醇2.5ml。將姬姆薩氏粉置于乳缽,研溶于少量甘油中,再加入全部甘油,傾于燒瓶內(nèi),置60℃水浴2h,并不斷振搖攪拌,促其完全溶解,再加入甲醇混合過濾,存放2～3周后使用。臨用時(shí)取原液以中性蒸餾水或離子水作10倍稀釋。2、抹片制作血液制成推片,組織制成觸片或抹片,滲出液、分泌物和培養(yǎng)物視其黏稠度直接或加生理鹽水稀調(diào)制作涂片,干燥,火焰固定。3、加溫染色滴加姬姆薩氏染色液覆蓋整個抹片,在酒精燈外焰上方約10cm處徐徐擺動玻片,溫染色0.5min,再自然染色3min,蒸餾水沖洗至不褪色時(shí),吸水紙吸干玻片。2、姬姆薩染色法改進(jìn)1、染液配制4、鏡檢觀察討論：1、染色速度快,從染色到鏡檢僅需6min;2、染色效果好,抹片染色清晰度高;3、節(jié)省染料,固定時(shí)不用甲醇,避免了在染色缸內(nèi)浸泡抹片浪費(fèi)染色液的問題鏡下背景為淡紅色,出現(xiàn)大量染成藍(lán)紫色的紅細(xì)胞！有異?，F(xiàn)象！4、鏡檢觀察討論：鏡下背景為淡紅色,出現(xiàn)大量染成藍(lán)紫色的紅酒精燈固定后的血片酒精燈固定后的血片3、血涂片的雙重染色法的改良原理：紅細(xì)胞呈淡紅色，中性粒細(xì)胞的胞質(zhì)呈粉紅色，含有大小不等的紫紅色顆粒。嗜酸性粒細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)充滿粗大均勻的嗜酸性顆粒，染成桔紅色，嗜堿性粒細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)含有嗜堿性顆粒，分布不均勻，大小不等，染成藍(lán)紫色，單核細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)有嗜天青顆粒，胞質(zhì)呈灰藍(lán)色，淋巴細(xì)胞胞質(zhì)呈天藍(lán)色方法：1、新鮮血涂片自然晾干2、瑞氏染液染色5min蒸餾水沖洗數(shù)遍3、0.05％乙酸分色3s，蒸餾水沖洗兩遍4、稀釋了的姬姆薩染液染色10min，蒸餾水沖洗數(shù)遍，吹干5、無水酒精脫水15s左右3、血涂片的雙重染色法的改良原理：紅細(xì)胞呈淡紅色，中性粒細(xì)胞鏡檢觀察討論：1、兩種染液分別進(jìn)行染色，避免了成電的產(chǎn)生，用0.05％乙酸分色。2、血涂片直接用瑞氏染液固定節(jié)省時(shí)間，配制染液蒸餾水的pH值為6.7~7.0，但染液染色的順序不能顛倒數(shù)目極多的紅細(xì)胞，再次出現(xiàn)異常!鏡檢觀察討論：數(shù)目極多的紅細(xì)胞，再次出現(xiàn)異常!紙上得來終覺淺絕知此事要躬行紙上得來終覺淺絕知此事要躬行討論：三個白細(xì)胞染色法改良的實(shí)驗(yàn)中，只有第一個瑞氏的改良法是成功的，而從姬姆薩染色法的改進(jìn)和雙重染色法的改良我們可以看出，實(shí)驗(yàn)中被染色的并不是白細(xì)胞，而是紅細(xì)胞。與所查文獻(xiàn)中所給結(jié)果并不一致，我們多做了幾遍，觀察的現(xiàn)象依然如此，依然是很多的紅細(xì)胞，考慮到我們的藥品，實(shí)驗(yàn)步驟都嚴(yán)格正確的配制和實(shí)行。所以猜測原因：1、實(shí)驗(yàn)所用血源的不同；2、實(shí)驗(yàn)室大環(huán)境的不同；3、文獻(xiàn)有誤。這次試驗(yàn)給我們提了個醒，那就是在我們實(shí)驗(yàn)報(bào)告的文獻(xiàn)查閱中，不能簡單的、一股腦的將其全盤照收，要批判性的引用，首先要考慮文獻(xiàn)本身的正確性，有些實(shí)驗(yàn)結(jié)論要親自實(shí)驗(yàn)后才能認(rèn)同，要知道實(shí)踐才是檢驗(yàn)真理的唯一標(biāo)準(zhǔn)。討論：本次實(shí)驗(yàn)基本完成了老師們提出的要求，雖然有諸多不足之處，但在正式實(shí)驗(yàn)當(dāng)中并未出現(xiàn)太大的紕漏，同學(xué)們都很順利、很好的完成了實(shí)驗(yàn)。對此，我們要感謝李老師在整個實(shí)驗(yàn)過程中給予了我們諸多建設(shè)性意見。同時(shí)，我們也要感謝實(shí)驗(yàn)室中的學(xué)姐、學(xué)長們教給了我們一些儀器的使用方法。

這次實(shí)驗(yàn)雖然花了很長很長的時(shí)間與很多很多的精力，但同樣，讓我們收獲了很多很多。我們不僅對這個實(shí)驗(yàn)有了很深的了解，而且從這個實(shí)驗(yàn)中知道了一個科研項(xiàng)目的整個流程、知道了如何去進(jìn)行一個科研項(xiàng)目，如何從發(fā)現(xiàn)問題走到解決問題。

我們的這次經(jīng)歷為我們以后的科研道路起到了基石作用。我們會繼續(xù)努力，不負(fù)老師的教導(dǎo)，同學(xué)們的支持！

尾聲本次實(shí)驗(yàn)基本完成了老師們提出的要求，雖然有諸多不足之處，但在參考文獻(xiàn)：[1]劉墨祥,于紅艷,黃櫻,等.桔梗總皂苷與其總次皂苷溶血效應(yīng)的比較研究[J].揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào),2006,27(4):26-28.[2]NikaidoT,KoikeK,MitsunagaKetal.Twonewtriterpenoidsaponinsfromplatycodongrandiflorum[J].ChemPharmBul,l1999,47(6):903-904.[3]張義兵,田會,李建民,等.離心力與離心次數(shù)對MAP洗滌紅細(xì)胞脆性及損傷的影響[J].河北醫(yī)藥,2005,27(4):386-388.[4]郭希超,陳曉剛,陳瑜，等.急性酒精中毒后紅細(xì)胞膜脆性檢查.臨床檢驗(yàn)雜志.2001,19(3):186-188.[5]崔福德.藥劑學(xué)（第五版）.北京：人民衛(wèi)生出版社.2007，9：455-457[6]權(quán)國波,韓穎,楊超,等.海藻糖抑制高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的紅細(xì)胞磷脂酰絲氨酸暴露、滲透脆性增高和膜脂質(zhì)過氧化損傷的研究.中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志2008;16(6):1442-1446參考文獻(xiàn)：[1]劉墨祥,于紅艷,黃櫻,等.桔梗總Thankyou！Thankyou！紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)

與

羊血白細(xì)胞染色藥學(xué)2班陳旭宇李佳朋紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)

與

羊血白細(xì)胞染色藥學(xué)2班陳旭講解內(nèi)容實(shí)驗(yàn)概述預(yù)實(shí)驗(yàn)情況正式實(shí)驗(yàn)情況創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)講解內(nèi)容實(shí)驗(yàn)概述實(shí)驗(yàn)概述

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、觀察不同濃度的低滲鹽溶液對紅細(xì)胞的影響，加深理解細(xì)胞外液晶體滲透壓相對穩(wěn)定對維持細(xì)胞正常形態(tài)與功能的重要意義。2、掌握白細(xì)胞染色的方法，理解瑞氏染液的作用。二、實(shí)驗(yàn)原理紅細(xì)胞滲透脆性實(shí)驗(yàn)開始出現(xiàn)溶血現(xiàn)象的低滲鹽溶液濃度為該血液紅細(xì)胞的最小抵抗力開始出現(xiàn)完全溶血時(shí)的低滲鹽溶液的濃度則為該紅細(xì)胞的最大抵抗力實(shí)驗(yàn)概述一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)器材及藥品器材及藥品：

小試管、試管架、微量移液管（1000uL與200uL兩種規(guī)格）顯微鏡、載物玻璃片、170mmol/LNaCl溶液實(shí)驗(yàn)對象：

抗凝羊血（抗凝血劑為檸檬酸鈉）實(shí)驗(yàn)器材及藥品器材及預(yù)實(shí)驗(yàn)情況預(yù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、觀察不同濃度的低滲鹽溶液對紅細(xì)胞的影響，加深理解細(xì)胞外液晶體滲透壓相對穩(wěn)定對維持細(xì)胞正常形態(tài)與功能的重要意義2、熟練白細(xì)胞染色的操作，理解瑞氏染液、吉姆薩染色的作用3、查閱相關(guān)文獻(xiàn)，加深對實(shí)驗(yàn)的理解，掌握更全面信息4、總結(jié)實(shí)驗(yàn)的一些注意事項(xiàng)和操作技巧，預(yù)知實(shí)驗(yàn)可能出現(xiàn)的問題，做好應(yīng)對措施5、清楚實(shí)驗(yàn)的大致結(jié)果，給同學(xué)們作為參考預(yù)實(shí)驗(yàn)情況預(yù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模杭t細(xì)胞滲透脆性與白細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)總結(jié)課件紅細(xì)胞滲透脆性與白細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)總結(jié)課件染色原理：血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細(xì)胞核蛋白、淋巴細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞胞質(zhì)為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色或藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì)；染色原理：血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)紅細(xì)胞滲透脆性與白細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)總結(jié)課件預(yù)習(xí)探究一：

由于開始的兩次實(shí)驗(yàn)，我們都習(xí)慣先將羊血存于冰箱中保存，然后取出再在室溫下實(shí)驗(yàn)。

考慮到正式實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，我們會使用剛?cè)』氐难蜓ㄎ唇?jīng)冰箱冷卻實(shí)驗(yàn)）進(jìn)行試驗(yàn)?？紤]到這些溫度和時(shí)間上的差異，我們有必要進(jìn)行模擬實(shí)驗(yàn)，來探究正式實(shí)驗(yàn)環(huán)境下的合理范圍。

試管號試液12345678910170mmol/LNaCl（ml）1.41.31.21.11.00.90.80.70.60.5蒸餾水（ml）0.60.70.80.91.01.11.21.31.41.5NaCl濃度（mmol/L）12011210495867869605243表1：各種低滲鹽溶液的制備預(yù)習(xí)探究一：

由于開始的兩次實(shí)驗(yàn)，我們都習(xí)慣先將羊血存于冰箱實(shí)驗(yàn)溫度/℃離體時(shí)間/h最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/l）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/l）181769586193769495225678310420858631041912495310417243104表2：第一次取血紅細(xì)胞滲透脆性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)溫度/℃離體時(shí)間/h最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmo

表3：第二次取血紅細(xì)胞滲透脆性實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)溫度/℃離體時(shí)間/h最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/l）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/l）171769586203678495225678310421858631041712495310415243104表3：第二次取血紅細(xì)胞滲透脆性實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)溫度/℃離體

表4：第三次取血紅細(xì)胞滲透脆性實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)溫度/℃離體時(shí)間/h最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/l）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/l）19178658621367849525567849523858631042112586310420243104表4：第三次取血紅細(xì)胞滲透脆性實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)溫度/℃離體時(shí)結(jié)論：1、血紅細(xì)胞離體時(shí)間越長滲透脆脆性越大；2、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)同一天內(nèi)的溫度變化在15℃——28℃范圍內(nèi)，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響不明顯。3、羊血不經(jīng)冰箱儲存冷卻，在實(shí)驗(yàn)室溫度環(huán)境下，離體3——5h,預(yù)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：最小抵抗力濃度：95——104mmol/L最大抵抗力濃度：69——78mmol/L結(jié)論：1、血紅細(xì)胞離體時(shí)間越長滲透脆脆性越大；實(shí)驗(yàn)操作總結(jié)：（供以后實(shí)驗(yàn)同學(xué)們參考）a.溶液用前應(yīng)現(xiàn)配，以免水分蒸發(fā)，改變離子濃度。b.溶血的結(jié)果判斷，應(yīng)首先在室溫下靜置一個小時(shí)湖再觀察結(jié)果，先從高濃度觀察，上層初現(xiàn)透明紅色為開始溶血管，溶液透明深紅色、管底紅細(xì)胞完全消失者為完全溶血。如不易判斷可低速離心1分鐘后觀察。c.器材必須清潔干燥，避免引起其他異物影響所致溶血。d.紅細(xì)胞脆性實(shí)驗(yàn)中，可以先向每個試管中加氯化鈉然后再加蒸餾水，加的時(shí)候還有個小技巧，以氯化鈉為例，先將幾個大于1000uL的試管中都加上1000uL的氯化鈉，然后再按900,800到100uL遞減的順序依次加這樣可以節(jié)省時(shí)間實(shí)驗(yàn)操作總結(jié)：（供以后實(shí)驗(yàn)同學(xué)們參考）a.溶液用前應(yīng)現(xiàn)配，以e.血必須直接注入試劑中，不可沿著管壁。試驗(yàn)中我們直接用的滴管取血，可能試管中的血量有差距，建議后面用微量移液器定量取血排除觀察溶血狀況時(shí)，血量不同帶來的影響f.血液和鹽溶液時(shí)不要用力震蕩，靜置及觀察時(shí)不要移動試管。g.染色必須得等到血片干燥后進(jìn)行，否則染不上色h.血膜的沖洗時(shí)水流不能太急，防止將血膜沖掉，應(yīng)用蒸餾水沖血片的上方，然后滑落下的水流沖洗血膜e.血必須直接注入試劑中，不可沿著管壁。試驗(yàn)中我們直接用的滴實(shí)驗(yàn)2：細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)藥品準(zhǔn)備：緩沖液配制：1%KH2PO4+1%NaHPO4(20ml),加水至1000ml，置室溫黑暗處，瓶口密封，防止霉菌污染。姆薩染液配制：藥品：吉姆薩染料（粉末）0.5g、甲醇（AR）33ml、甘油（AR）33ml方法：先將吉姆薩染料放入研缽中，逐漸到甘油研磨溶于甘油中，置于58℃水溫箱內(nèi)90--120min，然后加入甲醇，搖勻后放置數(shù)天，過濾后或不過濾即可使用。（此染液放置室溫陰暗處，時(shí)間越長越好）實(shí)驗(yàn)2：細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)藥品準(zhǔn)備：(2）實(shí)驗(yàn)過程開始時(shí)，一切從零開始，我們的血片制備很不合格，要么過厚，要么不均勻。在耿姝學(xué)姐手把手講解之后，我們不耐其煩，連續(xù)聯(lián)系制作了近30個血片，終于能夠制作出厚度適宜，效果成功的血涂片，并掌握了制片的技巧。聯(lián)系生物實(shí)驗(yàn)一中白細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)用白細(xì)胞液破壞紅細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn)，我們在染色之前對血液使用白細(xì)胞稀釋液排除干擾，但是染色結(jié)果與不加白細(xì)胞染色液相比反而較差，影響染色效果。分析原因有可能是白細(xì)胞染色液引起了PH的改變，或產(chǎn)生液膜稀釋了染液，最后否定了加白細(xì)胞稀釋液進(jìn)行染色的方案。(2）實(shí)驗(yàn)過程開始時(shí)，一切從零開始，我們的血片制備很不合格，經(jīng)驗(yàn)總結(jié)推片經(jīng)驗(yàn)：用移液槍頭沾取羊血點(diǎn)置于載玻片上，呈米粒大小，將推玻片保持與載玻片約30度角，置于血滴正前方，稍往后移與血滴接觸，即可見血液沿推片下緣散開，再勻速沿載玻片平面平穩(wěn)向后滑動，至血膜鋪勻。經(jīng)驗(yàn)總結(jié)紅細(xì)胞滲透脆性與白細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)總結(jié)課件圖1瑞氏染色法

圖2吉姆薩氏染色法

通過預(yù)實(shí)驗(yàn)總結(jié)出的各染色法染色效果：瑞氏染色法：白細(xì)胞核、細(xì)胞漿層次分明，嗜中性白細(xì)胞漿中可見淡紅色染色顆粒。吉姆薩氏染色法：白細(xì)胞核呈藍(lán)色，層次清楚。瑞—吉復(fù)合染色法：白細(xì)胞層次清晰，細(xì)胞漿中染色顆?？梢姟D1瑞氏染色法圖2吉姆薩氏染色法通正式實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：我們在周三下午將PPT交與李老師征求修改意見，并在當(dāng)天晚上修改完畢。于周四晚上，準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需各項(xiàng)儀器與藥品，并寫好板書。周五早上上課前取回羊血。正式實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)過程：實(shí)驗(yàn)過程無遲到、曠課、早退現(xiàn)象，同學(xué)們熱情度很高，認(rèn)真實(shí)驗(yàn)。對同學(xué)的操作過程進(jìn)行嚴(yán)格把關(guān)，使絕大多數(shù)同學(xué)的實(shí)驗(yàn)取得了預(yù)期的結(jié)果，其中章夢甜、陶倩組白細(xì)胞染色觀察效果非常好，能觀察到多個白細(xì)胞清晰鏡像。白細(xì)胞染色出現(xiàn)問題主要為以下幾點(diǎn)：1、血膜涂得過厚，造成觀察困難；2、對染液進(jìn)行沖洗時(shí)不徹底，造成著色過深，出現(xiàn)一大片藍(lán)的現(xiàn)象；3、沖洗過猛，觀察不到白細(xì)胞。在老師和我們的幫助下，同學(xué)們很好解決了這些問題。實(shí)驗(yàn)過程：實(shí)驗(yàn)過程無遲到、曠課、早退現(xiàn)象，同學(xué)們熱情度很高，掌握好染色時(shí)間、染液量和染液沖洗是關(guān)鍵不好，上圖為典型的染液沖洗不好的結(jié)果掌握好染色時(shí)間、染液量和染液沖洗是關(guān)鍵不好，上圖為典型的染液實(shí)驗(yàn)報(bào)告批改情況存在的問題與不足：漏寫：有些同學(xué)實(shí)驗(yàn)儀器及藥品未寫全;或廠家未標(biāo)注;實(shí)驗(yàn)室溫度濕度等環(huán)境記錄;實(shí)驗(yàn)原理未寫或?qū)懙牟蝗?。討論：?shí)驗(yàn)結(jié)果分析不到位；實(shí)驗(yàn)操作中的討論過于寬泛；文獻(xiàn)內(nèi)容過多引用，缺乏自己的語言；一些討論不夠嚴(yán)謹(jǐn)，理論支持太少。創(chuàng)新：創(chuàng)新方面未結(jié)合實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況，有些不實(shí)用。實(shí)驗(yàn)報(bào)告批改情況存在的問題與不足：有不少同學(xué)在報(bào)告中反映瑞士染色效果好于吉姆薩染色，這可能是由于正式實(shí)驗(yàn)中所使用吉姆薩染液比較新的原因。在吉姆薩染液放置一個月后，染色效果有很大提高，在我組后期染色操作中發(fā)現(xiàn)，吉姆薩染色效果要優(yōu)于瑞氏染液，因此總結(jié)到經(jīng)驗(yàn)：吉姆薩染液最好提前一個月配置，暗處放置。有不少同學(xué)在報(bào)告中反映瑞士染色效果好于吉姆薩染色，這可能是由創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)1、進(jìn)一步探究溫度、離體時(shí)間對紅細(xì)胞形態(tài)及滲透脆性

的影響；2、利用紫外分光光度計(jì)測不同地深鹽溶液中的溶血度；3、探究白細(xì)胞染色片中的藍(lán)紫色小顆粒聚集物來源4、改良白細(xì)胞染色方法創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)1、進(jìn)一步探究溫度、離體時(shí)間對紅細(xì)胞形態(tài)及滲透脆性一、探討離體時(shí)間、溫度對紅細(xì)胞

形態(tài)及滲透脆性的影響紅細(xì)胞滲透脆性受細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、細(xì)胞膜流動性、以及紅細(xì)胞幾何特性及紅細(xì)胞膜抗張強(qiáng)度等多個因素的影響，其中與紅細(xì)胞表面面積和體積的比值有很大關(guān)系。通過批閱報(bào)告，我們發(fā)現(xiàn)大多數(shù)同學(xué)沒有對不同濃度低滲鹽溶液中的血紅細(xì)胞進(jìn)行鏡檢,而且往屆助教也沒有進(jìn)行形態(tài)變化的觀察。一、探討離體時(shí)間、溫度對紅細(xì)胞

形態(tài)及滲透脆性的影響紅細(xì)胞滲1.2方法:對三次取的羊血材料分別進(jìn)行了相同的實(shí)驗(yàn)操作。取適量新鮮羊血（A液）分別置于4個潔凈燒杯，標(biāo)號A1.A2.A3.A4。實(shí)驗(yàn)過程中，各組羊血、低滲鹽溶液、A滴入B、均勻、靜置、觀察各步驟均在各自的恒溫環(huán)境中進(jìn)行。

表6各種低滲鹽溶液(B液）的制備試管號試液12345678910170mmol/LNaCl（mL）1.41.31.21.11.00.90.80.70.60.5蒸餾水（mL）0.60.70.80.91.01.11.21.31.41.5NaCl濃度（mmol/L）120112104958678696052431.2方法:對三次取的羊血材料分別進(jìn)行了相同的實(shí)驗(yàn)操作。取1℃下羊血紅細(xì)胞均出現(xiàn)表面凹凸不平，呈不規(guī)則球形。有萎縮趨勢。紅細(xì)胞變化明顯，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)變形嚴(yán)重，易發(fā)生溶血。聯(lián)系生物化學(xué)知識，降低溫度會抑制細(xì)胞各類酶的活性，如呼吸酶、轉(zhuǎn)氨酶等。導(dǎo)致細(xì)胞生物活性降低。細(xì)胞膜通透性能改變，紅細(xì)胞脆性增大。1℃下羊血紅細(xì)胞均出現(xiàn)表面凹凸不平，呈不規(guī)則球形。有萎縮趨勢室溫下羊血紅細(xì)胞的變化比較明顯，部分細(xì)胞形狀變化嚴(yán)重，大多變癟，甚至有鐮刀狀紅細(xì)胞出現(xiàn)?？梢酝茢嘣谡星闆r下檢測出的紅細(xì)胞脆性肯定與在體的規(guī)則球形紅細(xì)胞的滲透脆性不同。室溫下羊血紅細(xì)胞的變化比較明顯，部分細(xì)胞形狀變化嚴(yán)重，大多變38℃下保存的羊血紅細(xì)胞變化情況不如25℃的明顯，但是依然可以看出紅細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生變形，表面凹凸不平，呈現(xiàn)不規(guī)則塊狀、橢圓狀、三角狀。38℃下保存的羊血紅細(xì)胞變化情況不如25℃的明顯，但是依然可51℃下保存的羊血紅細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的變形。大多數(shù)紅細(xì)胞變癟，呈鐮刀狀或飛碟狀。我們推測高溫使血液蒸發(fā)失水，血液中離子等溶質(zhì)濃度升高，滲透壓增大，導(dǎo)致紅細(xì)胞失水變癟。51℃下保存的羊血紅細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重的變形。大多數(shù)紅細(xì)胞變癟，呈在加入少量51℃蒸餾水稀釋后，部分細(xì)胞干癟情況減輕，形狀又恢復(fù)，但仍有許多飛碟狀、鐮刀狀細(xì)胞?？梢娺@種變化是多方面的，高溫對紅細(xì)胞的活性產(chǎn)生了不可逆的影響。在加入少量51℃蒸餾水稀釋后，部分細(xì)胞干癟情況減輕，形狀又

表7.離體3h不同溫度下的羊血紅細(xì)胞脆性標(biāo)號實(shí)驗(yàn)溫度/℃最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/L）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/L）A11678586A225678495A338678586A451678586表7.離體3h不同溫度下的羊血紅細(xì)胞脆性標(biāo)號實(shí)驗(yàn)溫度/℃

表8.離體5h不同溫度下的羊血紅細(xì)胞脆性標(biāo)號實(shí)驗(yàn)溫度/℃最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/L）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/L）A11678495A225678495A338678586A451678586表8.離體5h不同溫度下的羊血紅細(xì)胞脆性標(biāo)號實(shí)驗(yàn)溫度/℃

表9.離體12h不同溫度下的羊血紅細(xì)胞脆性標(biāo)號實(shí)驗(yàn)溫度/℃最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/L）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/L）A11678495A225678495A338678586A451678586表9.離體12h不同溫度下的羊血紅細(xì)胞脆性標(biāo)號實(shí)驗(yàn)溫度/

表10.25℃下探究更準(zhǔn)確的最大最小抵抗力試管號試液12345678170mmol/LNaCl（ml）1.281.261.241.221.081.061.041.02蒸餾水（ml）0.720.740.760.780.920.940.960.98NaCl濃度（mmol/L）10910710510492908887實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、2、3、4、5、6管皆為上層透明紅色，下層渾濁紅7、8管為透明紅色表10.25℃下探究更準(zhǔn)確的最大最小抵抗力試1.4得出結(jié)論：溫度對紅細(xì)胞的形態(tài)有影響，其中高溫（51℃）對紅細(xì)胞形態(tài)影響最大；相同溫度下，紅細(xì)胞的脆性隨時(shí)間的增長而變大；相同時(shí)間下，1℃和51℃下紅細(xì)胞脆性變大速度較室溫和體溫快，溫度偏離體溫程度越大，越容易使紅細(xì)胞脆性增大；保存環(huán)境的溫度對紅細(xì)胞的形態(tài)有很大影響。1.4得出結(jié)論：溫度對紅細(xì)胞的形態(tài)有影響，其中高溫（51℃）實(shí)驗(yàn)2、紅細(xì)胞在不同濃度低滲氯化鈉溶液中溶血率的測定2.1概述：傳統(tǒng)的測定方法采用目測觀察其溶血情況,需要靜置一小時(shí)后觀察,觀察過程中不能晃動。此法僅能觀察到溶血的大致情況,不能量化紅細(xì)胞破裂的程度。本試驗(yàn)采用分光光度法精確測定紅細(xì)胞在低滲氯化鈉溶液中的溶血情況。進(jìn)一步了解血紅蛋白的脆性。實(shí)驗(yàn)2、紅細(xì)胞在不同濃度低滲氯化鈉溶液中溶血率的測定2.1概2.3實(shí)驗(yàn)步驟2.3.1配制不同濃度低滲氯化鈉溶液取口徑相同、清潔干凈的小試管做好編號,制成不同濃度的低滲鹽溶液,每管總量為3.0mL，第11管為蒸餾水,具體配制情況見如下表所示：試管號試液123456789101112170mmol/LNaCl（ml）2.11.951.81.651.51.351.21.050.90.752.70蒸餾水（ml）0.91.051.21.351.51.651.81.952.12.270.33.0NaCl濃度（mmol/L）1201121049586786960524319402.3實(shí)驗(yàn)步驟2.3.1配制不同濃度低滲氯化鈉溶液試管號122.3.2最大吸收波長測定取12管加入0.1mL血液,輕輕顛倒混勻5min,3000r/min離心10min,取上清液至比色皿中,以11管(生理鹽水）為空白對照,754N紫外可見分光光度計(jì)上掃描,測得其最大吸收波長為590nm.2.3.2最大吸收波長測定取12管加入0.1mL血液,2.3.3紅細(xì)胞在不同濃度低滲氯化鈉溶液中溶血率的測定依次向12支試管內(nèi)各加0.1ml血液,輕輕顛倒混勻5min置入干燥離心管中以3000r/min離心10min,取上清在分光光度計(jì)590nm波長處檢測。用11管生理鹽水的上清調(diào)零,測其他每管吸光度。以12管測出的吸光度作最大溶血的吸光度,分別計(jì)算出1-10支管的溶血率。溶血率=（樣品吸光度/最大溶血吸光度）×100%。

2.3.3紅細(xì)胞在不同濃度低滲氯化鈉溶液中溶血率的測定依次

表12不同濃度低滲氯化鈉溶液對

紅細(xì)胞滲透脆性的影響試管標(biāo)號NaCl溶液濃度（mmol/L）OD值溶血率（%）目測法11200.0799.5-21120.0829.8-31040.20724.8-4950.31237.3+5860.62474.6+6780.6678.9+7690.73888.3+8600.75490.2+9520.76791.7+10430.79595.1+11194001200.836100+

(注："-"表示不溶血,"+"表示部分溶血,"+"表示完全溶血)表12不同濃度低滲氯化鈉溶液對

紅細(xì)胞滲透脆性的影響紅細(xì)胞滲透脆性與白細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)總結(jié)課件探究究竟對人體血液的影響，不應(yīng)該想當(dāng)然的在血液中直接加入酒精，而應(yīng)該分析究竟在人體的代謝產(chǎn)物，進(jìn)入血液的代謝產(chǎn)物是什么。酒精進(jìn)入體內(nèi)后在乙醇脫氫酶(ADH)和乙醛脫氫酶(ALDH)的作用下逐步氧化成乙酸,其中間代謝產(chǎn)物乙醛對機(jī)體的毒性作用最大。2.4.2酒精、葡萄糖對紅細(xì)胞滲透脆性的影響酒精代謝過程：乙醇→乙醛→乙酸乙醇→乙醛

2CH3CH2OH+O2

→2

CH3CHO+2H2O乙醛→乙酸

2CH3CHO+O2

→

2CH3COOH探究究竟對人體血液的影響，不應(yīng)該想當(dāng)然的在血液中直接加入酒精探究1：取血方法同上,依次向14支試管內(nèi)各加0.1mL血液后,用加樣器再分別加入0.790g/mL無水乙醛5uL。來模擬人在大量飲酒后代謝在血液中乙醛濃度對血紅細(xì)胞脆性影響。探究2：取血方法同上,依次向14支試管內(nèi)各加0.1mL血液后,用加樣器再分別加入0.05g/mL葡萄糖溶液10UL。來模擬人在大量攝入糖活著患有糖尿病后血液中高糖濃度對血紅細(xì)胞脆性影響。拓展探究探究1：取血方法同上,依次向14支試管內(nèi)各加0.1mL血表13乙醛對紅細(xì)胞滲透脆性的影響試管標(biāo)號NaCl溶液濃度（mmol/L）OD值溶血率（%）11200.0637.221120.0788.831040.12514.44950.25128.95860.58967.86780.67477.67690.76986.38600.78288.69520.79190.210430.80792.911194001200.869100表13乙醛對紅細(xì)胞滲透脆性的影響試管標(biāo)號NaCl溶2.4.2酒精、葡萄糖對紅細(xì)胞滲透脆性的影響表13乙醛對紅細(xì)胞滲透脆性的影響

試管標(biāo)號NaCl溶液濃度（mmol/L）OD值溶血率（%）11200.0637.221120.0788.831040.12514.44950.25128.95860.58967.86780.67477.67690.76986.38600.78288.69520.79190.210430.80792.911194001200.8691002.4.2酒精、葡萄糖對紅細(xì)胞滲透脆性的影響表13表14葡萄糖對紅細(xì)胞滲透脆性的影響試管標(biāo)號NaCl溶液濃度（mmol/L）OD值溶血率（%）11200.0758.421120.0788.631040.0819.14950.19621.95860.33161.86780.64171.87690.68979.18600.77681.99520.7983.510430.79685.211194001200.893100表14葡萄糖對紅細(xì)胞滲透脆性的影響試管標(biāo)號NaCl溶紅細(xì)胞滲透脆性與白細(xì)胞染色實(shí)驗(yàn)總結(jié)課件2.4.3結(jié)果分析在加入乙醛之后羊血紅細(xì)胞對低滲鹽溶液抵抗力略增高，紅細(xì)胞脆性減小。78mmol--118mmol的NaCl溶液內(nèi)紅細(xì)胞的溶血率比不加乙醛前降低5-12個百分點(diǎn),溶血程度降低明顯,說明紅細(xì)胞破裂明顯減少。我們查閱相關(guān)資料，發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞脆性下降的原因可能是乙醇分解后產(chǎn)生的乙醛濃度不斷增加對紅細(xì)胞膜的固化修飾所致[4]。此外，隨著血液中乙醛逐漸被分解,其對紅細(xì)胞的修飾作用解除,紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能恢復(fù)正常;而且乙醇代謝的產(chǎn)物----乙酸濃度比例不斷上升可能會使紅細(xì)膜性增高,這兩種作用的協(xié)調(diào)將使得紅細(xì)胞脆性逐步恢復(fù)正常。參考文獻(xiàn)：[4]郭希超,陳曉剛,陳瑜，等.急性酒精中毒后紅細(xì)胞膜脆性檢查.臨床檢驗(yàn)雜志.2001,19(3):186-188.2.4.3結(jié)果分析在加入乙醛之后羊血紅細(xì)胞對低滲鹽溶液抵抗由于實(shí)驗(yàn)室條件限制，我們有設(shè)計(jì)了一組加葡萄糖的實(shí)驗(yàn)，但做過之后思考發(fā)現(xiàn)，5%的葡萄糖溶液也常作為血漿等滲液使用。通常注射制劑的血漿等滲液的調(diào)配很重要，應(yīng)用NaCl當(dāng)量法,葡萄糖的NaCl當(dāng)量為0.18[5]。加入葡萄糖，從某一角度講相當(dāng)于提高了NaCl低滲夜的濃度，無疑會產(chǎn)生紅細(xì)胞脆性減小的結(jié)果。不過可以大幅度提高葡萄糖濃度，來探究高糖環(huán)境對紅細(xì)胞脆性的影響。有資料顯示[6]，高濃度葡萄糖會誘導(dǎo)的紅細(xì)胞磷脂酰絲氨酸暴露、滲透脆性增高和膜脂質(zhì)過氧化損傷。參考文獻(xiàn)：[5]崔福德.藥劑學(xué)（第五版）.北京：人民衛(wèi)生出版社.

2007，9：455-457[6]權(quán)國波,韓穎,楊超,等.海藻糖抑制高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的紅細(xì)胞磷脂酰絲氨酸暴露、滲透脆性增高和膜脂質(zhì)過氧化損傷的研究.中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志2008;16(6):1442-1446由于實(shí)驗(yàn)室條件限制，我們有設(shè)計(jì)了一組加葡萄糖的實(shí)驗(yàn)，但做過之在加樣中,我們改用微量加樣器加樣,加樣準(zhǔn)確消除了濃度誤差對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。通過其溶血度變化從而證明用分光分度法可以用于臨床初步篩選對紅細(xì)胞膜穩(wěn)定的藥品以及對紅細(xì)胞膜破壞的藥品,對靜脈注射制劑新藥的安全性是一種安全有效準(zhǔn)確的評價(jià)方法。此外，我們還可以依據(jù)本實(shí)驗(yàn)，再加入維生素C（膳食、輔助性藥物）、乳酸（無氧運(yùn)動）、血氨（人體正常數(shù)值不超過60umol/L）、甘油（注射用溶劑的一種）等物質(zhì)來探究因?yàn)轱嬍场⑤斠?、運(yùn)動、疾病等原因?qū)е碌难涵h(huán)境改變對紅細(xì)胞脆性的影響。進(jìn)一步拓展進(jìn)一步拓展三、染色中觀察到的小顆粒藍(lán)色聚集物是什么？猜想：1、制片問題？2、染液殘?jiān)?、紅細(xì)胞干擾？4、白細(xì)胞破裂釋放物質(zhì)？5、細(xì)菌？6、血液中其他物質(zhì)?三、染色中觀察到的小顆粒藍(lán)色聚集物是什么？猜想：1、制片問題？探究過程：我們最開始覺得這種現(xiàn)象的發(fā)生可能是因?yàn)椴僮鞑灰?guī)范，血片制的太厚，重新制薄片后觀察，又出現(xiàn)些許小顆粒聚集現(xiàn)象，猜測可能是染料殘留物或者是破碎的紅細(xì)胞。于是我們又重新做了一遍，將制片洗完全，觀察，仍然在視野中發(fā)現(xiàn)少量聚集物，于是排除染料殘留的可能性。1、制片問題？探究過程：白細(xì)胞破裂？對于白細(xì)胞破裂的猜測，我們的想法是從血液中分離處理白細(xì)胞直接進(jìn)行染色，于是查閱文獻(xiàn)，找尋血液中分離白細(xì)胞的方法:1、簡單離心分離法：直接取樣血液于離心管中3000r/min離心分離10min，取上清液，做成血片，染色觀察；2、Ficoll-泛影鈉（Ficoll-Hypaque）密度梯度及紅細(xì)胞裂解法，首先配制白細(xì)胞緩沖液，漢克斯液配置好。然后提取好白細(xì)胞后，使用對照的方法，對其中一組加不同濃度的低滲鹽溶液，或者加不等量的蒸餾水，將白細(xì)胞脹破。然后制片染色，顯微鏡下觀察，與對照組做對比，觀察是否有相同的聚集現(xiàn)象。白細(xì)胞破裂？對于白細(xì)胞破