生物檢測(cè)技術(shù)-核酸探針課件

生物檢測(cè)技術(shù)

——核酸探針生物檢測(cè)技術(shù)

1前言從基因工程技術(shù)一開(kāi)始，就伴隨著核酸探針的應(yīng)用。在許多領(lǐng)域如基因研究、SNP檢測(cè)、STR檢測(cè)、腫瘤研究、藥理學(xué)研究等方面，核酸探針都是一種強(qiáng)有力的工具。為了能更好的應(yīng)用和發(fā)展核酸探針，有必要對(duì)核酸探針有一個(gè)系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)。核酸探針是以研究和診斷為目的，用來(lái)檢測(cè)特定序列核酸(DNA或RNA)的DNA或RNA片段，稱(chēng)為核酸探針，作為探針的核酸探針片段可以較短(20bp)，也可以較(5kb)。核酸探針具有特定的序列，能夠與具有相應(yīng)核苷酸堿基互補(bǔ)序列的核酸片段結(jié)合，因此可用于樣品中特定基因片段的檢測(cè)。前言從基因工程技術(shù)一開(kāi)始，就伴隨著核酸探針的應(yīng)用。在2核酸探針的標(biāo)記物一.放射性標(biāo)記放射性同位素是最早使用、也是目前應(yīng)用最廣泛的探針標(biāo)記物。常用的同位素有32P、3H、35S。其中，以32P應(yīng)用最普遍。放射性標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，可以檢測(cè)到pg級(jí)；缺點(diǎn)是易造成放射性污染，而且同位素半衰期短、不穩(wěn)定、成本高。因此，放射性標(biāo)記的探針不能實(shí)現(xiàn)商品化。目前，許多實(shí)驗(yàn)室都致力于研究非放射性標(biāo)記的探針。核酸探針的標(biāo)記物一.放射性標(biāo)記3二.非放射性標(biāo)記目前應(yīng)用較多的非放射性標(biāo)記物是生物素和地高辛，二者都是半抗原。生物素是一種小分子水溶性維生素，對(duì)親和素有獨(dú)特的親和力，兩者能形成穩(wěn)定復(fù)合物，通過(guò)連接在親和素或抗生物素蛋白上的顯色物質(zhì)(如酶、熒光素等)進(jìn)行檢測(cè)。地高辛是一種類(lèi)固醇半抗原分子，可利用其抗體進(jìn)行免疫檢測(cè)，運(yùn)用原理類(lèi)似于生物素的檢測(cè)。地高辛標(biāo)記核酸探針的檢測(cè)靈敏度可與放射性同位素標(biāo)記的相當(dāng)，而特異性?xún)?yōu)于生物素標(biāo)記，其應(yīng)用日趨廣泛。二.非放射性標(biāo)記目前應(yīng)用較多的非放射性標(biāo)記物是生物素和地高辛4核酸探針檢測(cè)的原理核酸探針檢測(cè)所依據(jù)的是核酸分子雜交，其工作原理是堿基配對(duì)，即2條堿基互補(bǔ)的DNA鏈(或2條堿基互補(bǔ)的DNA鏈和RNA鏈)在適當(dāng)條件下可以按堿基配對(duì)原則，形成雜交DNA分子。生物體含有相對(duì)穩(wěn)定的DNA序列，不易受外界環(huán)境因素的影響而改變。一般來(lái)說(shuō)同種生物的DNA序列相同，不同種生物體DNA序列不同．生物個(gè)體都有自己獨(dú)特的DNA序列。根據(jù)中心法則．DNA雙鏈的核苷酸分子是通過(guò)堿基之間的氫鍵作用力專(zhuān)一性互補(bǔ)配對(duì)而結(jié)合在一起的，每個(gè)基因的RNA和對(duì)應(yīng)的模板DNA鏈也可以通過(guò)堿基配對(duì)而結(jié)合在一起。核酸探針就是根據(jù)核酸分子之間的互補(bǔ)配對(duì)原則設(shè)計(jì)的一種檢測(cè)目標(biāo)DNA序列是否存在的一段核酸序列。核酸探針檢測(cè)的原理核酸探針檢測(cè)所依據(jù)的是核酸分子雜交，其工作5核酸探針的分類(lèi)及制備方法根據(jù)核酸的來(lái)源和性質(zhì)，核酸探針可分為RNA探針、人工合成的寡核苷酸探針、單鏈DNA探針、雙鏈DNA探針等幾類(lèi)。1）RNA探針RNA探針一般都是單鏈，它具有單鏈DNA探針的優(yōu)點(diǎn)，又具有許多DNA單鏈探針?biāo)鶝](méi)有的優(yōu)點(diǎn)，主要是：RNA：DNA雜交體比DNA：DNA雜交體有更高的穩(wěn)定性，所以在雜交反應(yīng)中RNA探針比相同活性的DNA探針?biāo)a(chǎn)生信號(hào)要強(qiáng)。RNA：RNA雜交體用RNA酶A(胰RNA酶)切比用Sl酶切DNA：RNA雜交體容易控制，所以用RNA探針進(jìn)行RNA結(jié)構(gòu)分析比用DNA探針效果好。核酸探針的分類(lèi)及制備方法根據(jù)核酸的來(lái)源和性質(zhì)，核酸探針可分為6RNA的探針制備過(guò)程是將一段含完整或部分基因的DNA片段插入重組質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)，以?xún)?nèi)切酶在插入片段中某一適當(dāng)部位或插入片段下游的某一部位消化重組質(zhì)粒，使之成為線(xiàn)性DNA，然后在相應(yīng)的DNA依賴(lài)RNA聚合酶催化下，以含有目的基因的DNA片段為模板合成RNA探針。2)人工合成的寡核苷酸探針人工合成的寡核苷酸探針是在已知基因序列的情況下。由核酸合成儀來(lái)完成，可廉價(jià)獲得大量的此類(lèi)探針，長(zhǎng)度一般長(zhǎng)約10~30bp，甚至可達(dá)50bp。如果已知核酸序列可根據(jù)已知DNA或RNA序列合成精確互補(bǔ)的DNA探針，單一已知序列寡核苷酸探針能與它們的目的序列準(zhǔn)確配對(duì)，可以準(zhǔn)確地設(shè)計(jì)雜交條件，以保證探針只與目的序列雜交而不與序列相近的非完全配對(duì)序列雜交，對(duì)于一些未知序列的目的片段則無(wú)效；如果不知道核酸序列，可依據(jù)其蛋白質(zhì)產(chǎn)物的氨基酸順序推導(dǎo)出核酸序列從而合成DNA探針。RNA的探針制備過(guò)程是將一段含完整或部分基因的DNA片段插入73)單鏈DNA探針和雙鏈DNA探針用雙鏈探針雜交驗(yàn)測(cè)另一個(gè)遠(yuǎn)緣DNA時(shí)，探針序列與被檢測(cè)序列之間有很多錯(cuò)配，但是，2條探針互補(bǔ)鏈之間的配對(duì)卻十分穩(wěn)定，即形成自身的無(wú)效雜交，結(jié)果使檢測(cè)效率下降?？茖W(xué)上采用單鏈探針則可解決這一問(wèn)題。單鏈DNA探針的合成方法:(1)從Ml3載體衍生序列合成單鏈DNA探針。(2)以RNA為模板用反轉(zhuǎn)錄酶合成單鏈cDNA探針。雙鏈DNA探針的合成方法：切口平移法和隨機(jī)引物合成法。雙鏈DNA探針在與靶序列雜交前，DNA分子必須變?yōu)閱捂?，這一般是通過(guò)加熱使其變性而達(dá)到解鏈目的。解鏈DNA分子被迅速冷卻到只能緩慢復(fù)性的溫度以下，可使探針保持單鏈狀態(tài)。3)單鏈DNA探針和雙鏈DNA探針用雙鏈探針雜交驗(yàn)測(cè)另一個(gè)遠(yuǎn)8核酸探針的應(yīng)用現(xiàn)狀一食品檢測(cè)中的應(yīng)用：核酸探針技術(shù)已被用于檢驗(yàn)食品中一些常見(jiàn)的病原菌。（1）大腸桿菌：產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(ETEC)是引起人和動(dòng)物腹瀉的主要病原之一。用生物素標(biāo)記的編碼大腸桿菌耐熱腸毒素(ST)的DNA片段作為基因探針，檢測(cè)了污染食品(包括鮮豬肉、雞蛋、牛乳)中的產(chǎn)ST大腸桿菌。（2）沙門(mén)氏菌：沙門(mén)氏菌是重要的人畜共患致病菌及食物中毒性細(xì)菌之一，廣泛地分布于自然界及畜禽體內(nèi)。由該菌引起的食物中毒占細(xì)菌性食物中毒的首位。利用生物素標(biāo)記的克隆沙門(mén)氏菌DNA片段作為基因探針，檢測(cè)了臨床樣品、食品及飼料樣品中的沙門(mén)氏菌。核酸探針的應(yīng)用現(xiàn)狀一食品檢測(cè)中的應(yīng)用：核酸探針技術(shù)已被用于9二DNA測(cè)序及再測(cè)序中的應(yīng)用DNA測(cè)序早期采用Maxam和Gilbert的化學(xué)法與Sanger的雙脫氧法進(jìn)行測(cè)序。由于這兩種測(cè)序方法是手工測(cè)序，所以它的精確度較低。在以上兩種方法的基礎(chǔ)上，通過(guò)與計(jì)算機(jī)技術(shù)和熒光技術(shù)的結(jié)合，產(chǎn)生的自動(dòng)測(cè)序儀在很大程度上提高測(cè)序的精確度。近幾年，由于DNA測(cè)序技術(shù)的不斷發(fā)展和測(cè)序策略的日益成熟，以及自動(dòng)測(cè)序儀的改進(jìn)，序列測(cè)定速度和準(zhǔn)確率大為提高，隨之出現(xiàn)了基因芯片的測(cè)序，它是利用固定探針的樣品，進(jìn)行分子雜交產(chǎn)生的雜交圖譜，而排列出待測(cè)樣品的序列。隨之就出現(xiàn)了基因芯片雜交測(cè)序技術(shù)(SBH)和鄰位雜交測(cè)序技術(shù)(GSH)。二DNA測(cè)序及再測(cè)序中的應(yīng)用DNA測(cè)序早期采用Maxam10基因芯片

原理原型基因芯片

11三檢測(cè)人及生物體基因組中特異性序列用非放射性核酸探針——地高辛核酸探針可對(duì)醫(yī)學(xué)病毒，禽類(lèi)病毒，植物病毒的進(jìn)行檢測(cè)；用重復(fù)DNA片段來(lái)檢測(cè)麻風(fēng)桿菌；用rRNA探針檢測(cè)銅綠假單脆菌；用核酸探針檢測(cè)腺病毒、BK病毒，巨細(xì)胞病毒以及惡性病原蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)、利氏曼原蟲(chóng)等。雖然以上核酸探針已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于各類(lèi)病毒的檢測(cè)，但在檢測(cè)技術(shù)方面還有一些問(wèn)題，檢測(cè)一種菌就需要制備一種探針一次只能檢測(cè)出一種菌或病毒檢測(cè)的操步驟復(fù)雜，效率低等缺點(diǎn)。而基因芯片可將大量的探針同時(shí)固定于支持物上，所以一次可對(duì)大量核酸分子進(jìn)行檢測(cè)分析，從而解決了傳統(tǒng)核酸印跡雜交的操作復(fù)雜，自動(dòng)化程度低，檢測(cè)目的分子數(shù)量少，效率低的缺陷，使核酸探針的應(yīng)用更加廣闊。現(xiàn)在基因芯片可以用于檢測(cè)人類(lèi)的許多疾病如腫瘤，血友病，地中海貧血病，異常血紅蛋白病，苯酮尿病等。三檢測(cè)人及生物體基因組中特異性序列用非放射性核酸探針——12四臨床診斷和司法方面的應(yīng)用目前利用核酸探針發(fā)展起來(lái)的PCR在臨床上的應(yīng)用廣泛，。例如：對(duì)結(jié)核、麻風(fēng)、沙眼衣原體、金黃色葡萄球菌、霍亂弧菌等微生物病原體的檢測(cè)；對(duì)艾滋病、病毒、細(xì)胞淋巴瘤病毒的檢測(cè)；數(shù)十種遺傳病(如鐮刀狀細(xì)胞貧血、血友病、肌營(yíng)養(yǎng)不良癥、舞蹈癥等)都采用PCR診斷；腫瘤的診斷；性別鑒定；DNA指紋鑒定。診斷芯心技術(shù)是DNA雜交技術(shù)和PCR擴(kuò)增技術(shù)相結(jié)合的分子診斷方法，將成為一項(xiàng)現(xiàn)代化診斷新技術(shù)?，F(xiàn)在，肝炎病毒檢測(cè)診斷芯片、結(jié)核桿菌耐的性檢測(cè)芯片、多種惡性腫瘤相關(guān)病毒基因芯片等一系列診斷芯片逐步開(kāi)始進(jìn)入市場(chǎng)。未來(lái)人們?cè)隗w檢時(shí)，由搭載基因芯片的診斷器機(jī)器人，對(duì)受檢者取血，轉(zhuǎn)瞬間體驗(yàn)結(jié)果便可以顯示在計(jì)算機(jī)的屏幕上。四臨床診斷和司法方面的應(yīng)用目前利用核酸探針發(fā)展起來(lái)的PCR13五核酸探針技術(shù)在浮游植物檢測(cè)中的應(yīng)用核酸探針技術(shù)在浮游植物檢測(cè)中的應(yīng)用的是利用高特異性的寡核苷酸探針直接與細(xì)胞內(nèi)的或從細(xì)胞中提取出來(lái)的rRNA進(jìn)行雜交，從而在混合樣品中檢測(cè)到特定物種的存在。不同物種的基因序列在某些位點(diǎn)會(huì)存在一定幾率的突變，但是它們本身又具有高度的保守性，其序列的相似程度可以反映出它們?cè)谙到y(tǒng)發(fā)育上的關(guān)系，當(dāng)其全序列或者大部分序列被分析時(shí)，就可以得到有關(guān)物種在系統(tǒng)發(fā)育方面的足夠信息并因此知道它們?cè)谙到y(tǒng)發(fā)育上的位置，從而鑒定浮游植物。而利用基于這些信息而設(shè)計(jì)的寡核苷酸探針即可以直接在環(huán)境樣品進(jìn)行原位雜交，或者與細(xì)胞裂解物進(jìn)行三明治夾心雜交，從而檢測(cè)到特定浮游植物在特定海區(qū)的存在與否。五核酸探針技術(shù)在浮游植物檢測(cè)中的應(yīng)用核酸探針技術(shù)在浮游植物14核酸探針的前景基因芯片在環(huán)保方面、食品檢測(cè)方面的研究報(bào)道比較少，這將成為將來(lái)的研究方向。從某種意義上我們可以認(rèn)為：基因結(jié)構(gòu)或種類(lèi)決定物種，基因功能或表達(dá)則決定生命即生物的生、老、病、死?；蛐酒夹g(shù)將為我們提供一條認(rèn)識(shí)生命本質(zhì)的捷徑，同時(shí)它的發(fā)展也帶動(dòng)了蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片、多肽芯片、組織芯片的發(fā)展和應(yīng)用。在癌基因的檢測(cè)和診斷、致病病原體的檢測(cè)、遺傳病的產(chǎn)前診斷以及親子關(guān)系鑒定等基因診斷方面以及特異性目的基因及外源DNA的檢測(cè)方面，核酸探針技術(shù)將越來(lái)越顯出其巨大的應(yīng)用前景。核酸探針的前景基因芯片在環(huán)保方面、食品檢測(cè)方面的研究報(bào)道比較15

核酸檢測(cè)試劑盒圖片

通用型核酸檢測(cè)試劑盒

解脲脲原體(UU)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?核酸檢測(cè)試劑盒圖片

通16謝謝謝謝17生物檢測(cè)技術(shù)

——核酸探針生物檢測(cè)技術(shù)

18前言從基因工程技術(shù)一開(kāi)始，就伴隨著核酸探針的應(yīng)用。在許多領(lǐng)域如基因研究、SNP檢測(cè)、STR檢測(cè)、腫瘤研究、藥理學(xué)研究等方面，核酸探針都是一種強(qiáng)有力的工具。為了能更好的應(yīng)用和發(fā)展核酸探針，有必要對(duì)核酸探針有一個(gè)系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)。核酸探針是以研究和診斷為目的，用來(lái)檢測(cè)特定序列核酸(DNA或RNA)的DNA或RNA片段，稱(chēng)為核酸探針，作為探針的核酸探針片段可以較短(20bp)，也可以較(5kb)。核酸探針具有特定的序列，能夠與具有相應(yīng)核苷酸堿基互補(bǔ)序列的核酸片段結(jié)合，因此可用于樣品中特定基因片段的檢測(cè)。前言從基因工程技術(shù)一開(kāi)始，就伴隨著核酸探針的應(yīng)用。在19核酸探針的標(biāo)記物一.放射性標(biāo)記放射性同位素是最早使用、也是目前應(yīng)用最廣泛的探針標(biāo)記物。常用的同位素有32P、3H、35S。其中，以32P應(yīng)用最普遍。放射性標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，可以檢測(cè)到pg級(jí)；缺點(diǎn)是易造成放射性污染，而且同位素半衰期短、不穩(wěn)定、成本高。因此，放射性標(biāo)記的探針不能實(shí)現(xiàn)商品化。目前，許多實(shí)驗(yàn)室都致力于研究非放射性標(biāo)記的探針。核酸探針的標(biāo)記物一.放射性標(biāo)記20二.非放射性標(biāo)記目前應(yīng)用較多的非放射性標(biāo)記物是生物素和地高辛，二者都是半抗原。生物素是一種小分子水溶性維生素，對(duì)親和素有獨(dú)特的親和力，兩者能形成穩(wěn)定復(fù)合物，通過(guò)連接在親和素或抗生物素蛋白上的顯色物質(zhì)(如酶、熒光素等)進(jìn)行檢測(cè)。地高辛是一種類(lèi)固醇半抗原分子，可利用其抗體進(jìn)行免疫檢測(cè)，運(yùn)用原理類(lèi)似于生物素的檢測(cè)。地高辛標(biāo)記核酸探針的檢測(cè)靈敏度可與放射性同位素標(biāo)記的相當(dāng)，而特異性?xún)?yōu)于生物素標(biāo)記，其應(yīng)用日趨廣泛。二.非放射性標(biāo)記目前應(yīng)用較多的非放射性標(biāo)記物是生物素和地高辛21核酸探針檢測(cè)的原理核酸探針檢測(cè)所依據(jù)的是核酸分子雜交，其工作原理是堿基配對(duì)，即2條堿基互補(bǔ)的DNA鏈(或2條堿基互補(bǔ)的DNA鏈和RNA鏈)在適當(dāng)條件下可以按堿基配對(duì)原則，形成雜交DNA分子。生物體含有相對(duì)穩(wěn)定的DNA序列，不易受外界環(huán)境因素的影響而改變。一般來(lái)說(shuō)同種生物的DNA序列相同，不同種生物體DNA序列不同．生物個(gè)體都有自己獨(dú)特的DNA序列。根據(jù)中心法則．DNA雙鏈的核苷酸分子是通過(guò)堿基之間的氫鍵作用力專(zhuān)一性互補(bǔ)配對(duì)而結(jié)合在一起的，每個(gè)基因的RNA和對(duì)應(yīng)的模板DNA鏈也可以通過(guò)堿基配對(duì)而結(jié)合在一起。核酸探針就是根據(jù)核酸分子之間的互補(bǔ)配對(duì)原則設(shè)計(jì)的一種檢測(cè)目標(biāo)DNA序列是否存在的一段核酸序列。核酸探針檢測(cè)的原理核酸探針檢測(cè)所依據(jù)的是核酸分子雜交，其工作22核酸探針的分類(lèi)及制備方法根據(jù)核酸的來(lái)源和性質(zhì)，核酸探針可分為RNA探針、人工合成的寡核苷酸探針、單鏈DNA探針、雙鏈DNA探針等幾類(lèi)。1）RNA探針RNA探針一般都是單鏈，它具有單鏈DNA探針的優(yōu)點(diǎn)，又具有許多DNA單鏈探針?biāo)鶝](méi)有的優(yōu)點(diǎn)，主要是：RNA：DNA雜交體比DNA：DNA雜交體有更高的穩(wěn)定性，所以在雜交反應(yīng)中RNA探針比相同活性的DNA探針?biāo)a(chǎn)生信號(hào)要強(qiáng)。RNA：RNA雜交體用RNA酶A(胰RNA酶)切比用Sl酶切DNA：RNA雜交體容易控制，所以用RNA探針進(jìn)行RNA結(jié)構(gòu)分析比用DNA探針效果好。核酸探針的分類(lèi)及制備方法根據(jù)核酸的來(lái)源和性質(zhì)，核酸探針可分為23RNA的探針制備過(guò)程是將一段含完整或部分基因的DNA片段插入重組質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)，以?xún)?nèi)切酶在插入片段中某一適當(dāng)部位或插入片段下游的某一部位消化重組質(zhì)粒，使之成為線(xiàn)性DNA，然后在相應(yīng)的DNA依賴(lài)RNA聚合酶催化下，以含有目的基因的DNA片段為模板合成RNA探針。2)人工合成的寡核苷酸探針人工合成的寡核苷酸探針是在已知基因序列的情況下。由核酸合成儀來(lái)完成，可廉價(jià)獲得大量的此類(lèi)探針，長(zhǎng)度一般長(zhǎng)約10~30bp，甚至可達(dá)50bp。如果已知核酸序列可根據(jù)已知DNA或RNA序列合成精確互補(bǔ)的DNA探針，單一已知序列寡核苷酸探針能與它們的目的序列準(zhǔn)確配對(duì)，可以準(zhǔn)確地設(shè)計(jì)雜交條件，以保證探針只與目的序列雜交而不與序列相近的非完全配對(duì)序列雜交，對(duì)于一些未知序列的目的片段則無(wú)效；如果不知道核酸序列，可依據(jù)其蛋白質(zhì)產(chǎn)物的氨基酸順序推導(dǎo)出核酸序列從而合成DNA探針。RNA的探針制備過(guò)程是將一段含完整或部分基因的DNA片段插入243)單鏈DNA探針和雙鏈DNA探針用雙鏈探針雜交驗(yàn)測(cè)另一個(gè)遠(yuǎn)緣DNA時(shí)，探針序列與被檢測(cè)序列之間有很多錯(cuò)配，但是，2條探針互補(bǔ)鏈之間的配對(duì)卻十分穩(wěn)定，即形成自身的無(wú)效雜交，結(jié)果使檢測(cè)效率下降?？茖W(xué)上采用單鏈探針則可解決這一問(wèn)題。單鏈DNA探針的合成方法:(1)從Ml3載體衍生序列合成單鏈DNA探針。(2)以RNA為模板用反轉(zhuǎn)錄酶合成單鏈cDNA探針。雙鏈DNA探針的合成方法：切口平移法和隨機(jī)引物合成法。雙鏈DNA探針在與靶序列雜交前，DNA分子必須變?yōu)閱捂湥@一般是通過(guò)加熱使其變性而達(dá)到解鏈目的。解鏈DNA分子被迅速冷卻到只能緩慢復(fù)性的溫度以下，可使探針保持單鏈狀態(tài)。3)單鏈DNA探針和雙鏈DNA探針用雙鏈探針雜交驗(yàn)測(cè)另一個(gè)遠(yuǎn)25核酸探針的應(yīng)用現(xiàn)狀一食品檢測(cè)中的應(yīng)用：核酸探針技術(shù)已被用于檢驗(yàn)食品中一些常見(jiàn)的病原菌。（1）大腸桿菌：產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(ETEC)是引起人和動(dòng)物腹瀉的主要病原之一。用生物素標(biāo)記的編碼大腸桿菌耐熱腸毒素(ST)的DNA片段作為基因探針，檢測(cè)了污染食品(包括鮮豬肉、雞蛋、牛乳)中的產(chǎn)ST大腸桿菌。（2）沙門(mén)氏菌：沙門(mén)氏菌是重要的人畜共患致病菌及食物中毒性細(xì)菌之一，廣泛地分布于自然界及畜禽體內(nèi)。由該菌引起的食物中毒占細(xì)菌性食物中毒的首位。利用生物素標(biāo)記的克隆沙門(mén)氏菌DNA片段作為基因探針，檢測(cè)了臨床樣品、食品及飼料樣品中的沙門(mén)氏菌。核酸探針的應(yīng)用現(xiàn)狀一食品檢測(cè)中的應(yīng)用：核酸探針技術(shù)已被用于26二DNA測(cè)序及再測(cè)序中的應(yīng)用DNA測(cè)序早期采用Maxam和Gilbert的化學(xué)法與Sanger的雙脫氧法進(jìn)行測(cè)序。由于這兩種測(cè)序方法是手工測(cè)序，所以它的精確度較低。在以上兩種方法的基礎(chǔ)上，通過(guò)與計(jì)算機(jī)技術(shù)和熒光技術(shù)的結(jié)合，產(chǎn)生的自動(dòng)測(cè)序儀在很大程度上提高測(cè)序的精確度。近幾年，由于DNA測(cè)序技術(shù)的不斷發(fā)展和測(cè)序策略的日益成熟，以及自動(dòng)測(cè)序儀的改進(jìn)，序列測(cè)定速度和準(zhǔn)確率大為提高，隨之出現(xiàn)了基因芯片的測(cè)序，它是利用固定探針的樣品，進(jìn)行分子雜交產(chǎn)生的雜交圖譜，而排列出待測(cè)樣品的序列。隨之就出現(xiàn)了基因芯片雜交測(cè)序技術(shù)(SBH)和鄰位雜交測(cè)序技術(shù)(GSH)。二DNA測(cè)序及再測(cè)序中的應(yīng)用DNA測(cè)序早期采用Maxam27基因芯片

原理原型基因芯片

28三檢測(cè)人及生物體基因組中特異性序列用非放射性核酸探針——地高辛核酸探針可對(duì)醫(yī)學(xué)病毒，禽類(lèi)病毒，植物病毒的進(jìn)行檢測(cè)；用重復(fù)DNA片段來(lái)檢測(cè)麻風(fēng)桿菌；用rRNA探針檢測(cè)銅綠假單脆菌；用核酸探針檢測(cè)腺病毒、BK病毒，巨細(xì)胞病毒以及惡性病原蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)、利氏曼原蟲(chóng)等。雖然以上核酸探針已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于各類(lèi)病毒的檢測(cè)，但在檢測(cè)技術(shù)方面還有一些問(wèn)題，檢測(cè)一種菌就需要制備一種探針一次只能檢測(cè)出一種菌或病毒檢測(cè)的操步驟復(fù)雜，效率低等缺點(diǎn)。而基因芯片可將大量的探針同時(shí)固定于支持物上，所以一次可對(duì)大量核酸分子進(jìn)行檢測(cè)分析，從而解決了傳統(tǒng)核酸印跡雜交的操作復(fù)雜，自動(dòng)化程度低，檢測(cè)目的分子數(shù)量少，效率低的缺陷，使核酸探針的應(yīng)用更加廣闊?，F(xiàn)在基因芯片可以用于檢測(cè)人類(lèi)的許多疾病如腫瘤，血友病，地中海貧血病，異常血紅蛋白病，苯酮尿病等。三檢測(cè)人及生物體基因組中特異性序列用非放射性核酸探針——29四臨床診斷和司法方面的應(yīng)用目前利用核酸探針發(fā)展起來(lái)的PCR在臨床上的應(yīng)用廣泛，。例如：對(duì)結(jié)核、麻風(fēng)、沙眼衣原體、金黃色葡萄球菌、霍亂弧菌等微生物病原體的檢測(cè)；對(duì)艾滋病、病毒、細(xì)胞淋巴瘤病毒的檢測(cè)；數(shù)十種遺傳病(如鐮刀狀細(xì)胞貧血、血友病、肌營(yíng)養(yǎng)不良癥、舞蹈癥等)都采用PCR診斷；腫瘤的診斷；性別鑒定；DNA指紋鑒定。診斷芯心技術(shù)是DNA雜交技術(shù)和PCR擴(kuò)增技術(shù)相結(jié)合的分子診斷方法，將成為一項(xiàng)現(xiàn)代化診斷新技術(shù)?，F(xiàn)在，肝炎病毒檢