病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展培訓(xùn)課件

病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展1回顧過去，病理學(xué)的重大發(fā)現(xiàn)，無一不是新技術(shù)的發(fā)明和應(yīng)用的結(jié)果。同時新技術(shù)的應(yīng)用，也受到病理學(xué)診斷水平和科研能力的制約?；仡欉^去，病理學(xué)的重大發(fā)現(xiàn)，無一不是新技術(shù)的2

目前，我國病理技術(shù)主要還是以常規(guī)HE、特染和免疫組化為主，整體水平并不高，處于中等以下水平。在講規(guī)范化的前面，我想先分析一下我國病理科存在的問題：目前，我國病理技術(shù)主要還是以常規(guī)HE、特染和免3一、技術(shù)員存在的問題

一、技術(shù)員存在的問題

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（1）技術(shù)員隊伍整體素質(zhì)不高，學(xué)歷偏低。大多數(shù)病理科技術(shù)員都是中專畢業(yè)，也有的是由工人轉(zhuǎn)的，有的是由護(hù)士或其它專業(yè)轉(zhuǎn)的。

（1）技術(shù)員隊伍整體素質(zhì)不高，學(xué)歷偏低。大多數(shù)病理科技5

我反對唯學(xué)歷論，學(xué)歷并不能完全代表一個人的能力，但在大多數(shù)情況下，學(xué)歷還是能力的體現(xiàn)。經(jīng)歷了大學(xué)或研究生的培養(yǎng)和學(xué)習(xí)，他們的知識面和考慮問題的思路都不一樣，他們更有發(fā)展?jié)摿Α?/p>

我反對唯學(xué)歷論，學(xué)歷并不能完全代表一個人的能力6（2）、在主觀上不求上進(jìn)者甚多，我這樣說會引起技術(shù)員的公憤，但事實的確如此，沒有理想，不思改進(jìn)，做一天算一天，已是很多技術(shù)員的通病。這就和我們的體制有關(guān)，只有通過崗位競聘，才會讓技術(shù)員認(rèn)識到問題的嚴(yán)重性。（2）、在主觀上不求上進(jìn)者7

（3）缺少正規(guī)的培養(yǎng)和學(xué)習(xí)的機(jī)會，很多技術(shù)員的技術(shù)都是師傅帶徒弟式的方法教的，也有的自學(xué)了；有的盡管出去進(jìn)修了，但學(xué)回來的并不一定是正確的。缺少相互交流的機(jī)會，技術(shù)會議少，技術(shù)員出來的機(jī)會就更少。

（3）缺少正規(guī)的培養(yǎng)和學(xué)習(xí)的機(jī)會，很多技術(shù)員的技術(shù)都是師傅8（4）缺少比較：我到過很多片子做的很差的單位，我發(fā)現(xiàn)醫(yī)生、技術(shù)員的自我感覺都很好，認(rèn)為自己做的很不錯，對“好”沒有概念，如果不知道優(yōu)秀的片子怎么樣，那么對切片質(zhì)量就不會有一個正確的認(rèn)識。

（4）缺少比較：我到過很多片子做的很差的單位，我發(fā)現(xiàn)醫(yī)生、技9

有的技術(shù)員出去學(xué)習(xí)，也是走馬觀花，覺得沒什么好學(xué)的，別人做的和自己沒什么不一樣。諸不知每一個人的動作都有細(xì)微的差異，正因為這些細(xì)微的差異，導(dǎo)致了每個人切片質(zhì)量的不一樣。

有的技術(shù)員出去學(xué)習(xí)，也是走馬觀花，覺得沒什么好學(xué)10諸不知每一個人的動作都有細(xì)微的差異，正因為這些細(xì)微的差異，導(dǎo)致了每個人切片質(zhì)量的不一樣。濃度低的酒精比濃度高的酒精更容易脫水，但也容易使伊紅褪色，故脫水時間可短一點，每道1－3分鐘，純酒精每道5－10分鐘。染液的更換也該應(yīng)量化，蘇木素1500張/500ml，依紅3000張/500ml。5、抗原修復(fù)方法的選擇我覺的任何事物都有主次，紅花總要綠葉配，但不能因為綠葉重要就可以代替紅花。2、脫水脫水液濃度，脫水的時間，溫度。1）

有科研能力的與沒科研7、阻斷內(nèi)源性過氧化物酶和內(nèi)源性生物素（設(shè)立陽性片與陰性片）為增加酒精與二甲苯的相融性，切片更透徹，可在二甲苯前面增加一道正丁醇；重視技術(shù)，提高技術(shù)水平，可以減少由于制片質(zhì)量引起的誤診，最終受益的是我們的醫(yī)生和病人。5、切片、染色必須在10分鐘內(nèi)完成缺少相互交流的機(jī)會，技術(shù)會議少，技術(shù)員出來的機(jī)會就更少。

還有一些技術(shù)員，把一些不規(guī)范的甚至是錯誤的東西當(dāng)成了經(jīng)驗來宣傳、使用和推廣。

諸不知每一個人的動作都有細(xì)微的差異，正因為這些細(xì)微的差異，導(dǎo)11（5）人的惰性當(dāng)技術(shù)發(fā)展到一定階段，或者做了一段時間后，就會慢慢的產(chǎn)生惰性，墨守成規(guī)，不思更新，好的規(guī)章制度也會慢慢的消失，然后固步自封，業(yè)務(wù)水平停頓甚至倒退。（5）人的惰性12（6）不能正確擺正自己的位置。程天民院士曾經(jīng)說過，診斷與技術(shù)是二個輪子，缺一不可，互為依存。我認(rèn)為這個說法不夠確切，容易讓人主次不分。醫(yī)生與技術(shù)員的風(fēng)險與價值是不能等同的。

（6）不能正確擺正自己的位置。程天民院士曾經(jīng)說過，診斷與技術(shù)13而目前我國大多數(shù)的技術(shù)員（包括我自己）只是涉及到病理技術(shù)的一小部分，只學(xué)會了一點皮毛，要學(xué)好技術(shù)，和國際接軌，還有很長的一段路要走。有的盡管出去進(jìn)修了，但學(xué)回來的并不一定是正確的。病理科也是一樣，醫(yī)生是主角，技術(shù)員是配角，技術(shù)員就是要配合醫(yī)生做好工作，你既然干了技術(shù)這個工作，就應(yīng)該有這樣的思想準(zhǔn)備，應(yīng)該正確的面對現(xiàn)實。我們在實踐中發(fā)現(xiàn)，室溫在1215℃時，可作為一個臨界溫度范圍。7、阻斷內(nèi)源性過氧化物酶和內(nèi)源性生物素（設(shè)立陽性片與陰性片）重視技術(shù)，提高技術(shù)水平，可以減少由于制片質(zhì)量引起的誤診，最終受益的是我們的醫(yī)生和病人。嚴(yán)重脫水不足的組織中間發(fā)軟，甚至還會有水。病人來看病，總是沖著醫(yī)生的診斷水平來的，不會因為你的片子做得好沖著你來。1、固定液的種類、濃度，固定的時間，溫度。濃度低的酒精比濃度高的酒精更容易脫水，但也容易使伊紅褪色，故脫水時間可短一點，每道1－3分鐘，純酒精每道5－10分鐘。有的技術(shù)員什么事情都要和醫(yī)生比，當(dāng)二者出現(xiàn)差異后，醫(yī)技關(guān)系就開始緊張，有的就和醫(yī)生頂著干，有的自暴自棄，也有的目空無人，孤芳自賞。

而目前我國大多數(shù)的技術(shù)員（包括我自己）只是涉及到病理技術(shù)的一14我覺的任何事物都有主次，紅花總要綠葉配，但不能因為綠葉重要就可以代替紅花。

我覺的任何事物都有主次，紅花總要綠葉配，但不能因15病理科也是一樣，醫(yī)生是主角，技術(shù)員是配角，技術(shù)員就是要配合醫(yī)生做好工作，你既然干了技術(shù)這個工作，就應(yīng)該有這樣的思想準(zhǔn)備，應(yīng)該正確的面對現(xiàn)實。病人來看病，總是沖著醫(yī)生的診斷水平來的，不會因為你的片子做得好沖著你來。

病理科也是一樣，醫(yī)生是主角，技術(shù)員是配角，技術(shù)員就是要配合醫(yī)16我覺得病理科更像一輛火車：主任是車頭，醫(yī)生是車箱，技術(shù)員是火車的輪子。技術(shù)是決定火車額定速度的動力。最終火車開的好不好，還要靠大家齊心協(xié)力。

我覺得病理科更像一輛火車：主任是車頭，醫(yī)生是車箱17常聽技術(shù)員說現(xiàn)在技術(shù)員的地位越來越低了，于是就感到技術(shù)工作沒前途。

我想這有二方面的因素：第一，你的工作是否已經(jīng)做好。

常聽技術(shù)員說現(xiàn)在技術(shù)員的地位越來越低了，于是就感到技術(shù)工作沒18第二，隨著社會的發(fā)展，改革的深入，對知識重視，醫(yī)生與技術(shù)員之間的差異會增大，我想這也是正常的，我們不是整天叫中國要尊重知識嗎，不能因為對自己不利就不滿意了，我們只有服從這個社會，而不能叫社會服從我們。第二，隨著社會的發(fā)展，改革的深入，對知識重視，醫(yī)19人與人、工作與工作之間由于機(jī)遇不同，性質(zhì)不同，社會地位就會不同，沒必要比來比去。但如果你不用心去做每一件事，任何一個工作對你來說都不會有好前途。只要你把本職工作做好了，別人就會尊重你。工作只有分工不同，沒有貴賤之分。人與人、工作與工作之間由于機(jī)遇不同，性質(zhì)不同，社會地位就會不20在國外，很多國家的病理科技術(shù)員要比醫(yī)生早上班4個多小時，也就是說在醫(yī)生到科前，你就要把昨天取材的組織做好，放在他的桌上。我想遲早，中國也會走上這條路。工作是一個謀生的手段，敬業(yè)，也是為了更好的保住自己的飯碗。在國外，很多國家的病理科技術(shù)員要比醫(yī)生早上班4個多小時，也就21二、醫(yī)生的原因二、醫(yī)生的原因22

很多人會說，技術(shù)員工作做的不好，和醫(yī)生沒什么關(guān)系，其實不然。最簡單的如取材，如果醫(yī)生取材厚薄不均，組織就處理不好，HE切片和免疫組化質(zhì)量都會有影響。

23（1）醫(yī)生工作和學(xué)習(xí)的態(tài)度，在很大程度上影響著技術(shù)員，如果醫(yī)生不喜歡學(xué)習(xí)，技術(shù)員一般也不會學(xué)習(xí)。前面我說過新技術(shù)的應(yīng)用，會受到病理診斷水平和科研能力的制約。如果醫(yī)生什么都不懂，什么工作都不開展，技術(shù)員的業(yè)務(wù)水平也無法提高。

（1）醫(yī)生工作和學(xué)習(xí)的態(tài)度，在很大程度上影響著技術(shù)員，如果醫(yī)242）將就很多醫(yī)生不管技術(shù)員切片做的多差，能將就的就將就，造就了技術(shù)員的惰性，我認(rèn)為這是對病人的不負(fù)責(zé)，對技術(shù)員的不負(fù)責(zé)，也是對自己不負(fù)責(zé)。2）將就25（3）看不起技術(shù)。這樣的病理醫(yī)生其實很多，認(rèn)為技術(shù)員只是操作工，培養(yǎng)個2-3個月就可以做得很好（當(dāng)然這很大程度也有我們技術(shù)員自己造成的，技術(shù)水平越差，醫(yī)生就越看不起，你越看不起，就做的越差，這是一種惡性循環(huán)）。

（3）看不起技術(shù)。26

這就要求我們的醫(yī)生與技術(shù)員，要懂得如何尊重別人。尊重別人，就是尊重自己。要讓別人尊重你，首先你要尊重別人。這就要求我們的醫(yī)生與技術(shù)員，要懂得如何27而目前我國大多數(shù)的技術(shù)員（包括我自己）只是涉及到病理技術(shù)的一小部分，只學(xué)會了一點皮毛，要學(xué)好技術(shù)，和國際接軌，還有很長的一段路要走。

而目前我國大多數(shù)的技術(shù)員（包括我自己）只是涉28

重視技術(shù)，提高技術(shù)水平，可以減少由于制片質(zhì)量引起的誤診，最終受益的是我們的醫(yī)生和病人。

重視技術(shù)，提高技29

三、

錢

金錢，是造成很多病理科醫(yī)技關(guān)系緊張的原因之一。在中國，病理醫(yī)生的高風(fēng)險、高技術(shù)并未在價值上體現(xiàn)出來，與臨床醫(yī)生相比，相差甚遠(yuǎn)。于是有的醫(yī)生就把目光投向了技術(shù)員的口袋，覺得技術(shù)員的業(yè)務(wù)水平與風(fēng)險不能與自己相比，自己應(yīng)該比技術(shù)員拿的多。這種觀點對不對，應(yīng)該說完全正確。但是，在中國這是一個社會體制問題，我們也認(rèn)為醫(yī)生的收入太少了，多一點也應(yīng)該。無論從社會地位，經(jīng)濟(jì)收入上，醫(yī)生與技術(shù)員本身就存在差異，。

30如何解決1、不斷的向社會呼吁，提高人們對病理的認(rèn)識，提高病理收費(fèi)，價格是價值的體現(xiàn)。2、醫(yī)技雙方應(yīng)該齊心協(xié)力，多想想如何從醫(yī)院多爭取錢，如何提高業(yè)務(wù)水平，用技術(shù)賺錢，在合法的條件下拓展業(yè)務(wù)賺錢。3、合理的分配醫(yī)技人員比例，把醫(yī)生從簡單勞動中解放出來。最終以年薪制代替目前的工資獎金制。如何解決1、不斷的向社會呼吁，提高人們對病理的認(rèn)識，提高病理311、

其他原因：1）

有科研能力的與沒科研能力的病理科之間的差異2）大醫(yī)院與小醫(yī)院之間的差異3）經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)與落后地區(qū)的差異

1、

其他原因：32如何解決這些問題：1、

首先技術(shù)員要正確認(rèn)識自己，擺正自己的位置，樹立遠(yuǎn)大的理想，要有責(zé)任感和緊迫感，懂得自尊，自強(qiáng)，自愛。如何解決這些問題：33

2、

多學(xué)習(xí)理論知識，多向同行學(xué)習(xí)，學(xué)會總結(jié)經(jīng)驗，學(xué)會理論與實際相結(jié)合，學(xué)會新的技術(shù)，學(xué)會用腦干活。

343、需要醫(yī)生和科主任的大力支持，沒有醫(yī)生的支持，提高病理技術(shù)是一句空話。4、科學(xué)的管理和規(guī)范化操作，是解決質(zhì)量問題的關(guān)鍵。3、需要醫(yī)生和科主任的大力支持，沒有醫(yī)生的支持，提高病35病理技術(shù)很多是憑經(jīng)驗工作，由于經(jīng)驗的隨意性較大，導(dǎo)致質(zhì)量的不穩(wěn)定性。和國際接軌，是我們的奮斗目標(biāo)，在這背景下，中華病理學(xué)會提出了病理技術(shù)規(guī)范化操作。

病理技術(shù)很多是憑經(jīng)驗工作，由于經(jīng)驗的隨意性較大，導(dǎo)致質(zhì)量的不36病理技術(shù)有很多小竅門，有的是在犧牲制片質(zhì)量的前提下發(fā)明的，使用者往往自己不知道。每個地方操作方法不同，導(dǎo)致制片質(zhì)量各不相同。病理技術(shù)有很多小竅門，有的是在犧牲制片質(zhì)量的37規(guī)范化操作是病理制片質(zhì)量的保證，而量化的管理增加了病理制片質(zhì)量的穩(wěn)定性。規(guī)范化操作是病理制片質(zhì)量的保證，而量化的管理增加了病理制片質(zhì)38

所謂規(guī)范化，就是在操作過程中，對使用試劑種類、pH值、濃度、溫度、時間以及操作的步驟都有詳細(xì)的規(guī)定，盡可能的減少人為的影響，減少各種變量，減少影響制片質(zhì)量的條件。特別是在做分子技術(shù)時，更應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程做。所謂規(guī)范化，就是在操作過程中，對使用試劑種類、pH值、濃39所謂量化，就是把以前經(jīng)驗的東西用量來判定。

所謂量化，就是把以前經(jīng)驗的東西用量來判定。40下面我就講一下病理技術(shù)的規(guī)范化操作下面我就講一下病理技術(shù)的規(guī)范化操作41一、建立完善的規(guī)章制度

沒有規(guī)矩不成方圓，沒有制度就沒有質(zhì)量的保證。一、建立完善的規(guī)章制度沒有規(guī)矩不成方42病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展培訓(xùn)課件43病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展培訓(xùn)課件44病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展培訓(xùn)課件45有了制度最重要的是要去執(zhí)行二、建全監(jiān)督機(jī)制

成立省質(zhì)量控制中心，定期進(jìn)行室間質(zhì)控和室內(nèi)質(zhì)控檢查

有了制度最重要的是要去執(zhí)行二、建全監(jiān)46室間質(zhì)控全省各醫(yī)療機(jī)構(gòu)的病理科都必須嚴(yán)格實施質(zhì)量管理，按規(guī)定參與質(zhì)控檢查工作，接受室間質(zhì)控的評價。組織專家定期對全省各級醫(yī)院病理科進(jìn)行基本設(shè)施、設(shè)備、人員結(jié)構(gòu)、開展工作項目、完成質(zhì)量進(jìn)行抽檢考評，并與等級醫(yī)院、文明醫(yī)院評審掛鉤。室間質(zhì)控全省各醫(yī)療機(jī)構(gòu)的病理科都必須嚴(yán)格實施質(zhì)量管理，按規(guī)定47室內(nèi)質(zhì)控各項制度、規(guī)范應(yīng)該健全、完善，做到有章可依，落實到人。每天自檢制片質(zhì)量，及時發(fā)現(xiàn)問題，確保質(zhì)量穩(wěn)定，并做好評價、記錄、以及整改措施。嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)本驗收、報告發(fā)送、登記、歸檔、資料借閱等規(guī)章制度。定期檢查實驗用試劑及儀器性能，并完整的作好維修、維護(hù)、庫存等記錄。室內(nèi)質(zhì)控各項制度、規(guī)范應(yīng)該健全、完善，做到有章可依，落實到人48HE切片的規(guī)范化管理1、固定液的種類、濃度，固定的時間，溫度。2、脫水脫水液濃度，脫水的時間，溫度。以及更換試劑的方法。3、浸蠟的溫度及包埋時的注意點。4、染色的控制和染色液的更換。5、脫水、透明、封片。HE切片的規(guī)范化管理1、固定液的種類、濃度，固定的時間，溫度49檢查切片（石蠟、冰凍）的完整性厚薄均勻、無皺褶、無刀痕、無污染、色彩分明、樹膠適當(dāng)、無氣泡、編號清楚。對有問題的重新處理，并做好記錄。檢查切片（石蠟、冰凍）的完整性厚薄均勻50冰凍的規(guī)范化管理1、快速冷凍，防止冰晶2、合適的冷凍室溫度3、固定液的選擇4、切片必須快速固定5、切片、染色必須在10分鐘內(nèi)完成冰凍的規(guī)范化管理1、快速冷凍，防止冰晶51免疫組化的規(guī)范化操作1、固定液的選擇和固定的時間2、緩沖液的PH值3、反應(yīng)的溫度與時間4、適當(dāng)?shù)目贵w稀釋比及有效期5、抗原修復(fù)方法的選擇6、合理的使用檢測系統(tǒng)7、阻斷內(nèi)源性過氧化物酶和內(nèi)源性生物素（設(shè)立陽性片與陰性片）8、正確的陽性結(jié)果與定位免疫組化的規(guī)范化操作1、固定液的選擇和固定的時間52特殊染色規(guī)范化操作1、水質(zhì)（蒸餾水或雙蒸水）2、器皿要干凈，不能使用金屬鑷子3、注意試劑的有效期限和保存方法4、注意pH值，溫度，濃度和時間5、鏡下控制分化特殊染色規(guī)范化操作1、水質(zhì)（蒸餾水或雙蒸水）53特別要注意的是規(guī)范化不是教條，規(guī)范化不是一成不變，規(guī)范化不是墨守成規(guī)，規(guī)范化也應(yīng)該不斷地創(chuàng)新。特別要注意的是54謝謝謝謝謝謝謝謝55病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展培訓(xùn)課件56固定

固定是技術(shù)室工作的第一步，也是在整個制片過程中無法補(bǔ)救的一步。所謂“固定”，就是組織離體后，用各種辦法使其細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)盡量接近其生活狀態(tài)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置的過程。

固定固定是技術(shù)室工作的第一步，也是在整個57

固定的目的是為了防止組織細(xì)胞自溶與腐敗，防止細(xì)胞內(nèi)的酶對蛋白質(zhì)的分解作用，使細(xì)胞內(nèi)的各種成分如蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、酶類轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持原有的結(jié)構(gòu)和生活時相仿。另外，組織固定后，均呈一定的硬化狀態(tài)，增加了組織的韌性，而且不易變形，有利于以后的組織處理。

固定的目的是為了防止組織細(xì)胞自溶58

所以組織一旦離體必需及時固定，固定液的量應(yīng)為組織的5倍以上。固定的關(guān)鍵主要與固定的及時性、固定液的選擇、固定液的濃度、固定的溫度和時間有關(guān)。最常用的固定液為10％福爾馬林。由于10％福爾馬林受到福爾馬林的質(zhì)量、使用時的揮發(fā)和取材時帶入水分的影響，濃度容易被降低致組織固定不足，而高濃度的福爾馬林，降低了對組織的穿透性，形成周圍固定好而中央固定不到的現(xiàn)象。所以可以適當(dāng)?shù)脑黾痈栺R林的濃度，以12％左右為佳。

所以組織一旦離體必需及時固定，固定液的59pH7.0中性福爾馬林對大多數(shù)抗原有很好的保存作用，普通福爾馬林略差，通過大量實驗證明，二者有差異但并不十分明顯，通過對抗原修復(fù)液、檢測系統(tǒng)和修復(fù)方法的不同選擇，可以減少二者的差異。

pH7.0中性福爾馬林對大多數(shù)抗原有很好的60由于HE染色時細(xì)胞核的最佳著色點pH為3.54.5,中性福爾馬林對蘇木素染色有一定影響,細(xì)胞核容易發(fā)灰。而病理診斷，主要還是以HE切片為主，就常規(guī)HE規(guī)范化而言，用普通福爾馬林比中性福爾馬林要好（這僅為我個人觀點，爭議會很大，需病理同仁們進(jìn)一步探討）。由于HE染色時細(xì)胞核的最佳著色點pH為61病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展培訓(xùn)課件62

如果每95毫升12％的福爾馬林液內(nèi)加入適量的冰醋酸效果會更佳。當(dāng)然如果根據(jù)常規(guī)切片、免疫組織化學(xué)和分子生物學(xué)的需要不同選用二種或二種以上不同的固定液分開制片是最好的解決辦法。如果每95毫升12％的福爾馬林液63

脫水

所謂脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來，以利于有機(jī)溶劑的滲入，這一過程稱為脫水。脫水是否徹底，直接關(guān)系到組織是否能充分透明。一般我們總認(rèn)為脫水主要跟高濃度酒精有關(guān)，而忽視了與低濃度的酒精關(guān)系。低濃度的酒精可以減少細(xì)胞的收縮，使組織更好切。

脫水的關(guān)鍵是如何使低濃度的酒精脫水時間和高濃度的酒精脫水時間的正確搭配。

脫水所謂脫水就是利用脫水劑將64其實7580%濃度的酒精具有極強(qiáng)的穿透力，在短時間內(nèi)可以置換出大量的水份，而高酒精容易使蛋白質(zhì)凝固，在組織的表面形成一層硬殼，使酒精難以滲透到組織塊中間去，導(dǎo)致組織脫水不佳；其實高濃度酒精里只需脫去從低濃度到高濃度之間的水份，如果純酒精時間過久，或在脫水時加溫過高（超過36℃），使用丙酮等等，都容易導(dǎo)致組織收縮過度和組織發(fā)硬、發(fā)脆。其實7580%濃度的酒精具有極強(qiáng)的穿65組織脫水引起的組織發(fā)脆有二種原因一種是組織脫水過度，其現(xiàn)象是切起來組織如粉狀或組織特別硬，出現(xiàn)一絲一絲的現(xiàn)象或出現(xiàn)一棱一棱的現(xiàn)象；另一種是假脆，是脫水不足引起的，切起來也是組織硬，也會出現(xiàn)一棱一棱的現(xiàn)象，還會使組織整塊整塊往外崩，這種現(xiàn)象主要表現(xiàn)在子宮肌瘤和纖維結(jié)締組織多的組織中；嚴(yán)重脫水不足的組織中間發(fā)軟，甚至還會有水。組織脫水引起的組織發(fā)脆有二種原因一種66為了使組織脫水恰到好處，大小標(biāo)本應(yīng)該分開脫水，一般情況下，大標(biāo)本脫水時間（35℃），75％酒精1.5小時，85％酒精1.52小時、95％酒精（2道）各1.52小時、純酒精（2道）各1小時。小標(biāo)本脫水時間應(yīng)相應(yīng)縮短。脫水時間長短，與室溫高低、固定程度、組織類型、厚薄有密切的相關(guān)。純酒精只需要脫去5%的水份，所以并不需要很長時間。組織在高濃度酒精里隨著時間的延長，硬度、脆度也在不斷增加。為了使組織脫水恰到好處，大小標(biāo)本應(yīng)該分67我們在實踐中發(fā)現(xiàn)，室溫在1215℃時，可作為一個臨界溫度范圍。當(dāng)室溫高于此溫度范圍時，組織容易脫水，可適當(dāng)縮短脫水時間；而室溫低于該溫度范圍時，應(yīng)適當(dāng)延長脫水時間。從規(guī)范化角度出發(fā)，應(yīng)該盡可能的減少變量，也就是溫度、濃度和作用時間。如果一年四季都在一個恒定的溫度下（35℃）最好，有條件的應(yīng)該買全封閉自動脫水機(jī)。我們在實踐中發(fā)現(xiàn)，室溫在1215℃時，68更換脫水液，應(yīng)以量為基礎(chǔ)，定量更換。根據(jù)我科經(jīng)驗，如試劑用量為500ml，每500個蠟塊更換一次為宜。在更換脫水液時，不提倡全部試劑向前退的方法，因為此法不能保證低濃度的酒精的濃度（往往會偏高），也不能用比重計去測量脫過水的酒精濃度，因為脫過水的酒精內(nèi)含有大量的脂肪、蛋白質(zhì)，比重計不能反映出酒精的真正濃度。

更換脫水液，應(yīng)以量為基礎(chǔ)，定量更換。根據(jù)我科69

所以我們認(rèn)為85%的酒精不能退到85%的酒精里，95%的酒精不能退到85%的酒精里，無水酒精不能退到95%的酒精里，而第二道的95%的酒精可以退到第一道95%的酒精里，第二道無水酒精也可以退到第一道無水酒精里。要保證各梯度酒精的真正濃度。只有這樣才能做好每一批組織。

所以我們認(rèn)為85%的酒精不能退到70

脫水原則

合理調(diào)整各濃度酒精的脫水時間，在最短的時間內(nèi)，把水份脫干凈，使組織收縮最小，硬度最適中，切片最舒展、最好切。

脫水原則

71

蘇木素染色時間要根據(jù)染料的新舊、溫度、切片的類型而定，一般為5－15分鐘。經(jīng)水略洗后，用鹽酸酒精分化是關(guān)鍵，分化程度必須用顯微鏡控制。分化水洗后，可用溫水或自來水藍(lán)化，并充分水洗（流水沖洗5分鐘以上），以防鹽酸殘留導(dǎo)致切片褪色。我們不提倡使用堿性溶液（釋氨水、肥皂水等）促藍(lán)，盡管藍(lán)化效果很好，但從實踐的結(jié)果來看，用堿性溶液促藍(lán)的切片容易褪色。染液的更換也該應(yīng)量化，蘇木素1500張/500ml，依紅3000張/500ml。蘇木素染色時間要根據(jù)染料的新舊、溫72HE染色的關(guān)鍵在于深淺適度，對比鮮明，一般有經(jīng)驗的，肉眼就能判斷，但偶而也會出現(xiàn)失誤，所以用顯微鏡控制是最保險的方法。其關(guān)鍵的步驟在于蘇木素染好后的分化及藍(lán)化過程，在藍(lán)化結(jié)束后，應(yīng)在顯微鏡下觀察細(xì)胞核著色是否合適，核結(jié)構(gòu)是否清晰，胞漿內(nèi)是否有殘留的蘇木素等等。染色理想的切片在顯微鏡下應(yīng)是細(xì)胞核與細(xì)胞漿藍(lán)紅相映，鮮艷美麗；核漿對比明顯，核膜及核染色質(zhì)顆粒清晰可見。

HE染色的關(guān)鍵在于深淺適度，對比73脫水和封片

切片脫水應(yīng)從低濃度的酒精到高濃度的酒精，80%酒精1道，95%酒精2道，純酒精2道，二甲苯2道。濃度低的酒精比濃度高的酒精更容易脫水，但也容易使伊紅褪色，故脫水時間可短一點，每道1－3分鐘，純酒精每道5－10分鐘。為增加酒精與二甲苯的相融性，切片更透徹，可在二甲苯前面增加一道正丁醇；石碳酸－二甲苯液也有此效，但石碳酸是弱酸性液體，如不洗凈，可引起切片的褪色，不利于切片久存，故不作推薦。

脫水和封片切片脫水應(yīng)從低濃度的74病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展75回顧過去，病理學(xué)的重大發(fā)現(xiàn)，無一不是新技術(shù)的發(fā)明和應(yīng)用的結(jié)果。同時新技術(shù)的應(yīng)用，也受到病理學(xué)診斷水平和科研能力的制約。回顧過去，病理學(xué)的重大發(fā)現(xiàn)，無一不是新技術(shù)的76

目前，我國病理技術(shù)主要還是以常規(guī)HE、特染和免疫組化為主，整體水平并不高，處于中等以下水平。在講規(guī)范化的前面，我想先分析一下我國病理科存在的問題：目前，我國病理技術(shù)主要還是以常規(guī)HE、特染和免77一、技術(shù)員存在的問題

一、技術(shù)員存在的問題

78

（1）技術(shù)員隊伍整體素質(zhì)不高，學(xué)歷偏低。大多數(shù)病理科技術(shù)員都是中專畢業(yè)，也有的是由工人轉(zhuǎn)的，有的是由護(hù)士或其它專業(yè)轉(zhuǎn)的。

（1）技術(shù)員隊伍整體素質(zhì)不高，學(xué)歷偏低。大多數(shù)病理科技79

我反對唯學(xué)歷論，學(xué)歷并不能完全代表一個人的能力，但在大多數(shù)情況下，學(xué)歷還是能力的體現(xiàn)。經(jīng)歷了大學(xué)或研究生的培養(yǎng)和學(xué)習(xí)，他們的知識面和考慮問題的思路都不一樣，他們更有發(fā)展?jié)摿Α?/p>

我反對唯學(xué)歷論，學(xué)歷并不能完全代表一個人的能力80（2）、在主觀上不求上進(jìn)者甚多，我這樣說會引起技術(shù)員的公憤，但事實的確如此，沒有理想，不思改進(jìn)，做一天算一天，已是很多技術(shù)員的通病。這就和我們的體制有關(guān)，只有通過崗位競聘，才會讓技術(shù)員認(rèn)識到問題的嚴(yán)重性。（2）、在主觀上不求上進(jìn)者81

（3）缺少正規(guī)的培養(yǎng)和學(xué)習(xí)的機(jī)會，很多技術(shù)員的技術(shù)都是師傅帶徒弟式的方法教的，也有的自學(xué)了；有的盡管出去進(jìn)修了，但學(xué)回來的并不一定是正確的。缺少相互交流的機(jī)會，技術(shù)會議少，技術(shù)員出來的機(jī)會就更少。

（3）缺少正規(guī)的培養(yǎng)和學(xué)習(xí)的機(jī)會，很多技術(shù)員的技術(shù)都是師傅82（4）缺少比較：我到過很多片子做的很差的單位，我發(fā)現(xiàn)醫(yī)生、技術(shù)員的自我感覺都很好，認(rèn)為自己做的很不錯，對“好”沒有概念，如果不知道優(yōu)秀的片子怎么樣，那么對切片質(zhì)量就不會有一個正確的認(rèn)識。

（4）缺少比較：我到過很多片子做的很差的單位，我發(fā)現(xiàn)醫(yī)生、技83

有的技術(shù)員出去學(xué)習(xí)，也是走馬觀花，覺得沒什么好學(xué)的，別人做的和自己沒什么不一樣。諸不知每一個人的動作都有細(xì)微的差異，正因為這些細(xì)微的差異，導(dǎo)致了每個人切片質(zhì)量的不一樣。

有的技術(shù)員出去學(xué)習(xí)，也是走馬觀花，覺得沒什么好學(xué)84諸不知每一個人的動作都有細(xì)微的差異，正因為這些細(xì)微的差異，導(dǎo)致了每個人切片質(zhì)量的不一樣。濃度低的酒精比濃度高的酒精更容易脫水，但也容易使伊紅褪色，故脫水時間可短一點，每道1－3分鐘，純酒精每道5－10分鐘。染液的更換也該應(yīng)量化，蘇木素1500張/500ml，依紅3000張/500ml。5、抗原修復(fù)方法的選擇我覺的任何事物都有主次，紅花總要綠葉配，但不能因為綠葉重要就可以代替紅花。2、脫水脫水液濃度，脫水的時間，溫度。1）

有科研能力的與沒科研7、阻斷內(nèi)源性過氧化物酶和內(nèi)源性生物素（設(shè)立陽性片與陰性片）為增加酒精與二甲苯的相融性，切片更透徹，可在二甲苯前面增加一道正丁醇；重視技術(shù)，提高技術(shù)水平，可以減少由于制片質(zhì)量引起的誤診，最終受益的是我們的醫(yī)生和病人。5、切片、染色必須在10分鐘內(nèi)完成缺少相互交流的機(jī)會，技術(shù)會議少，技術(shù)員出來的機(jī)會就更少。

還有一些技術(shù)員，把一些不規(guī)范的甚至是錯誤的東西當(dāng)成了經(jīng)驗來宣傳、使用和推廣。

諸不知每一個人的動作都有細(xì)微的差異，正因為這些細(xì)微的差異，導(dǎo)85（5）人的惰性當(dāng)技術(shù)發(fā)展到一定階段，或者做了一段時間后，就會慢慢的產(chǎn)生惰性，墨守成規(guī)，不思更新，好的規(guī)章制度也會慢慢的消失，然后固步自封，業(yè)務(wù)水平停頓甚至倒退。（5）人的惰性86（6）不能正確擺正自己的位置。程天民院士曾經(jīng)說過，診斷與技術(shù)是二個輪子，缺一不可，互為依存。我認(rèn)為這個說法不夠確切，容易讓人主次不分。醫(yī)生與技術(shù)員的風(fēng)險與價值是不能等同的。

（6）不能正確擺正自己的位置。程天民院士曾經(jīng)說過，診斷與技術(shù)87而目前我國大多數(shù)的技術(shù)員（包括我自己）只是涉及到病理技術(shù)的一小部分，只學(xué)會了一點皮毛，要學(xué)好技術(shù)，和國際接軌，還有很長的一段路要走。有的盡管出去進(jìn)修了，但學(xué)回來的并不一定是正確的。病理科也是一樣，醫(yī)生是主角，技術(shù)員是配角，技術(shù)員就是要配合醫(yī)生做好工作，你既然干了技術(shù)這個工作，就應(yīng)該有這樣的思想準(zhǔn)備，應(yīng)該正確的面對現(xiàn)實。我們在實踐中發(fā)現(xiàn)，室溫在1215℃時，可作為一個臨界溫度范圍。7、阻斷內(nèi)源性過氧化物酶和內(nèi)源性生物素（設(shè)立陽性片與陰性片）重視技術(shù)，提高技術(shù)水平，可以減少由于制片質(zhì)量引起的誤診，最終受益的是我們的醫(yī)生和病人。嚴(yán)重脫水不足的組織中間發(fā)軟，甚至還會有水。病人來看病，總是沖著醫(yī)生的診斷水平來的，不會因為你的片子做得好沖著你來。1、固定液的種類、濃度，固定的時間，溫度。濃度低的酒精比濃度高的酒精更容易脫水，但也容易使伊紅褪色，故脫水時間可短一點，每道1－3分鐘，純酒精每道5－10分鐘。有的技術(shù)員什么事情都要和醫(yī)生比，當(dāng)二者出現(xiàn)差異后，醫(yī)技關(guān)系就開始緊張，有的就和醫(yī)生頂著干，有的自暴自棄，也有的目空無人，孤芳自賞。

而目前我國大多數(shù)的技術(shù)員（包括我自己）只是涉及到病理技術(shù)的一88我覺的任何事物都有主次，紅花總要綠葉配，但不能因為綠葉重要就可以代替紅花。

我覺的任何事物都有主次，紅花總要綠葉配，但不能因89病理科也是一樣，醫(yī)生是主角，技術(shù)員是配角，技術(shù)員就是要配合醫(yī)生做好工作，你既然干了技術(shù)這個工作，就應(yīng)該有這樣的思想準(zhǔn)備，應(yīng)該正確的面對現(xiàn)實。病人來看病，總是沖著醫(yī)生的診斷水平來的，不會因為你的片子做得好沖著你來。

病理科也是一樣，醫(yī)生是主角，技術(shù)員是配角，技術(shù)員就是要配合醫(yī)90我覺得病理科更像一輛火車：主任是車頭，醫(yī)生是車箱，技術(shù)員是火車的輪子。技術(shù)是決定火車額定速度的動力。最終火車開的好不好，還要靠大家齊心協(xié)力。

我覺得病理科更像一輛火車：主任是車頭，醫(yī)生是車箱91常聽技術(shù)員說現(xiàn)在技術(shù)員的地位越來越低了，于是就感到技術(shù)工作沒前途。

我想這有二方面的因素：第一，你的工作是否已經(jīng)做好。

常聽技術(shù)員說現(xiàn)在技術(shù)員的地位越來越低了，于是就感到技術(shù)工作沒92第二，隨著社會的發(fā)展，改革的深入，對知識重視，醫(yī)生與技術(shù)員之間的差異會增大，我想這也是正常的，我們不是整天叫中國要尊重知識嗎，不能因為對自己不利就不滿意了，我們只有服從這個社會，而不能叫社會服從我們。第二，隨著社會的發(fā)展，改革的深入，對知識重視，醫(yī)93人與人、工作與工作之間由于機(jī)遇不同，性質(zhì)不同，社會地位就會不同，沒必要比來比去。但如果你不用心去做每一件事，任何一個工作對你來說都不會有好前途。只要你把本職工作做好了，別人就會尊重你。工作只有分工不同，沒有貴賤之分。人與人、工作與工作之間由于機(jī)遇不同，性質(zhì)不同，社會地位就會不94在國外，很多國家的病理科技術(shù)員要比醫(yī)生早上班4個多小時，也就是說在醫(yī)生到科前，你就要把昨天取材的組織做好，放在他的桌上。我想遲早，中國也會走上這條路。工作是一個謀生的手段，敬業(yè)，也是為了更好的保住自己的飯碗。在國外，很多國家的病理科技術(shù)員要比醫(yī)生早上班4個多小時，也就95二、醫(yī)生的原因二、醫(yī)生的原因96

很多人會說，技術(shù)員工作做的不好，和醫(yī)生沒什么關(guān)系，其實不然。最簡單的如取材，如果醫(yī)生取材厚薄不均，組織就處理不好，HE切片和免疫組化質(zhì)量都會有影響。

97（1）醫(yī)生工作和學(xué)習(xí)的態(tài)度，在很大程度上影響著技術(shù)員，如果醫(yī)生不喜歡學(xué)習(xí)，技術(shù)員一般也不會學(xué)習(xí)。前面我說過新技術(shù)的應(yīng)用，會受到病理診斷水平和科研能力的制約。如果醫(yī)生什么都不懂，什么工作都不開展，技術(shù)員的業(yè)務(wù)水平也無法提高。

（1）醫(yī)生工作和學(xué)習(xí)的態(tài)度，在很大程度上影響著技術(shù)員，如果醫(yī)982）將就很多醫(yī)生不管技術(shù)員切片做的多差，能將就的就將就，造就了技術(shù)員的惰性，我認(rèn)為這是對病人的不負(fù)責(zé)，對技術(shù)員的不負(fù)責(zé)，也是對自己不負(fù)責(zé)。2）將就99（3）看不起技術(shù)。這樣的病理醫(yī)生其實很多，認(rèn)為技術(shù)員只是操作工，培養(yǎng)個2-3個月就可以做得很好（當(dāng)然這很大程度也有我們技術(shù)員自己造成的，技術(shù)水平越差，醫(yī)生就越看不起，你越看不起，就做的越差，這是一種惡性循環(huán)）。

（3）看不起技術(shù)。100

這就要求我們的醫(yī)生與技術(shù)員，要懂得如何尊重別人。尊重別人，就是尊重自己。要讓別人尊重你，首先你要尊重別人。這就要求我們的醫(yī)生與技術(shù)員，要懂得如何101而目前我國大多數(shù)的技術(shù)員（包括我自己）只是涉及到病理技術(shù)的一小部分，只學(xué)會了一點皮毛，要學(xué)好技術(shù)，和國際接軌，還有很長的一段路要走。

而目前我國大多數(shù)的技術(shù)員（包括我自己）只是涉102

重視技術(shù)，提高技術(shù)水平，可以減少由于制片質(zhì)量引起的誤診，最終受益的是我們的醫(yī)生和病人。

重視技術(shù)，提高技103

三、

錢

金錢，是造成很多病理科醫(yī)技關(guān)系緊張的原因之一。在中國，病理醫(yī)生的高風(fēng)險、高技術(shù)并未在價值上體現(xiàn)出來，與臨床醫(yī)生相比，相差甚遠(yuǎn)。于是有的醫(yī)生就把目光投向了技術(shù)員的口袋，覺得技術(shù)員的業(yè)務(wù)水平與風(fēng)險不能與自己相比，自己應(yīng)該比技術(shù)員拿的多。這種觀點對不對，應(yīng)該說完全正確。但是，在中國這是一個社會體制問題，我們也認(rèn)為醫(yī)生的收入太少了，多一點也應(yīng)該。無論從社會地位，經(jīng)濟(jì)收入上，醫(yī)生與技術(shù)員本身就存在差異，。

104如何解決1、不斷的向社會呼吁，提高人們對病理的認(rèn)識，提高病理收費(fèi)，價格是價值的體現(xiàn)。2、醫(yī)技雙方應(yīng)該齊心協(xié)力，多想想如何從醫(yī)院多爭取錢，如何提高業(yè)務(wù)水平，用技術(shù)賺錢，在合法的條件下拓展業(yè)務(wù)賺錢。3、合理的分配醫(yī)技人員比例，把醫(yī)生從簡單勞動中解放出來。最終以年薪制代替目前的工資獎金制。如何解決1、不斷的向社會呼吁，提高人們對病理的認(rèn)識，提高病理1051、

其他原因：1）

有科研能力的與沒科研能力的病理科之間的差異2）大醫(yī)院與小醫(yī)院之間的差異3）經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)與落后地區(qū)的差異

1、

其他原因：106如何解決這些問題：1、

首先技術(shù)員要正確認(rèn)識自己，擺正自己的位置，樹立遠(yuǎn)大的理想，要有責(zé)任感和緊迫感，懂得自尊，自強(qiáng)，自愛。如何解決這些問題：107

2、

多學(xué)習(xí)理論知識，多向同行學(xué)習(xí)，學(xué)會總結(jié)經(jīng)驗，學(xué)會理論與實際相結(jié)合，學(xué)會新的技術(shù)，學(xué)會用腦干活。

1083、需要醫(yī)生和科主任的大力支持，沒有醫(yī)生的支持，提高病理技術(shù)是一句空話。4、科學(xué)的管理和規(guī)范化操作，是解決質(zhì)量問題的關(guān)鍵。3、需要醫(yī)生和科主任的大力支持，沒有醫(yī)生的支持，提高病109病理技術(shù)很多是憑經(jīng)驗工作，由于經(jīng)驗的隨意性較大，導(dǎo)致質(zhì)量的不穩(wěn)定性。和國際接軌，是我們的奮斗目標(biāo)，在這背景下，中華病理學(xué)會提出了病理技術(shù)規(guī)范化操作。

病理技術(shù)很多是憑經(jīng)驗工作，由于經(jīng)驗的隨意性較大，導(dǎo)致質(zhì)量的不110病理技術(shù)有很多小竅門，有的是在犧牲制片質(zhì)量的前提下發(fā)明的，使用者往往自己不知道。每個地方操作方法不同，導(dǎo)致制片質(zhì)量各不相同。病理技術(shù)有很多小竅門，有的是在犧牲制片質(zhì)量的111規(guī)范化操作是病理制片質(zhì)量的保證，而量化的管理增加了病理制片質(zhì)量的穩(wěn)定性。規(guī)范化操作是病理制片質(zhì)量的保證，而量化的管理增加了病理制片質(zhì)112

所謂規(guī)范化，就是在操作過程中，對使用試劑種類、pH值、濃度、溫度、時間以及操作的步驟都有詳細(xì)的規(guī)定，盡可能的減少人為的影響，減少各種變量，減少影響制片質(zhì)量的條件。特別是在做分子技術(shù)時，更應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程做。所謂規(guī)范化，就是在操作過程中，對使用試劑種類、pH值、濃113所謂量化，就是把以前經(jīng)驗的東西用量來判定。

所謂量化，就是把以前經(jīng)驗的東西用量來判定。114下面我就講一下病理技術(shù)的規(guī)范化操作下面我就講一下病理技術(shù)的規(guī)范化操作115一、建立完善的規(guī)章制度

沒有規(guī)矩不成方圓，沒有制度就沒有質(zhì)量的保證。一、建立完善的規(guī)章制度沒有規(guī)矩不成方116病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展培訓(xùn)課件117病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展培訓(xùn)課件118病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展培訓(xùn)課件119有了制度最重要的是要去執(zhí)行二、建全監(jiān)督機(jī)制

成立省質(zhì)量控制中心，定期進(jìn)行室間質(zhì)控和室內(nèi)質(zhì)控檢查

有了制度最重要的是要去執(zhí)行二、建全監(jiān)120室間質(zhì)控全省各醫(yī)療機(jī)構(gòu)的病理科都必須嚴(yán)格實施質(zhì)量管理，按規(guī)定參與質(zhì)控檢查工作，接受室間質(zhì)控的評價。組織專家定期對全省各級醫(yī)院病理科進(jìn)行基本設(shè)施、設(shè)備、人員結(jié)構(gòu)、開展工作項目、完成質(zhì)量進(jìn)行抽檢考評，并與等級醫(yī)院、文明醫(yī)院評審掛鉤。室間質(zhì)控全省各醫(yī)療機(jī)構(gòu)的病理科都必須嚴(yán)格實施質(zhì)量管理，按規(guī)定121室內(nèi)質(zhì)控各項制度、規(guī)范應(yīng)該健全、完善，做到有章可依，落實到人。每天自檢制片質(zhì)量，及時發(fā)現(xiàn)問題，確保質(zhì)量穩(wěn)定，并做好評價、記錄、以及整改措施。嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)本驗收、報告發(fā)送、登記、歸檔、資料借閱等規(guī)章制度。定期檢查實驗用試劑及儀器性能，并完整的作好維修、維護(hù)、庫存等記錄。室內(nèi)質(zhì)控各項制度、規(guī)范應(yīng)該健全、完善，做到有章可依，落實到人122HE切片的規(guī)范化管理1、固定液的種類、濃度，固定的時間，溫度。2、脫水脫水液濃度，脫水的時間，溫度。以及更換試劑的方法。3、浸蠟的溫度及包埋時的注意點。4、染色的控制和染色液的更換。5、脫水、透明、封片。HE切片的規(guī)范化管理1、固定液的種類、濃度，固定的時間，溫度123檢查切片（石蠟、冰凍）的完整性厚薄均勻、無皺褶、無刀痕、無污染、色彩分明、樹膠適當(dāng)、無氣泡、編號清楚。對有問題的重新處理，并做好記錄。檢查切片（石蠟、冰凍）的完整性厚薄均勻124冰凍的規(guī)范化管理1、快速冷凍，防止冰晶2、合適的冷凍室溫度3、固定液的選擇4、切片必須快速固定5、切片、染色必須在10分鐘內(nèi)完成冰凍的規(guī)范化管理1、快速冷凍，防止冰晶125免疫組化的規(guī)范化操作1、固定液的選擇和固定的時間2、緩沖液的PH值3、反應(yīng)的溫度與時間4、適當(dāng)?shù)目贵w稀釋比及有效期5、抗原修復(fù)方法的選擇6、合理的使用檢測系統(tǒng)7、阻斷內(nèi)源性過氧化物酶和內(nèi)源性生物素（設(shè)立陽性片與陰性片）8、正確的陽性結(jié)果與定位免疫組化的規(guī)范化操作1、固定液的選擇和固定的時間126特殊染色規(guī)范化操作1、水質(zhì)（蒸餾水或雙蒸水）2、器皿要干凈，不能使用金屬鑷子3、注意試劑的有效期限和保存方法4、注意pH值，溫度，濃度和時間5、鏡下控制分化特殊染色規(guī)范化操作1、水質(zhì)（蒸餾水或雙蒸水）127特別要注意的是規(guī)范化不是教條，規(guī)范化不是一成不變，規(guī)范化不是墨守成規(guī)，規(guī)范化也應(yīng)該不斷地創(chuàng)新。特別要注意的是128謝謝謝謝謝謝謝謝129病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展培訓(xùn)課件130固定

固定是技術(shù)室工作的第一步，也是在整個制片過程中無法補(bǔ)救的一步。所謂“固定”，就是組織離體后，用各種辦法使其細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)盡量接近其生活狀態(tài)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置的過程。

固定固定是技術(shù)室工作的第一步，也是在整個131

固定的目的是為了防止組織細(xì)胞自溶與腐敗，防止細(xì)胞內(nèi)的酶對蛋白質(zhì)的分解作用，使細(xì)胞內(nèi)的各種成分如蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、酶類轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持原有的結(jié)構(gòu)和生活時相仿。另外，組織固定后，均呈一定的硬化狀態(tài)，增加了組織的韌性，而且不易變形，有利于以后的組織處理。

固定的目的是為了防止組織細(xì)胞自溶132

所以組織一旦離體必需及時固定，固定液的量應(yīng)為組織的5倍以上。固定的關(guān)鍵主要與固定的及時性、固定液的選擇、固定液的濃度、固定的溫度和時間有關(guān)。最常用的固定液為10％福爾馬林。由于10％福爾馬林受到福爾馬林的質(zhì)量、使用時的揮發(fā)和取材時帶入水分的影響，濃度容易被降低致組織固定不足，而高濃度的福爾馬林，降低了對組織的穿透性，形成周圍固定好而中央固定不到的現(xiàn)象。所以可以適當(dāng)?shù)脑黾痈栺R林的濃度，以12％左右為佳。

所以組織一旦離體必需及時固定，固定液的133pH7.0中性福爾馬林對大多數(shù)抗原有很好的保存作用，普通福爾馬林略差，通過大量實驗證明，二者有差異但并不十分明顯，通過對抗原修復(fù)液、檢測系統(tǒng)和修復(fù)方法的不同選擇，可以減少二者的差異。

pH7.0中性福爾馬林對大多數(shù)抗原有很好的134由于HE染色時細(xì)胞核的最佳著色點pH為3.54.5,中性福爾馬林對蘇木素染色有一定影響,細(xì)胞核容易發(fā)灰。而病理診斷，主要還是以HE切片為主，就常規(guī)HE規(guī)范化而言，用普通福爾馬林比中性福爾馬林要好（這僅為我個人觀點，爭議會很大，需病理同仁們進(jìn)一步探討）。由于HE染色時細(xì)胞核的最佳著色點pH為135病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展培訓(xùn)課件136

如果每95毫升12％的福爾馬林液內(nèi)加入適量的冰醋酸效果會更佳。當(dāng)然如果根據(jù)常規(guī)切片、免疫組織化學(xué)和分子生物學(xué)的需要不同選用二種或二種以上不同的固定液分開制片是最好的解決辦法。如果每95毫升12％的福爾馬林液137

脫水

所謂脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來，以利于有機(jī)溶劑的滲入，這一過程稱為脫水。脫水是否徹底，直接關(guān)系到組織是否能充分透明。一般我們總認(rèn)為脫水主要跟高濃度酒精有關(guān)，而忽視了與低濃度的酒精關(guān)系。低濃度的酒精可以減少細(xì)胞的收縮，使組織更好切。

脫水的關(guān)鍵是如何使低濃度的酒精脫水時間和高濃度的酒精脫水時間的正確搭配。

脫水所謂脫水就是利用脫水劑將138其實7580%濃度的酒精具有極強(qiáng)的穿透力，在短時間內(nèi)可以置換出大量的水份，而高酒精容易使蛋白質(zhì)凝固，在組織的表面形成一層硬殼，使酒精難以滲透