《電泳技術(shù)》-2教學(xué)課件

《電泳技術(shù)》(2)幻燈片本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使用學(xué)習(xí)完請(qǐng)自行刪除，謝謝！本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使用學(xué)習(xí)完請(qǐng)自行刪除，謝謝！《電泳技術(shù)》(2)幻燈片本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使目錄第一節(jié) 區(qū)帶電泳第二節(jié) 等電聚焦電泳第三節(jié) SDS電泳第四節(jié) 二維電泳第五節(jié) 印跡技術(shù)第六節(jié) 免疫電泳第七節(jié) 高效毛細(xì)管電泳技術(shù)第八節(jié) 電泳分析儀目錄第一節(jié) 區(qū)帶電泳根本原理不同性質(zhì)的質(zhì)點(diǎn)，由于帶電性質(zhì)及電量不同，在一定電場(chǎng)強(qiáng)度下移動(dòng)的方向和速度亦不同。蛋白質(zhì)分子為兩性電解質(zhì)等電點(diǎn)pH>等電點(diǎn)帶負(fù)電pH<等電點(diǎn)帶正電根本原理不同性質(zhì)的質(zhì)點(diǎn)，由于帶電性質(zhì)及電量不同，在一定電場(chǎng)強(qiáng)質(zhì)點(diǎn)所帶凈電荷量越多（介質(zhì)的pH值離等電點(diǎn)越遠(yuǎn)）質(zhì)點(diǎn)的直徑越小越接近球形則它在電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度越快，遷移率亦越大。根本原理質(zhì)點(diǎn)所帶凈電荷量越多（介質(zhì)的pH值離等電點(diǎn)越遠(yuǎn)）根本原理區(qū)帶電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－血清蛋白電泳圖6-1正常血清蛋白電泳圖譜上圖：箭頭示電泳方向，右側(cè)示各條帶的主要組分；下圖：光密度掃描后電泳圖譜；HP：觸珠蛋白；CP：銅藍(lán)蛋白Alb：清蛋白α1：α1酸性糖蛋白、α1抗胰蛋白酶α2：HP、CP、α2巨球蛋白、α脂蛋白β：運(yùn)鐵蛋白、補(bǔ)體系統(tǒng)、β脂蛋白γ：IgG、IgM、IgA、IgD、IgE區(qū)帶電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－血清蛋白電泳Alb：清蛋白區(qū)帶電泳

圖6-2幾種常見(jiàn)異常血清蛋白圖譜A：雙清蛋白血清電泳圖；B：慢性肝病或肝硬變常見(jiàn)的-融合的橋連現(xiàn)象；C：免疫球蛋白寡克隆增生型；D：M蛋白血清型（IgA型）；N：正常對(duì)照血清；P：患者血清A BC D區(qū)帶電泳圖6-2幾種常見(jiàn)異常血清蛋白圖譜A 區(qū)帶電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－同工酶電泳圖6-3LDH同工酶區(qū)帶電泳圖譜左：5份血清iso-LDH電泳圖；右：iso-LDH電泳示意圖區(qū)帶電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－同工酶電泳圖6-3LDH同第一節(jié) 區(qū)帶電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－同工酶電泳圖6-4CK同工酶示意圖左：血清iso-CK電泳圖，3示正常血清（CKMB<5%），1、2、4示急性心梗（CKMB>5%）；4示CKBB陽(yáng)性；右：iso-CK電泳圖譜示意圖第一節(jié) 區(qū)帶電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－同工酶電泳圖6-4區(qū)帶電泳實(shí)驗(yàn)原理讓pH>pI〔max〕所有蛋白質(zhì)帶負(fù)電各種蛋白質(zhì)帶電量不同電泳速度不同經(jīng)過(guò)一段時(shí)間電泳后，各種蛋白質(zhì)被區(qū)分開(kāi)區(qū)帶電泳實(shí)驗(yàn)原理區(qū)帶電泳圖6-1正常血清蛋白電泳圖譜上圖：箭頭示電泳方向，右側(cè)示各條帶的主要組分；下圖：光密度掃描后電泳圖譜；HP：觸珠蛋白；CP：銅藍(lán)蛋白Alb：清蛋白α1：α1酸性糖蛋白、α1抗胰蛋白酶α2：HP、CP、α2巨球蛋白、α脂蛋白β：運(yùn)鐵蛋白、補(bǔ)體系統(tǒng)、β脂蛋白γ：IgG、IgM、IgA、IgD、IgE區(qū)帶電泳Alb：清蛋白《電泳技術(shù)》-2教學(xué)課件《電泳技術(shù)》-2教學(xué)課件第二節(jié)等電聚焦電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－次級(jí)同工酶的別離

圖6-5堿性磷酸酶同工酶等電聚焦電泳圖譜左：iso-ALP等電聚焦示意圖；右：膽道梗阻性疾病iso-ALP電泳圖譜第二節(jié)等電聚焦電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－次級(jí)同工酶的別離第二節(jié)等電聚焦電泳區(qū)帶電泳的原理是不同的蛋白質(zhì)有不同的電泳速度那么可不可以有另外一種方法：使得不同蛋白質(zhì)在泳道中本來(lái)就有“固定〞位置，蛋白質(zhì)在相應(yīng)的位置上停留？蛋白質(zhì)如何能夠停頓電泳？除了切斷電源之外？蛋白質(zhì)不帶電了——蛋白質(zhì)處于等電點(diǎn)溶液中第二節(jié)等電聚焦電泳區(qū)帶電泳的原理是不同的蛋白質(zhì)有不同的電第二節(jié)等電聚焦電泳根本原理 在等電聚焦電泳時(shí)必須有一個(gè)穩(wěn)定的pH梯度介質(zhì)，使pH值從正極向負(fù)極漸次增加，形成一線性pH梯度。 蛋白質(zhì)混合物參加有pH梯度的電泳管中，在電場(chǎng)中經(jīng)一定時(shí)間后，混合物中各組分將分別聚焦在與各等電點(diǎn)相應(yīng)的pH介質(zhì)區(qū)域，形成別離的各種蛋白質(zhì)區(qū)帶。這就是等電聚焦電泳別離蛋白質(zhì)的根本原理。第二節(jié)等電聚焦電泳根本原理第三節(jié)SDS電泳等電聚焦根據(jù)等電點(diǎn)將蛋白質(zhì)別離那還能不能根據(jù)其他性質(zhì)將蛋白質(zhì)別離?區(qū)帶電泳的電泳速度的影響條件較多〔大小、電荷、形狀〕，不是根據(jù)單一性質(zhì)別離有一種方法能根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量使之帶上相應(yīng)的電荷，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于蛋白質(zhì)本身電荷的大小，并使電荷成為電泳速度的主要決定因素，那么電泳速度只和分子量相關(guān)第三節(jié)SDS電泳等電聚焦根據(jù)等電點(diǎn)將蛋白質(zhì)別離第三節(jié)SDS電泳 SDS是一種陰離子外表活性劑，能使蛋白質(zhì)負(fù)載了大量負(fù)電荷，大大超過(guò)了天然蛋白質(zhì)的原有電荷，因此蛋白質(zhì)之間原有電荷的差異就無(wú)顯著效應(yīng)，蛋白質(zhì)帶電量的多少，只與蛋白質(zhì)大小即分子量有關(guān)，此時(shí)，不同泳動(dòng)速率僅反映了各蛋白質(zhì)亞基的分子量的差異。第三節(jié)SDS電泳 SDS是一種陰離子外表活性劑第三節(jié)SDS電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－非濃縮尿蛋白電泳圖6-7非濃縮尿蛋白電泳示意圖第三節(jié)SDS電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－非濃縮尿蛋白第三節(jié)SDS電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－非濃縮尿蛋白電泳

圖6-8臨床常見(jiàn)蛋白尿電泳圖譜左：腎小球性蛋白尿；中：腎小管性蛋白尿，泳道4示混合性蛋白尿，腎小管性蛋白尿?yàn)橹餍?；右：混合型蛋白尿第三?jié)SDS電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－非濃縮尿蛋白一個(gè)條帶中仍是混合著多種蛋白質(zhì)，如何再把它們分開(kāi)呢？一個(gè)條帶中仍是混合著多種蛋白質(zhì)，如何再把它們分開(kāi)呢？第四節(jié)二維電泳圖6-9二維電泳原理及流程圖第四節(jié)二維電泳圖6-9二維電泳原理及流程圖第四節(jié)二維電泳根本原理第一維電泳，即等電聚焦電泳(isoelectricfocusing，IEF)其根本原理是利用蛋白質(zhì)分子等電點(diǎn)的不同對(duì)其進(jìn)展別離；第二維電泳，即SDS-聚丙稀酰胺凝膠電泳(SDS)，使電泳遷移率主要取決于蛋白質(zhì)或亞基分子量的大小。第四節(jié)二維電泳根本原理第四節(jié)二維電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第四節(jié)二維電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用一個(gè)問(wèn)題：如何確定某個(gè)條帶是什么蛋白質(zhì)？圖6-1正常血清蛋白電泳圖譜上圖：箭頭示電泳方向，右側(cè)示各條帶的主要組分；下圖：光密度掃描后電泳圖譜；HP：觸珠蛋白；CP：銅藍(lán)蛋白一個(gè)問(wèn)題：如何確定某個(gè)條帶是什么蛋白質(zhì)？第五節(jié)印跡技術(shù)免疫印跡法－－根本原理圖6-13免疫印跡法的原理第五節(jié)印跡技術(shù)免疫印跡法－－根本原理圖6-13免疫印跡第五節(jié)印跡技術(shù)免疫印跡法〔Immunoblotting〕 又稱蛋白質(zhì)印跡(Westernblot)，因與早先建立的檢測(cè)核酸的Southernblot相類似，亦被稱為Westernblot，是一種借助特異性抗體鑒定抗原的有效方法。被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針〞是抗體，“顯色〞用標(biāo)記二抗。第五節(jié)印跡技術(shù)免疫印跡法〔Immunoblotting〕第五節(jié)印跡技術(shù) 共分三個(gè)階段進(jìn)展SDS電轉(zhuǎn)移酶免疫定位 第五節(jié)印跡技術(shù) 共分三個(gè)階段進(jìn)展第五節(jié)印跡技術(shù)免疫印跡法在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用自身抗體檢測(cè)中的應(yīng)用第五節(jié)印跡技術(shù)免疫印跡法在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第五節(jié)印跡技術(shù)

圖6-14免疫印跡法在自身抗體ENA檢測(cè)中的應(yīng)用第五節(jié)印跡技術(shù)圖6-14免疫印跡法在自第六節(jié)免疫電泳 電泳技術(shù)與免疫技術(shù)相結(jié)合，大大擴(kuò)大了其臨床應(yīng)用的范圍，于1953年Grabar和Williams首次將凝膠擴(kuò)散置于直流電場(chǎng)中進(jìn)展，讓電流來(lái)加速抗原與抗體的擴(kuò)散并規(guī)定其運(yùn)行方向，并與免疫沉淀反響相結(jié)合,該技術(shù)有兩大優(yōu)點(diǎn)，一是加快了沉淀反響的速度，二是將某些蛋白組分利用其帶電荷的不同而將其別離開(kāi)，再分別與其對(duì)應(yīng)抗體反響，以此作更細(xì)微的分析。第六節(jié)免疫電泳 電泳技術(shù)與免疫技術(shù)相結(jié)合，大大擴(kuò)大了其第六節(jié)免疫電泳對(duì)流免疫電泳(CIEP)圖6-15對(duì)流免疫電泳示意圖及應(yīng)用（1：陽(yáng)性；2：弱陽(yáng)性；3/4：強(qiáng)陽(yáng)性）第六節(jié)免疫電泳對(duì)流免疫電泳(CIEP)圖6-15對(duì)第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE) 實(shí)驗(yàn)原理： 在含抗體的瓊脂板一端打一排抗原孔；參加待測(cè)標(biāo)本后，將抗原置陰極端，用橫距2～3mA/cm的電流強(qiáng)度進(jìn)展電泳。抗原泳向陽(yáng)極，在抗原抗體比例恰當(dāng)處發(fā)生結(jié)合沉淀。隨著泳動(dòng)抗原的減少，抗原泳動(dòng)的基底區(qū)越來(lái)越窄，抗原抗體復(fù)合物形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個(gè)狀如火箭的沉淀峰。第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)圖6-16Laurell技術(shù)示意圖及火箭免疫電泳圖譜Ag：抗原；1、2、3為待測(cè)標(biāo)本；4、5、6為標(biāo)準(zhǔn)第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)圖6-16Lau第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用火箭電泳放射自顯影定量甲胎蛋白圖6-17火箭電泳放射自顯影定量檢測(cè)AFP圖譜第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用血清脂蛋白ApoA1和ApoB火箭電泳圖6-18血清脂蛋白ApoA1和ApoB火箭電泳分析圖譜1、2、3、4、5示標(biāo)準(zhǔn)；6、7、8示待測(cè)標(biāo)本第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六節(jié)免疫電泳免疫電泳(IEP)技術(shù) 是區(qū)帶電泳與免疫雙擴(kuò)散相結(jié)合的一種免疫化學(xué)分析技術(shù)。第六節(jié)免疫電泳免疫電泳(IEP)技術(shù)第六節(jié)免疫電泳免疫電泳(IEP)技術(shù)－－根本原理第六節(jié)免疫電泳免疫電泳(IEP)技術(shù)－－根本原理第六節(jié)免疫電泳免疫電泳(IEP)技術(shù)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用表1血漿免疫電泳各區(qū)帶所含蛋白成分Albα1α2βγ前白蛋白白蛋白α1-抗胰蛋白酶α1-酸糖蛋白α1-抗糜蛋白酶α1-脂蛋白甲胎蛋白觸珠蛋白銅藍(lán)蛋白α2-巨球蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白C3、C4β脂蛋白β2-微球蛋白纖維蛋白原C反應(yīng)蛋白免疫球蛋白第六節(jié)免疫電泳免疫電泳(IEP)技術(shù)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六節(jié)免疫電泳第六節(jié)免疫電泳第六節(jié)免疫電泳免疫固定電泳(IFE)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用圖6-21血清免疫固定電泳圖左：IgA-κ型M蛋白；右：雙M蛋白（IgG-κ、IgA-κ）第六節(jié)免疫電泳免疫固定電泳(IFE)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用圖第六節(jié)免疫電泳免疫固定電泳(IFE)－－技術(shù)優(yōu)勢(shì)周期短敏感性高分辨率好結(jié)果易分析第六節(jié)免疫電泳免疫固定電泳(IFE)－－技術(shù)優(yōu)勢(shì)第七節(jié)高效毛細(xì)管電泳技術(shù)根本原理電滲流電流蛋白泳動(dòng)－+電源檢測(cè)器泳動(dòng)溫度控制器緩沖液+－緩沖液圖6-23高效毛細(xì)管電泳原理圖第七節(jié)高效毛細(xì)管電泳技術(shù)根本原理電滲流電流蛋白泳動(dòng)第七節(jié)高效毛細(xì)管電泳技術(shù)高效毛細(xì)管電泳的別離模式毛細(xì)管區(qū)帶電泳(capillaryzoneelectrophoresis,CZE)毛細(xì)管凝膠電泳〔capillarygelelectrophoresis,CGE〕膠束電動(dòng)力學(xué)毛細(xì)管色譜〔micellarelectrokineticcapillarychromatography,MECC)等電聚焦電泳〔isoelectricfocusing,IEF)等速聚焦電泳(isotachophoresis,ITP)毛細(xì)管電色譜〔capillaryelectrochromatography,CEC〕親和毛細(xì)管電泳〔affinitycapillaryelectrophoresis,ACE〕電動(dòng)色譜(electrokineticchromatography,EKC)非水相毛細(xì)管電泳〔non-aqueouscapillaryelectrophoresis,NACE〕第七節(jié)高效毛細(xì)管電泳技術(shù)高效毛細(xì)管電泳的別離模式第八節(jié)電泳分析儀電泳分析儀的根本構(gòu)造電源可分為穩(wěn)流、穩(wěn)壓、穩(wěn)功率電泳槽電泳區(qū)帶分析裝置第八節(jié)電泳分析儀電泳分析儀的根本構(gòu)造《電泳技術(shù)》-2教學(xué)課件《電泳技術(shù)》-2教學(xué)課件第八節(jié)電泳分析儀半自動(dòng)電泳分析儀圖6-26HELANA半自動(dòng)電泳分析儀第八節(jié)電泳分析儀半自動(dòng)電泳分析儀圖6-26HELAN第八節(jié)電泳分析儀全自動(dòng)電泳分析儀圖6-27Sebia全自動(dòng)電泳儀第八節(jié)電泳分析儀全自動(dòng)電泳分析儀圖6-27Sebia《電泳技術(shù)》-2教學(xué)課件《電泳技術(shù)》-2教學(xué)課件謝謝謝謝思考題1.二維電泳中，分別是哪二維電泳，分別根據(jù)蛋白質(zhì)的什么性質(zhì)進(jìn)展別離？2.免疫印跡法分哪幾個(gè)步驟？思考題1.二維電泳中，分別是哪二維電泳，分別根據(jù)蛋白質(zhì)的什么《電泳技術(shù)》(2)幻燈片本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使用學(xué)習(xí)完請(qǐng)自行刪除，謝謝！本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使用學(xué)習(xí)完請(qǐng)自行刪除，謝謝！《電泳技術(shù)》(2)幻燈片本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使目錄第一節(jié) 區(qū)帶電泳第二節(jié) 等電聚焦電泳第三節(jié) SDS電泳第四節(jié) 二維電泳第五節(jié) 印跡技術(shù)第六節(jié) 免疫電泳第七節(jié) 高效毛細(xì)管電泳技術(shù)第八節(jié) 電泳分析儀目錄第一節(jié) 區(qū)帶電泳根本原理不同性質(zhì)的質(zhì)點(diǎn)，由于帶電性質(zhì)及電量不同，在一定電場(chǎng)強(qiáng)度下移動(dòng)的方向和速度亦不同。蛋白質(zhì)分子為兩性電解質(zhì)等電點(diǎn)pH>等電點(diǎn)帶負(fù)電pH<等電點(diǎn)帶正電根本原理不同性質(zhì)的質(zhì)點(diǎn)，由于帶電性質(zhì)及電量不同，在一定電場(chǎng)強(qiáng)質(zhì)點(diǎn)所帶凈電荷量越多（介質(zhì)的pH值離等電點(diǎn)越遠(yuǎn)）質(zhì)點(diǎn)的直徑越小越接近球形則它在電場(chǎng)中的泳動(dòng)速度越快，遷移率亦越大。根本原理質(zhì)點(diǎn)所帶凈電荷量越多（介質(zhì)的pH值離等電點(diǎn)越遠(yuǎn)）根本原理區(qū)帶電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－血清蛋白電泳圖6-1正常血清蛋白電泳圖譜上圖：箭頭示電泳方向，右側(cè)示各條帶的主要組分；下圖：光密度掃描后電泳圖譜；HP：觸珠蛋白；CP：銅藍(lán)蛋白Alb：清蛋白α1：α1酸性糖蛋白、α1抗胰蛋白酶α2：HP、CP、α2巨球蛋白、α脂蛋白β：運(yùn)鐵蛋白、補(bǔ)體系統(tǒng)、β脂蛋白γ：IgG、IgM、IgA、IgD、IgE區(qū)帶電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－血清蛋白電泳Alb：清蛋白區(qū)帶電泳

圖6-2幾種常見(jiàn)異常血清蛋白圖譜A：雙清蛋白血清電泳圖；B：慢性肝病或肝硬變常見(jiàn)的-融合的橋連現(xiàn)象；C：免疫球蛋白寡克隆增生型；D：M蛋白血清型（IgA型）；N：正常對(duì)照血清；P：患者血清A BC D區(qū)帶電泳圖6-2幾種常見(jiàn)異常血清蛋白圖譜A 區(qū)帶電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－同工酶電泳圖6-3LDH同工酶區(qū)帶電泳圖譜左：5份血清iso-LDH電泳圖；右：iso-LDH電泳示意圖區(qū)帶電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－同工酶電泳圖6-3LDH同第一節(jié) 區(qū)帶電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－同工酶電泳圖6-4CK同工酶示意圖左：血清iso-CK電泳圖，3示正常血清（CKMB<5%），1、2、4示急性心梗（CKMB>5%）；4示CKBB陽(yáng)性；右：iso-CK電泳圖譜示意圖第一節(jié) 區(qū)帶電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－同工酶電泳圖6-4區(qū)帶電泳實(shí)驗(yàn)原理讓pH>pI〔max〕所有蛋白質(zhì)帶負(fù)電各種蛋白質(zhì)帶電量不同電泳速度不同經(jīng)過(guò)一段時(shí)間電泳后，各種蛋白質(zhì)被區(qū)分開(kāi)區(qū)帶電泳實(shí)驗(yàn)原理區(qū)帶電泳圖6-1正常血清蛋白電泳圖譜上圖：箭頭示電泳方向，右側(cè)示各條帶的主要組分；下圖：光密度掃描后電泳圖譜；HP：觸珠蛋白；CP：銅藍(lán)蛋白Alb：清蛋白α1：α1酸性糖蛋白、α1抗胰蛋白酶α2：HP、CP、α2巨球蛋白、α脂蛋白β：運(yùn)鐵蛋白、補(bǔ)體系統(tǒng)、β脂蛋白γ：IgG、IgM、IgA、IgD、IgE區(qū)帶電泳Alb：清蛋白《電泳技術(shù)》-2教學(xué)課件《電泳技術(shù)》-2教學(xué)課件第二節(jié)等電聚焦電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－次級(jí)同工酶的別離

圖6-5堿性磷酸酶同工酶等電聚焦電泳圖譜左：iso-ALP等電聚焦示意圖；右：膽道梗阻性疾病iso-ALP電泳圖譜第二節(jié)等電聚焦電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－次級(jí)同工酶的別離第二節(jié)等電聚焦電泳區(qū)帶電泳的原理是不同的蛋白質(zhì)有不同的電泳速度那么可不可以有另外一種方法：使得不同蛋白質(zhì)在泳道中本來(lái)就有“固定〞位置，蛋白質(zhì)在相應(yīng)的位置上停留？蛋白質(zhì)如何能夠停頓電泳？除了切斷電源之外？蛋白質(zhì)不帶電了——蛋白質(zhì)處于等電點(diǎn)溶液中第二節(jié)等電聚焦電泳區(qū)帶電泳的原理是不同的蛋白質(zhì)有不同的電第二節(jié)等電聚焦電泳根本原理 在等電聚焦電泳時(shí)必須有一個(gè)穩(wěn)定的pH梯度介質(zhì)，使pH值從正極向負(fù)極漸次增加，形成一線性pH梯度。 蛋白質(zhì)混合物參加有pH梯度的電泳管中，在電場(chǎng)中經(jīng)一定時(shí)間后，混合物中各組分將分別聚焦在與各等電點(diǎn)相應(yīng)的pH介質(zhì)區(qū)域，形成別離的各種蛋白質(zhì)區(qū)帶。這就是等電聚焦電泳別離蛋白質(zhì)的根本原理。第二節(jié)等電聚焦電泳根本原理第三節(jié)SDS電泳等電聚焦根據(jù)等電點(diǎn)將蛋白質(zhì)別離那還能不能根據(jù)其他性質(zhì)將蛋白質(zhì)別離?區(qū)帶電泳的電泳速度的影響條件較多〔大小、電荷、形狀〕，不是根據(jù)單一性質(zhì)別離有一種方法能根據(jù)蛋白質(zhì)的分子量使之帶上相應(yīng)的電荷，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于蛋白質(zhì)本身電荷的大小，并使電荷成為電泳速度的主要決定因素，那么電泳速度只和分子量相關(guān)第三節(jié)SDS電泳等電聚焦根據(jù)等電點(diǎn)將蛋白質(zhì)別離第三節(jié)SDS電泳 SDS是一種陰離子外表活性劑，能使蛋白質(zhì)負(fù)載了大量負(fù)電荷，大大超過(guò)了天然蛋白質(zhì)的原有電荷，因此蛋白質(zhì)之間原有電荷的差異就無(wú)顯著效應(yīng)，蛋白質(zhì)帶電量的多少，只與蛋白質(zhì)大小即分子量有關(guān)，此時(shí)，不同泳動(dòng)速率僅反映了各蛋白質(zhì)亞基的分子量的差異。第三節(jié)SDS電泳 SDS是一種陰離子外表活性劑第三節(jié)SDS電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－非濃縮尿蛋白電泳圖6-7非濃縮尿蛋白電泳示意圖第三節(jié)SDS電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－非濃縮尿蛋白第三節(jié)SDS電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－非濃縮尿蛋白電泳

圖6-8臨床常見(jiàn)蛋白尿電泳圖譜左：腎小球性蛋白尿；中：腎小管性蛋白尿，泳道4示混合性蛋白尿，腎小管性蛋白尿?yàn)橹餍?；右：混合型蛋白尿第三?jié)SDS電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用－－非濃縮尿蛋白一個(gè)條帶中仍是混合著多種蛋白質(zhì)，如何再把它們分開(kāi)呢？一個(gè)條帶中仍是混合著多種蛋白質(zhì)，如何再把它們分開(kāi)呢？第四節(jié)二維電泳圖6-9二維電泳原理及流程圖第四節(jié)二維電泳圖6-9二維電泳原理及流程圖第四節(jié)二維電泳根本原理第一維電泳，即等電聚焦電泳(isoelectricfocusing，IEF)其根本原理是利用蛋白質(zhì)分子等電點(diǎn)的不同對(duì)其進(jìn)展別離；第二維電泳，即SDS-聚丙稀酰胺凝膠電泳(SDS)，使電泳遷移率主要取決于蛋白質(zhì)或亞基分子量的大小。第四節(jié)二維電泳根本原理第四節(jié)二維電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第四節(jié)二維電泳檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用一個(gè)問(wèn)題：如何確定某個(gè)條帶是什么蛋白質(zhì)？圖6-1正常血清蛋白電泳圖譜上圖：箭頭示電泳方向，右側(cè)示各條帶的主要組分；下圖：光密度掃描后電泳圖譜；HP：觸珠蛋白；CP：銅藍(lán)蛋白一個(gè)問(wèn)題：如何確定某個(gè)條帶是什么蛋白質(zhì)？第五節(jié)印跡技術(shù)免疫印跡法－－根本原理圖6-13免疫印跡法的原理第五節(jié)印跡技術(shù)免疫印跡法－－根本原理圖6-13免疫印跡第五節(jié)印跡技術(shù)免疫印跡法〔Immunoblotting〕 又稱蛋白質(zhì)印跡(Westernblot)，因與早先建立的檢測(cè)核酸的Southernblot相類似，亦被稱為Westernblot，是一種借助特異性抗體鑒定抗原的有效方法。被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針〞是抗體，“顯色〞用標(biāo)記二抗。第五節(jié)印跡技術(shù)免疫印跡法〔Immunoblotting〕第五節(jié)印跡技術(shù) 共分三個(gè)階段進(jìn)展SDS電轉(zhuǎn)移酶免疫定位 第五節(jié)印跡技術(shù) 共分三個(gè)階段進(jìn)展第五節(jié)印跡技術(shù)免疫印跡法在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用自身抗體檢測(cè)中的應(yīng)用第五節(jié)印跡技術(shù)免疫印跡法在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第五節(jié)印跡技術(shù)

圖6-14免疫印跡法在自身抗體ENA檢測(cè)中的應(yīng)用第五節(jié)印跡技術(shù)圖6-14免疫印跡法在自第六節(jié)免疫電泳 電泳技術(shù)與免疫技術(shù)相結(jié)合，大大擴(kuò)大了其臨床應(yīng)用的范圍，于1953年Grabar和Williams首次將凝膠擴(kuò)散置于直流電場(chǎng)中進(jìn)展，讓電流來(lái)加速抗原與抗體的擴(kuò)散并規(guī)定其運(yùn)行方向，并與免疫沉淀反響相結(jié)合,該技術(shù)有兩大優(yōu)點(diǎn)，一是加快了沉淀反響的速度，二是將某些蛋白組分利用其帶電荷的不同而將其別離開(kāi)，再分別與其對(duì)應(yīng)抗體反響，以此作更細(xì)微的分析。第六節(jié)免疫電泳 電泳技術(shù)與免疫技術(shù)相結(jié)合，大大擴(kuò)大了其第六節(jié)免疫電泳對(duì)流免疫電泳(CIEP)圖6-15對(duì)流免疫電泳示意圖及應(yīng)用（1：陽(yáng)性；2：弱陽(yáng)性；3/4：強(qiáng)陽(yáng)性）第六節(jié)免疫電泳對(duì)流免疫電泳(CIEP)圖6-15對(duì)第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE) 實(shí)驗(yàn)原理： 在含抗體的瓊脂板一端打一排抗原孔；參加待測(cè)標(biāo)本后，將抗原置陰極端，用橫距2～3mA/cm的電流強(qiáng)度進(jìn)展電泳?？乖鞠蜿?yáng)極，在抗原抗體比例恰當(dāng)處發(fā)生結(jié)合沉淀。隨著泳動(dòng)抗原的減少，抗原泳動(dòng)的基底區(qū)越來(lái)越窄，抗原抗體復(fù)合物形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個(gè)狀如火箭的沉淀峰。第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)圖6-16Laurell技術(shù)示意圖及火箭免疫電泳圖譜Ag：抗原；1、2、3為待測(cè)標(biāo)本；4、5、6為標(biāo)準(zhǔn)第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)圖6-16Lau第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用火箭電泳放射自顯影定量甲胎蛋白圖6-17火箭電泳放射自顯影定量檢測(cè)AFP圖譜第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用血清脂蛋白ApoA1和ApoB火箭電泳圖6-18血清脂蛋白ApoA1和ApoB火箭電泳分析圖譜1、2、3、4、5示標(biāo)準(zhǔn)；6、7、8示待測(cè)標(biāo)本第六節(jié)免疫電泳火箭免疫電泳(RIE)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六節(jié)免疫電泳免疫電泳(IEP)技術(shù) 是區(qū)帶電泳與免疫雙擴(kuò)散相結(jié)合的一種免疫化學(xué)分析技術(shù)。第六節(jié)免疫電泳免疫電泳(IEP)技術(shù)第六節(jié)免疫電泳免疫電泳(IEP)技術(shù)－－根本原理第六節(jié)免疫電泳免疫電泳(IEP)技術(shù)－－根本原理第六節(jié)免疫電泳免疫電泳(IEP)技術(shù)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用表1血漿免疫電泳各區(qū)帶所含蛋白成分Albα1α2βγ前白蛋白白蛋白α1-抗胰蛋白酶α1-酸糖蛋白α1-抗糜蛋白酶α1-脂蛋白甲胎蛋白觸珠蛋白銅藍(lán)蛋白α2-巨球蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白C3、C4β脂蛋白β2-微球蛋白纖維蛋白原C反應(yīng)蛋白免疫球蛋白第六節(jié)免疫電泳免疫電泳(IEP)技術(shù)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用第六節(jié)免疫電泳第六節(jié)免疫電泳第六節(jié)免疫電泳免疫固定電泳(IFE)－－檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用圖6-21血清免疫固定電泳圖