膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測教學(xué)課件

膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測幻燈片本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使用學(xué)習(xí)完請自行刪除，謝謝！本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使用學(xué)習(xí)完請自行刪除，謝謝！膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測幻燈片本課件PPT僅供大1染色瓶6組，染色架8個。染色瓶6組，染色架8個。2醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗

綜合性實驗一膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測〔四〕斜面培養(yǎng)物的觀察革蘭染色法肉湯接種法顯微鏡油鏡的使用醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗

綜合性實驗一膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測〔3斜面培養(yǎng)物的觀察分別從斜面的正面和反面觀察。從普通平板上挑取的黃色或白色菌落接種的斜面，菌苔的顏色，還是原來菌落的顏色，黃色或白色。從伊紅美藍(lán)平板上挑取的紫黑色或粉紅色菌落接種的斜面，菌苔已經(jīng)沒有原來菌落的顏色。菌苔灰白色、外表濕潤、光滑、不透明〔紫黑〕或半透明〔粉紅〕?！鶠榱酥v解方便，以后的實驗，仍然沿用初次別離得到菌落的顏色，紫黑色或粉紅色。從斜面上取菌時，不管是涂片，還是接種，每次只取半個小菌落大小的菌量；接種環(huán)或接種針在培養(yǎng)基外表輕輕刮一下即可。斜面培養(yǎng)物的觀察分別從斜面的正面和反面觀察。4細(xì)菌染色法單染色法：只用一種染料染色，如美藍(lán)或復(fù)紅，能清楚觀察菌體大小、形態(tài)與排列，不能鑒別細(xì)菌。復(fù)染色法〔鑒別染色〕：采用兩種或兩種以上的不同染料進(jìn)展先后染色，可將細(xì)菌染成不同的顏色，以便鑒別細(xì)菌?？顾崛旧?用于檢查結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌等抗酸性細(xì)菌，陽性者為紅色。特殊染色：莢膜染色，芽胞染色，鞭毛染色，極體染色〔用于白喉桿菌異染顆粒染色〕。細(xì)菌染色法單染色法：只用一種染料染色，如美藍(lán)或復(fù)紅，能清楚觀5結(jié)核分枝桿菌抗酸染色麻風(fēng)分枝桿菌抗酸染色產(chǎn)氣莢膜梭菌莢膜Hiss染色破傷風(fēng)梭菌芽胞芽胞染色變形桿菌鞭毛Leifson染色

白喉棒狀桿菌異染顆粒Albert染色結(jié)核分枝桿菌麻風(fēng)分枝桿菌產(chǎn)氣莢膜梭菌莢膜破傷風(fēng)梭菌芽胞變形桿6革蘭染色法GramStaining革蘭染色法是丹麥內(nèi)科醫(yī)生ChristainGram于1884年創(chuàng)立的一種細(xì)菌染色方法，已有120多年的歷史，仍在廣泛使用，是細(xì)菌學(xué)中最為經(jīng)典的染色法。革蘭染色法GramStaining7革蘭染色法原理的三種學(xué)說通透性學(xué)說：G+菌細(xì)胞壁構(gòu)造比較致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)含量少，酒精不易透入，反而可使細(xì)胞壁脫水而形成一道屏障，阻止染料向細(xì)胞外滲。G-菌細(xì)胞壁比較疏松，肽聚糖層很薄，而外膜、脂蛋白、脂多糖均含有大量脂質(zhì)，易被酒精溶解，致使細(xì)胞壁通透性增高，細(xì)胞內(nèi)的結(jié)晶紫—碘復(fù)合物容易被酒精脫出。等電學(xué)說：G+菌等電點(pH2～3)比G-菌(pH4～5)低，一般染色時染液的酸堿度在pH7.0左右，電離后陽性菌帶的負(fù)電荷比陰性菌多，因此與帶正電荷的結(jié)晶紫染料結(jié)合結(jié)實，不易脫色?；瘜W(xué)學(xué)說：G+菌細(xì)胞內(nèi)含有某種特殊化學(xué)成分，一般認(rèn)為是核糖核酸鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與染料—媒染劑復(fù)合物結(jié)合，使已著色的細(xì)菌不易脫色。革蘭染色法原理的三種學(xué)說通透性學(xué)說：G+菌細(xì)胞壁構(gòu)造比較致密8革蘭染色的意義鑒別細(xì)菌：把細(xì)菌分成G+和G-兩大類。選擇抗菌藥物：G+球菌對青霉素敏感,G-桿菌耐藥。了解細(xì)菌的致病機(jī)理：G+菌大多產(chǎn)生外毒素,G-菌產(chǎn)生內(nèi)毒素。革蘭染色的步驟涂片→枯燥→固定→染色革蘭染色的意義9接種環(huán)取生理鹽水3～4ul，2滴。菌苔少許（1mm小菌落的半量）與鹽水混勻，涂成≥1cm2。涂畢→環(huán)移至涂膜中央側(cè)立，環(huán)內(nèi)菌膜破裂，接種環(huán)→滅菌。涂片的制備甲→黃色，紫黑。乙→黃色，紫黑。丙→白色，粉紅。丁→白色，粉紅。涂片接種環(huán)取生理鹽菌苔少許（1mm小菌落的半量）與鹽水混勻，涂成10涂片干燥固定涂片干燥固定11革蘭染色方法步驟涂片→枯燥→固定→↓結(jié)晶紫→初染1分鐘→水洗→↓盧戈碘液→媒染1分鐘→水洗→↓95％乙醇→脫色約20秒鐘→水洗→↓稀釋復(fù)紅→復(fù)染1分鐘→水洗→↓吸干,鏡檢。★取菌適量,涂片均勻,水洗輕緩,脫色適當(dāng)?！镉绊懜锾m染色的關(guān)鍵是涂片太厚和脫色。革蘭染色方法步驟涂片→枯燥→固定→12革蘭陽性菌革蘭陰性菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌13G+鏈球菌G-雙球菌G+桿菌G+短桿菌G-弧菌G-螺菌G+鏈球菌G-雙球菌G+桿菌G+短桿菌G-弧菌G-螺菌14甲→黃色,乙→白色,丙→紫黑,丁→粉紅。標(biāo)記：組號，顏色36℃培養(yǎng)4小時4～5×108cfu/ml液體培養(yǎng)基接種BrothTransfer—懸浮法SuspendingMethod甲→黃色,乙→白色,36℃培養(yǎng)4小時4～5×108cf15細(xì)菌在液體培養(yǎng)基的生長情況均勻渾濁：例如金黃色葡萄球菌,大腸桿菌。外表生長形成菌膜：例如枯草桿菌。沉淀生長：例如鏈球菌。細(xì)菌在液體培養(yǎng)基的生長情況均勻渾濁：例如金黃色葡萄球菌,大16生物平安警告本次實驗操作，可產(chǎn)生幾十至幾百個微生物氣溶膠顆粒。氣溶膠粒徑＞100um沉降很快,＜50um在0.4s內(nèi)擴(kuò)散開,＜5um通過呼吸道直接到達(dá)肺泡。Pike博士對實驗室感染統(tǒng)計分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴(kuò)散引起的。實驗時應(yīng)坐著，在火焰周圍10～20厘米內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說話、少走動，以免感染病原菌。生物平安警告本次實驗操作，可產(chǎn)生幾十至幾百個微生物氣溶膠顆粒17100倍浸油物鏡使用方法油鏡放入光路之前，一定要在標(biāo)本的觀察部位上加一滴浸油。旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡進(jìn)入光路，用微調(diào)旋鈕對好焦距。如果浸油內(nèi)有氣泡，會影響觀察，可稍微旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡來回通過1～2次浸油，排除油內(nèi)氣泡。100倍浸油物鏡使用方法油鏡放入光路之前，一定要在標(biāo)本的觀察18香柏油折射率n=1.515空氣折射率n=1.00玻片折射率n=1.52油浸鏡的原理光線滴加香柏油可使光線更多進(jìn)入物鏡,避免光線通過折射率低的空氣而散失,以提高物鏡的分辨率,使物象明亮清晰。放大倍數(shù)：目鏡10倍×物鏡90或100倍香柏油折射率n=1.515空氣折射率n=1.00玻片折射率n19顯微鏡油鏡的使用P1310×物鏡→標(biāo)本位置→滴加香柏油→100×油鏡→浸泡油中,幾乎與標(biāo)本接觸〔工作距離0.13mm〕→細(xì)調(diào)節(jié)調(diào)焦，觀察物像→記錄結(jié)果→關(guān)閉電源。油鏡處理：擦鏡紙拭去香柏油→擦鏡紙沾少許乙醇和乙醚〔7:3〕混合液擦拭→擦鏡紙擦拭油鏡。顯微鏡罩上防塵罩→橫放在實驗柜內(nèi)?！?順德校區(qū)〕實驗臺兩側(cè)的電源插座，只能插入一個插頭，請選擇離你最近的電源插座?！铩残１静俊硨嶒炁_中間，三個位的插座，中間那位插孔沒有電，不能使用，只能用兩側(cè)的插座。顯微鏡油鏡的使用P1310×物鏡→標(biāo)本位置→滴加香柏油→1020革蘭染色法P15甲→黃色，紫黑乙→黃色，紫黑丙→白色，粉紅丁→白色，粉紅肉湯接種法P10甲→黃色乙→白色丙→紫黑丁→粉紅油鏡的使用P1310×物鏡→標(biāo)本位置→滴加香柏油→100×油鏡→浸泡油中,幾乎與標(biāo)本接觸〔工作距離0.13mm〕→細(xì)調(diào)節(jié)調(diào)焦，觀察物像→記錄結(jié)果→關(guān)閉電源→擦鏡紙拭去香柏油→擦鏡紙沾少許乙醇和乙醚〔7:3〕混合液擦拭→擦鏡紙擦拭油鏡。革蘭染色法P1521思考題革蘭染色法的關(guān)鍵步驟是什么?為什么?染色時為什么通常要用新鮮的細(xì)菌培養(yǎng)物?如何使用油鏡?思考題革蘭染色法的關(guān)鍵步驟是什么?為什么?22實驗小結(jié)用普通平板，從濃汁標(biāo)本中別離得到黃色、白色兩種菌落，這兩株細(xì)菌，顯微鏡油鏡下均為G+球菌，排列不規(guī)那么，呈葡萄串狀，是典型的葡萄球菌。結(jié)合菌落色素，這兩株葡萄球菌可能是金黃色葡萄球菌和白色葡萄球菌。電鏡油鏡葡萄實驗小結(jié)電鏡油鏡葡萄23葡萄球菌三個種的鑒別試驗金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌血漿凝固酶+--甘露醇發(fā)酵+--新生霉素敏感性SSRA蛋白+--注：敏感（SensitiveS）,耐藥（ResistantR）。葡萄球菌三個種的鑒別試驗金黃色表皮腐生血漿凝固酶+--甘露醇24用伊紅美藍(lán)平板,從糞便標(biāo)本別離、獲得紫黑色和粉紅色半透明兩種菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的非致病菌大腸埃希菌。粉紅色菌落是不能分解乳糖的致病菌。顯微鏡下，均為G-桿菌，散在排列，從形態(tài)上不能鑒別是什么細(xì)菌。電鏡油鏡電鏡油鏡25常用器材擺放順序：電源插座→試管架→酒精燈→污物盤。試管架上器材：靠近插座一側(cè)第1和第2列分別放置接種針和接種環(huán)，另一側(cè)中間兩行放置油性筆和打火機(jī)?！鞑氖褂煤?，必須放回原處，依次擺整齊。常用器材擺放順序：電源插座→試管架→酒精燈→污物盤?！鞑氖?6實驗器材整齊有序?qū)嶒炂鞑恼R有序27革蘭染色瓶染色架石蠟油拭鏡紙吸水紙乙醇乙醚微生物學(xué)器材柜-1（邊臺西側(cè)中段）革蘭染色器材收拾入柜依次擺整齊↓革蘭染色瓶染色架石蠟油拭鏡紙吸水紙乙醇乙醚微生物學(xué)器材柜-128膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測幻燈片本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使用學(xué)習(xí)完請自行刪除，謝謝！本課件PPT僅供大家學(xué)習(xí)使用學(xué)習(xí)完請自行刪除，謝謝！膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測幻燈片本課件PPT僅供大29染色瓶6組，染色架8個。染色瓶6組，染色架8個。30醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗

綜合性實驗一膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測〔四〕斜面培養(yǎng)物的觀察革蘭染色法肉湯接種法顯微鏡油鏡的使用醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗

綜合性實驗一膿汁和糞便標(biāo)本中病原菌的檢測〔31斜面培養(yǎng)物的觀察分別從斜面的正面和反面觀察。從普通平板上挑取的黃色或白色菌落接種的斜面，菌苔的顏色，還是原來菌落的顏色，黃色或白色。從伊紅美藍(lán)平板上挑取的紫黑色或粉紅色菌落接種的斜面，菌苔已經(jīng)沒有原來菌落的顏色。菌苔灰白色、外表濕潤、光滑、不透明〔紫黑〕或半透明〔粉紅〕?！鶠榱酥v解方便，以后的實驗，仍然沿用初次別離得到菌落的顏色，紫黑色或粉紅色。從斜面上取菌時，不管是涂片，還是接種，每次只取半個小菌落大小的菌量；接種環(huán)或接種針在培養(yǎng)基外表輕輕刮一下即可。斜面培養(yǎng)物的觀察分別從斜面的正面和反面觀察。32細(xì)菌染色法單染色法：只用一種染料染色，如美藍(lán)或復(fù)紅，能清楚觀察菌體大小、形態(tài)與排列，不能鑒別細(xì)菌。復(fù)染色法〔鑒別染色〕：采用兩種或兩種以上的不同染料進(jìn)展先后染色，可將細(xì)菌染成不同的顏色，以便鑒別細(xì)菌?？顾崛旧?用于檢查結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌等抗酸性細(xì)菌，陽性者為紅色。特殊染色：莢膜染色，芽胞染色，鞭毛染色，極體染色〔用于白喉桿菌異染顆粒染色〕。細(xì)菌染色法單染色法：只用一種染料染色，如美藍(lán)或復(fù)紅，能清楚觀33結(jié)核分枝桿菌抗酸染色麻風(fēng)分枝桿菌抗酸染色產(chǎn)氣莢膜梭菌莢膜Hiss染色破傷風(fēng)梭菌芽胞芽胞染色變形桿菌鞭毛Leifson染色

白喉棒狀桿菌異染顆粒Albert染色結(jié)核分枝桿菌麻風(fēng)分枝桿菌產(chǎn)氣莢膜梭菌莢膜破傷風(fēng)梭菌芽胞變形桿34革蘭染色法GramStaining革蘭染色法是丹麥內(nèi)科醫(yī)生ChristainGram于1884年創(chuàng)立的一種細(xì)菌染色方法，已有120多年的歷史，仍在廣泛使用，是細(xì)菌學(xué)中最為經(jīng)典的染色法。革蘭染色法GramStaining35革蘭染色法原理的三種學(xué)說通透性學(xué)說：G+菌細(xì)胞壁構(gòu)造比較致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)含量少，酒精不易透入，反而可使細(xì)胞壁脫水而形成一道屏障，阻止染料向細(xì)胞外滲。G-菌細(xì)胞壁比較疏松，肽聚糖層很薄，而外膜、脂蛋白、脂多糖均含有大量脂質(zhì)，易被酒精溶解，致使細(xì)胞壁通透性增高，細(xì)胞內(nèi)的結(jié)晶紫—碘復(fù)合物容易被酒精脫出。等電學(xué)說：G+菌等電點(pH2～3)比G-菌(pH4～5)低，一般染色時染液的酸堿度在pH7.0左右，電離后陽性菌帶的負(fù)電荷比陰性菌多，因此與帶正電荷的結(jié)晶紫染料結(jié)合結(jié)實，不易脫色?；瘜W(xué)學(xué)說：G+菌細(xì)胞內(nèi)含有某種特殊化學(xué)成分，一般認(rèn)為是核糖核酸鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與染料—媒染劑復(fù)合物結(jié)合，使已著色的細(xì)菌不易脫色。革蘭染色法原理的三種學(xué)說通透性學(xué)說：G+菌細(xì)胞壁構(gòu)造比較致密36革蘭染色的意義鑒別細(xì)菌：把細(xì)菌分成G+和G-兩大類。選擇抗菌藥物：G+球菌對青霉素敏感,G-桿菌耐藥。了解細(xì)菌的致病機(jī)理：G+菌大多產(chǎn)生外毒素,G-菌產(chǎn)生內(nèi)毒素。革蘭染色的步驟涂片→枯燥→固定→染色革蘭染色的意義37接種環(huán)取生理鹽水3～4ul，2滴。菌苔少許（1mm小菌落的半量）與鹽水混勻，涂成≥1cm2。涂畢→環(huán)移至涂膜中央側(cè)立，環(huán)內(nèi)菌膜破裂，接種環(huán)→滅菌。涂片的制備甲→黃色，紫黑。乙→黃色，紫黑。丙→白色，粉紅。丁→白色，粉紅。涂片接種環(huán)取生理鹽菌苔少許（1mm小菌落的半量）與鹽水混勻，涂成38涂片干燥固定涂片干燥固定39革蘭染色方法步驟涂片→枯燥→固定→↓結(jié)晶紫→初染1分鐘→水洗→↓盧戈碘液→媒染1分鐘→水洗→↓95％乙醇→脫色約20秒鐘→水洗→↓稀釋復(fù)紅→復(fù)染1分鐘→水洗→↓吸干,鏡檢。★取菌適量,涂片均勻,水洗輕緩,脫色適當(dāng)?！镉绊懜锾m染色的關(guān)鍵是涂片太厚和脫色。革蘭染色方法步驟涂片→枯燥→固定→40革蘭陽性菌革蘭陰性菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌41G+鏈球菌G-雙球菌G+桿菌G+短桿菌G-弧菌G-螺菌G+鏈球菌G-雙球菌G+桿菌G+短桿菌G-弧菌G-螺菌42甲→黃色,乙→白色,丙→紫黑,丁→粉紅。標(biāo)記：組號，顏色36℃培養(yǎng)4小時4～5×108cfu/ml液體培養(yǎng)基接種BrothTransfer—懸浮法SuspendingMethod甲→黃色,乙→白色,36℃培養(yǎng)4小時4～5×108cf43細(xì)菌在液體培養(yǎng)基的生長情況均勻渾濁：例如金黃色葡萄球菌,大腸桿菌。外表生長形成菌膜：例如枯草桿菌。沉淀生長：例如鏈球菌。細(xì)菌在液體培養(yǎng)基的生長情況均勻渾濁：例如金黃色葡萄球菌,大44生物平安警告本次實驗操作，可產(chǎn)生幾十至幾百個微生物氣溶膠顆粒。氣溶膠粒徑＞100um沉降很快,＜50um在0.4s內(nèi)擴(kuò)散開,＜5um通過呼吸道直接到達(dá)肺泡。Pike博士對實驗室感染統(tǒng)計分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不明原因的感染高達(dá)82%，大多數(shù)是氣溶膠在空氣中擴(kuò)散引起的。實驗時應(yīng)坐著，在火焰周圍10～20厘米內(nèi)操作，保持安靜、有序，盡量少說話、少走動，以免感染病原菌。生物平安警告本次實驗操作，可產(chǎn)生幾十至幾百個微生物氣溶膠顆粒45100倍浸油物鏡使用方法油鏡放入光路之前，一定要在標(biāo)本的觀察部位上加一滴浸油。旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡進(jìn)入光路，用微調(diào)旋鈕對好焦距。如果浸油內(nèi)有氣泡，會影響觀察，可稍微旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤，使油鏡來回通過1～2次浸油，排除油內(nèi)氣泡。100倍浸油物鏡使用方法油鏡放入光路之前，一定要在標(biāo)本的觀察46香柏油折射率n=1.515空氣折射率n=1.00玻片折射率n=1.52油浸鏡的原理光線滴加香柏油可使光線更多進(jìn)入物鏡,避免光線通過折射率低的空氣而散失,以提高物鏡的分辨率,使物象明亮清晰。放大倍數(shù)：目鏡10倍×物鏡90或100倍香柏油折射率n=1.515空氣折射率n=1.00玻片折射率n47顯微鏡油鏡的使用P1310×物鏡→標(biāo)本位置→滴加香柏油→100×油鏡→浸泡油中,幾乎與標(biāo)本接觸〔工作距離0.13mm〕→細(xì)調(diào)節(jié)調(diào)焦，觀察物像→記錄結(jié)果→關(guān)閉電源。油鏡處理：擦鏡紙拭去香柏油→擦鏡紙沾少許乙醇和乙醚〔7:3〕混合液擦拭→擦鏡紙擦拭油鏡。顯微鏡罩上防塵罩→橫放在實驗柜內(nèi)?！?順德校區(qū)〕實驗臺兩側(cè)的電源插座，只能插入一個插頭，請選擇離你最近的電源插座?！铩残１静俊硨嶒炁_中間，三個位的插座，中間那位插孔沒有電，不能使用，只能用兩側(cè)的插座。顯微鏡油鏡的使用P1310×物鏡→標(biāo)本位置→滴加香柏油→1048革蘭染色法P15甲→黃色，紫黑乙→黃色，紫黑丙→白色，粉紅丁→白色，粉紅肉湯接種法P10甲→黃色乙→白色丙→紫黑丁→粉紅油鏡的使用P1310×物鏡→標(biāo)本位置→滴加香柏油→100×油鏡→浸泡油中,幾乎與標(biāo)本接觸〔工作距離0.13mm〕→細(xì)調(diào)節(jié)調(diào)焦，觀察物像→