核酸類藥物的分析課件

第九章核酸類藥物的分析第九章核酸類藥物的分析基本要求掌握：核酸的結(jié)構(gòu)和分類；嘌呤類藥物和嘧啶類藥物鑒別、檢查、含量測定的原理熟悉：核酸的理化性質(zhì)；反義寡核苷酸藥物鑒別、檢查、含量測定的原理基本要求掌握：核酸的結(jié)構(gòu)和分類；嘌呤類藥物和嘧啶類藥物鑒別、第一節(jié)概述結(jié)構(gòu)和分類理化性質(zhì)第一節(jié)概述結(jié)構(gòu)和分類什么是核酸？1869年核酸最早分離自外科繃帶膿細胞的細胞核，當(dāng)時發(fā)現(xiàn)這種物質(zhì)含磷量之高超過當(dāng)時發(fā)現(xiàn)的任何一種有機物，并且含有很強的酸性，故得名核酸。1909年其組成被研究清楚，1944年生物功能初步澄清，在X射線衍射技術(shù)支持下1953年結(jié)構(gòu)澄清。核酸是脫氧核糖核酸（DNA）與核糖核酸（RNA）的通稱。什么是核酸？1869年核酸最早分離自外科繃帶膿細胞的細胞核，核酸核苷酸磷酸核苷戊糖堿基水解一、結(jié)構(gòu)和分類核酸核苷酸磷酸核苷戊糖堿基水一、結(jié)構(gòu)和分類核酸代表戊糖，對DNA而言為脫氧核糖，對RNA而言為核糖；

代表堿基

代表磷酸基核苷酸核酸代表戊糖，對DNA而言為脫氧核糖，對RNA而言為核核苷酸磷酸堿基戊糖核苷酸磷酸堿基戊糖H2OH2O堿基磷酸戊糖糖苷鍵酯鍵H2OH2O堿基磷酸戊糖糖苷鍵酯鍵核苷酸堿基連接（糖苷鍵）酯鍵（對DNA為H）1`2`3`4`5`核苷酸堿基連接（糖苷鍵）酯鍵（對DNA為H）1`2`3`4`戊糖核糖(inRNA)2｀－脫氧核糖(inDNA)戊糖核糖2｀－脫氧核糖核苷核苷DNA&RNADNA&RNA堿基RNADNA

嘧啶環(huán)

嘌呤環(huán)尿嘧啶U胸腺嘧啶T胞嘧啶C鳥嘌呤G腺嘌呤A堿基RNADNA嘧啶環(huán)嘌呤環(huán)尿嘧啶U胸腺嘧啶T胞嘧啶類別DNARNA基本單位脫氧核糖核苷酸核糖核苷酸核苷酸腺嘌呤脫氧核苷酸

鳥嘌呤脫氧核苷酸

胞嘧啶脫氧核苷酸

胸腺嘧啶脫氧核苷酸腺嘌呤核苷酸

鳥嘌呤核苷酸

胞嘧啶核苷酸

尿嘧啶核苷酸堿基腺嘌呤（A)

鳥嘌呤（G)

胞嘧啶（C)

胸腺嘧啶（T)腺嘌呤（A)

鳥嘌呤（G)

胞嘧啶（C)

尿嘧啶（U）五碳糖脫氧核糖核糖酸磷酸磷酸類別DNARNA基本單位脫氧核糖核苷酸核糖核苷酸核苷酸腺嘌呤稀有堿基嘌呤——次黃嘌呤、1-甲基次黃嘌呤、N2、N2-二甲基鳥嘌呤。嘧啶——5-甲基胞嘧啶、5-羥甲基胞嘧啶、二氫尿嘧啶、4-巰尿嘧啶都是基本堿基的化學(xué)修飾型。稀有堿基嘌呤——次黃嘌呤、1-甲基次黃嘌呤、N2、N2-二甲鳥嘌呤次黃嘌呤1-甲基次黃嘌呤鳥嘌呤次黃嘌呤1-甲基次黃嘌呤二、理化性質(zhì)（一）兩性性質(zhì)：磷酸基；堿基（通常：酸性）

pH影響堿基間氫鍵穩(wěn)定：DNApH4.0~11.0（二）水解性：微溶于水，不溶于一般的有機溶劑（三）UV：λmax=260nm蛋白質(zhì)280nmA260/A280純DNA＞1.8

純RNA應(yīng)達到2.0

混有雜蛋白比值降低二、理化性質(zhì)（一）兩性性質(zhì)：磷酸基；堿基（通常：酸性）第九章核酸類藥物的分析課件（四）變性和復(fù)性1.變性：在某些理化因素影響下，DNA雙螺旋區(qū)的氫鍵斷裂和堿基堆積力破壞，有規(guī)律的雙螺旋結(jié)構(gòu)變成單鏈無規(guī)律的“線團”，但不發(fā)生共價鍵的斷裂，這過程稱之。變性原因：高溫（一般＞75℃）、強氧化劑、強酸、堿、尿素等；機理：雙鏈間氫鍵斷開，成為兩條單鏈（DNA雙螺旋二級結(jié)構(gòu)的破壞，生物活性的喪失）特征性Tm---DNA的變性溫度82~95℃（四）變性和復(fù)性第九章核酸類藥物的分析課件2.復(fù)性一定條件下，去除變性因素后，核酸恢復(fù)二級結(jié)構(gòu)及生物活性的現(xiàn)象；通常使用熱復(fù)性。（退火）高溫變性緩慢冷卻熱復(fù)性急速冷卻復(fù)性失敗熱復(fù)性在基因測序中被廣泛應(yīng)用2.復(fù)性高溫變性緩慢冷卻熱復(fù)性急速冷卻復(fù)性失敗熱復(fù)性在基因測第九章核酸類藥物的分析課件（五）顏色反應(yīng)苔黑酚反應(yīng):RNA中核糖+濃HCl（濃H2SO4）→糠醛+苔黑酚→深綠色化合物（λmax=670nm）二苯胺反應(yīng):DNA中脫氧核糖+濃H2SO4→5-羥基-4-羰基戊醛+二苯胺→藍色化合物（λmax=595nm）水解后磷酸：磷酸+鉬酸→磷鉬酸+還原劑（維生素C、氯化亞錫等）→鉬藍（λmax=660nm）Fe3+脫水（五）顏色反應(yīng)Fe3+脫水第二節(jié)嘌呤類核苷酸藥物分析嘌呤堿（腺嘌呤、鳥嘌呤）戊糖磷酸第二節(jié)嘌呤類核苷酸藥物分析嘌呤堿（腺嘌呤、鳥嘌呤）一、鑒別戊糖鑒別嘌呤鑒別磷酸鑒別特征吸收光譜熔點測定一、鑒別戊糖鑒別（一）戊糖的鑒別苔黑酚反應(yīng)（地衣酚反應(yīng)）---凡核糖均有此反應(yīng)試劑：濃鹽酸，苔黑酚試劑，三氯化鐵（催化劑）現(xiàn)象：鮮綠色二苯胺反應(yīng)DNA試劑：濃硫酸，二苯胺現(xiàn)象：藍色與間苯三酚反應(yīng)（核苷酸中的戊糖）現(xiàn)象：玫瑰紅色（一）戊糖的鑒別苔黑酚反應(yīng)（地衣酚反應(yīng)）---凡核糖均有此反（二）嘌呤的鑒別+氨制硝酸銀→白色↓→紅棕色（遇光）（嘌呤堿基的特殊鑒別反應(yīng)）（二）嘌呤的鑒別+氨制硝酸銀→白色↓→紅棕色（遇光）（三）磷酸的鑒別有機磷→無機磷+鉬酸→磷鉬酸+還原劑→鉬藍（三）磷酸的鑒別有機磷→無機磷+鉬酸→磷鉬酸+還原劑→鉬藍（四）特征吸收光譜UV：嘌呤環(huán)，嘧啶環(huán)IR（四）特征吸收光譜UV：嘌呤環(huán)，嘧啶環(huán)（五）熔點測定（五）熔點測定二、檢查一般檢查酸度，水分，無機鹽，有機物，溶液的顏色和澄清度蛋白質(zhì)檢查磺基水楊酸溶液有關(guān)物質(zhì)紙色譜，薄層色譜，電泳，熒光檢查二、檢查一般檢查三、含量測定紫外-可見分光光度法現(xiàn)在國家已經(jīng)批準(zhǔn)的嘌呤類核苷酸藥物一般都用此法測定含量HPLC三、含量測定紫外-可見分光光度法四、實例分析肌苷ATP四、實例分析肌苷（一）肌苷的質(zhì)量分析1.結(jié)構(gòu)：C10H12N4O5268.23本品為9β-D-核糖次黃嘌呤。按干燥品計算，含C10H12N4O5應(yīng)為98.0～102.0％。2.性狀：本品為白色結(jié)晶性粉末；無臭，味微苦。本品在水中略溶，在氯仿或乙醇中不溶，在稀鹽酸和氫氧化鈉溶液中易溶。

（一）肌苷的質(zhì)量分析1.結(jié)構(gòu)：C10H12N4O523.鑒別取0.01％供試品溶液適量,加等體積的3,5-二羥基甲苯溶液(取3，5-二羥基甲苯與三氯化鐵各0.1g，加鹽酸使成100ml)，混勻，在水浴中加熱約10分鐘，即顯綠色。---苔黑酚反應(yīng)取本品1％水溶液，加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，即產(chǎn)生白色膠狀沉淀。---嘌呤堿基

取含量測定項下的溶液,照分光光度法測定，在248nm的波長處有最大吸收，在222nm的波長處有最小吸收。色譜圖IR

3.鑒別4.檢查

溶液的澄清度與顏色（溶液的透光率）取本品0.5g，加水50ml使溶解，照分光光度法在430nm的波長處測定透光率，不得低于98.0％(供注射用)。干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，減失重量不得過1.0熾灼殘渣不得過0.1％(供注射用),或不得過0.2％(供口服用重金屬取本品1.0g，依法檢查含重金屬不得過百萬分之十。次黃嘌呤

①精密稱取本品0.5g，置50ml量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，照紙色譜法試驗，吸取上述溶10μl，點于3×25cm色譜濾紙上，照上行法，以水為展開劑，展開約20cm處，取出晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，不得出現(xiàn)雜質(zhì)斑點。

②HPLC4.檢查5.含量測定

1）UV法：取本品，精密稱定，加水制成每1ml中約含10μg的溶液，照分光光度法在248nm的波長處測定吸收度，按C10H12N4O5的吸收系數(shù)（E1％1cm）為460計算。2）HPLC5.含量測定6.作用與用途輔酶類藥。有改善機體代謝作用。用于各種類型肝臟疾患、心臟疾患、白細胞減少癥、血小板減少癥、中心視網(wǎng)膜炎、視神經(jīng)萎縮等。7.用法與用量口服，一次0.2～0.6g一日0.6～1.8g8.貯藏遮光，密閉保存。9.制劑(1)肌苷口服溶液(2)肌苷片(3)肌苷注射液(4)肌苷膠囊(5)肌苷顆粒劑

6.作用與用途輔酶類藥。有改善機體代謝作用。用于各種類型肝（二）三磷酸腺苷二鈉（ATP）的質(zhì)量分析

拼音名：Sanlinsuanxiangan‘erna

英文名：AdenosineDisodiumTriphosphate

C10H14N5Na2O13P3551.151.結(jié)構(gòu)：本品為腺嘌呤核苷-5’-三磷酸酯二鈉鹽三水化合物。按干燥品計算，含C10H14N5Na2O13P3不得少于90.0％。

（二）三磷酸腺苷二鈉（ATP）的質(zhì)量分析拼音名：Sanl2.性狀：本品為白色或類白色粉末或結(jié)晶塊狀物；無臭，味咸；有引濕性。本品在水中易溶，在乙醇、氯仿或乙醚中幾乎不溶。2.性狀：本品為白色或類白色粉末或結(jié)晶塊狀物；無臭，味咸；有3.鑒別（1）取本品20mg,加稀硝酸2ml溶解后，加鉬酸銨試液1ml，加熱，放冷，即析出黃色沉淀。---磷酸鹽（2）取本品約10mg，加鹽酸溶液(1→2)5ml溶解后，加間苯三酚10mg，混勻，置水浴中加熱約1分鐘，即顯玫瑰紅色。--戊糖（3）苔黑酚反應(yīng)—戊糖（3）UV（4）IR（5）本品的水溶液顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)3.鑒別4.檢查酸度溶液的澄清度與顏色蛋白質(zhì)取本品20mg，加水2ml溶解后，滴加30％磺基水楊酸溶液0.5ml，不得發(fā)生渾濁。有關(guān)物質(zhì)水分氯化物鐵鹽重金屬熱原

4.檢查5.含量測定

（1）總核苷酸：UV（2）三磷酸腺苷二鈉的重量比：HPLC（3）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗（4）測定法5.含量測定6.作用與用途

輔酶類藥。用于進行性肌萎縮、腦溢血后遺癥、心功能不全、心肌疾患及肝炎等。7.注意

緩慢注射。心肌硬塞和腦溢血在發(fā)病期患者慎用。8.貯藏

有陰涼干燥處密封保存。有效期１年。9.制劑

(1)三磷酸腺苷二鈉注射液(2)注射用三磷酸腺苷二鈉

6.作用與用途輔酶類藥。用于進行性肌萎縮、腦溢血后遺癥、心第三節(jié)嘧啶類核苷酸藥物的分析第三節(jié)嘧啶類核苷酸藥物的分析一、鑒別

該類藥物的化學(xué)組成和性質(zhì)本與嘌呤類相似，唯一區(qū)別在于堿基的不同。一元堿一、鑒別該類藥物的化學(xué)組成和性質(zhì)本與嘌呤類二、檢查常規(guī)檢查其他核苷酸：TLC二、檢查常規(guī)檢查三、含量測定UV法電位滴定法三、含量測定UV法四、實例分析---氟尿嘧啶1.通用名:氟尿嘧啶

化學(xué)名:5-氟-2,4(1H,3H)-嘧啶二酮分子式:C4H3FN2O2

分子量:130.08熔點:278-286℃

水溶性:12.2g/L20℃含氟尿嘧啶（C4H3FN202）應(yīng)為標(biāo)示量的93.0-107.0%四、實例分析---氟尿嘧啶1.通用名:氟尿嘧啶

2.性狀：白色或類白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。在水中略溶，乙醇中微溶，三氯甲烷中幾乎不溶，在稀鹽酸或氫氧化鈉溶液中溶解。2.性狀：白色或類白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。3.鑒別（1）+溴，溴褪色；+氫氧化鋇，紫色↓（2）三氧化鉻的飽和硫酸溶液，均勻涂于管壁本品，不能再均勻涂于管壁（3）λmax=265nmλmin=232nm（4）IR3.鑒別4.檢查：氯化物硫酸鹽含氟量干燥失重重金屬4.檢查：5.含量測定：取本品適量，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1mL中約含10μg的溶液，照紫外-可見分光光度法，在265nm波長處，測定吸光度，按C4H3FN2O2的吸收系數(shù)（E1%1cm）為552計算，即得。5.含量測定：取本品適量，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1第九章核酸類藥物的分析課件用途：本品為嘧啶類的氟化物，屬于抗代謝抗腫瘤藥，能抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，阻斷脫氧嘧啶核苷酸轉(zhuǎn)換成胸腺嘧啶核苷核，干擾DNA合成。對RNA的合成也有一定的抑制作用。

用途：本品為嘧啶類的氟化物，屬于抗代不良反應(yīng)：骨髓抑制：主要為白細胞減少、血小板下降。食欲不振、惡心、嘔吐、口腔炎、胃炎、腹痛及腹瀉等胃腸道反應(yīng)。注射局部有疼痛、靜脈炎或動脈內(nèi)膜炎。其他：常有脫發(fā)、紅斑性皮炎、皮膚色素沉著手足綜合征及暫時性小腦運動失調(diào)，偶有影響心臟功能不良反應(yīng)：注意事項：用藥期間應(yīng)嚴格檢查血象。避光置陰暗處保存，溫度不應(yīng)低于10℃，亦不宜超過35℃。治療期涂藥范圍有炎癥，停藥后炎癥消退。本品可引起嚴重的皮膚刺激，尤其在日光下。該藥還可經(jīng)皮損內(nèi)注射給藥用于角化棘皮病、疣和汗孔角化病。其主要副作用為注射期間有的燒感，繼之有局部紅斑、水腫甚至潰瘍。注意事項：第四節(jié)反義寡核苷酸藥物分析1.定義2.化學(xué)修飾：硫代修飾3.序列分析：化學(xué)測序法；質(zhì)譜法4.雜交性質(zhì)5.理化特性分析（鑒別：HPLC，CE）（特殊雜質(zhì)：失敗序列；硫代不充分）6.生物活性測定第四節(jié)反義寡核苷酸藥物分析1.定義樹立質(zhì)量法制觀念、提高全員質(zhì)量意識。1月-231月-23Monday,January2,2023人生得意須盡歡，莫使金樽空對月。21:24:5021:24:5021:241/2/20239:24:50PM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦繃。1月-2321:24:5021:24Jan-2302-Jan-23加強交通建設(shè)管理，確保工程建設(shè)質(zhì)量。21:24:5021:24:5021:24Monday,January2,2023安全在于心細，事故出在麻痹。1月-231月-2321:24:5021:24:50January2,2023踏實肯干，努力奮斗。2023年1月2日9:24下午1月-231月-23追求至善憑技術(shù)開拓市場，憑管理增創(chuàng)效益，憑服務(wù)樹立形象。02一月20239:24:50下午21:24:501月-23嚴格把控質(zhì)量關(guān)，讓生產(chǎn)更加有保障。一月239:24下午1月-2321:24January2,2023作業(yè)標(biāo)準(zhǔn)記得牢，駕輕就熟除煩惱。2023/1/221:24:5021:24:5002January2023好的事情馬上就會到來，一切都是最好的安排。9:24:50下午9:24下午21:24:501月-23專注今天，好好努力，剩下的交給時間。1月-231月-2321:2421:24:5021:24:50Jan-23牢記安全之責(zé)，善謀安全之策，力務(wù)安全之實。2023/1/221:24:50Monday,January2,2023相信相信得力量。1月-232023/1/221:24:501月-23謝謝大家！樹立質(zhì)量法制觀念、提高全員質(zhì)量意識。12月-2212月-22踏實，奮斗，堅持，專業(yè)，努力成就未來。1月-231月-23Monday,January2,2023弄虛作假要不得，踏實肯干第一名。21:24:5021:24:5021:241/2/20239:24:50PM安全象只弓，不拉它就松，要想保安全，常把弓弦繃。1月-2321:24:5021:24Jan-2302-Jan-23重于泰山，輕于鴻毛。21:24:5021:24:5021:24Monday,January2,2023不可麻痹大意，要防微杜漸。1月-231月-2321:24:5021:24:50January2,2023加強自身建設(shè)，增強個人的休養(yǎng)。2023年1月2日9:24下午1月-231月-23追求卓越，讓自己更好，向上而生。02一月20239:24:50下午21:24:501月-23嚴格把控質(zhì)量關(guān)，讓生產(chǎn)更加有保障。一月239:24下午1月-2321:24January2,2023重規(guī)矩，嚴要求，少危險。2023/1/221:24:5021:24:5002January2023好的事情馬上就會到來，一切都是最好的安排。9:24:50下午9:24下午21:24:501月-23每天都是美好的一天，新的一天開啟。1月-231月-2321:2421:24:5021:24:50Jan-23務(wù)實，奮斗，成就，成功。2023/1/221:24:50Monday,January2,2023抓住每一次機會不能輕易流失，這樣我們才能真正強大。1月-232023/1/221:24:501月-23謝謝大家！踏實，奮斗，堅持，專業(yè)，努力成就未來。12月-2212月-2第九章核酸類藥物的分析第九章核酸類藥物的分析基本要求掌握：核酸的結(jié)構(gòu)和分類；嘌呤類藥物和嘧啶類藥物鑒別、檢查、含量測定的原理熟悉：核酸的理化性質(zhì)；反義寡核苷酸藥物鑒別、檢查、含量測定的原理基本要求掌握：核酸的結(jié)構(gòu)和分類；嘌呤類藥物和嘧啶類藥物鑒別、第一節(jié)概述結(jié)構(gòu)和分類理化性質(zhì)第一節(jié)概述結(jié)構(gòu)和分類什么是核酸？1869年核酸最早分離自外科繃帶膿細胞的細胞核，當(dāng)時發(fā)現(xiàn)這種物質(zhì)含磷量之高超過當(dāng)時發(fā)現(xiàn)的任何一種有機物，并且含有很強的酸性，故得名核酸。1909年其組成被研究清楚，1944年生物功能初步澄清，在X射線衍射技術(shù)支持下1953年結(jié)構(gòu)澄清。核酸是脫氧核糖核酸（DNA）與核糖核酸（RNA）的通稱。什么是核酸？1869年核酸最早分離自外科繃帶膿細胞的細胞核，核酸核苷酸磷酸核苷戊糖堿基水解一、結(jié)構(gòu)和分類核酸核苷酸磷酸核苷戊糖堿基水一、結(jié)構(gòu)和分類核酸代表戊糖，對DNA而言為脫氧核糖，對RNA而言為核糖；

代表堿基

代表磷酸基核苷酸核酸代表戊糖，對DNA而言為脫氧核糖，對RNA而言為核核苷酸磷酸堿基戊糖核苷酸磷酸堿基戊糖H2OH2O堿基磷酸戊糖糖苷鍵酯鍵H2OH2O堿基磷酸戊糖糖苷鍵酯鍵核苷酸堿基連接（糖苷鍵）酯鍵（對DNA為H）1`2`3`4`5`核苷酸堿基連接（糖苷鍵）酯鍵（對DNA為H）1`2`3`4`戊糖核糖(inRNA)2｀－脫氧核糖(inDNA)戊糖核糖2｀－脫氧核糖核苷核苷DNA&RNADNA&RNA堿基RNADNA

嘧啶環(huán)

嘌呤環(huán)尿嘧啶U胸腺嘧啶T胞嘧啶C鳥嘌呤G腺嘌呤A堿基RNADNA嘧啶環(huán)嘌呤環(huán)尿嘧啶U胸腺嘧啶T胞嘧啶類別DNARNA基本單位脫氧核糖核苷酸核糖核苷酸核苷酸腺嘌呤脫氧核苷酸

鳥嘌呤脫氧核苷酸

胞嘧啶脫氧核苷酸

胸腺嘧啶脫氧核苷酸腺嘌呤核苷酸

鳥嘌呤核苷酸

胞嘧啶核苷酸

尿嘧啶核苷酸堿基腺嘌呤（A)

鳥嘌呤（G)

胞嘧啶（C)

胸腺嘧啶（T)腺嘌呤（A)

鳥嘌呤（G)

胞嘧啶（C)

尿嘧啶（U）五碳糖脫氧核糖核糖酸磷酸磷酸類別DNARNA基本單位脫氧核糖核苷酸核糖核苷酸核苷酸腺嘌呤稀有堿基嘌呤——次黃嘌呤、1-甲基次黃嘌呤、N2、N2-二甲基鳥嘌呤。嘧啶——5-甲基胞嘧啶、5-羥甲基胞嘧啶、二氫尿嘧啶、4-巰尿嘧啶都是基本堿基的化學(xué)修飾型。稀有堿基嘌呤——次黃嘌呤、1-甲基次黃嘌呤、N2、N2-二甲鳥嘌呤次黃嘌呤1-甲基次黃嘌呤鳥嘌呤次黃嘌呤1-甲基次黃嘌呤二、理化性質(zhì)（一）兩性性質(zhì)：磷酸基；堿基（通常：酸性）

pH影響堿基間氫鍵穩(wěn)定：DNApH4.0~11.0（二）水解性：微溶于水，不溶于一般的有機溶劑（三）UV：λmax=260nm蛋白質(zhì)280nmA260/A280純DNA＞1.8

純RNA應(yīng)達到2.0

混有雜蛋白比值降低二、理化性質(zhì)（一）兩性性質(zhì)：磷酸基；堿基（通常：酸性）第九章核酸類藥物的分析課件（四）變性和復(fù)性1.變性：在某些理化因素影響下，DNA雙螺旋區(qū)的氫鍵斷裂和堿基堆積力破壞，有規(guī)律的雙螺旋結(jié)構(gòu)變成單鏈無規(guī)律的“線團”，但不發(fā)生共價鍵的斷裂，這過程稱之。變性原因：高溫（一般＞75℃）、強氧化劑、強酸、堿、尿素等；機理：雙鏈間氫鍵斷開，成為兩條單鏈（DNA雙螺旋二級結(jié)構(gòu)的破壞，生物活性的喪失）特征性Tm---DNA的變性溫度82~95℃（四）變性和復(fù)性第九章核酸類藥物的分析課件2.復(fù)性一定條件下，去除變性因素后，核酸恢復(fù)二級結(jié)構(gòu)及生物活性的現(xiàn)象；通常使用熱復(fù)性。（退火）高溫變性緩慢冷卻熱復(fù)性急速冷卻復(fù)性失敗熱復(fù)性在基因測序中被廣泛應(yīng)用2.復(fù)性高溫變性緩慢冷卻熱復(fù)性急速冷卻復(fù)性失敗熱復(fù)性在基因測第九章核酸類藥物的分析課件（五）顏色反應(yīng)苔黑酚反應(yīng):RNA中核糖+濃HCl（濃H2SO4）→糠醛+苔黑酚→深綠色化合物（λmax=670nm）二苯胺反應(yīng):DNA中脫氧核糖+濃H2SO4→5-羥基-4-羰基戊醛+二苯胺→藍色化合物（λmax=595nm）水解后磷酸：磷酸+鉬酸→磷鉬酸+還原劑（維生素C、氯化亞錫等）→鉬藍（λmax=660nm）Fe3+脫水（五）顏色反應(yīng)Fe3+脫水第二節(jié)嘌呤類核苷酸藥物分析嘌呤堿（腺嘌呤、鳥嘌呤）戊糖磷酸第二節(jié)嘌呤類核苷酸藥物分析嘌呤堿（腺嘌呤、鳥嘌呤）一、鑒別戊糖鑒別嘌呤鑒別磷酸鑒別特征吸收光譜熔點測定一、鑒別戊糖鑒別（一）戊糖的鑒別苔黑酚反應(yīng)（地衣酚反應(yīng)）---凡核糖均有此反應(yīng)試劑：濃鹽酸，苔黑酚試劑，三氯化鐵（催化劑）現(xiàn)象：鮮綠色二苯胺反應(yīng)DNA試劑：濃硫酸，二苯胺現(xiàn)象：藍色與間苯三酚反應(yīng)（核苷酸中的戊糖）現(xiàn)象：玫瑰紅色（一）戊糖的鑒別苔黑酚反應(yīng)（地衣酚反應(yīng)）---凡核糖均有此反（二）嘌呤的鑒別+氨制硝酸銀→白色↓→紅棕色（遇光）（嘌呤堿基的特殊鑒別反應(yīng)）（二）嘌呤的鑒別+氨制硝酸銀→白色↓→紅棕色（遇光）（三）磷酸的鑒別有機磷→無機磷+鉬酸→磷鉬酸+還原劑→鉬藍（三）磷酸的鑒別有機磷→無機磷+鉬酸→磷鉬酸+還原劑→鉬藍（四）特征吸收光譜UV：嘌呤環(huán)，嘧啶環(huán)IR（四）特征吸收光譜UV：嘌呤環(huán)，嘧啶環(huán)（五）熔點測定（五）熔點測定二、檢查一般檢查酸度，水分，無機鹽，有機物，溶液的顏色和澄清度蛋白質(zhì)檢查磺基水楊酸溶液有關(guān)物質(zhì)紙色譜，薄層色譜，電泳，熒光檢查二、檢查一般檢查三、含量測定紫外-可見分光光度法現(xiàn)在國家已經(jīng)批準(zhǔn)的嘌呤類核苷酸藥物一般都用此法測定含量HPLC三、含量測定紫外-可見分光光度法四、實例分析肌苷ATP四、實例分析肌苷（一）肌苷的質(zhì)量分析1.結(jié)構(gòu)：C10H12N4O5268.23本品為9β-D-核糖次黃嘌呤。按干燥品計算，含C10H12N4O5應(yīng)為98.0～102.0％。2.性狀：本品為白色結(jié)晶性粉末；無臭，味微苦。本品在水中略溶，在氯仿或乙醇中不溶，在稀鹽酸和氫氧化鈉溶液中易溶。

（一）肌苷的質(zhì)量分析1.結(jié)構(gòu)：C10H12N4O523.鑒別取0.01％供試品溶液適量,加等體積的3,5-二羥基甲苯溶液(取3，5-二羥基甲苯與三氯化鐵各0.1g，加鹽酸使成100ml)，混勻，在水浴中加熱約10分鐘，即顯綠色。---苔黑酚反應(yīng)取本品1％水溶液，加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，即產(chǎn)生白色膠狀沉淀。---嘌呤堿基

取含量測定項下的溶液,照分光光度法測定，在248nm的波長處有最大吸收，在222nm的波長處有最小吸收。色譜圖IR

3.鑒別4.檢查

溶液的澄清度與顏色（溶液的透光率）取本品0.5g，加水50ml使溶解，照分光光度法在430nm的波長處測定透光率，不得低于98.0％(供注射用)。干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，減失重量不得過1.0熾灼殘渣不得過0.1％(供注射用),或不得過0.2％(供口服用重金屬取本品1.0g，依法檢查含重金屬不得過百萬分之十。次黃嘌呤

①精密稱取本品0.5g，置50ml量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，照紙色譜法試驗，吸取上述溶10μl，點于3×25cm色譜濾紙上，照上行法，以水為展開劑，展開約20cm處，取出晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，不得出現(xiàn)雜質(zhì)斑點。

②HPLC4.檢查5.含量測定

1）UV法：取本品，精密稱定，加水制成每1ml中約含10μg的溶液，照分光光度法在248nm的波長處測定吸收度，按C10H12N4O5的吸收系數(shù)（E1％1cm）為460計算。2）HPLC5.含量測定6.作用與用途輔酶類藥。有改善機體代謝作用。用于各種類型肝臟疾患、心臟疾患、白細胞減少癥、血小板減少癥、中心視網(wǎng)膜炎、視神經(jīng)萎縮等。7.用法與用量口服，一次0.2～0.6g一日0.6～1.8g8.貯藏遮光，密閉保存。9.制劑(1)肌苷口服溶液(2)肌苷片(3)肌苷注射液(4)肌苷膠囊(5)肌苷顆粒劑

6.作用與用途輔酶類藥。有改善機體代謝作用。用于各種類型肝（二）三磷酸腺苷二鈉（ATP）的質(zhì)量分析

拼音名：Sanlinsuanxiangan‘erna

英文名：AdenosineDisodiumTriphosphate

C10H14N5Na2O13P3551.151.結(jié)構(gòu)：本品為腺嘌呤核苷-5’-三磷酸酯二鈉鹽三水化合物。按干燥品計算，含C10H14N5Na2O13P3不得少于90.0％。

（二）三磷酸腺苷二鈉（ATP）的質(zhì)量分析拼音名：Sanl2.性狀：本品為白色或類白色粉末或結(jié)晶塊狀物；無臭，味咸；有引濕性。本品在水中易溶，在乙醇、氯仿或乙醚中幾乎不溶。2.性狀：本品為白色或類白色粉末或結(jié)晶塊狀物；無臭，味咸；有3.鑒別（1）取本品20mg,加稀硝酸2ml溶解后，加鉬酸銨試液1ml，加熱，放冷，即析出黃色沉淀。---磷酸鹽（2）取本品約10mg，加鹽酸溶液(1→2)5ml溶解后，加間苯三酚10mg，混勻，置水浴中加熱約1分鐘，即顯玫瑰紅色。--戊糖（3）苔黑酚反應(yīng)—戊糖（3）UV（4）IR（5）本品的水溶液顯鈉鹽的鑒別反應(yīng)3.鑒別4.檢查酸度溶液的澄清度與顏色蛋白質(zhì)取本品20mg，加水2ml溶解后，滴加30％磺基水楊酸溶液0.5ml，不得發(fā)生渾濁。有關(guān)物質(zhì)水分氯化物鐵鹽重金屬熱原

4.檢查5.含量測定

（1）總核苷酸：UV（2）三磷酸腺苷二鈉的重量比：HPLC（3）色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗（4）測定法5.含量測定6.作用與用途

輔酶類藥。用于進行性肌萎縮、腦溢血后遺癥、心功能不全、心肌疾患及肝炎等。7.注意

緩慢注射。心肌硬塞和腦溢血在發(fā)病期患者慎用。8.貯藏

有陰涼干燥處密封保存。有效期１年。9.制劑

(1)三磷酸腺苷二鈉注射液(2)注射用三磷酸腺苷二鈉

6.作用與用途輔酶類藥。用于進行性肌萎縮、腦溢血后遺癥、心第三節(jié)嘧啶類核苷酸藥物的分析第三節(jié)嘧啶類核苷酸藥物的分析一、鑒別

該類藥物的化學(xué)組成和性質(zhì)本與嘌呤類相似，唯一區(qū)別在于堿基的不同。一元堿一、鑒別該類藥物的化學(xué)組成和性質(zhì)本與嘌呤類二、檢查常規(guī)檢查其他核苷酸：TLC二、檢查常規(guī)檢查三、含量測定UV法電位滴定法三、含量測定UV法四、實例分析---氟尿嘧啶1.通用名:氟尿嘧啶

化學(xué)名:5-氟-2,4(1H,3H)-嘧啶二酮分子式:C4H3FN2O2

分子量:130.08熔點:278-286℃

水溶性:12.2g/L20℃含氟尿嘧啶（C4H3FN202）應(yīng)為標(biāo)示量的93.0-107.0%四、實例分析---氟尿嘧啶1.通用名:氟尿嘧啶

2.性狀：白色或類白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。在水中略溶，乙醇中微溶，三氯甲烷中幾乎不溶，在稀鹽酸或氫氧化鈉溶液中溶解。2.性狀：白色或類白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末。3.鑒別（1）+溴，溴褪色；+氫氧化鋇，紫色↓（2）三氧化鉻的飽和硫酸溶液，均勻涂于管壁本品，不能再均勻涂于管壁（3）λmax=265nmλmin=232nm（4）IR3.鑒別4.檢查：氯化物硫酸鹽含氟量干燥失重重金屬4.檢查：5.含量測定：取本品適量，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1mL中約含10μg的溶液，照紫外-可見分光光度法，在265nm波長處，測定吸光度，按C4H3FN2O2的吸收系數(shù)（E1%1cm）為552計算，即得。5.含量測定：取本品適量，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1第九章核酸類藥物的分析課件用途：本品為嘧啶類的氟化物，屬于抗代謝抗腫瘤藥，能抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，阻斷脫氧嘧啶核苷酸轉(zhuǎn)換成胸腺嘧啶核苷核，干擾DNA合成。對RNA的合成也有一定的抑制作用。

用途：本品為嘧啶類的氟化物，屬于抗代不良反應(yīng)：骨髓抑制：主要為白細胞減少、血小板下降。食欲不振、惡心、嘔吐、口腔炎、胃炎、腹痛及腹瀉等胃腸道反應(yīng)。注射局部有疼痛、靜脈炎或動脈內(nèi)膜炎。其他：常有脫發(fā)、紅斑性皮炎、皮膚色素沉著手足綜合征及暫時性小腦運動失調(diào)，偶有影響心臟功能不良反應(yīng)：注意事項：用藥期間應(yīng)嚴格檢查血象。避光置陰暗處保存，溫度不應(yīng)低于10℃，亦不宜超過35℃。治療期涂藥范圍有炎癥，停藥后炎癥消退。本品可引起嚴重的皮膚刺激，尤其在日光下。該藥還可經(jīng)皮損內(nèi)注射給藥用于角化棘皮病、疣和汗孔角化病。其主要副作用為注射期間有的燒感，繼之有局部紅斑、水腫甚至潰瘍。注意事項：第四節(jié)反義寡核苷酸藥物分析1.定義2.化學(xué)修飾：硫代修飾3.序列分析：化學(xué)測序法；質(zhì)譜法4.雜交性質(zhì)5.理化特性分析（鑒別：HPLC，CE）（特殊雜質(zhì)：失敗序列；硫代不充分）6.生物活性測定第四節(jié)反義寡核苷酸藥物分析1.定義樹立質(zhì)量法制觀念、提高全員質(zhì)量意識。1月-23