第5章-植物器官的培養(yǎng)課件

第五章植物器官的培養(yǎng)2023/1/31第五章2022/12/291一、器官培養(yǎng)的種類包括離體的根、莖、葉、花器和果實的培養(yǎng)。以器官作為外植體進行離體培養(yǎng)，是植物組織培養(yǎng)中最主要的一個方面，進行的植物種類最多，應(yīng)用的范圍也最廣。第一節(jié)概述2023/1/32一、器官培養(yǎng)的種類第一節(jié)概述2022/12/292

二、器官培養(yǎng)的意義：

1.器官培養(yǎng)是研究器官生長、營養(yǎng)代謝、生理生化、組織分化和形態(tài)建成的最好材料和方法；2.器官培養(yǎng)在生產(chǎn)實踐上具有重要的應(yīng)用價值.

2023/1/33二、器官培養(yǎng)的意義：2022/12/293

如利用莖、葉和花器培養(yǎng)建立的試管苗，可在短期內(nèi)提高繁殖速率，進行名貴品種的快速繁殖；利用莖尖培養(yǎng)可得到脫毒試管苗，解決品種的退化問題，提高產(chǎn)量和質(zhì)量；將植物器官作誘變處理，用器官培養(yǎng)可得到突變株，進行細胞突變育種。2023/1/34如利用莖、葉和花器培養(yǎng)建立的試管苗，可在短期內(nèi)提高繁植物器官培養(yǎng)營養(yǎng)器官培養(yǎng)生殖器官培養(yǎng)根培養(yǎng)莖培養(yǎng)（包括莖尖、莖段）葉培養(yǎng)（包括葉原基、葉柄、葉鞘、葉片、子葉）花培養(yǎng)（包括花托、花瓣、花絲、花柄、子房、花藥）種子培養(yǎng)（包括成熟與未成熟）胚胎培養(yǎng)（包括幼胚、成熟胚、胚珠、子房、胚乳培養(yǎng)）2023/1/35植物器官培養(yǎng)營養(yǎng)器生殖器根培養(yǎng)花培養(yǎng)（包括花托、第二節(jié)營養(yǎng)器官的培養(yǎng)一、離體根的培養(yǎng)二、莖尖的培養(yǎng)三、莖段的培養(yǎng)四、離體葉的培養(yǎng)2023/1/36第二節(jié)營養(yǎng)器官的培養(yǎng)一、離體根的培養(yǎng)2022/12/一、離體根的培養(yǎng)

（一）意義：①生理代謝研究的優(yōu)良實驗體系②研究器官分化形態(tài)建成的良好體系③建立快速生長的根無性系④進行誘變育種2023/1/37一、離體根的培養(yǎng)2022/12/2971.培養(yǎng)基選擇

White培養(yǎng)基；2/3或1/2MS和B5培養(yǎng)基注：離體根生長要求提供全部必需元素，蔗糖、硝態(tài)氮效果好，加入B1、B6最重要，生長素對離體根影響不一致。培養(yǎng)溫度25－27℃，暗光培養(yǎng)。（二）培養(yǎng)方法2023/1/381.培養(yǎng)基選擇（二）培養(yǎng)方法2022/12/2982.無性繁殖系的建立

種子消毒→→接種→→待根伸長后從根尖一端切取長1.2cm的根尖→→接種于培養(yǎng)基→→發(fā)育出側(cè)根→→待側(cè)根生長約1周后切取側(cè)根的根尖進行擴大培養(yǎng)→→又迅速生長并長出側(cè)根→→切下進行培養(yǎng)，如此反復(fù)→→得到從單個根尖衍生而來的離體根的無性系。

3.培養(yǎng)條件

暗光和溫度25-27℃。2023/1/392.無性繁殖系的建立2022/12/299根無性繁殖系的建立根無性繁殖系無菌種子

1.2cm接后1周側(cè)根反復(fù)轉(zhuǎn)接2023/1/310根無性繁殖系的建立根無性繁殖系無菌種子1.2cm接后1周側(cè)

4.植株再生培養(yǎng)

根段的離體培養(yǎng)也可以用來再生植株。第一步誘導(dǎo)形成愈傷組織。第二步在再分化培養(yǎng)基上誘導(dǎo)芽的分化、在愈傷組織上分化成小植株。

離體根愈傷組織分化芽再生植株再分化培養(yǎng)基脫分化培養(yǎng)基2023/1/3114.植株再生培養(yǎng)離體根愈傷組織分化芽再生植株再分化培二、莖尖的培養(yǎng)（一）莖尖培養(yǎng)概念及類型（二）莖尖培養(yǎng)方法及步驟2023/1/312二、莖尖的培養(yǎng)（一）莖尖培養(yǎng)概念及類型2022/12/291

(一)莖尖培養(yǎng)概念及類型

1.莖尖培養(yǎng)：切取莖的先端部分或莖尖分生組織部分，進行無菌培養(yǎng)。莖尖培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)目的和取材大小可分為：

2.微莖尖培養(yǎng):帶有1-2個葉原基的生長錐,其長度不超過0.5mm。

2023/1/313(一)莖尖培養(yǎng)概念及類型2022/12/29133.普通莖尖培養(yǎng)：較大的莖尖(如幾mm到幾十mm)、芽尖及側(cè)芽。這里主要講普通莖尖培養(yǎng)。這種培養(yǎng)技術(shù)簡單，操作方便，莖尖容易成活，成苗所需時間短。4.莖尖培養(yǎng)的意義：普通莖尖培養(yǎng)技術(shù)簡單，操作方便，易成活，成苗時間短，加快繁殖。微莖尖培養(yǎng)可獲得脫毒苗；2023/1/3143.普通莖尖培養(yǎng)：較大的莖尖(如幾mm到幾十mm)、芽尖及側(cè)（二）莖尖培養(yǎng)方法及步驟取材材料處理及消毒培養(yǎng)接種馴化移栽2023/1/315（二）莖尖培養(yǎng)方法及步驟取材材料處理及消毒培養(yǎng)接①直接取材：在生長旺盛、枝條健壯、無病的母株上選生長不久、雜菌污染少的頂梢（1－2cm）（取前可噴殺菌藥，可頂芽或側(cè)芽）。②從試管苗獲取。1、取材取1-2㎝頂梢2023/1/316①直接取材：在生長旺盛、枝條健壯、無病的母株上選生長不久、雜2、材料處理及消毒

將采集到的莖尖切成0.5-1.0cm長→→去葉（休眠芽預(yù)先剝除鱗片）→→流水沖洗2-4h→→75％的酒精中處理30s→→稀釋20倍的次氯酸鈉中浸5-8min(取自老枝條上的可適當(dāng)延長時間）

→→用無菌水沖洗數(shù)次，準備接種。

2023/1/3172、材料處理及消毒將采集到的莖尖切成0.5-1.0c

3、接種

接種前再剝掉一些葉片，使莖尖0.5cm→→接種要求：隨切隨接，動作迅速。亦可將切下莖尖材料在1－5%VC液中浸一下。2023/1/3183、接種2022/12/29184、培養(yǎng)的方法和程序（1）培養(yǎng)基①基本培養(yǎng)基MS、White、B5、

Heller培養(yǎng)基。

②蔗糖作碳源效果好，濃度2－3%。③激素（2，4-D，IAA，NAA）和有機添加物有明顯影響。但激素濃度以0.1mg/L為宜，不要太高。2023/1/3194、培養(yǎng)的方法和程序2022/12/2919生長太慢：莖尖不增大→→變綠→→細胞逐漸老化→→休眠原因:生長素濃度太低；溫度過低或過高；生長太快：莖尖迅速增大→→愈傷組織→→喪失成苗能力原因:生長素濃度過高；光照太弱或溫度太高；生長正常：莖尖基部稍增大并形成少量愈傷組織，莖尖顏色逐漸變綠，并伸長，葉原基發(fā)育成可見的小葉，進而形成小苗。莖尖生長狀態(tài)2023/1/320生長太慢：莖尖不增大→→變綠→→細胞逐漸老化→→休眠（2）初代培養(yǎng)條件

每天光照16h，光強度1500-30001x，

溫度25±2℃

2023/1/321（2）初代培養(yǎng)條件2022/12/2921（3）繼代培養(yǎng)

莖尖長成的新梢→→切成小段→→增殖培養(yǎng)基中→→1個月左右→→新梢又可切成小段→→再轉(zhuǎn)入新培養(yǎng)基→→建立和維持了莖尖無性系。（即微型扦插）

繼代培養(yǎng)可用MS培養(yǎng)基。2023/1/322（3）繼代培養(yǎng)2022/12/2922

（4）誘導(dǎo)生根

采用1／2MS培養(yǎng)基

加入一定的生長素類調(diào)節(jié)物質(zhì)，如NAA、IBA等。新梢基部浸入50或100mg/l的IBA溶液處理4-8h，然后轉(zhuǎn)移到無激素的生根培養(yǎng)基中。2023/1/323（4）誘導(dǎo)生根2022/12/2923(5)馴化移栽入土

在生根培養(yǎng)1個月左右→→生長健壯而發(fā)達的根系→→煉苗→→移栽→→管理（溫、光、濕、氣）2023/1/324(5)馴化移栽入土2022/12/2924

（一）定義：指不帶芽和帶一個以上定芽或不定芽（包括塊莖、球莖在內(nèi)）的幼莖切段的無菌培養(yǎng)。

三、莖段培養(yǎng)2023/1/325（一）定義：指不帶芽和帶一個以上定芽或不定芽（包括塊莖（二）意義：

快速繁殖；探討莖細胞的生理特點進行育種上的篩選突變體的過程2023/1/326（二）意義：2022/12/2926（三）培養(yǎng)步驟1.材料的選擇和處理

（1）取材：當(dāng)年生嫩枝→→去葉→→剪成5cm的小段→→自來水沖洗1-3h

注：生長期取芽，外植體取枝條頂部或中部莖段。2023/1/327（三）培養(yǎng)步驟注：生長期取芽，外植體取枝條頂部或中部莖段。（2）消毒與接種：

將材料切割成2-3cm長短→→無菌條件下用75％酒精滅菌30-60s

→無菌水沖洗→→0.1％升汞浸泡3-8min（飽和漂白粉浸泡10-20min）→→無菌水沖洗數(shù)次→切割成0.5cm→以備接種。2023/1/328（2）消毒與接種：2022/12/29282.培養(yǎng)

(1)培養(yǎng)基的選擇：MS+3％蔗糖+0.7％瓊脂+激素（促進腋芽增殖6-BA﹥Kt和Ze）(2)培養(yǎng)條件：保持25℃左右，給予充分的光照和光期2023/1/3292.培養(yǎng)2022/12/2929(3)繼代培養(yǎng)：

途徑一：促進腋芽的快速生長優(yōu)點：不會產(chǎn)生變異，方法簡便，每年從一個芽可增殖10萬株以上途徑二：誘導(dǎo)形成大量不定芽。優(yōu)點：產(chǎn)生變異。繼代增殖過程注意選用培養(yǎng)基和生長調(diào)節(jié)劑2023/1/330(3)繼代培養(yǎng)：2022/12/2930（4）生根培養(yǎng)

目的：使再生的大量試管苗形成根系，獲得完整的植株。培養(yǎng)基選擇：1/2，1/3或1/4的MS，B5培養(yǎng)基或White培養(yǎng)基附加生長素（濃度NAA0.1-1.0mg/L，IBA和IAA可稍高）而降低或除去細胞分裂素。最好添加0.3％活性炭，以促進生根

2023/1/331（4）生根培養(yǎng)2022/12/2931

3.移植

移植是一個由異養(yǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)樽责B(yǎng)的過程。試管苗→→煉苗→→取苗→→洗凈瓊脂→→小心移栽→→苗期管理（初期濕度要大，基質(zhì)通氣濕潤，保濕保溫）2023/1/3323.移植2022/12/2932

（一）定義：

離體葉培養(yǎng)指包括葉原基、葉柄、葉鞘、葉片、子葉在內(nèi)的葉組織的無菌培養(yǎng)。它大多經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再由愈傷組織分化出莖和根。其中葉片培養(yǎng)是一個典型的代表。

四、離體葉的培養(yǎng)2023/1/333（一）定義：四、離體葉的培養(yǎng)2022/12/2933（二）意義：

1.是繁殖稀有名貴品種的有效手段；

2.可用于研究形態(tài)建成、光合作用、葉綠素形成等理論問題。2023/1/334（二）意義：2022/12/2934（三）葉片的離體培養(yǎng)方法

發(fā)育方式：葉片培養(yǎng)再生成完整植株有兩種方式：①是直接誘導(dǎo)形成芽和根→→完整植株；

②是先誘導(dǎo)形成愈傷組織，再經(jīng)愈傷組織分化形成芽和根→→完整植株。其中，以第二種方式最為常見。2023/1/335（三）葉片的離體培養(yǎng)方法2022/12/2935葉片離體培養(yǎng)發(fā)育方式（成苗途徑）葉原基葉鞘葉片子葉葉柄愈傷組織莖和根試管苗

不定芽2023/1/336葉片離體培養(yǎng)發(fā)育方式（成苗途徑）葉原基葉鞘葉片子葉葉

1.材料選擇及滅菌

取植物的幼嫩葉片，切割成適當(dāng)大?。?—3cm），在流水中沖洗干凈。再用70％酒精浸泡約10s→→飽和漂白粉液中浸3-15min，或在0.1％升汞中浸3-5min→→無菌水沖洗數(shù)次→→無菌的干濾紙上吸干水分→→接種。注：細嫩與成熟葉片消毒時間不同2023/1/3371.材料選擇及滅菌2022/12/29372.接種

外植體大?。?.5cm2薄片（葉柄、子葉）上表皮朝上接種培養(yǎng)基。最好帶葉脈，注意極性2023/1/3382.接種2022/12/29383.培養(yǎng)

（1）培養(yǎng)基：

MS、B5、White、N6；蔗糖3%；2.4－D利于愈傷組織形成，NAA抑制芽形成，利于根發(fā)生，KT、6-BA利于芽形成。愈傷組織誘導(dǎo)：BA1-3mg/L,NAA0.25-1mg/L；

分化培養(yǎng)：CTK2mg/L；

生根培養(yǎng)：NAA0.5－1.0mg/L2023/1/3393.培養(yǎng)2022/12/2939(2)培養(yǎng)過程：

培養(yǎng)約2周至4周→→形成愈傷組織→→再分化培養(yǎng)基上（附加6-BA2mg／L）進行分化培養(yǎng)→→約10d左右，愈傷組織開始轉(zhuǎn)綠出現(xiàn)綠色芽點→→發(fā)育成無根苗→→生根培養(yǎng)基（附加NAA0.5-lmg/L）→→發(fā)育形成完整植株。2023/1/340(2)培養(yǎng)過程：2022/12/2940(3)培養(yǎng)條件：

溫度：25±2℃

光照時間：10-12h，光照強度：1500-3000Lx。2023/1/341(3)培養(yǎng)條件：2022/12/2941

葉的培養(yǎng)比胚，莖尖和莖段培養(yǎng)難度大。首先要選用易培養(yǎng)成功的葉組織，如幼葉比成熟葉易培養(yǎng)，子葉比葉片易培養(yǎng)。其次要添加適當(dāng)?shù)纳L素和細胞分裂素，保證利于葉組織的脫分化和再分化。2023/1/342葉的培養(yǎng)比胚，莖尖和莖段培養(yǎng)難度大。2022/12/29第二節(jié)生殖器官的培養(yǎng)一、花器官的培養(yǎng)二、種子的培養(yǎng)三、胚胎的培養(yǎng)四、胚珠培養(yǎng)五、子房培養(yǎng)六、胚乳培養(yǎng)2023/1/343第二節(jié)生殖器官的培養(yǎng)一、花器官的培養(yǎng)2022/12/294一、花器官的培養(yǎng)2023/1/344一、花器官的培養(yǎng)2022/12/29441.定義：花器官培養(yǎng)指整個花器及其組成部分如花托、花瓣、花絲、花柄、子房、花藥等的無菌培養(yǎng)。

一、花器官的培養(yǎng)（花蕾）2023/1/3451.定義：一、花器官的培養(yǎng)（花蕾）2022/12/292、意義：

通過離體花芽培養(yǎng)可了解整體植物和內(nèi)源激素在花芽性別決定中所起的作用可以了解花器各部分對果實和種子發(fā)育的作用內(nèi)、外源激素在果實種子發(fā)育過程中的調(diào)控作用生產(chǎn)上也可用于珍貴品種的擴大繁殖。2023/1/3462、意義：2022/12/2946

3.培養(yǎng)方法

(1)取材、消毒

從健壯植株上取未開放的花蕾→75％酒精浸潤約30s→飽和漂白粉浸泡10-15min（或0.1％升汞中浸3-5min）→無菌水沖洗數(shù)次→接種。

2023/1/3473.培養(yǎng)方法2022/12/2947(2)接種花蕾培養(yǎng)：花梗插入培養(yǎng)基中。部分花器培養(yǎng)：切片接入培養(yǎng)基中(3)培養(yǎng)培養(yǎng)基：MS、B5。附加生長素（NAA0.1mg/L）和細胞分裂素（6-BA2mg/L），誘導(dǎo)形成愈傷組織或胚狀體，再分化培養(yǎng)成植株2023/1/348(2)接種花蕾培養(yǎng)：花梗插入培養(yǎng)基中。(3)培養(yǎng)2022/1培養(yǎng)條件：溫度：25±2℃

光照時間：10-12h，光照強度：1500-3000Lx培養(yǎng)約1周，形成少量愈傷組織。再經(jīng)1個月就分化出綠色芽點，再切割轉(zhuǎn)接，可形成大量無根苗，經(jīng)長根成植株，用于繁殖。2023/1/349培養(yǎng)條件：2022/12/2949二、種子培養(yǎng)2023/1/350二、種子培養(yǎng)2022/12/2950定義：

種子培養(yǎng)是指受精后發(fā)育完全的成熟種子和發(fā)育不完全的未成熟種子的無菌培養(yǎng)。2023/1/351定義：2022/12/29512.意義：可以打破種子休眠，促進萌發(fā)；解決遠緣雜種敗育性，產(chǎn)生后代；快速繁殖苗木優(yōu)點：植株分化容易，無菌操作方便2023/1/3522.意義：2022/12/2952

3.培養(yǎng)技術(shù)

(1)種子滅菌

種皮厚或不飽滿的種子，宜用0.1％升汞消毒10-20min。幼嫩的或發(fā)育不全的種子，宜用飽和漂白粉消毒15-30min。若種子上有絨毛或蠟質(zhì)，應(yīng)先用95％酒精或吐溫40處理，提高消毒效果。對殼厚難萌發(fā)的種子，可去殼培養(yǎng)。2023/1/3533.培養(yǎng)技術(shù)2022/12/2953(2)培養(yǎng)基：A.促種子萌發(fā)用MS培養(yǎng)基，加或不加激素，誘導(dǎo)愈傷組織則可加入6-BA或2,4-D。B.無胚乳種子應(yīng)適當(dāng)加生長素。C.一般糖濃度為1-3%。D.打破休眠可加GA，或在接種前浸種處理。2023/1/354(2)培養(yǎng)基：2022/12/2954(3)接種培養(yǎng)

把種子按每瓶3-5粒放人培養(yǎng)瓶中，均勻排列

培養(yǎng)條件：溫度20-28℃光強1000-20001x，每天光照10-12h2023/1/355(3)接種培養(yǎng)2022/12/2955植物胚胎培養(yǎng)是胚及胚器官(如子房、胚珠)在離體無菌條件下，使胚發(fā)育成幼苗的技術(shù)。包括幼胚培養(yǎng)、成熟胚培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)、子房培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)等。三、胚胎的培養(yǎng)2023/1/356植物胚胎培養(yǎng)是胚及胚器官(如子房、胚珠)三、胚胎的培養(yǎng)202胚胎培養(yǎng)已有近百年的歷史：1904年的Haning最早成功地培養(yǎng)了蘿卜和辣椒的胚，并萌發(fā)形成小苗。30年代成功地把蘭科植物的胚培養(yǎng)成小植株。40年代在蘋果、桃、柑桔、梨、葡萄、山楂、馬鈴薯、甘藍與大白菜的種間雜種的胚胎培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)及子房與胚珠培養(yǎng)均取得了不同程度的進展2023/1/357胚胎培養(yǎng)已有近百年的歷史：2022/12/2957（一）胚胎培養(yǎng)的意義克服遠緣雜種的不育性；使胚發(fā)育不全的植物獲得后代縮短育種年限；研究與胚發(fā)育有關(guān)的內(nèi)外因素2023/1/358（一）胚胎培養(yǎng)的意義2022/12/2958（二）離體胚培養(yǎng)

離體胚培養(yǎng)包括胚胎發(fā)生過程中不同發(fā)育期的胚，一般可分為成熟胚和幼胚培養(yǎng)。2023/1/359（二）離體胚培養(yǎng)2022/12/29591.成熟胚培養(yǎng)

指子葉期后至發(fā)育完全的胚。培養(yǎng)較易成功，在含有大量無機元素和糖的基本培養(yǎng)基上，就能正常生長成幼苗。將成熟或未成熟種子用70％酒精進行幾秒鐘的表面消毒→無菌水沖洗3-4次→無菌條件下進行解剖，取出胚并接種在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上培養(yǎng)。2023/1/3601.成熟胚培養(yǎng)2022/12/2960

培養(yǎng)基：WhiteTukeyMS無機鹽+糖(1-2%)+生長輔助物質(zhì)(激素、AA、活性炭、維生素等)2023/1/361培養(yǎng)基：2022/12/2961幼胚是指子葉期以前的幼小胚。由于幼胚培養(yǎng)在遠緣雜交育種上有極大的利用價值，其研究應(yīng)用越來越深入廣泛。幼胚培養(yǎng)技術(shù)：心形期胚或更早期的胚（長度僅0.1～0.2mm）胚越小就越難培養(yǎng),幼胚培養(yǎng)成功的有大麥、薺菜、甘蔗、甜菜、胡蘿卜等

2.幼胚（未成熟胚）培養(yǎng)：2023/1/362幼胚是指子葉期以前的幼小胚。2.幼胚（未成熟胚）培養(yǎng)：2（1）未成熟胚胎的培養(yǎng)有三種不同的發(fā)育方式：a.繼續(xù)進行正常的胚胎發(fā)育，維持“胚性生長”；b.早熟萌發(fā)，即培養(yǎng)后迅速萌發(fā)成幼苗；c.胚在培養(yǎng)基中發(fā)生細胞增殖形成愈傷組織，并由此再分化形成多個胚狀體或芽原基。

2023/1/363（1）未成熟胚胎的培養(yǎng)有三種不同的發(fā)育方式：2022/12/（2）幼胚培養(yǎng)技術(shù)幼胚培養(yǎng)的操作方法與成熟胚培養(yǎng)方法基本相同。值得注意的是切取幼胚必須在高倍解剖鏡下進行，操作時要細心，盡量取出完整的胚。幼胚培養(yǎng)成功的關(guān)鍵，是提供幼胚所必需的營養(yǎng)和環(huán)境條件。2023/1/364（2）幼胚培養(yǎng)技術(shù)2022/12/2964

①培養(yǎng)基幼胚對培養(yǎng)基要求較高，常用的培養(yǎng)基有Tukey，Nitch、MS，B5培養(yǎng)基；通常存在的影響條件如下：2023/1/365①培養(yǎng)基通常存在的影響條件如下：2022/12/29②生長調(diào)節(jié)物質(zhì)

不同植物的胚培養(yǎng)需要的生長物質(zhì)不同。如IAA可明顯促進向日葵胚的生長；IAA，Kt的共同作用可促進薺菜幼胚的生長；一般認為IAA可使胚的長度增加；加入BA可提高胚的生存機會；2023/1/366②生長調(diào)節(jié)物質(zhì)2022/12/2966③天然提取物的作用

椰乳對胚培養(yǎng)有一定的促進作用（番茄胚在含有50%椰乳的培養(yǎng)基中可維持生長）一些瓜類的胚乳提取物能促進胚生長的能力。2023/1/367③天然提取物的作用2022/12/2967④溫光條件

對于大多數(shù)植物的胚來說，在25-30℃為宜早熟果樹如桃的種胚，必須經(jīng)過一定的低溫春化階段才能正常萌發(fā)生長，而馬鈴薯胚以20℃為好。光照可以促進某些植物胚的轉(zhuǎn)綠，利于胚芽生長，而黑暗則利于胚根生長。因此以光暗交替培養(yǎng)較為有利。2023/1/368④溫光條件2022/12/2968⑤其它條件

胚培養(yǎng)中除要求較高的蔗糖（4.5%）濃度、高滲透壓以外，還要求較高濃度的氨基酸及無機鹽。2023/1/369⑤其它條件2022/12/2969四、胚珠培養(yǎng)（一）定義：胚珠培養(yǎng)是將授粉的子房在無菌條件下解剖后，取胚珠置于培養(yǎng)基培養(yǎng)的過程。有時也把胚珠連同胎座一起取下來培養(yǎng)。2023/1/370四、胚珠培養(yǎng)（一）定義：2022/12/2970柱頭花柱子房花?；ㄍ谢ńM成2023/1/371柱頭花柱子房花?；ㄍ谢ńM成2022/12/2971胚囊卵細胞株心珠孔反足細胞珠被胚珠極核

株柄2023/1/372胚囊卵細胞株心珠孔反足細胞珠被胚珠極核株柄（二）意義：

胚珠培養(yǎng)可以解決象蘭科植物成熟胚較小不易培養(yǎng)的問題。另一方面在未受精的胚珠培養(yǎng)中，可誘發(fā)大孢子發(fā)育成單倍體，用于單倍體育種。

2023/1/373（二）意義：2022/12/2973（三）培養(yǎng)技術(shù)：

從花中取出子房→→70%酒精消毒30秒→→無菌水沖洗→→5%次氯酸鈉液中滅菌10分鐘→→無菌水沖洗數(shù)次→→在無菌條件下進行解剖→→取出胚珠→→放在培養(yǎng)基上→→培養(yǎng)基本培養(yǎng)基：用Nistch培養(yǎng)基MS、N6、B5等培養(yǎng)基也可采用關(guān)鍵：選擇胚的發(fā)育時期——球形胚期的胚珠較易培養(yǎng)成功2023/1/374（三）培養(yǎng)技術(shù)：2022/12/2974（四）發(fā)育方式：未受精胚珠受精胚珠愈傷組織發(fā)育成種子大孢子或卵分化為單倍體植株再生植株2023/1/375（四）發(fā)育方式：未受精胚珠受精胚珠愈傷組織發(fā)育成種子大孢子或五、子房培養(yǎng)1.取材：開花前1－5天摘下未授粉子房；或授粉后摘下子房。2.滅菌：

材料處理(禾谷類植物用70%酒精擦洗幼穗；雙子葉植物花蕾用飽和漂白粉滅菌15分)→→70%浸30秒→→無菌水沖洗→→0.1%升汞15－20分鐘→→無菌水沖洗→→無菌濾紙吸干。2023/1/376五、子房培養(yǎng)1.取材：2022/12/29763.接種：

無菌條件下剝開幼花，夾出子房并接種于培養(yǎng)基（MS、N6等）。4.培養(yǎng)：

溫度26℃,相對濕度50-60%，16h散射光。2023/1/3773.接種：2022/12/2977

胚乳是由兩個單倍的極核和一個單倍的精子結(jié)合而成的三倍體組織。由它可獲得無子結(jié)實的三倍體植株，進而可將它加倍成六倍體植株。六、胚乳的培養(yǎng)2023/1/378胚乳是由兩個單倍的極核和一個單倍的精子結(jié)合而

培養(yǎng)方法：

1.取材與接種

取授粉4-8d后的幼果→常規(guī)消毒→在無菌條件下切開果實→取出種子→分離出胚乳→接種

2.培養(yǎng)基:MS、White+2，4-D（NAA0.5-2.0）+6-BA0.1-1.0mg/L

2023/1/379培養(yǎng)方法：2022/12/29793.培養(yǎng)

在25-27℃和黑暗條件或散射光下培養(yǎng)約6-l0d胚乳開始膨大→形成愈傷組織→分化培養(yǎng)基上（附加6-BA

0.5-3.0mg/L及少量的NAA）培養(yǎng)→待愈傷組織長出芽后，切下不定芽→生根培養(yǎng)基→光下培養(yǎng)10-15d，切口處可長出白色的不定根。2023/1/3803.培養(yǎng)2022/12/2980復(fù)習(xí)思考題(1)為什么說植物器官培養(yǎng)是組織培養(yǎng)的一個最重要的方面?(2)植物的離體根培養(yǎng)有何意義？(3)普通莖尖培養(yǎng)時，怎樣取材和處理外植體?在莖尖培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)什么現(xiàn)象?應(yīng)怎樣解決?(4)莖段培養(yǎng)與莖尖培養(yǎng)有什么主要區(qū)別?(5)花器官培養(yǎng)通常指花的哪些部分培養(yǎng)?常用的基本培養(yǎng)基是什么?(6)植物胚胎培養(yǎng)分為哪些類型?各有何特點和要求?胚胎培養(yǎng)有何重要意義?

2023/1/381復(fù)習(xí)思考題2022/12/2981第5章-植物器官的培養(yǎng)課件82

第五章植物器官的培養(yǎng)2023/1/383第五章2022/12/291一、器官培養(yǎng)的種類包括離體的根、莖、葉、花器和果實的培養(yǎng)。以器官作為外植體進行離體培養(yǎng)，是植物組織培養(yǎng)中最主要的一個方面，進行的植物種類最多，應(yīng)用的范圍也最廣。第一節(jié)概述2023/1/384一、器官培養(yǎng)的種類第一節(jié)概述2022/12/292

二、器官培養(yǎng)的意義：

1.器官培養(yǎng)是研究器官生長、營養(yǎng)代謝、生理生化、組織分化和形態(tài)建成的最好材料和方法；2.器官培養(yǎng)在生產(chǎn)實踐上具有重要的應(yīng)用價值.

2023/1/385二、器官培養(yǎng)的意義：2022/12/293

如利用莖、葉和花器培養(yǎng)建立的試管苗，可在短期內(nèi)提高繁殖速率，進行名貴品種的快速繁殖；利用莖尖培養(yǎng)可得到脫毒試管苗，解決品種的退化問題，提高產(chǎn)量和質(zhì)量；將植物器官作誘變處理，用器官培養(yǎng)可得到突變株，進行細胞突變育種。2023/1/386如利用莖、葉和花器培養(yǎng)建立的試管苗，可在短期內(nèi)提高繁植物器官培養(yǎng)營養(yǎng)器官培養(yǎng)生殖器官培養(yǎng)根培養(yǎng)莖培養(yǎng)（包括莖尖、莖段）葉培養(yǎng)（包括葉原基、葉柄、葉鞘、葉片、子葉）花培養(yǎng)（包括花托、花瓣、花絲、花柄、子房、花藥）種子培養(yǎng)（包括成熟與未成熟）胚胎培養(yǎng)（包括幼胚、成熟胚、胚珠、子房、胚乳培養(yǎng)）2023/1/387植物器官培養(yǎng)營養(yǎng)器生殖器根培養(yǎng)花培養(yǎng)（包括花托、第二節(jié)營養(yǎng)器官的培養(yǎng)一、離體根的培養(yǎng)二、莖尖的培養(yǎng)三、莖段的培養(yǎng)四、離體葉的培養(yǎng)2023/1/388第二節(jié)營養(yǎng)器官的培養(yǎng)一、離體根的培養(yǎng)2022/12/一、離體根的培養(yǎng)

（一）意義：①生理代謝研究的優(yōu)良實驗體系②研究器官分化形態(tài)建成的良好體系③建立快速生長的根無性系④進行誘變育種2023/1/389一、離體根的培養(yǎng)2022/12/2971.培養(yǎng)基選擇

White培養(yǎng)基；2/3或1/2MS和B5培養(yǎng)基注：離體根生長要求提供全部必需元素，蔗糖、硝態(tài)氮效果好，加入B1、B6最重要，生長素對離體根影響不一致。培養(yǎng)溫度25－27℃，暗光培養(yǎng)。（二）培養(yǎng)方法2023/1/3901.培養(yǎng)基選擇（二）培養(yǎng)方法2022/12/2982.無性繁殖系的建立

種子消毒→→接種→→待根伸長后從根尖一端切取長1.2cm的根尖→→接種于培養(yǎng)基→→發(fā)育出側(cè)根→→待側(cè)根生長約1周后切取側(cè)根的根尖進行擴大培養(yǎng)→→又迅速生長并長出側(cè)根→→切下進行培養(yǎng)，如此反復(fù)→→得到從單個根尖衍生而來的離體根的無性系。

3.培養(yǎng)條件

暗光和溫度25-27℃。2023/1/3912.無性繁殖系的建立2022/12/299根無性繁殖系的建立根無性繁殖系無菌種子

1.2cm接后1周側(cè)根反復(fù)轉(zhuǎn)接2023/1/392根無性繁殖系的建立根無性繁殖系無菌種子1.2cm接后1周側(cè)

4.植株再生培養(yǎng)

根段的離體培養(yǎng)也可以用來再生植株。第一步誘導(dǎo)形成愈傷組織。第二步在再分化培養(yǎng)基上誘導(dǎo)芽的分化、在愈傷組織上分化成小植株。

離體根愈傷組織分化芽再生植株再分化培養(yǎng)基脫分化培養(yǎng)基2023/1/3934.植株再生培養(yǎng)離體根愈傷組織分化芽再生植株再分化培二、莖尖的培養(yǎng)（一）莖尖培養(yǎng)概念及類型（二）莖尖培養(yǎng)方法及步驟2023/1/394二、莖尖的培養(yǎng)（一）莖尖培養(yǎng)概念及類型2022/12/291

(一)莖尖培養(yǎng)概念及類型

1.莖尖培養(yǎng)：切取莖的先端部分或莖尖分生組織部分，進行無菌培養(yǎng)。莖尖培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)目的和取材大小可分為：

2.微莖尖培養(yǎng):帶有1-2個葉原基的生長錐,其長度不超過0.5mm。

2023/1/395(一)莖尖培養(yǎng)概念及類型2022/12/29133.普通莖尖培養(yǎng)：較大的莖尖(如幾mm到幾十mm)、芽尖及側(cè)芽。這里主要講普通莖尖培養(yǎng)。這種培養(yǎng)技術(shù)簡單，操作方便，莖尖容易成活，成苗所需時間短。4.莖尖培養(yǎng)的意義：普通莖尖培養(yǎng)技術(shù)簡單，操作方便，易成活，成苗時間短，加快繁殖。微莖尖培養(yǎng)可獲得脫毒苗；2023/1/3963.普通莖尖培養(yǎng)：較大的莖尖(如幾mm到幾十mm)、芽尖及側(cè)（二）莖尖培養(yǎng)方法及步驟取材材料處理及消毒培養(yǎng)接種馴化移栽2023/1/397（二）莖尖培養(yǎng)方法及步驟取材材料處理及消毒培養(yǎng)接①直接取材：在生長旺盛、枝條健壯、無病的母株上選生長不久、雜菌污染少的頂梢（1－2cm）（取前可噴殺菌藥，可頂芽或側(cè)芽）。②從試管苗獲取。1、取材取1-2㎝頂梢2023/1/398①直接取材：在生長旺盛、枝條健壯、無病的母株上選生長不久、雜2、材料處理及消毒

將采集到的莖尖切成0.5-1.0cm長→→去葉（休眠芽預(yù)先剝除鱗片）→→流水沖洗2-4h→→75％的酒精中處理30s→→稀釋20倍的次氯酸鈉中浸5-8min(取自老枝條上的可適當(dāng)延長時間）

→→用無菌水沖洗數(shù)次，準備接種。

2023/1/3992、材料處理及消毒將采集到的莖尖切成0.5-1.0c

3、接種

接種前再剝掉一些葉片，使莖尖0.5cm→→接種要求：隨切隨接，動作迅速。亦可將切下莖尖材料在1－5%VC液中浸一下。2023/1/31003、接種2022/12/29184、培養(yǎng)的方法和程序（1）培養(yǎng)基①基本培養(yǎng)基MS、White、B5、

Heller培養(yǎng)基。

②蔗糖作碳源效果好，濃度2－3%。③激素（2，4-D，IAA，NAA）和有機添加物有明顯影響。但激素濃度以0.1mg/L為宜，不要太高。2023/1/31014、培養(yǎng)的方法和程序2022/12/2919生長太慢：莖尖不增大→→變綠→→細胞逐漸老化→→休眠原因:生長素濃度太低；溫度過低或過高；生長太快：莖尖迅速增大→→愈傷組織→→喪失成苗能力原因:生長素濃度過高；光照太弱或溫度太高；生長正常：莖尖基部稍增大并形成少量愈傷組織，莖尖顏色逐漸變綠，并伸長，葉原基發(fā)育成可見的小葉，進而形成小苗。莖尖生長狀態(tài)2023/1/3102生長太慢：莖尖不增大→→變綠→→細胞逐漸老化→→休眠（2）初代培養(yǎng)條件

每天光照16h，光強度1500-30001x，

溫度25±2℃

2023/1/3103（2）初代培養(yǎng)條件2022/12/2921（3）繼代培養(yǎng)

莖尖長成的新梢→→切成小段→→增殖培養(yǎng)基中→→1個月左右→→新梢又可切成小段→→再轉(zhuǎn)入新培養(yǎng)基→→建立和維持了莖尖無性系。（即微型扦插）

繼代培養(yǎng)可用MS培養(yǎng)基。2023/1/3104（3）繼代培養(yǎng)2022/12/2922

（4）誘導(dǎo)生根

采用1／2MS培養(yǎng)基

加入一定的生長素類調(diào)節(jié)物質(zhì)，如NAA、IBA等。新梢基部浸入50或100mg/l的IBA溶液處理4-8h，然后轉(zhuǎn)移到無激素的生根培養(yǎng)基中。2023/1/3105（4）誘導(dǎo)生根2022/12/2923(5)馴化移栽入土

在生根培養(yǎng)1個月左右→→生長健壯而發(fā)達的根系→→煉苗→→移栽→→管理（溫、光、濕、氣）2023/1/3106(5)馴化移栽入土2022/12/2924

（一）定義：指不帶芽和帶一個以上定芽或不定芽（包括塊莖、球莖在內(nèi)）的幼莖切段的無菌培養(yǎng)。

三、莖段培養(yǎng)2023/1/3107（一）定義：指不帶芽和帶一個以上定芽或不定芽（包括塊莖（二）意義：

快速繁殖；探討莖細胞的生理特點進行育種上的篩選突變體的過程2023/1/3108（二）意義：2022/12/2926（三）培養(yǎng)步驟1.材料的選擇和處理

（1）取材：當(dāng)年生嫩枝→→去葉→→剪成5cm的小段→→自來水沖洗1-3h

注：生長期取芽，外植體取枝條頂部或中部莖段。2023/1/3109（三）培養(yǎng)步驟注：生長期取芽，外植體取枝條頂部或中部莖段。（2）消毒與接種：

將材料切割成2-3cm長短→→無菌條件下用75％酒精滅菌30-60s

→無菌水沖洗→→0.1％升汞浸泡3-8min（飽和漂白粉浸泡10-20min）→→無菌水沖洗數(shù)次→切割成0.5cm→以備接種。2023/1/3110（2）消毒與接種：2022/12/29282.培養(yǎng)

(1)培養(yǎng)基的選擇：MS+3％蔗糖+0.7％瓊脂+激素（促進腋芽增殖6-BA﹥Kt和Ze）(2)培養(yǎng)條件：保持25℃左右，給予充分的光照和光期2023/1/31112.培養(yǎng)2022/12/2929(3)繼代培養(yǎng)：

途徑一：促進腋芽的快速生長優(yōu)點：不會產(chǎn)生變異，方法簡便，每年從一個芽可增殖10萬株以上途徑二：誘導(dǎo)形成大量不定芽。優(yōu)點：產(chǎn)生變異。繼代增殖過程注意選用培養(yǎng)基和生長調(diào)節(jié)劑2023/1/3112(3)繼代培養(yǎng)：2022/12/2930（4）生根培養(yǎng)

目的：使再生的大量試管苗形成根系，獲得完整的植株。培養(yǎng)基選擇：1/2，1/3或1/4的MS，B5培養(yǎng)基或White培養(yǎng)基附加生長素（濃度NAA0.1-1.0mg/L，IBA和IAA可稍高）而降低或除去細胞分裂素。最好添加0.3％活性炭，以促進生根

2023/1/3113（4）生根培養(yǎng)2022/12/2931

3.移植

移植是一個由異養(yǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)樽责B(yǎng)的過程。試管苗→→煉苗→→取苗→→洗凈瓊脂→→小心移栽→→苗期管理（初期濕度要大，基質(zhì)通氣濕潤，保濕保溫）2023/1/31143.移植2022/12/2932

（一）定義：

離體葉培養(yǎng)指包括葉原基、葉柄、葉鞘、葉片、子葉在內(nèi)的葉組織的無菌培養(yǎng)。它大多經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再由愈傷組織分化出莖和根。其中葉片培養(yǎng)是一個典型的代表。

四、離體葉的培養(yǎng)2023/1/3115（一）定義：四、離體葉的培養(yǎng)2022/12/2933（二）意義：

1.是繁殖稀有名貴品種的有效手段；

2.可用于研究形態(tài)建成、光合作用、葉綠素形成等理論問題。2023/1/3116（二）意義：2022/12/2934（三）葉片的離體培養(yǎng)方法

發(fā)育方式：葉片培養(yǎng)再生成完整植株有兩種方式：①是直接誘導(dǎo)形成芽和根→→完整植株；

②是先誘導(dǎo)形成愈傷組織，再經(jīng)愈傷組織分化形成芽和根→→完整植株。其中，以第二種方式最為常見。2023/1/3117（三）葉片的離體培養(yǎng)方法2022/12/2935葉片離體培養(yǎng)發(fā)育方式（成苗途徑）葉原基葉鞘葉片子葉葉柄愈傷組織莖和根試管苗

不定芽2023/1/3118葉片離體培養(yǎng)發(fā)育方式（成苗途徑）葉原基葉鞘葉片子葉葉

1.材料選擇及滅菌

取植物的幼嫩葉片，切割成適當(dāng)大?。?—3cm），在流水中沖洗干凈。再用70％酒精浸泡約10s→→飽和漂白粉液中浸3-15min，或在0.1％升汞中浸3-5min→→無菌水沖洗數(shù)次→→無菌的干濾紙上吸干水分→→接種。注：細嫩與成熟葉片消毒時間不同2023/1/31191.材料選擇及滅菌2022/12/29372.接種

外植體大?。?.5cm2薄片（葉柄、子葉）上表皮朝上接種培養(yǎng)基。最好帶葉脈，注意極性2023/1/31202.接種2022/12/29383.培養(yǎng)

（1）培養(yǎng)基：

MS、B5、White、N6；蔗糖3%；2.4－D利于愈傷組織形成，NAA抑制芽形成，利于根發(fā)生，KT、6-BA利于芽形成。愈傷組織誘導(dǎo)：BA1-3mg/L,NAA0.25-1mg/L；

分化培養(yǎng)：CTK2mg/L；

生根培養(yǎng)：NAA0.5－1.0mg/L2023/1/31213.培養(yǎng)2022/12/2939(2)培養(yǎng)過程：

培養(yǎng)約2周至4周→→形成愈傷組織→→再分化培養(yǎng)基上（附加6-BA2mg／L）進行分化培養(yǎng)→→約10d左右，愈傷組織開始轉(zhuǎn)綠出現(xiàn)綠色芽點→→發(fā)育成無根苗→→生根培養(yǎng)基（附加NAA0.5-lmg/L）→→發(fā)育形成完整植株。2023/1/3122(2)培養(yǎng)過程：2022/12/2940(3)培養(yǎng)條件：

溫度：25±2℃

光照時間：10-12h，光照強度：1500-3000Lx。2023/1/3123(3)培養(yǎng)條件：2022/12/2941

葉的培養(yǎng)比胚，莖尖和莖段培養(yǎng)難度大。首先要選用易培養(yǎng)成功的葉組織，如幼葉比成熟葉易培養(yǎng)，子葉比葉片易培養(yǎng)。其次要添加適當(dāng)?shù)纳L素和細胞分裂素，保證利于葉組織的脫分化和再分化。2023/1/3124葉的培養(yǎng)比胚，莖尖和莖段培養(yǎng)難度大。2022/12/29第二節(jié)生殖器官的培養(yǎng)一、花器官的培養(yǎng)二、種子的培養(yǎng)三、胚胎的培養(yǎng)四、胚珠培養(yǎng)五、子房培養(yǎng)六、胚乳培養(yǎng)2023/1/3125第二節(jié)生殖器官的培養(yǎng)一、花器官的培養(yǎng)2022/12/294一、花器官的培養(yǎng)2023/1/3126一、花器官的培養(yǎng)2022/12/29441.定義：花器官培養(yǎng)指整個花器及其組成部分如花托、花瓣、花絲、花柄、子房、花藥等的無菌培養(yǎng)。

一、花器官的培養(yǎng)（花蕾）2023/1/31271.定義：一、花器官的培養(yǎng)（花蕾）2022/12/292、意義：

通過離體花芽培養(yǎng)可了解整體植物和內(nèi)源激素在花芽性別決定中所起的作用可以了解花器各部分對果實和種子發(fā)育的作用內(nèi)、外源激素在果實種子發(fā)育過程中的調(diào)控作用生產(chǎn)上也可用于珍貴品種的擴大繁殖。2023/1/31282、意義：2022/12/2946

3.培養(yǎng)方法

(1)取材、消毒

從健壯植株上取未開放的花蕾→75％酒精浸潤約30s→飽和漂白粉浸泡10-15min（或0.1％升汞中浸3-5min）→無菌水沖洗數(shù)次→接種。

2023/1/31293.培養(yǎng)方法2022/12/2947(2)接種花蕾培養(yǎng)：花梗插入培養(yǎng)基中。部分花器培養(yǎng)：切片接入培養(yǎng)基中(3)培養(yǎng)培養(yǎng)基：MS、B5。附加生長素（NAA0.1mg/L）和細胞分裂素（6-BA2mg/L），誘導(dǎo)形成愈傷組織或胚狀體，再分化培養(yǎng)成植株2023/1/3130(2)接種花蕾培養(yǎng)：花梗插入培養(yǎng)基中。(3)培養(yǎng)2022/1培養(yǎng)條件：溫度：25±2℃

光照時間：10-12h，光照強度：1500-3000Lx培養(yǎng)約1周，形成少量愈傷組織。再經(jīng)1個月就分化出綠色芽點，再切割轉(zhuǎn)接，可形成大量無根苗，經(jīng)長根成植株，用于繁殖。2023/1/3131培養(yǎng)條件：2022/12/2949二、種子培養(yǎng)2023/1/3132二、種子培養(yǎng)2022/12/2950定義：

種子培養(yǎng)是指受精后發(fā)育完全的成熟種子和發(fā)育不完全的未成熟種子的無菌培養(yǎng)。2023/1/3133定義：2022/12/29512.意義：可以打破種子休眠，促進萌發(fā)；解決遠緣雜種敗育性，產(chǎn)生后代；快速繁殖苗木優(yōu)點：植株分化容易，無菌操作方便2023/1/31342.意義：2022/12/2952

3.培養(yǎng)技術(shù)

(1)種子滅菌

種皮厚或不飽滿的種子，宜用0.1％升汞消毒10-20min。幼嫩的或發(fā)育不全的種子，宜用飽和漂白粉消毒15-30min。若種子上有絨毛或蠟質(zhì)，應(yīng)先用95％酒精或吐溫40處理，提高消毒效果。對殼厚難萌發(fā)的種子，可去殼培養(yǎng)。2023/1/31353.培養(yǎng)技術(shù)2022/12/2953(2)培養(yǎng)基：A.促種子萌發(fā)用MS培養(yǎng)基，加或不加激素，誘導(dǎo)愈傷組織則可加入6-BA或2,4-D。B.無胚乳種子應(yīng)適當(dāng)加生長素。C.一般糖濃度為1-3%。D.打破休眠可加GA，或在接種前浸種處理。2023/1/3136(2)培養(yǎng)基：2022/12/2954(3)接種培養(yǎng)

把種子按每瓶3-5粒放人培養(yǎng)瓶中，均勻排列

培養(yǎng)條件：溫度20-28℃光強1000-20001x，每天光照10-12h2023/1/3137(3)接種培養(yǎng)2022/12/2955植物胚胎培養(yǎng)是胚及胚器官(如子房、胚珠)在離體無菌條件下，使胚發(fā)育成幼苗的技術(shù)。包括幼胚培養(yǎng)、成熟胚培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng)、子房培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)等。三、胚胎的培養(yǎng)2023/1/3138植物胚胎培養(yǎng)是胚及胚器官(如子房、胚珠)三、胚胎的培養(yǎng)202胚胎培養(yǎng)已有近百年的歷史：1904年的Haning最早成功地培養(yǎng)了蘿卜和辣椒的胚，并萌發(fā)形成小苗。30年代成功地把蘭科植物的胚培養(yǎng)成小植株。40年代在蘋果、桃、柑桔、梨、葡萄、山楂、馬鈴薯、甘藍與大白菜的種間雜種的胚胎培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)及子房與胚珠培養(yǎng)均取得了不同程度的進展2023/1/3139胚胎培養(yǎng)已有近百年的歷史：2022/12/2957（一）胚胎培養(yǎng)的意義克服遠緣雜種的不育性；使胚發(fā)育不全的植物獲得后代縮短育種年限；研究與胚發(fā)育有關(guān)的內(nèi)外因素2023/1/3140（一）胚胎培養(yǎng)的意義2022/12/2958（二）離體胚培養(yǎng)

離體胚培養(yǎng)包括胚胎發(fā)生過程中不同發(fā)育期的胚，一般可分為成熟胚和幼胚培養(yǎng)。2023/1/3141（二）離體胚培養(yǎng)2022/12/29591.成熟胚培養(yǎng)

指子葉期后至發(fā)育完全的胚。培養(yǎng)較易成功，在含有大量無機元素和糖的基本培養(yǎng)基上，就能正常生長成幼苗。將成熟或未成熟種子用70％酒精進行幾秒鐘的表面消毒→無菌水沖洗3-4次→無菌條件下進行解剖，取出胚并接種在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上培養(yǎng)。2023/1/31421.成熟胚培養(yǎng)2022/12/2960

培養(yǎng)基：WhiteTukeyMS無機鹽+糖(1-2%)+生長輔助物質(zhì)(激素、AA、活性炭、維生素等)2023/1/3143培養(yǎng)基：2022/12/2961幼胚是指子葉期以前的幼小胚。由于幼胚培養(yǎng)在遠緣雜交育種上有極大的利用價值，其研究應(yīng)用越來越深入廣泛。幼胚培養(yǎng)技術(shù)：心形期胚或更早期的胚（長度僅0.1～0.2mm）胚越小就越難培養(yǎng),幼胚培養(yǎng)成功的有大麥、薺菜、甘蔗、甜菜、胡蘿卜等

2.幼胚（未成熟胚）培養(yǎng)：2023/1/3144幼胚是指子葉期以前的幼小胚。2.幼胚（未成熟胚）培養(yǎng)：2（1）未成熟胚胎的培養(yǎng)有三種不同的發(fā)育方式：a.繼續(xù)進行正常的胚胎發(fā)育，維持“胚性生長”；b.早熟萌發(fā)，即培養(yǎng)后迅速萌發(fā)成幼苗；c.胚在培養(yǎng)基中發(fā)生細胞增殖形成愈傷組織，并由此再分化形成多個胚狀體或芽原基。

2023/1/3145（1）未成熟胚胎的培養(yǎng)有三種不同的發(fā)育方式：2022/12/（2）幼胚培養(yǎng)技術(shù)幼胚培養(yǎng)的操作方法與成熟胚培養(yǎng)方法基本相同。值得注意的是切取幼胚必須在高倍解剖鏡下進行，操作時要細心，盡量取出完整的胚。幼胚培養(yǎng)成功的關(guān)鍵，是提供幼胚所必需的營養(yǎng)和環(huán)境條件。2023/1/3146（2）幼胚培養(yǎng)技術(shù)2022/12/2964

①培養(yǎng)基幼胚對培養(yǎng)基要求較高，常用的培養(yǎng)基有Tukey，Nitch、MS，B5培養(yǎng)基；通常存在的影響條件如下：2023/1/3147①培養(yǎng)基通常存在的