X實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量監(jiān)測

1/4/20231實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量監(jiān)測的意義生物學(xué)實(shí)驗(yàn)研究的四個(gè)基本條件Animal，Equipment，Information，Reagent，簡稱AEIR四要素這4個(gè)要素在整個(gè)實(shí)驗(yàn)研究中具有同等重要的地位，不能忽略或偏廢。事實(shí)上，實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量往往成為制約性要素，影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量和水平實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量監(jiān)測是實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)的重要內(nèi)容，是確保實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量的必要手段。1/4/202321、實(shí)驗(yàn)工作人員的健康和生命的保證常見的人畜共患病：流行性出血熱、狂犬病、猴B病毒、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、利什曼原蟲等1/4/202332、動物生產(chǎn)和繁殖的保證動物一旦染上傳染病，則種群難以凈化，一些烈性傳染病如鼠痘、兔病毒性出血癥等可致動物全軍覆沒，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。1/4/202343、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性、規(guī)律性、重復(fù)性的保證1/4/20235實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量監(jiān)測主要包括以下幾個(gè)方面：遺傳質(zhì)量微生物與寄生蟲質(zhì)量飼料質(zhì)量環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測。1/4/20236第一節(jié)遺傳質(zhì)量監(jiān)測實(shí)驗(yàn)動物的遺傳背景與反應(yīng)特性，是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要因素。不同遺傳背景與反應(yīng)特性的實(shí)驗(yàn)動物，對同一刺激有時(shí)可引起不同質(zhì)和量的反應(yīng)。為了保存實(shí)驗(yàn)動物品種品系特性。使實(shí)驗(yàn)動物使用者在動物實(shí)驗(yàn)中能得到正確的、可重復(fù)的科學(xué)數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)者在嚴(yán)格遵守品系繁育技術(shù)路線的同時(shí)，還必須努力做好實(shí)驗(yàn)動物遺傳質(zhì)量的嚴(yán)格監(jiān)測，以防止實(shí)驗(yàn)動物遺傳上的污染和變異。1/4/20237如：BALB/c對放射線比其他品系更為敏感。C57BL/6腫瘤發(fā)生率低，A系高。BALB/c和C3H小鼠對鼠傷寒沙門氏菌的敏感性存在顯著差異SHR為自發(fā)性高血壓大鼠，心血管疾病發(fā)生率高1/4/20238一、群體管理管理上人為的粗心最易引起遺傳上的混雜，所以對育種群進(jìn)行恰當(dāng)?shù)墓芾硎潜ＷC遺傳質(zhì)量的最有效方法。每一個(gè)實(shí)驗(yàn)動物育種機(jī)構(gòu)都應(yīng)當(dāng)認(rèn)真執(zhí)行良好的育種制度，完善地保持育種記錄，基礎(chǔ)群應(yīng)有系譜記錄。要做到以上要求，最重要的因素就是要有訓(xùn)練有素、經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員。1/4/20239二、免疫學(xué)標(biāo)記監(jiān)測（一）皮膚移植法這是目前最常用和最靈敏的檢測亞系內(nèi)或亞系間組織相容性基因差異的方法。在小鼠和大鼠中普遍采用的是尾部或背部皮膚移植法。皮膚移植法靈敏度高。易掌握，經(jīng)濟(jì)。不需昂貴設(shè)備，易對植皮成活情況進(jìn)行觀察和判斷。能有效地測出新發(fā)生的、造成亞系變異的遺傳混雜和突變。1/4/202310（二）混合合淋巴細(xì)胞胞反應(yīng)混合淋巴細(xì)細(xì)胞反應(yīng)的的原理為：：異源動物物或遺傳上上有差異個(gè)個(gè)體的淋巴巴細(xì)胞混合合培養(yǎng)一定定時(shí)間后，，這些細(xì)胞胞會增殖，，甚至進(jìn)一一步裂解。。此反應(yīng)結(jié)結(jié)果可在7～9天獲得得，定期地地從群體中中抽取足夠夠量的動物物進(jìn)行監(jiān)測測能夠維護(hù)護(hù)實(shí)驗(yàn)動物物的品質(zhì)。。12/29/202211（三三））淋淋巴巴組組織織移移植植用供供體體的的均均質(zhì)質(zhì)淋淋巴巴器器官官，，如如骨骨髓髓、、脾脾、、淋淋巴巴結(jié)結(jié)、、胸胸腺腺或或胚胚胎胎肝肝臟臟制制備備出出單單細(xì)細(xì)胞胞懸懸液液。。然然后后將將適適量量活活細(xì)細(xì)胞胞通通過過靜靜脈脈或或腹腹腔腔注注射射到到受受體體動動物物體體內(nèi)內(nèi)，，組組織織相相容容性性由由受受體體中中存存活活者者及及脾脾增增大大者者來來確確定定，，也也可可以以用用放放射射學(xué)學(xué)方方法法。。根根據(jù)據(jù)移移植植細(xì)細(xì)胞胞的的存存活活數(shù)數(shù)測測定定。。12/29/202212三、、生生化化標(biāo)標(biāo)記記監(jiān)監(jiān)測測通過過多多種種形形式式的的電電泳泳和和電電聚聚集集。?？煽蓹z檢定定生生化化標(biāo)標(biāo)記記即即同同工工酶酶或或蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)，，常常用用的的電電泳泳介介質(zhì)質(zhì)有有乙乙酸酸纖纖維維素素膜膜、、淀淀粉粉凝凝膠膠、、聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝膠膠。。每每一一種種標(biāo)標(biāo)記記系系統(tǒng)統(tǒng)做做特特異異性性染染色色，，最最后后將將得得到到的的帶帶型型與與公公布布的的生生化化遺遺傳傳圖圖式式進(jìn)進(jìn)行行比比較較。。如如中中華華人人民民共共和和國國國國家家標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)GB；；T14923-2001公公布布9種種常常用用近近交交系系大大鼠鼠生生化化位位點(diǎn)點(diǎn)標(biāo)標(biāo)記記基基因因(表表5-2)。。12/29/202213表5-2常常用用近交交系大大鼠生生化位位點(diǎn)標(biāo)標(biāo)記基基因StrainAkp1Cs2Es1Es3Es4Es6Es8Es9F344/NaaaababaLOU/CaaaabbbaSHRababaabaWKYbbadbaacLEW/MaaadbabcACIbababbba12/29/202214四、骨骨骼形形態(tài)特特征監(jiān)監(jiān)測常采用用“下頜骨骨分析析法”來鑒鑒別和和檢測測大小小鼠的的亞系系變異異。將年齡齡、性性別、、體重重相當(dāng)當(dāng)?shù)拇蟠笫蠡蚧蛐∈笫筇幩浪篮?，，分辨辨右下下頜骨骨，加加以標(biāo)標(biāo)記，，在直直角坐坐標(biāo)系系上測測量出出多個(gè)個(gè)形態(tài)態(tài)特征征參考考點(diǎn)距距離。。將所有測量量的平均數(shù)數(shù)作統(tǒng)計(jì)分分析，利用用判別函數(shù)數(shù)確定下頜頜骨形狀。。如果測量量值集中，，則表明被被測亞系間間無顯著的的遺傳變異異。12/29/202215五、染色體體帶型監(jiān)測測可以利用染染色體分帶帶技術(shù)，鑒鑒別C帶和和Q帶作為為染色體標(biāo)標(biāo)記，用來來區(qū)分大、、小鼠的近近交系，在在多數(shù)大、、小鼠的近近交系中，，所有中期期染色體都都存在C帶帶材料，同同源染色體體的C帶區(qū)區(qū)域大小相相同；不同同的近交系系，C帶材材料大小不不同，是品品系特異的的，是一種種很有價(jià)值值的檢測亞亞系變異和和混雜來源源的方法。。12/29/202216六、現(xiàn)代分分子生物學(xué)學(xué)技術(shù)傳統(tǒng)的遺傳傳監(jiān)測方法法來源于過過去研究者者對哺乳動動物進(jìn)行遺遺傳分析時(shí)時(shí)采用的研研究手段。。隨著分子子生物學(xué)技技術(shù)的發(fā)展展，分子生生物學(xué)技術(shù)術(shù)有可能取取代傳統(tǒng)的的遺傳監(jiān)測測方法，其其優(yōu)點(diǎn)是多多態(tài)性高，，位點(diǎn)豐富富，實(shí)驗(yàn)技技術(shù)成熟，，直接涉及及生物的遺遺傳基礎(chǔ)，，DNA樣樣品容易保保存和運(yùn)輸輸?shù)鹊取?2/29/2022171．限制制性片斷斷長度多多態(tài)(RFLP)技術(shù)術(shù)當(dāng)動物基基因組DNA被被限制性性內(nèi)切酶酶消化時(shí)時(shí)，酶能能夠識別別雙鏈DNA鏈鏈上的特特定核苷苷酸序列列，并在在每條DNA鏈鏈上切割割產(chǎn)生一一個(gè)切口口，使DNA裂裂解為片片斷。這這些片斷斷的長度度在動物物群體中中存在變變異，造造成多態(tài)態(tài)現(xiàn)象。。通過DNA電電泳和DNA探探針分子子雜交技技術(shù)，即即可觀察察到不同同帶型。。12/29/202218例如：位位于小鼠鼠第2號號染色體體補(bǔ)體-5（complement-5））位點(diǎn)(He)的pC5探針針，當(dāng)用用HindⅢ消消化小鼠鼠DNA時(shí)，C3H品品系將產(chǎn)產(chǎn)生一條條2.7kb的的帶型，，而AKP品系系將產(chǎn)生生6.0kb和和4.6kb兩兩條帶型型。從而而可以在在He位位點(diǎn)上區(qū)區(qū)別這兩兩個(gè)品系系。目前前所報(bào)道道的RFLP位位點(diǎn)已多多達(dá)1098個(gè)個(gè)，給遺遺傳學(xué)研研究帶來來許多便便利條件件。12/29/2022192．簡單單序列長長度多態(tài)態(tài)(SSLP)技術(shù)簡單序列列長度多多態(tài)位點(diǎn)點(diǎn)是動物物基因內(nèi)內(nèi)廣泛存存在的由由l～4個(gè)核苷苷酸組成成的成串串的重復(fù)復(fù)序列，，又稱為為微衛(wèi)星星(microsatellite)。。估計(jì)這這樣的DNA結(jié)結(jié)構(gòu)在哺哺乳動物物基因組組內(nèi)的數(shù)數(shù)目多達(dá)達(dá)5萬～～10萬萬個(gè)。在在每個(gè)特特定的位位點(diǎn)上，，重復(fù)序序列的長長度在不不同品系系中存在在著差異異。采用用夾在這這些序列列兩端的的引物，，通過聚聚合酶鏈鏈?zhǔn)椒磻?yīng)應(yīng)(PCR)和和電泳，，就能觀觀察到這這些位點(diǎn)點(diǎn)的差異異，從而而區(qū)分不不同的品品系。12/29/202220例如：小鼠鼠第16條條染色體的的D16Mit4位位點(diǎn)，其PCR產(chǎn)物物的大?。ǎ╞p）在在常用近交交系中分別別如下：C57BL/6-132，DBA/2-123，A/J-147，C3H-123，BALB/c-149，，AKR-126，，CBA-132。。SSLP測試技術(shù)術(shù)比RFLP技術(shù)簡簡便，多態(tài)態(tài)性高，需需要的DNA樣品較較少，引物物容易獲得得，推廣應(yīng)應(yīng)用前景可可觀。12/29/2022213．DNA指紋(fingerprinting)技技術(shù)上述兩種DNA技術(shù)術(shù)是針對單單個(gè)DNA位點(diǎn)進(jìn)行行的測試。。DNA指指紋技術(shù)一一次可同時(shí)時(shí)測試多個(gè)個(gè)位點(diǎn)，所所以有一定定的優(yōu)勢。。DNA指指紋技術(shù)經(jīng)經(jīng)過電泳后后可獲得十十幾到幾十十條帶，而而這些帶型型在個(gè)體之之間或品系系之間有差差異，如同同人類的指指紋在每個(gè)個(gè)人都不同同一樣，因因此而得名名。通常有有兩種方法法獲得DNA指紋圖圖。一是用用限制性內(nèi)內(nèi)切酶和小小衛(wèi)星探針針技術(shù)獲得得的DNA指紋。二二是用較短短的隨機(jī)擴(kuò)擴(kuò)增引物或或小衛(wèi)星引引物，通過過PCR而而獲得的DNA指紋紋。12/29/202222DNA指指紋圖譜譜有時(shí)在在亞系或或亞群之之間有區(qū)區(qū)別，所所以對亞亞系的監(jiān)監(jiān)測十分分有用。。但是DNA指指紋的結(jié)結(jié)果因?yàn)闉殡娪編喽缓帽姹嬲J(rèn)和比比較。因因此，也也影響其其在遺傳傳監(jiān)測和和其他研研究中的的應(yīng)用。。目前所所做的DNA指指紋比上上述兩種種DNA技術(shù)少少，但隨隨著研究究的深入入和方法法的改進(jìn)進(jìn)，將來來一定會會有所突突破。12/29/2022234．隨機(jī)機(jī)擴(kuò)增多多態(tài)（RAPD）技術(shù)術(shù)RAPD技術(shù)是是20世世紀(jì)90年代發(fā)發(fā)展起來來的一種種簡便、、快捷的的檢測基基因組DNA多多態(tài)性的的遺傳標(biāo)標(biāo)記技術(shù)術(shù)。該項(xiàng)項(xiàng)技術(shù)首首先將動動物目的的基因組組DNA提純、、酶切，，用含10個(gè)堿堿基的隨隨機(jī)引物物，對DNA進(jìn)進(jìn)行PCR擴(kuò)增增，經(jīng)電電泳，便便可在多多個(gè)位點(diǎn)點(diǎn)上得到到擴(kuò)增產(chǎn)產(chǎn)物。各各種DNA多態(tài)態(tài)分析方方法，12/29/202224如：DNA指紋紋、限制制性片段段長度多多態(tài)(RFLP)等，，雖然可可直接檢檢測基因因組的遺遺傳變異異，但都都不同程程度地存存在操作作復(fù)雜、、需要特特異性操操作、需需要事先先知道動動物基因因組DNA序列列等不足足。而RAPD技術(shù)，，由于引引物可任任意改變變，有可可能找到到任何一一個(gè)個(gè)體體特異的的RAPD標(biāo)記記，從而而為實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物的的遺傳檢檢測和分分析提供供一個(gè)十十分有效效的工具具。12/29/202225七、遺遺傳性性狀監(jiān)監(jiān)測結(jié)結(jié)果的的分析析當(dāng)被檢檢查的的遺傳傳性狀狀與每每個(gè)品品系的的遺傳傳概貌貌圖一一致時(shí)時(shí)，同同時(shí)遺遺傳管管理資資料清清晰、、可信信，可可以認(rèn)認(rèn)為有有關(guān)品品系的的繁育育生產(chǎn)產(chǎn)正在在正確確地進(jìn)進(jìn)行，，該品品系的的動物物遺傳傳質(zhì)量量合格格；若若與遺遺傳概概貌圖圖不一一致時(shí)時(shí)，可可以考考慮以以下原原因：：12/29/2022261．遺遺傳污污染(geneticcontamination)這是最最常見見的遺遺傳變變異，，往往往是由由于遺傳學(xué)學(xué)管理理不善善所致致。這種種情況況如發(fā)發(fā)現(xiàn)得得早，，在被被檢查查的性性狀中中至少少可以以觀察察到一一個(gè)以以上基基因標(biāo)標(biāo)記發(fā)發(fā)生改改變，，出現(xiàn)現(xiàn)雜合合型，，或與與遺傳傳概貌貌不符符的其其他表表型；；如果果發(fā)現(xiàn)現(xiàn)得較較遲，，一些些雜合合基因因可隨隨機(jī)地地固定定為單單一的的純合合型，，但與與原品品系的的遺傳傳概貌貌不一一致。。出現(xiàn)現(xiàn)上述述情況況均應(yīng)應(yīng)淘汰汰原品品系，，更換換來源源清楚楚、質(zhì)質(zhì)量合合格的的動物物作為為新種種，重重新進(jìn)進(jìn)行品品系的的繁育育。12/29/2022272.遺遺傳傳漂變變(geneticdrift)遺傳漂漂變是是指一一個(gè)品品種或或品系系動物物基因因型在在飼養(yǎng)養(yǎng)的過過程中中可能能發(fā)生生隨機(jī)機(jī)的改改變。。這種種改變變多由由于近近交系系動物物部分分雜合合基因因尚未未純合合時(shí)即即進(jìn)行行了分分系，，造成成了亞亞系和和支系系的形形成。。監(jiān)測測時(shí)可可以看看到一一個(gè)品品系所所有的的動物物在1～2個(gè)個(gè)基因因標(biāo)記記上與與原品品系的的遺傳傳概貌貌不符符，但但表型型一致致又均均為純純合型型。這這種情情況在在經(jīng)同同系異異體移移植試試驗(yàn)排排除了了遺傳傳污染染后需需按照照亞系系和支支系重重新命命名。。12/29/2022283．遺傳傳突變(mutation)遺傳突變變在哺乳乳類動物物中的頻頻率為10-5。在分析析監(jiān)測結(jié)結(jié)果時(shí)，，如果僅僅看到一一只動物物單個(gè)基基因標(biāo)記記出現(xiàn)雜雜合型，，應(yīng)考慮慮有否發(fā)發(fā)生遺傳傳突變。。為了證證實(shí)此點(diǎn)點(diǎn)，往往往需要根根據(jù)動物物編號查查詢該只只動物同同窩兄妹妹或雙親親的基因因標(biāo)記表表型。如如遺傳突突變發(fā)生生在親代代，則同同窩兄妹妹均應(yīng)為為雜合型型或分離離產(chǎn)生不不同的表表型。12/29/202229如果在同同窩兄妹妹或雙親親中該基基因標(biāo)記記的表型型與遺傳傳概貌圖圖一致，，應(yīng)考慮慮被測個(gè)個(gè)體發(fā)生生了遺傳傳突變。。在檢查查時(shí)如同同時(shí)發(fā)現(xiàn)現(xiàn)其他基基因標(biāo)記記的表型型與遺傳傳概貌圖圖不符，，無論是是雜合型型還是純純合型均均應(yīng)考慮慮發(fā)生了了遺傳污污染，應(yīng)應(yīng)立即淘淘汰換種種。遺傳傳突變?nèi)缛鐭o特殊殊保留價(jià)價(jià)值，在在剔除突突變的個(gè)個(gè)體后，，整個(gè)品品系可以以繼續(xù)保保存；如如有保存存價(jià)值，，可將突突變個(gè)體體單獨(dú)培培育成同同源突變變近交系系。12/29/202230第二節(jié)微微生生物學(xué)與與寄生蟲蟲學(xué)監(jiān)測測如何控制制微生物物和寄生生蟲，是是實(shí)驗(yàn)動動物標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)化的主主要內(nèi)容容之一。。一般而而言，科科研中使使用的實(shí)實(shí)驗(yàn)動物物，其微微生物和和寄生蟲蟲的控制制級別越越高，其其結(jié)果就就越精確確、越可可靠。12/29/202231一、監(jiān)測測意義1．對實(shí)實(shí)驗(yàn)動物物進(jìn)行微微生物、、病毒與與寄生蟲蟲的監(jiān)控控，對保保證實(shí)驗(yàn)驗(yàn)研究的的順利進(jìn)進(jìn)行和工工作人員員的身體體健康具具有十分分重要的的意義。。實(shí)驗(yàn)動物物被集中中飼養(yǎng)，，極易導(dǎo)導(dǎo)致疾病病的爆發(fā)發(fā)與流行行。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物疾疾病的爆爆發(fā)，除除造成動動物死亡亡外，還還會干擾擾實(shí)驗(yàn)的的順利進(jìn)進(jìn)行，引引起生物物制品的的污染，，對人類類健康產(chǎn)產(chǎn)生危害害。12/29/2022322．對實(shí)實(shí)驗(yàn)動物物飼養(yǎng)設(shè)設(shè)施的監(jiān)監(jiān)測，為為確保這這些設(shè)施施能否控控制微生生物污染染提供依依據(jù)。3．對引引進(jìn)的實(shí)實(shí)驗(yàn)動物物進(jìn)行檢檢疫，避避免病原原體入侵侵原有的的動物群群。4．如動動物群發(fā)發(fā)生疾病病，為了了確證病病原，對對患病動動物進(jìn)行行病原學(xué)學(xué)診斷，，積累對對疾病的的認(rèn)識，，收集菌菌株和毒毒株，進(jìn)進(jìn)一步研研究病原原，為診診斷試劑劑和疫苗苗的制備備提供菌菌株和毒毒株。12/29/202233二、、監(jiān)監(jiān)測測方方法法（一一））實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物病病毒毒學(xué)學(xué)檢檢測測方方法法1．．血血清清學(xué)學(xué)檢檢測測適用用于于各各級級各各類類實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物的的經(jīng)經(jīng)常常性性檢檢測測和和疫疫情情普普查查。。常常用用方方法法有有：：酶酶聯(lián)聯(lián)免免疫疫吸吸附附試試驗(yàn)驗(yàn)(ELISA)、、免免疫疫熒熒光光試試驗(yàn)驗(yàn)(IFA)、、免免疫疫酶酶染染色色試試驗(yàn)驗(yàn)(IEA)、、血血凝凝試試驗(yàn)驗(yàn)(HA)、、血血凝凝抑抑制制試試驗(yàn)驗(yàn)(HI)、、病病毒毒中中和和試試驗(yàn)驗(yàn)、、補(bǔ)補(bǔ)體體結(jié)結(jié)合合試試驗(yàn)驗(yàn)、、瓊瓊脂脂擴(kuò)擴(kuò)散散試試驗(yàn)驗(yàn)。。12/29/2022342．病病原學(xué)學(xué)檢測測適用于于動物物群中中有疾疾病流流行，，需要要檢出出病毒毒或確確認(rèn)病病毒存存在的的情況況。檢檢測方方法有有：病病毒分分離與與鑒定定，病病毒顆顆粒、、抗原原或核核酸的的檢出出，潛潛在病病毒的的激活活，抗抗體產(chǎn)產(chǎn)生試試驗(yàn)等等。例例如：：采用用HA或HI方方法檢檢查患患病動動物排排泄物物或組組織懸懸液中中的血血凝素素抗原原；采采用聚聚丙烯烯酰胺胺凝膠膠電泳泳(PAGE)檢查查病毒毒基因因組；；采用用核酸酸分子子雜交交技術(shù)術(shù)或聚聚合酶酶鏈反反應(yīng)(PCR)檢出出組織織或排排泄物物中的的病毒毒核酸酸。12/29/202235（二二））實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物細(xì)細(xì)菌菌學(xué)學(xué)檢檢測測方方法法最常常用用的的方方法法是是病病原原菌菌的的分分離離與與培培養(yǎng)養(yǎng)或或進(jìn)進(jìn)行行動動物物接接種種。。部部分分病病原原菌菌，，如如：：鼠鼠傷傷寒寒沙沙門門菌菌、、鼠鼠棒棒狀狀桿桿菌菌、、布布氏氏桿桿菌菌、、沙沙門門菌菌、、氣氣管管敗敗血血波波氏氏桿桿菌菌等等，，可可采采取取血血清清學(xué)學(xué)方方法法，，但但仍仍需需結(jié)結(jié)合合分分離離培培養(yǎng)養(yǎng)結(jié)結(jié)果果最最后后做做出出診診斷斷。。對對于于泰泰澤澤菌菌，，由由于于不不能能在在人人工工培培養(yǎng)養(yǎng)基基上上生生長長，，因因此此宜宜采采用用組組織織壓壓片片、、鏡鏡檢檢的的方方法法進(jìn)進(jìn)行行檢檢查查，，并并結(jié)結(jié)合合病病理理檢檢查查結(jié)結(jié)果果最最后后做做出出診診斷斷。。12/29/202236（三三））實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物真真菌菌學(xué)學(xué)檢檢測測方方法法目前主主要采采用沙沙氏培培養(yǎng)基基分離離培養(yǎng)養(yǎng)。皮皮膚真真菌一一般在在25℃培培養(yǎng)，，深部部真菌菌在37℃℃培養(yǎng)養(yǎng)。不不同的的真菌菌具有有一定定的菌菌落特特點(diǎn)，，鏡下下染色色檢查查可進(jìn)進(jìn)行種種屬鑒鑒定，，有時(shí)時(shí)，還還需借借助于于生物物化學(xué)學(xué)反應(yīng)應(yīng)結(jié)果果和免免疫學(xué)學(xué)方法法進(jìn)行行最后后診斷斷。12/29/202237（四））實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物物寄生生蟲學(xué)學(xué)檢測測方法法1．體體外寄寄生蟲蟲肉眼觀觀察法法、透透明膠膠紙粘粘取法法、拔拔毛取取樣法法、皮皮屑刮刮取法法、黑黑背景景檢查查法、、解剖剖鏡下下通體體檢查查法等等，主主要檢檢查蚤蚤、虱虱、螨螨等節(jié)節(jié)肢動動物。。12/29/2022382．體內(nèi)內(nèi)寄生蟲蟲主要要檢檢查查蠕蠕蟲蟲和和原原蟲蟲，，可可用用直直接接涂涂片片法法(糞糞便便、、血血液液、、臟臟器器、、腸腸內(nèi)內(nèi)容容物物)、、飽飽和和鹽鹽水水漂漂浮浮法法或或沉沉淀淀法法、、透透明明膠膠紙紙肛肛門門周周圍圍粘粘取取法法、、組組織織或或器器官官剖剖面面壓壓印印法法、、病病變變組組織織切切片片或或壓壓片片法法、、尿尿液液的的離離心心法法(如如查查鼠鼠膀膀胱胱線線蟲蟲)等等。。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物的的微微生生物物、、寄寄生生蟲蟲檢檢測測具具體體操操作作方方法法詳詳見見《《國國家家標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物微微生生物物學(xué)學(xué)和和寄寄生生蟲蟲學(xué)學(xué)的的檢檢測測方方法法（（嚙嚙齒齒類類和和兔兔類類））》》（（GB/T14926.1-14926.41-2001））。。12/29/202239三、、監(jiān)監(jiān)測測要要求求1．．選選定定監(jiān)監(jiān)測測項(xiàng)項(xiàng)目目任何何一一種種實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物都都有有許許多多致致病病性性微微生生物物、、寄寄生生蟲蟲，，結(jié)結(jié)合合具具體體情情況況選選擇擇合合適適的的檢檢測測項(xiàng)項(xiàng)目目，，既既達(dá)達(dá)到到保保證證動動物物質(zhì)質(zhì)量量的的目目的的，，又又可可節(jié)節(jié)省省人人力力物物力力。。我我國國經(jīng)經(jīng)過過十十多多年年來來對對各各地地實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物感感染染病病原原微微生生物物、、寄寄生生蟲蟲情情況況的的調(diào)調(diào)查查，，結(jié)結(jié)合合其其他他國國家家的的規(guī)規(guī)定定和和經(jīng)經(jīng)驗(yàn)驗(yàn)，，制制定定了了我我國國嚙嚙齒齒類類和和兔兔類類微微生生物物學(xué)學(xué)、、寄寄生生蟲蟲學(xué)學(xué)等等級級標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)，，貓貓、、犬犬、、猴猴等等中中型型實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物，，衛(wèi)衛(wèi)生生部部醫(yī)醫(yī)學(xué)學(xué)實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物管管理理委委員員會會亦亦有有初初步步規(guī)規(guī)定定。。12/29/2022402．采樣樣數(shù)量和和頻度檢測結(jié)果果的準(zhǔn)確確性，要要采取合合適的動動物數(shù)量量。采樣樣動物數(shù)數(shù)可根據(jù)據(jù)動物群群體的污污染程度度而有所所不同。。按照國家家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)規(guī)定，動動物數(shù)量量超過100只只的生產(chǎn)產(chǎn)繁殖單單元取樣樣如下：：普通級級動物不不能少于于10只只；清潔潔級動物物檢測5～10只只；飼養(yǎng)養(yǎng)于小隔隔離罩內(nèi)內(nèi)的無菌菌動物和和無特定定病原體體動物隨隨機(jī)抽檢檢2只；；飼養(yǎng)于于生產(chǎn)繁繁殖單元元的抽檢檢5～10只。。12/29/202241除了采樣樣的數(shù)量量，還必必須考慮慮到檢測測的間隔隔時(shí)間。。一般來來說，一一旦病原原體侵入入動物群群體引起起感染，，初期分分離病原原體較容容易，抗抗體的檢檢出率上上升。2～3個(gè)個(gè)月后可可因某些些個(gè)體抗抗體水平平的降低低以及新新出生的的非感染染個(gè)體的的增加等等原因，，抗體檢檢出率下下降，據(jù)據(jù)此，檢檢測間隔隔時(shí)間以以3個(gè)月月一次為為宜。至至少每年年檢查2次，選選在春、、秋季疾疾病多發(fā)發(fā)季節(jié)為為宜。12/29/202242采樣時(shí)時(shí)，宜宜在動動物群群中不不同方方位隨隨機(jī)采采取育育成動動物，，選擇擇至少少4個(gè)個(gè)不同同的位位置采采集樣樣品或或采用用前哨哨動物物放人人群內(nèi)內(nèi)，不不時(shí)調(diào)調(diào)換位位置，，飼養(yǎng)養(yǎng)一定定時(shí)間間后解解剖檢檢查抗抗體或或病原原。運(yùn)輸途途中保保證動動物的的安全全和避避免污污染。。引種種的動動物則則需有有檢疫疫隔離離期，，小鼠鼠、大大鼠和和豚鼠鼠l～～7天天，兔兔21天，，犬、、貓21～～28天，，猴l～9周。。12/29/202243第三節(jié)節(jié)飼飼料料質(zhì)量量監(jiān)控控實(shí)驗(yàn)動動物作作為生生物體體離不不開營營養(yǎng)，，飼料料是實(shí)實(shí)驗(yàn)動動物攝攝人營營養(yǎng)素素的主主要來來源。。只有有良好好的營營養(yǎng)才才能使使實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物物保持持良好好的健健康狀狀態(tài)，，而健健康的的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物物才能能確保保實(shí)驗(yàn)驗(yàn)結(jié)果果的可可靠。。因此此，加加強(qiáng)飼飼料質(zhì)質(zhì)量標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)化化管理理，是是實(shí)現(xiàn)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物物標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)化的的重要要環(huán)節(jié)節(jié)。12/29/202244一、實(shí)驗(yàn)動動物飼料生生產(chǎn)產(chǎn)加工、儲儲存與管理理實(shí)驗(yàn)動物飼飼料是以實(shí)實(shí)驗(yàn)動物飼飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)為為依據(jù)，經(jīng)經(jīng)過嚴(yán)密設(shè)設(shè)計(jì)、科學(xué)學(xué)配方、精精心加工、、生產(chǎn)制造造而形成的的標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)產(chǎn)品。因此此，進(jìn)行實(shí)實(shí)驗(yàn)動物飼飼料生產(chǎn)必必須了解有有關(guān)實(shí)驗(yàn)動動物飼養(yǎng)管管理法規(guī)條條例，全面面掌握飼料料的生產(chǎn)過過程。12/29/2022451．實(shí)驗(yàn)動動物配合飼飼料的生產(chǎn)產(chǎn)加工應(yīng)根據(jù)各種種實(shí)驗(yàn)動物物的特性和和不同的實(shí)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?，采用不同同的飼料加加工方法。。常用?shí)驗(yàn)動動物如大鼠鼠、小鼠、、豚鼠及兔兔等實(shí)驗(yàn)動動物的飼料料應(yīng)制成具具有一定硬硬度的顆粒粒飼料較為為適合其攝攝食習(xí)性；；狗、貓則則以膨化飼飼料為好；；而有的實(shí)實(shí)驗(yàn)動物根根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)磕康牟煌?，，常要求制制作糊狀、、粉狀或液液體飼料以以滿足研究究需要。但但是無論其其形狀如何何，在實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物飼料料加工生產(chǎn)產(chǎn)過程中都都應(yīng)注意生生產(chǎn)規(guī)格及及其產(chǎn)品標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)。12/29/2022462．．實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物飼飼料料的的儲儲存存包括括原原料料儲儲存存和和成成品品儲儲存存兩兩部部分分內(nèi)內(nèi)容容。。原料料儲儲存存：：應(yīng)應(yīng)按按原原料料種種類類、、生生產(chǎn)產(chǎn)廠廠家家、、進(jìn)進(jìn)貨貨日日期期等等分分開開保保管管。。保保管管中中要要注注意意溫溫度度、、濕濕度度變變化化，，防防止止鳥鳥類類、、鼠鼠類類和和昆昆蟲蟲的的污污染染。。盡盡量量做做到到先先進(jìn)進(jìn)先先出出。。成品品儲儲存存：：要要定定期期清清掃掃存存儲儲罐罐，，產(chǎn)產(chǎn)品品變變更更時(shí)時(shí)徹徹底底清清掃掃存存儲儲罐罐，，成成品品庫庫內(nèi)內(nèi)嚴(yán)嚴(yán)格格執(zhí)執(zhí)行行先先進(jìn)進(jìn)先先出出原原則則。。注注意意存存儲儲罐罐的的溫溫、、濕濕度度，，防防止止成成品品飼飼料料霉霉變變，，防防止止野野鼠鼠、、昆昆蟲蟲及及有有毒毒物物質(zhì)質(zhì)自自引引污污染染。。分分類類堆堆放放，，標(biāo)標(biāo)志志清清楚楚，，嚴(yán)嚴(yán)防防與與原原料料混混貯貯，，保保證證標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)貨貨物物出出庫庫登登記記。。12/29/2022473．．實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物的的飼飼料料管管理理實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物飼飼料料管管理理是是指指從從飼飼料料原原料料選選擇擇、、生生產(chǎn)產(chǎn)加加工工到到成成品品以以及及生生產(chǎn)產(chǎn)過過程程中中的的蟲蟲害害、、安安全全及及衛(wèi)衛(wèi)生生管管理理的的全全過過程程。。12/29/202248二、實(shí)驗(yàn)動動物飼料的的消毒實(shí)驗(yàn)動物的的飼料在收收獲、加工工、儲存及及運(yùn)輸過程程中都有污污染病菌的的可能，為為確保實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物質(zhì)量量和動物實(shí)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確確性，我們們要通過適適當(dāng)?shù)南径痉椒ㄊ蛊淦溥_(dá)到滅菌菌的目的。。常用飼料料消毒方法法有干熱、、濕熱、輻輻照及藥物物熏蒸等多多種，應(yīng)按按飼養(yǎng)動物物的不同要要求和飼料料種類以及及所具備的的條件來選選擇。12/29/2022491．干干熱滅滅菌法法將飼料料在80～100℃℃的條條件下下烘烤烤。此此法設(shè)設(shè)備比比較簡簡單，，但溫溫度不不好掌掌握，，滅菌菌不夠夠徹底底，而而且營營養(yǎng)損損失較較大。。12/29/2022502．高高溫高高壓滅滅菌法法高溫高高壓滅滅菌法法是指指將飼飼料在在121℃℃，1.0kg/cm3的高高溫高高壓蒸蒸鍋內(nèi)內(nèi)加熱熱15min以以上，，將細(xì)細(xì)菌全全部殺殺死。。一般般115℃℃30min、、12l℃℃20min、、125℃℃15min。。絕大大多數(shù)數(shù)維生生素。。尤其其是維維生素素C、、維生生素B1、、維生生素B6和和維生生素A等，，過熱熱會受受到破破壞，，而純純化學(xué)學(xué)性飼飼料比比天然然飼料料更不不穩(wěn)定定。12/29/2022513．藥藥物熏熏蒸滅滅菌法法熏蒸是是利用用化學(xué)學(xué)藥品品的氣氣霧劑劑對飼飼料進(jìn)進(jìn)行消消毒。。如用用環(huán)氧氧乙烷烷進(jìn)行行滅菌菌，熏熏蒸后后必須須在不不低于于20℃的的自然然空氣氣中將將殘余余氣體體揮發(fā)發(fā)。實(shí)實(shí)驗(yàn)證證明，，即使使這樣樣處理理，在在飼料料中仍仍然殘殘存一一些對對動物物代謝謝有損損害的的化合合物。。12/29/2022524.放放射線照照射滅菌菌法通常在對對谷物類類飼料消消毒時(shí)，，采用5Mrad劑量量的60Co照照射對營營養(yǎng)成分分損失甚甚小。γγ射線對對維生素素B1和和維生素素B6僅僅有微小小破壞，，通常采采用的劑劑量為3～5Mrad。此法法在滅菌菌效果和和對營養(yǎng)養(yǎng)素的破破壞程度度方面都都優(yōu)于其其他方法法。但受受條件所所限，不不便推廣廣。12/29/202253三、實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物飼飼料的檢檢測飼料檢測測是實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物飼飼料質(zhì)量量管理必必不可少少的重要要手段。。飼料質(zhì)質(zhì)量變化化不僅直直接影響響著實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物質(zhì)質(zhì)量，而而且也間間接影響響實(shí)驗(yàn)結(jié)結(jié)果的可可靠性。。我國實(shí)實(shí)驗(yàn)動物物飼料質(zhì)質(zhì)量應(yīng)符符合國家家標(biāo)準(zhǔn)GBl4924-2001規(guī)規(guī)定的根根據(jù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物的的不同種種類、性性別、年年齡、體體重和生生理階段段制定的的飼養(yǎng)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)。12/29/2022541．感觀觀性狀的的檢驗(yàn)用手、眼眼、鼻等等器官直直接通過過色澤、、氣味、、手感、、雜質(zhì)情情況等項(xiàng)項(xiàng)指標(biāo)對對飼料的的新鮮程程度、均均勻度、、含水量量等進(jìn)行行直觀判判斷。2．營養(yǎng)養(yǎng)成分的的測定按照國家家實(shí)驗(yàn)動動物飼料料營養(yǎng)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)規(guī)定的養(yǎng)養(yǎng)分含量量及分析析方法，，對產(chǎn)品品的營養(yǎng)養(yǎng)成分和和混合均均勻度等等進(jìn)行檢檢測。5212/29/202255第四節(jié)環(huán)環(huán)境境質(zhì)量監(jiān)監(jiān)測嚴(yán)格監(jiān)控控實(shí)驗(yàn)動動物生產(chǎn)產(chǎn)環(huán)境和和動物實(shí)實(shí)驗(yàn)環(huán)境境，可保保證實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物健健康和質(zhì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)化，可可保障實(shí)實(shí)驗(yàn)研究究獲得正正確的結(jié)結(jié)果。合合乎標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)的環(huán)境境，不僅僅為實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動物及及動物實(shí)實(shí)驗(yàn)工作作者提供供適宜的的條件，，維持實(shí)實(shí)驗(yàn)動物物等級標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)，而而且是保保障工作作人員身身體健康康，使他他們不受受危害因因素傷害害的需要要。12/29/202256一、噪聲測測定1．儀器普通噪聲計(jì)計(jì)、積分型型噪聲計(jì)。。2．測定方方法分靜態(tài)和動動態(tài)：靜態(tài)態(tài)為在動物物飼養(yǎng)前，，所有系統(tǒng)統(tǒng)正常運(yùn)轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)時(shí)檢測；；動態(tài)為飼飼養(yǎng)動物后后，在正常常飼養(yǎng)條件件下檢測。。通常在潔凈凈室無人、、無動物，，空調(diào)凈化化系統(tǒng)正常常運(yùn)行的情情況下測定定潔凈室的的噪聲，測測定點(diǎn)選擇擇在被測環(huán)環(huán)境的中央央，如房間間大于15m2，可選擇兩兩個(gè)或兩個(gè)個(gè)以上的測測定點(diǎn)，距距地面1m。12/29/202257二、照度測測定1．儀器便攜式照度度計(jì)。2．測定方方法測定者需穿穿著黑色衣衣服，避免免反射光影影響測定結(jié)結(jié)果。測定定前開啟所所有的照明明設(shè)備，測測定時(shí)以距距墻壁1m以上、離離地面85cm處的的平面照明明度為準(zhǔn)。。每隔1.0～2.0m選擇擇一個(gè)測量量點(diǎn)，每點(diǎn)點(diǎn)測3次，，取平均值值，單位為為lx。12/29/202258三、空氣落落下細(xì)菌測測定空氣落下菌菌數(shù)測定應(yīng)應(yīng)在實(shí)驗(yàn)動動物設(shè)施經(jīng)經(jīng)消毒滅菌菌，空調(diào)凈凈化系統(tǒng)正正常運(yùn)行48h后進(jìn)進(jìn)行。1．試劑直徑9cm的血液瓊瓊脂培養(yǎng)基基。2．測定方方法在無動物的的狀態(tài)下，，每5～10m2放置一個(gè)直直徑9cm的血液瓊瓊脂培養(yǎng)基基，敞開皿皿蓋暴露30min，蓋上皿皿蓋，置于于37℃培培養(yǎng)48～～72h后后，計(jì)算培培養(yǎng)皿內(nèi)菌菌落數(shù)。12/29/202259四、空氣潔潔凈度測定定在動物飼養(yǎng)養(yǎng)前，空調(diào)調(diào)凈化系統(tǒng)統(tǒng)運(yùn)行48h后進(jìn)行行。1、檢測儀儀器塵埃粒子計(jì)計(jì)數(shù)器。2、方法亂流潔凈室室面積不大大于50m2的布置5個(gè)個(gè)測點(diǎn)，每每增加20～50m2應(yīng)增加3～～5個(gè)測點(diǎn)點(diǎn)。每個(gè)測測定點(diǎn)連續(xù)續(xù)測定3次次。測定時(shí)時(shí)100級級凈化室的的采樣量每每分鐘不少少于1L，，1000級以上的的凈化室的的采樣量每每分鐘不小小于0.3L。層流流潔凈室取取各測定點(diǎn)點(diǎn)最大值；；亂流潔凈凈室取潔凈凈室各測點(diǎn)點(diǎn)的平均值值作為實(shí)測測結(jié)果。12/29/202260五、相鄰鄰潔凈區(qū)區(qū)靜壓差差測定1．儀器器微壓計(jì)，，最小刻刻度為1.0Pa。2．測定定方法測定順序序一般由由低壓到到高壓，，測定前前將需要要測定壓壓差的兩兩個(gè)區(qū)域域封閉，，關(guān)閉所所有的門門。測定定時(shí)將測測定用的的膠管穿穿過墻上上或門上上預(yù)留的的孔洞進(jìn)進(jìn)入室內(nèi)內(nèi)(穿膠膠管的孔孔洞必須須密封，，設(shè)置在在離墻面面不遠(yuǎn)處處垂直氣氣流的方方向，且且周圍無無阻擋物物、氣流流干擾小小的區(qū)域域)。s112/29/202261六、氣流流方向和和速度測測定1．儀器器發(fā)煙管、、熱球式式電風(fēng)速速儀或數(shù)數(shù)字顯示示式風(fēng)速速儀。2．．測測定定方方法法測定定氣氣流流方方向向一一般般用用煙煙霧霧法法，，也也可可用用紙紙條條測測定定法法。。測測定定氣氣流流速速度度，，將將風(fēng)風(fēng)速速儀儀放放置置在在有有代代表表性性的的飼飼養(yǎng)養(yǎng)實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動動物物籠籠具具的的位位置置進(jìn)進(jìn)行行