項(xiàng)目二任務(wù)一紫外-可見分光光度檢測(cè)技術(shù)2課件

項(xiàng)目二光分析法

任務(wù)一紫外—可見分光光度法2

教學(xué)目標(biāo)知識(shí)目標(biāo)：掌握紫外-可見分光光度法的結(jié)構(gòu)和定量方法。能力目標(biāo)：能夠應(yīng)用定量方法定量含量，能夠掌握儀器的結(jié)構(gòu)功能。素質(zhì)目標(biāo)：初步具有一定的計(jì)算能力；具有一定的數(shù)據(jù)分析能力。教學(xué)內(nèi)容一、紫外-可見分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)二、紫外-可見分光光度計(jì)的分類三、顯色反應(yīng)與顯色劑四、紫外-可見分光光度計(jì)的定量方法1.1光源：可見分光光度計(jì)都以鎢燈（320~1000nm）作光源。鎢燈是6~12V的鎢絲燈泡，儀器裝有聚光透鏡使光線變成平行光，為保證光強(qiáng)度恒定不變，配有穩(wěn)壓電源。紫外—可見分光光度計(jì)除有鎢燈外其光源還有氫燈，氫燈發(fā)射150~400nm波長的光，適用于200~400nm波長范圍的紫外分光光度法測(cè)定。氙燈氫燈鎢燈

1.2單色器：其作用是將光源輻射的復(fù)合光分解成按波長順序排列的單色光。包括狹縫和色散元件及準(zhǔn)直鏡三部分。色散元件用棱鏡或光柵制成。玻璃棱鏡的色散波段一般在360~700nm，主要用于可見分光光度計(jì)中。石英棱鏡的色散波段一般在200~1000nm，可用于紫外—可見分光光度計(jì)中。光柵其特點(diǎn)是工作波段范圍寬，適用性強(qiáng)，對(duì)各種波長色散率幾乎一致。棱鏡：依據(jù)不同波長光通過棱鏡時(shí)折射率不同單色器入射狹縫準(zhǔn)直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫λ1λ2800600500400

光柵：在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。M1M2出射狹縫光屏透鏡平面透射光柵光柵衍射示意圖原理：利用光通過光柵時(shí)發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光.1.4檢測(cè)器：把透過吸收池后透射光強(qiáng)度轉(zhuǎn)換成電信號(hào)的裝置。檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)具有靈敏度高、對(duì)透過光的響應(yīng)時(shí)間短、且響應(yīng)的線性關(guān)系好，對(duì)不同波長的光具有相同的響應(yīng)可靠性。在分光光度計(jì)中常用光電管和光電倍增管等做檢測(cè)器。光電倍增管其靈敏度要比光電管約高200倍。二、分光光度計(jì)的類型(1).選擇性好，干擾少。(2).靈敏度高，ε大。(3).顯色后的物質(zhì)組成恒定，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。(4).有色物質(zhì)與顯色劑顏色差別大。顯色劑在測(cè)定波長處無明顯吸收,Δmax>60nm;M+RMR3.1對(duì)顯色反應(yīng)的要求

3.2干擾及消除方法

共存離子有色或顯色劑反應(yīng)生成有色物質(zhì)干擾測(cè)定，需設(shè)法消除或提前分離之。消除方法有：(1)、控制酸度(2)、選擇適當(dāng)?shù)难诒蝿貉诒蝿┎慌c待測(cè)組分反應(yīng)；掩蔽劑本身及掩蔽劑與干擾組分的反應(yīng)產(chǎn)物不干擾待測(cè)組分的測(cè)定。例：測(cè)定Ti4＋，加入H3PO4掩蔽劑使Fe3+(黃色)成為［Fe(PO４)2］3-(無色)，消除Fe3+的干擾。采用適當(dāng)?shù)姆蛛x方法預(yù)先除去干擾物質(zhì)。(3).利用惰性配合物(4).選擇適宜的波長,避開干擾物的最大吸收,配制適當(dāng)?shù)膮⒈纫海蓴_組分的影響。(5).分離干擾離子采用適當(dāng)?shù)姆蛛x方法預(yù)先除去干擾物質(zhì)四、測(cè)量條件的選擇

4.1波長的選擇：應(yīng)選用max作為入射波長4.2參比溶液的選擇：將被測(cè)溶液盛放在吸收池中，分光光度計(jì)光路如圖所示：試樣中其他成分吸收溶劑和試劑吸收吸收池對(duì)光的反射和吸收A=lg(I0/It)A（樣品）=A（MR）+A（干擾）+A（吸收池）A（參比）=A（干擾）+A（池）=0

為了消除由于比色皿、溶劑及試劑對(duì)入射光的反射和吸收等帶來的誤差，需扣除非待測(cè)組分的影響——使用參比溶液

參比溶液：A（樣品）-A（參比）=

A（MR）=kbc

5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線法其方法是先配制一系列濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用選定的顯色劑進(jìn)行顯色，在一定波長下分別測(cè)定它們的吸光度A。以A為縱坐標(biāo)，濃度c為橫坐標(biāo)，繪制A-c曲線，若符合朗伯—比爾定律，則得到一條通過原點(diǎn)的直線，稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后用完全相同的方法和步驟測(cè)定被測(cè)溶液的吸光度