細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課件：同 種 細(xì) 胞 融 合_第1頁
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文檔簡介

同種細(xì)胞融合細(xì)胞融合定義又稱體細(xì)胞雜交，是指兩個或多個相同或不同細(xì)胞，通過培養(yǎng)和誘導(dǎo)，發(fā)生膜融合形成單個細(xì)胞的過程。分類同種融合：基因型相同的細(xì)胞進(jìn)行融合；異種融合：來自不同基因型的細(xì)胞進(jìn)行融合；自發(fā)融合：同種細(xì)胞在培養(yǎng)時2個靠在一起的細(xì)胞自發(fā)合并；誘發(fā)融合：異種間的細(xì)胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合。誘導(dǎo)因素生物方法（病毒）化學(xué)方法（聚乙二醇PEG）物理方法（電激和激光）。聚乙二醇誘導(dǎo)機(jī)理PEG具有強(qiáng)烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白質(zhì)的作用；在不同種類的動物細(xì)胞混合液中加入聚乙二醇，膜脂分子排列發(fā)生改變，細(xì)胞發(fā)生凝集；在稀釋和除去聚乙二醇時，質(zhì)膜恢復(fù)原有的有序結(jié)構(gòu)，在恢復(fù)過程中即可誘導(dǎo)相接觸的細(xì)胞發(fā)生融合。細(xì)胞計數(shù)板細(xì)胞濃度=(4個大格細(xì)胞數(shù)/4)×稀釋倍數(shù)×104/mL細(xì)胞計數(shù)室細(xì)胞計數(shù)的操作步驟擦凈細(xì)胞計數(shù)室備用取細(xì)胞懸液滴于有蓋玻片的細(xì)胞計數(shù)板斜面上，使液體充滿計數(shù)室，計數(shù)室內(nèi)有氣泡時，取下蓋片，重新滴加調(diào)整細(xì)胞原液濃度為107個/ml計算，取108個細(xì)胞細(xì)胞原液濃度=(4個大格細(xì)胞數(shù)/4)×稀釋倍數(shù)×104/mL取10ūl細(xì)胞原液加入990ūl生理鹽水雞紅細(xì)胞懸液1mL，加4mLHank’s液，1000r/min，5分鐘，棄上清。沉淀加0.5mLHank’s液打散（原液）本次實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線108個細(xì)胞5mlHank’s液+1000rpm，5min小心棄上清，彈指法沉淀打散37度水浴中，將1ml50%PEG加入1min內(nèi)37度邊加邊輕輕搖動緩慢滴加9mlHank’s液靜置3min37度水浴靜置5min懸起1000rpm，5min棄上清，沉淀打散，制片觀察融合率=融合細(xì)胞的全部核數(shù)/全部細(xì)胞核數(shù)×100%在高倍鏡下隨機(jī)計數(shù)200個細(xì)胞(包括融合的與未融合的細(xì)胞)，以融合細(xì)胞(含兩個或兩個以上的細(xì)胞核的細(xì)

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