酰胺藥相關(guān)的耐藥性革蘭陽性球

與B－內(nèi)酰胺藥相關(guān)的耐藥性革蘭陽性球菌 影響MRSA，MRSCoN PBP 所有B-內(nèi)酰胺MRE PBP PRSP PBP流感嗜血桿菌 青霉素酶卡它莫拉菌 青霉素酶(PRO-1,2)腸桿菌科的耐藥性肺炎克雷伯菌,大腸桿菌 ESBLs3,4代頭孢…腸桿菌，枸櫞酸桿菌 BushI型酶 3代頭孢…….非發(fā)酵糖的革蘭陰性桿菌嗜麥芽窄食單孢菌 通透性，酶綠膿桿菌 通透性，酶不動桿菌 酶，通透性2023/1/131腸桿菌科的耐藥性

主要菌 主要酶類 次主要酶肺炎克雷伯菌,大腸桿菌 ESBLs BushI型酶腸桿菌，枸櫞酸桿菌 BushI型酶 ESBLs2023/1/132ESBLs現(xiàn)狀

/studies/webt.htmTEM3-90(IRT16種)

71種SHV2-31(IRS1種)

28種OXA10-3121種CTX-M1-17PER:2IEB:2GES:1BES:1SPO:1OXY:22023/1/133B-內(nèi)酰胺酶的演變特征

TEM1

TEM2

TEM3Gly39Ser238Lys39Gly238Gly104lys1042023/1/134每一點(diǎn)變化可能改變底物的親和力 噻肟 他啶 安曲南TEM-1 0.125 0.25 0.125TEM-3 32 64 16TEM-7 0.5 64 2CTX-M11 64 2 322023/1/135ESBLTREESHV-2TEM-3 PSE

SME NME KOXY

CTX-M-1 TOHO-1 CITD-1 YENT

BLIP CAKCC ROB-1 PC-1

PER-1 PER-2 CBPA CBLA VEB-1 CPXA中國，臺灣日本泰2023/1/136ESBLs現(xiàn)狀

/studies/webt.htmTEM3-90(IRT16種)71種SHV2-31(IRS1種)

28種OXA10-3121種CTX-M1-17PER:2IEB:2GES:1BES:1SPO:1OXY:22023/1/137SHV-8SHV-1SHV-10SHV-11SHV-2aSHV-12SHV-2SHV-5SHV-?SHV-9SHV-7SHV-?SHV-4SHV-3SHV-61791793513054or140353524024020520524054or1408or438or43238238SHV突變相關(guān)圖JHeritageJAC，1999，44，309－3182023/1/138SHV酶族的地理分布

JAC，1999，44，309－318B-酶 首例 年 有報(bào)告的國家 pISHV-1 瑞士 1974 7.6SHV-2 德國 1983 中國,丹麥,法國,西班牙,南非 7.6 瑞士,英國 SHV-2a 德國 1986 朝鮮,瑞士 7.6SHV3 法國 1986 英國,美國 7.0SHV4 法國 1987 比利時(shí),葡萄牙,英國,美國 7.8SHV5 智利 1987 澳洲,奧地利,丹麥,埃及,法國,希臘 8.2

意大利,波蘭,南非,臺灣,英國,美國SHV6 法國 1991 7.6SHV7 美國 1993 7.6SHV8 美國 1990 7.6SHV9,10 希臘 1996,97 8.2SHV11 瑞士 1997 7.6SHV12 瑞士 1997 阿爾幾利亞，朝鮮 8.2SHV28 中國浙江 2000 2023/1/139ESBLs現(xiàn)狀

/studies/webt.htmTEM3-90(IRT16種)71種SHV2-31(IRS1種)28種OXA10-3121種CTX-M1-17PER:2IEB:2GES:1BES:1SPO:1OXY:22023/1/1310CTX－M族 亞組1 亞組2 亞組3 亞組4

CTX-M-1 CTX-M-2 CTX-M-9 CTX-M-8 MEN-1 TOHO-1 CTX-M-13

CTX-M-3CTX-M-4 CTX-M-14 CTX-M-10 CTX-M-5 CTX-M-15

CTX-M-11CTX-M-6 CTX-M-72023/1/1311CTX-M系列的發(fā)現(xiàn)歷史(美國基因庫資料)發(fā)現(xiàn)年, 地址, 發(fā)現(xiàn)菌 pI 參考文獻(xiàn)CTX-M-1 1990,

德國, E.coli 8.9 11Men-1 1992,意大利, K.oxytoca 8.9 9CTX-M-2 1992,

阿根廷, S.typhimurium 7.9 10Toho-1 1995,

日本 E.coli 7.8 13CTX-M-3 1998,

波蘭華沙 C.reundii 8.4 8CTX-M-4 1998,

俄羅斯 S.typhimurium 8.4 12CTX-M-5 1998,拉特維亞 S.typhimurium 8.8 16CTX-M-6 1998,西臘 S.typhimurium 8.4 17CTX-M-7 1998,

西臘 S.typhimurium 8.4 17Toho-2 1998,

日本 E.coli 7.7 14CTX-M-8 2000,

布魯塞爾 E.Cloacae 7.6 18CTX-M-9 2000,

西班牙 E.coli 8.0 3CTX-M-11 2000,北京協(xié)和

K.pneumoniae 8.0 19CTX-M-13-15 2001,廣州人民

K.pneumoniae 8.0 202023/1/1312ESBL在東南亞1999TEM-52，SHV-2a,12ECOKL-南韓1997TEM-26CTX-M5 ECOKL-日本

SHV-2,12,241999SHV-2a,5,12VEB-1,ECO,KL- 泰國2000T-10CTX-M-3 ECO,KL- 臺灣

SHV-2,5,12,25,261992SHV-2，5，12，EN－,KL-, 中國2000CTX-M-11，13,14,15KL-,ECO

中國2000

SHV-28 中國2023/1/1313不同細(xì)菌中的ESBL出現(xiàn)特點(diǎn)P.Hawkey

大腸桿菌 肺克 腸桿菌屬 枸櫞酸桿菌 1 1 1 CTX-M-13 2 CTX-M-13,TEM1B 2 CTX-M-14,TEM1B 1 1 1 CTX-M-14,SHV12 2 CTX-M-15,SHV11,TEM1B 1 1 SHV12,TEM1B2023/1/1314如何測出ESBLs頭孢噻肟＋克拉維酸頭孢他啶＋克拉維酸頭孢噻肟阿莫西林＋克拉維酸頭孢噻肟不同程度水解ESB體外可被棒酸抑制但I(xiàn)RT可抑制棒酸作用出現(xiàn)非TEM

非SHV酶MIC＝8MIC＝12023/1/1315抗生素 MIC（μg/ml） 敏感性

MIC50 MIC90 平均MIC R% I% S%頭孢他啶 0.25 0.5 0.369 0 0 100頭孢噻肟 0.25 0.25 0.302 0 0 100頭孢曲松 0.25 0.25 0.298 0 0 100頭孢吡肟 0.25 0.25 0.263 0 0 100氨曲南 0.25 0.25 0.278 0 0 100頭孢哌酮/舒巴坦 0.25 1 0.338 0 0 100哌拉西林/他唑巴坦 2 4 2.3 6 0 94亞胺培南 0.25 0.25 0.253 0 0 100頭孢美唑 0.5 2 0.871 0 0 100環(huán)丙沙星 0.062 2 0.141 8 0 92慶大霉素 1 1 1 2 0 9852株ESBL陰性肺炎克雷伯菌的耐藥情況2023/1/1316抗生素 MIC（μg/ml） 敏感性

MIC50 MIC90 平均MIC R% I% S%頭孢他啶 4 256 4.9 14 0 86頭孢噻肟 32 128 34.8 39 36 25頭孢曲松 128 256 62.2 68 7 25頭孢吡肟 1 4 1.1 0 7 93氨曲南 16 64 13.5 36 32 32頭孢哌酮/舒巴坦 8 32 7.8 7 7 86哌拉西林/他唑巴坦 2 4 2.2 0 4 96亞胺培南 0.25 0.25 0.279 0 0 100頭孢美唑 1 128 2.1 11 0 89環(huán)丙沙星 0.06 64 0.414 13 1 86慶大霉素 1 512 3.7 8 0 9228株ESBL陽性肺炎克雷伯菌的耐藥情況2023/1/131728株ESBL陽性Kpn中兩種抗生素的MIC比較25612864321684210.50.3

1 2 2 1 1 1 1 2 2 1 4 2 2 1 1 1

1

1

1

.3 .5 1 2 4 8 16 32 64 128256頭孢噻肟mg/L頭孢吡肟

mg/LRR2023/1/131828株ESBL陽性Kpn中兩種抗生素的MIC比較25612864321684210.50.3

1 1 1 4 2 2 3 3 3 2 1 1

2

1

.3 .5 1 2 4 8 16 32 64 128256頭孢噻肟mg/L頭孢他啶

mg/LRR2023/1/1319大腸桿菌＋肺炎克雷伯菌頭孢他啶mm頭孢噻肟2023/1/1320大腸桿菌＋肺炎克雷伯菌頭孢曲松頭孢他啶mm2023/1/1321

頭孢他啶 頭孢噻肟 等電點(diǎn)pI值 棒酸抑制結(jié)合子CK6 4 64 8.8

+結(jié)合子CK7 2 64 5.4、7.6、8.8

+結(jié)合子CK8 1 16 8.8

+結(jié)合子CK10 1 32 7.6、8.8

+結(jié)合子CK12 2 64 7.8、8.8

+結(jié)合子CK15 2 32 7.6、8.8

+結(jié)合子CK16 0.5 16 7.6、8.8

+結(jié)合子CK18 1 64 7.8、8.8

+結(jié)合子CK21 2 64 5.4、7.6、8.8

+結(jié)合子CK23 2 64 5.4、7.6、8.8

+接合子的MIC值和等電點(diǎn)的結(jié)果(1)2023/1/1322

頭孢他啶 頭孢噻肟 等電點(diǎn)pI值 棒酸抑制結(jié)合子CK24 1 32 8.8

+結(jié)合子CK25 1 32 7.6、8.8

+結(jié)合子CK26 2 64 7.6、8.8

+結(jié)合子CK4 4 32 5.4、6.3 +結(jié)合子CK14 1 64 5.4、7.6、7.8 +結(jié)合子CK22 1 32 7.6、7.8 +結(jié)合子CK27 2 64 5.4 +結(jié)合子CK13 4 0.25 5.4 +結(jié)合子CK17 32 0.25 5.4 +結(jié)合子CK20 1 0.25 5.4（條帶很淡） +接合子的MIC值和等電點(diǎn)的結(jié)果(2)2023/1/1323ESBLs及AmpC的等電點(diǎn)差別等電點(diǎn)

TEMSHVOXACTX-MAmpC

ESBLs

2023/1/1324A膠B膠等電聚焦鑒別質(zhì)粒介導(dǎo)的

ESBL和持續(xù)高產(chǎn)AmpC酶AmpC對照2023/1/1325一種新的對頭孢噻肟高活性

pI偏堿性的ESBL到當(dāng)時(shí)為止，CTX-M系列的ESBL有10個(gè)根據(jù)基因序列，分為3組組內(nèi)同源性很高，97%以上組間有80%的同源性

已知的CTX-M系列ESBL 同源性1組 1，3,10,11 99%2組 2，4，5,6,7 97%3組 9,13,14,15 97%4組 82023/1/1326為克隆ESBL耐藥基因所設(shè)計(jì)的引物引物名 引物序列 位置TEM5’ 5’-GTATCCGCTCATGAGACAATAACCC-3’ (-60至-36) TEM3’5’-GGCACCTATCTCAGCGATCTGTC-3’ (818至840）SHV5’ 5’-GGGTTATTCTTATTTGTCGC-3’ (-67至-48）SHV3’ 5’-TTAGCGTTGCCAGTGCTC-3’ (844至861）CTX51’ 5’-ATGGTTAAAAAATCACTGCGCC-3’ (1至22）CTX52’ 5’-ATGATGACTCAGAGCATTCG-3’ (1至20）CTX53’ 5’-CGGCCTGTATTTCGCTGTTG-3’ (61至80）CTX3’ 5’-TGGGTTACGATTTTCGCCGC-3’ (853至872）CTX51’系1組的5’端通用引物CTX52’系2組的5’端通用引物CTX53’系3組的5’端通用引物2023/1/1327

氨基酸的位點(diǎn)

39 80 117 122 143 278 289CTX-M-1 E V D L S D NCTX-M-3 E A N L A D D

CTX-M-N G A N P A H ND*縮寫：A=丙氨酸、D=天冬氨酸、E=谷氨酸、G=甘氨酸、H=組氨酸、L=亮氨酸、

N=天冬酰胺、P=脯氨酸、S=絲氨酸V=纈氨酸CTX-M-N與CTX-M-1、CTX-M-3突變點(diǎn)的比較2023/1/1328產(chǎn)ESBL的臨床株的流行情況 (王輝工作)細(xì)菌 菌數(shù) ESBL(+)株 發(fā)生率(%)E.coli 44 5 11.4K.pneumoniae 43 17 39.5E.cloacae 50 3 6.0C.freundii 25 2 8.0總計(jì) 162 27 16.72023/1/1329結(jié)合子PCR和序列分析 (王輝工作)結(jié)合子 供體b pI CTX-M3-PCR TEM-PCR

序列分析a 序列分析a2T eco 5.4,8.8 CTX-M3 ND15T kpn 5.4,8.6 CTX-M3 ND25T ecl 5.4,7.0,7.2,8.2,8.8

CTX-M3 ND26T cfr 5.4,8.8 CTX-M3 ND1T eco 5.4,7.6,8.3

ND TEM-1b:eco=E.coli,kpn=K.pneumoniae,ecl=Enterobactercloacae,cfr=Citrobacterfreundiia:ND=Notdone

2023/1/1330大腸桿菌為什么高度耐環(huán)丙沙星30株基因分析

（王輝工作）旋轉(zhuǎn)酶突變：gyrA

30/30至少2個(gè)突變點(diǎn)，parC 30/30有一個(gè)突變點(diǎn)gyrB 6/6無突變點(diǎn)逆泵marAsoxS 無過量表達(dá)AcrAB 18/30(60%)

有過量表達(dá)膜蛋白OmpF 30/30缺無，減少吸收2023/1/1331腸桿菌科的耐藥性

主要菌 主要酶類 次主要酶肺炎克雷伯菌,大腸桿菌 ESBLs BushI型腸桿菌，枸櫞酸桿菌 BushI型 ESBLs2023/1/1332產(chǎn)氣腸桿菌中的ESBLs(1)

AAC，1998，42(3):596-600在抗生素選擇性壓力下，易產(chǎn)生穩(wěn)定高產(chǎn)染色體

1型酶近來證實(shí)本菌也可產(chǎn)生質(zhì)粒型ESBLs從美國Virginia州某教學(xué)醫(yī)院分離出31株產(chǎn)氣腸桿菌，29株為SHV4，1株SHV3，1株SHV5，這些質(zhì)?？赊D(zhuǎn)移至大腸桿菌這31株菌對頭孢吡肟，亞胺培南均敏感細(xì)菌室也要查腸桿菌屬中的ESBL，并報(bào)告藥敏結(jié)果2023/1/1333許多陰溝、產(chǎn)氣腸桿菌也產(chǎn)ESBL

JClinMicrobiol.2000;38(2):542,希臘陰溝腸桿菌中18/56(25%)產(chǎn)氣腸桿菌中7/12(58%)包含cazR,ctxR,croR,ptzR,4代頭孢R不同株耐藥譜不同2023/1/1334JournalofClinicalMicrobiologyJuly,1999Volume37,(7):2165-2169

法國23家醫(yī)院：123株產(chǎn)氣腸桿菌21家有流行的克隆株：ESBLTEM-242023/1/1335臺灣

JCM2000，38:4320-51999年1－9月菌株1999年1－9月，1210株大腸桿菌查18株產(chǎn)ESBLs、耐CAZ、CTX、FOX菌數(shù)目 酶種類10 CTX-M-3、TEM-12 SHV-12、TEM-11 SHV-5、TEM-14 未知、TEM-11 TEM-102023/1/1336吳偉元在協(xié)和收集的陰溝腸桿菌中3株質(zhì)粒上載有CTX-M-32023/1/1337討論產(chǎn)ESBL的耐藥是目前抗生素面臨的挑戰(zhàn)之一監(jiān)測產(chǎn)ESBL菌株對臨床治療的重要性一種新的CTX-M型ESBL2023/1/1338AmpC的發(fā)展現(xiàn)狀

當(dāng)調(diào)節(jié)基因發(fā)生突變，其作用受到抑制，對3代頭孢產(chǎn)生高水平、持續(xù)的去遏制的耐藥80年代前，都報(bào)道為染色體型80年代后，有質(zhì)粒型的，增加了傳播力AmpC種類也在不斷增加。2023/1/1339協(xié)和醫(yī)院查24株臨床株陰溝腸桿菌中的SSBLs

高產(chǎn)AmpC

+

- + 5 4ESBL - 14 18株E.cloacae(陰性對照)均為陰性2023/1/1340吳偉元的工作6株陰溝腸桿菌持續(xù)高產(chǎn)染色體AmpC酶的原因是基因組中AmpD基因發(fā)生了突變有一株形成無意義密碼子終止了蛋白質(zhì)的形成2023/1/1341AmpC樹

1998年總結(jié)FOX-1BIL-1LAT-1陰溝腸桿菌MIR-1粘質(zhì)沙雷菌AmpCCMY-1MOX-1綠膿桿菌

AmpCAmpC大腸桿菌AmpC枸櫞酸桿菌AmpCCMY-2I II IIICMY-1(朝) LAT1-4 MIR-1(美)CMY8-11(臺,中國) CMY2,4-,7 ACT-1(美)MOX-1(日本) BIL1ACT-12023/1/1342質(zhì)粒AmpC的最新分類及流行

I II III CMY-1(朝)

LAT1-4 MIR-1(美)

CMY8-11(臺,中國)

CMY2,4-7 ACT-1(美,中國)

MOX-1(日本)

BIL12023/1/1343臺灣

JCM2000，38:4320-51999年1－9月菌株1999年1－9月，1210株大腸桿菌查18株產(chǎn)AmpC、耐CAZ、CTX、FOX菌數(shù)目 酶種類9 未知、TEM-14 CMY-2、TEM-13 未知、TEM-11 未知、CMY-2、TEM-11 CMY-2、CTX-M-3、TEM-12023/1/1344美國：SHV-5[ESBL]

、BIL-1[AMPC]

在同一質(zhì)粒上ESBL＋質(zhì)粒AmpC=SSBLSuperSpectrumBetaLactamases2023/1/1345SSBL鑒定有一定困難，

常規(guī)難以進(jìn)行分子水平的方法

CDCTenoverJCM1999,37:4063-703ESBL+1AmpC一株菌美國某城市、38個(gè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)加測試假陰性8個(gè)(21％)假陽性7個(gè)(18％)2023/1/1346陳軼蘭的工作:在大腸桿菌中的12號株,發(fā)現(xiàn)可轉(zhuǎn)移的大質(zhì)粒中含有ACT-1ESBL其意義是BushI型AMP-C基因也可存在與其他腸桿菌科菌中2023/1/1347AmpC樹

1998年總結(jié)FOX-1BIL-1LAT-1陰溝腸桿菌MIR-1粘質(zhì)沙雷菌AmpCCMY-1MOX-1綠膿桿菌

AmpCAmpC大腸桿菌AmpC枸櫞酸桿菌AmpCCMY-2I II IIICMY-1(朝) LAT1-4 MIR-1(美)CMY8-11(臺,中國) CMY2,4-,7 ACT-1(美)MOX-1(日本) BIL1ACT-12023/1/1348產(chǎn)AmpC酶菌的等電點(diǎn)和藥敏

JCM2000,38:179310株產(chǎn)AmpC酶菌等電點(diǎn) 9.0-9.1對頭孢吡肟MIC90： 0.5 mg/L對亞胺培南MIC90： 0.13 mg/L2023/1/1349頭孢吡肟對Bush1組B-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定. Km,對頭孢菌素的親和力[uM]細(xì)菌 頭孢吡肟 頭孢他啶 頭孢噻肟陰溝腸桿菌 58-180 3-17 0.05-0.2弗勞地枸櫞酸桿菌屬 159 0.9-1.2 --綠膿桿菌 87－941 3－16 0.03Fung-Tomc,clinicalMicroiologyNewsletter1997;19:129-1362023/1/1350頭孢西汀E