化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)第一節(jié)雄性生殖毒性一、精子子的生成過(guò)程精原細(xì)胞→初級(jí)精母細(xì)胞→次級(jí)精母細(xì)胞→精子細(xì)胞→精子二、毒物對(duì)雄性生殖影響

1、對(duì)睪丸生精細(xì)胞的影響；

2、對(duì)內(nèi)分泌功能的影響；

3、對(duì)性功能和生殖功能的影響。

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)三、雄性生殖毒性的檢測(cè)方法

1、精子生成分析

①精子計(jì)數(shù)；②精子形態(tài)觀測(cè)；③精子狀態(tài)分析試驗(yàn)2、精子穿透試驗(yàn)判斷精子的受精能力。3、睪丸中標(biāo)酶活性的測(cè)定主要檢測(cè)乳酸脫氫酶X（LDH-X)、山梨醇脫氫酶、6－磷酸葡萄糖脫氫酶的變化，并結(jié)合精子生成過(guò)程中各階段細(xì)胞的功能和形態(tài)學(xué)改變，來(lái)探明其毒性作用的部位和機(jī)理。4、體外試驗(yàn)主要將與生殖相關(guān)的細(xì)胞在體外條件下進(jìn)行培養(yǎng)，并與受試外源化學(xué)物接觸，觀測(cè)其與生殖相關(guān)細(xì)胞的變化。化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)5、雄性激素檢測(cè)主要檢測(cè)卵泡激素（FSH）、黃體激素（LH）和雄性激素。6、顯性致死試驗(yàn)接受受試化學(xué)物的雄性毒物與未經(jīng)受試物處理的雌性動(dòng)物交配，觀測(cè)雌性動(dòng)物早期胚胎死亡情況，以評(píng)價(jià)受試動(dòng)物是否對(duì)雄性動(dòng)物的生殖有損害作用。7、雄性生殖細(xì)胞遺傳毒性檢測(cè)判斷生殖細(xì)胞DNA是否受毒物損傷的一個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)。常用的方法為單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)，電泳結(jié)果呈彗星狀，說(shuō)明DNA受損，電泳結(jié)果呈條狀。8、雄性生殖毒性病理檢測(cè)化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)第二節(jié)雌性生殖毒性一、雌性生殖細(xì)胞的生成過(guò)程初級(jí)卵母細(xì)胞→次級(jí)卵母細(xì)胞→卵子二、外源化學(xué)物的雌性生殖毒性表現(xiàn)

1、對(duì)卵細(xì)胞的影響2、對(duì)內(nèi)分泌功能的影響3、其它毒性作用如對(duì)子代造成畸形、死胎、功能發(fā)育不全等。

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)三、雌性生殖毒性的檢測(cè)方法1、體外試驗(yàn)對(duì)外源化學(xué)物作用的雌性生殖部位進(jìn)行相應(yīng)的檢測(cè)。如下丘腦GnRH的合成與分泌對(duì)應(yīng)激素檢測(cè)；FSH、LH及甾體的受體進(jìn)行分析。2、動(dòng)物試驗(yàn)觀測(cè)

①發(fā)情周期的觀察②排卵的觀察③雌性激素檢測(cè)

④病理組織學(xué)檢查化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)第三節(jié)致畸試驗(yàn)化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)第三節(jié)致畸試驗(yàn)一、基本概念生殖毒性(reproductivetoxicity)

外源化學(xué)物對(duì)生殖過(guò)程的損害作用，主要包括對(duì)生殖細(xì)胞發(fā)生,卵細(xì)胞受精,胚胎形成,妊娠,分娩和哺乳過(guò)程的損害作用。評(píng)定方法即為生殖毒性試驗(yàn)。發(fā)育毒性(developmentaltoxicity)

外源化學(xué)物對(duì)胚胎發(fā)育,胎仔發(fā)育以及出生幼仔發(fā)育的損害作用。評(píng)定方法稱(chēng)為發(fā)育毒性試驗(yàn),其中主要為致畸試驗(yàn).

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)一、基本概念

發(fā)育毒理學(xué)(developmentaltoxicology)主要研究外源化學(xué)物對(duì)胚胎發(fā)育、胎仔發(fā)育以及出生幼仔發(fā)育的影響及其評(píng)定，評(píng)定方法稱(chēng)為發(fā)育毒性試驗(yàn)，其中主要為致畸試驗(yàn)。發(fā)育毒性(developmentaltoxicity)

指出生前經(jīng)父體和(或)母體接觸外源性理化因素引起的在子代到達(dá)成體之前出現(xiàn)的有害作用。具體表現(xiàn)可分為:生長(zhǎng)遲緩:即胚胎與胎仔的發(fā)育過(guò)程在外源化學(xué)物影響下，較正常的發(fā)育過(guò)程緩慢。

致畸作用:由于外源化學(xué)物干擾，活產(chǎn)胎仔胎兒出生時(shí)，某種器官表現(xiàn)形態(tài)結(jié)構(gòu)異常。

功能不全或異常:即胎仔的生化、生理、代謝、免疫、神經(jīng)活動(dòng)及行為的缺陷或異常。

胚胎或胎仔致死作用:某些外源化學(xué)物在一定劑量范圍內(nèi)，可在胚胎或胎仔發(fā)育期間對(duì)胚胎或胎仔具有損害作用，并使其死亡。

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)畸形、畸胎和致畸物

畸形(malformation):器官形態(tài)的異常。

畸胎(terate):具有畸形的胚胎或胎仔。

致畸物或致畸原(teratogen):凡在一定劑量下，能通過(guò)母體對(duì)胚胎或胎兒正常發(fā)育過(guò)程造成干擾，使子代出生后具有畸形的化合物。

致畸試驗(yàn):評(píng)定外源化學(xué)物是否具有致畸作用的試驗(yàn)。

一、基本概念

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)畸形與變異在胚胎或胎兒出現(xiàn)器官形態(tài)結(jié)構(gòu)異常稱(chēng)為畸形。機(jī)體的形態(tài)結(jié)構(gòu)或生理功能，在同一物種的子代與親代之間或子代的個(gè)體之間，有時(shí)出現(xiàn)不完全相同的現(xiàn)象，即為變異。

一、基本概念

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)

二、發(fā)育毒性機(jī)制

1、干擾基因表達(dá)5、干擾細(xì)胞-細(xì)胞交互作用

2、基因突變與染色體畸變6、通過(guò)胎盤(pán)毒性引起發(fā)育毒理

3損傷細(xì)胞和分子水平的翻譯7、干擾母體穩(wěn)態(tài)

4、細(xì)胞凋亡

8、內(nèi)分泌干擾作用

三、發(fā)育毒性的表現(xiàn)

1、生長(zhǎng)遲緩。

2、致畸作用

3、功能不全或異常

4、胚胎或胎仔致死作用

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)四、發(fā)育毒性三階段試驗(yàn)化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)五、外源化學(xué)物發(fā)育毒性的評(píng)價(jià)

傳統(tǒng)常規(guī)致畸試驗(yàn)動(dòng)物選擇劑量分組動(dòng)物交配處理胎仔檢查結(jié)果評(píng)定致畸物以及發(fā)育毒性作用物危險(xiǎn)度評(píng)定化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)1、動(dòng)物選擇:

致畸試驗(yàn)的動(dòng)物選擇，除參照毒性試驗(yàn)中選擇動(dòng)物的一般原則，即食性和對(duì)受試物代謝過(guò)程與人類(lèi)接近，體型小，馴服，容易飼養(yǎng)和繁殖及價(jià)廉外，還應(yīng)特別注意妊娠過(guò)程較短、每窩產(chǎn)仔數(shù)較多和胎盤(pán)構(gòu)造及厚度與人類(lèi)接近等特點(diǎn)。2、劑量分組一般應(yīng)先進(jìn)行預(yù)試，目的是找出引起母體中毒的劑量。最少設(shè)3個(gè)劑量組，另設(shè)對(duì)照組。原則上最高劑量組，可以引起母體輕度中毒，即進(jìn)食量減少、體重減輕、死亡不超過(guò)10%。最低劑量組不應(yīng)觀察到任何中毒癥狀；中間劑量組可以允許母體出現(xiàn)某些極輕微中毒癥狀。其劑量與高劑量和低劑量成等比級(jí)數(shù)關(guān)系。

一般最高劑量不超過(guò)LD50的1/5～1/3，低劑量可為1／100～1／30。五、外源化學(xué)物發(fā)育毒性的評(píng)價(jià)

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)3、動(dòng)物交配處理

每組動(dòng)物大鼠或小鼠為12～20只，家兔8～12只，狗等大動(dòng)物3～4只。

將性成熟雌雄動(dòng)物按雌雄l：1或2：1比例同籠交配。每日將已確定受孕雌鼠隨機(jī)分入各劑量組和對(duì)照組。出現(xiàn)陰栓或精子之日即為受孕0日，也有人作為第1日。由于致畸作用有極為明確的敏感期，應(yīng)精確掌握動(dòng)物接觸受試物的時(shí)間，必須在器官發(fā)生期。

五、外源化學(xué)物發(fā)育毒性的評(píng)價(jià)

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)4、胎仔檢查自然分娩前1-2日將受孕動(dòng)物處死，剖腹取出子宮及活產(chǎn)胎仔，并另行記錄死胎及吸收胎。一般大鼠在受孕后第19-20天，小鼠第18-19天，家兔在第29天。下列幾方面進(jìn)行畸形檢查：外觀畸形肉眼檢查，例如露腦；肉眼檢查內(nèi)臟及軟組織畸形，例如腭裂；骨骼畸形檢查，例如顱頂骨缺損，分叉肋等。畸形檢查只限活產(chǎn)胎仔。

五、外源化學(xué)物發(fā)育毒性的評(píng)價(jià)

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)5、數(shù)據(jù)處理活產(chǎn)幼仔平均畸形出現(xiàn)數(shù):即根據(jù)出現(xiàn)的畸形總數(shù)，計(jì)算每個(gè)活產(chǎn)幼仔出現(xiàn)的畸形平均數(shù)。

畸形出現(xiàn)率:即作為畸胎的幼仔在活產(chǎn)幼仔總數(shù)中所占的百分率。

母體畸胎出現(xiàn)率

:即出現(xiàn)畸形胎仔的母體在妊娠母體總數(shù)中所占的百分率6、結(jié)果評(píng)定致畸指數(shù)越大，致畸作用越強(qiáng)，反之越小。一般認(rèn)為致畸指數(shù)10以下為不致畸，10－100為致畸，100以上為強(qiáng)致畸。母體毒性與發(fā)育毒性比值，即母體最低損害作用劑量（A)與胎仔最低損害作用劑量（D)之比，比值越大，危險(xiǎn)性越高。五、外源化學(xué)物發(fā)育毒性的評(píng)價(jià)

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)7、致畸物以及發(fā)育毒性作用物危害度評(píng)價(jià)

歐共體（EEC）和經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）建議的致畸物分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。主要根據(jù)動(dòng)物試驗(yàn)和人群調(diào)查資料，具體分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：1級(jí)，已確定人類(lèi)母體接觸后可引起子代先天性缺陷；2A級(jí)，對(duì)動(dòng)物肯定致畸，但對(duì)人類(lèi)致畸作用尚未確定因果關(guān)系；2B級(jí)，動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果肯定致畸，但無(wú)人類(lèi)致畸資料；3級(jí)，尚無(wú)結(jié)論性肯定致畸證據(jù)或資料不足；4級(jí)，動(dòng)物試驗(yàn)陰性，人群中調(diào)查結(jié)果未發(fā)現(xiàn)致畸五、外源化學(xué)物發(fā)育毒性的評(píng)價(jià)

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)確定受試物是否具有致畸作用時(shí)需注意以下幾點(diǎn)：任何結(jié)果必須通過(guò)統(tǒng)計(jì)計(jì)算方法進(jìn)行劑量組與對(duì)照組對(duì)比；必須具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義才能認(rèn)為是陽(yáng)性結(jié)果。應(yīng)該掌握所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系的自然畸形發(fā)生率。致畸作用中動(dòng)物物種和品系差異較為顯著，因此要求在兩種動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。由于物種差異，對(duì)動(dòng)物不具有致畸作用的外源化學(xué)物對(duì)人是否致畸的問(wèn)題，應(yīng)格外認(rèn)真對(duì)待?；瘜W(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)發(fā)育毒性的替代試驗(yàn)

大鼠全胚胎培養(yǎng)胚胎細(xì)胞微團(tuán)培養(yǎng)小鼠胚胎干細(xì)胞試驗(yàn)發(fā)育毒性的體內(nèi)預(yù)篩試驗(yàn)(C.K.試驗(yàn))

化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)第四節(jié)繁殖試驗(yàn)

外源化學(xué)物對(duì)生殖過(guò)程作用的評(píng)定主要通過(guò)生殖毒性試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行，也稱(chēng)為繁殖試驗(yàn)。生殖毒性試驗(yàn)可以全面反映外源化學(xué)物對(duì)性腺功能、發(fā)情周期、交配行為、受孕、妊娠過(guò)程、分娩、授乳以及幼仔斷乳后生長(zhǎng)發(fā)育可能發(fā)生的影響。

評(píng)定的主要依據(jù)是交配后母體受孕情況（受孕率）、妊娠過(guò)程情況（正常妊娠率）、子代動(dòng)物分娩出生情況（出生存活率）、授乳哺育（哺育成活率）以及斷奶后發(fā)育情況等。化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)試驗(yàn)方法原則受試動(dòng)物：性成熟大鼠、小鼠或家兔

劑量分組:一般設(shè)立三個(gè)劑量組（至少兩個(gè)劑量組）和一個(gè)對(duì)照組染毒途徑:動(dòng)物接觸受試物的方法應(yīng)參照人類(lèi)實(shí)際接觸途徑動(dòng)物數(shù):每組雌雄各16到20只，或雌16到20只，雄8到10只

第四節(jié)繁殖試驗(yàn)化學(xué)毒物的生殖毒性食品毒理學(xué)試驗(yàn)方法

:三代兩窩

第四節(jié)繁殖試驗(yàn)F３bF３aF１bF２bF２aF１aF０（斷奶或出生８周）

給予受試物８到１２周第一次交配第二次交配觀察三個(gè)月，喂飼普通飼料，觀