實(shí)驗(yàn)四血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳

實(shí)驗(yàn)四血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳目的

1、掌握電泳的基本原理,了解其他電泳類型

2、掌握電泳的基本操作水產(chǎn)示范中心原理醋酸纖維薄膜電泳(CAME)是以醋酸纖維薄膜(CAM)作支持物的一種區(qū)帶電泳技術(shù)將血清樣品點(diǎn)樣于醋纖膜上，在pH8．6的緩沖液中電泳時(shí)，血清蛋白質(zhì)均帶負(fù)電荷移向正極。由于血清中各蛋白組分等電點(diǎn)不同而致表面凈電荷量不等，加之分子大小和形狀各異，因而電泳遷移率不同，彼此得以分離。電泳后，CAM經(jīng)染色和漂洗，可清晰呈現(xiàn)清蛋白、α1、α2、β、γ—球蛋白5條區(qū)帶。水產(chǎn)示范中心器材1．醋酸纖維薄膜(8X2mm)

2．點(diǎn)樣器

3．染色皿，漂洗器，鑷子

4．電泳儀：直流電源整流器，水平電泳槽

水產(chǎn)示范中心試劑1．巴比妥緩沖液(pH8.6I=0.06)：取巴比妥鈉12.76g，巴比妥1.66g，加蒸餾水加熱溶

解后稀釋至1升。2．氨基黑10B染色液：取氨基黑10B0．5g，甲醇50ml，冰醋酸l0ml，加水至100ml。3．漂洗液：95％乙醇45ml、冰醋酸5ml、蒸餾水50ml

水產(chǎn)示范中心操作-準(zhǔn)備1.醋纖膜的準(zhǔn)備：距離邊緣1.5cm用鉛筆作好標(biāo)記，粗糙面用于點(diǎn)樣，然后將薄膜放進(jìn)緩沖液中，自然浸潤(rùn)，約20分鐘。2．電泳槽的準(zhǔn)備：水平放置，將緩沖液注入電泳槽中，兩邊的緩沖液高度要一致，架上濾紙橋，蓋上電泳槽蓋。3．點(diǎn)樣：將充分浸透(指膜上沒有白色斑痕)的薄膜取出，用濾紙吸去膜上過多的緩沖液，載玻片蘸取血清(約10-20p1)，垂直印在CAM粗糙面的加樣線上，待樣品全部滲入薄膜內(nèi)后，移開點(diǎn)樣器。水產(chǎn)示范中心操作-電泳4．加樣后，將薄膜條架于支架兩端，點(diǎn)樣面朝下，點(diǎn)樣側(cè)置于負(fù)極端。薄膜應(yīng)平直無彎曲，加上槽蓋平衡5分鐘后通電電泳。5．正確連接電泳槽與電泳儀對(duì)應(yīng)的正負(fù)極，開啟電源通電。電壓10-15V/cm膜總寬。電泳40~60分鐘，泳動(dòng)距離約達(dá)3.5~4.0cm時(shí)即可斷電。6．染色:電泳完畢后斷電，用鑷子取出薄膜條投入染液5-10分鐘，染色過程中不時(shí)輕輕晃動(dòng)染色皿，使染色充分。7.漂洗:從染液中取出薄膜條并盡量瀝去染液，投入漂洗皿中反復(fù)漂洗，直至背景漂凈為止。此時(shí)清晰可見5條色帶，待干。

水產(chǎn)示范中心實(shí)驗(yàn)報(bào)告將薄膜條粘貼于實(shí)驗(yàn)報(bào)告.完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告.(本實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,電泳槽內(nèi)的緩沖液不要倒掉;染色液需要回收)本周值日:第四組水產(chǎn)示范中心附錄:其他電泳實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介聚丙烯酰胺凝膠電泳-垂直電泳如SDS瓊脂糖水平電泳槽

DNA瓊脂糖電泳圖譜

雙向電泳水產(chǎn)示范中心聚丙烯酰胺凝膠電泳-垂直電泳水產(chǎn)示范中心SDS圖4.8BL21(DE3)/pET-28a-PPbe1533表達(dá)產(chǎn)物的SDS分析Figure4.8SDSanalysisofproteinsfromBL21(DE3)/pET-28a-PPbe1533注：M為marker,Lane1為BL21(DE3)/pET-28a;Lane2為BL21(DE3)/pET-28a-1533沒加IPTG;Lane3-8為BL21(DE3)/pET-28a-1533在1mMIPTG誘導(dǎo)1h,2h,3h水產(chǎn)示范中心瓊脂糖水平電泳槽