不同病理類型及分級膠質(zhì)瘤細胞MGMT基因甲基化臨床研究

不同病理類型及分級膠質(zhì)瘤細胞MGMT基因甲基化臨床研究張建偉;田玉旺;張立英;張巖;許春偉;吳繼華MGMT167MGMTMGMTWHO16786MGMT51.50％.同時,彌GBM、少突膠質(zhì)瘤、少突星形細胞瘤的甲基化率更高,差異有統(tǒng)計學意義.WHO3.5938.92％,Ⅲ級27.54％,Ⅳ29.94％.MGMTGBMPearson,MGMTWHO分級呈正相關(γ=0.674,P=0.019),與年齡呈正相關(γ=0.732,P＜0.001).結(jié)論MGMTWHO【期刊名稱】《貴州醫(yī)藥》【年(卷),期】2018(042)010【總頁數(shù)】4頁(P1162-1165)【關鍵詞】神經(jīng)膠質(zhì)瘤;MGMT;甲基化【作者】張建偉;田玉旺;張立英;張巖;許春偉;吳繼華【作者單位】陸軍總醫(yī)院腫瘤科,北京100700;陸軍總醫(yī)院病理科,北京100700;陸軍總醫(yī)院病理科,北京100700;陸軍總醫(yī)院附屬八一腦科醫(yī)院,北京100700;福建省腫瘤醫(yī)院病理科,福建福州350014;解放軍306醫(yī)院病理科,北京100101【正文語種】中文【中圖分類】R745.130%，80%[1]，當前治療腦膠質(zhì)瘤主要是手術切除與術后輔助放射性治療以及化療的綜合性治療。替莫唑胺(Temozolomid，TMZ)由于其可以有效的腦膠質(zhì)瘤病人的術后生存率依舊是不容樂觀[2]。O6-甲基鳥嘌呤-DNATMZMGMT材料與方法材料2012120155167[3]：(1)患者均符合WHO(2)術前均未實施放化療等治療手段；(3)經(jīng)膠質(zhì)瘤病理學確診。排除標準：(1)其他類型的腫瘤；(2)無手術適應證。其中WHO分級Ⅰ級5例，Ⅱ級66例，Ⅲ級46例，Ⅳ級50例。毛細胞型、彌漫型及間變性星形細胞瘤分別為6例、17例及33例；原發(fā)及繼發(fā)性膠質(zhì)母細胞瘤(GBM)分別為21例及29例；少突膠質(zhì)瘤11例，(間變性)少突星形細胞瘤各25例，13例；室管膜瘤5例；節(jié)細胞膠質(zhì)瘤7例。DNA(QIAGENDNA盒(ZymoResearch公司)，PCR產(chǎn)物純化及膠回收試劑盒(Promega公司)，甲基化酶SssI(NEB公司)，焦磷酸測序反應試劑(Biotage公司)，高速離心機(Beckman公司)，核酸蛋白質(zhì)濃度測量儀B-500(上海創(chuàng)萌生物科技有限公司)，PCR擴增儀(MJResearch公司)，PSQ96焦磷酸測序儀(Biotage公司)。方法DNADNADNA，用紫外分光DNADNA25ng/μLDNA5’-CGCACGAACTCGCCTACGTAATCCG-3’BHQ1，β-actin5‘-ACCACCACCCAACACACAATAACAAACACA-3’BHQ1。PCR反應總體系為20μL，2TaqPCRMasterMix10μL；DNA2μL；上、下游引1μL(10pmol)；探針FAM0.4μL(10pmoL)；ROX0.3μL。反應條件：945min；945min；9430s，5645s，7245s，50個循環(huán)；725min，45minHumanMethylated&Non-methylatedDNASetSPSS19.0χ2tPearsonα=0.05。結(jié)果MGMT16786MGMT51.50%。同時，彌漫型及間變性星形細胞瘤、GBM、少突膠質(zhì)瘤、(間變性)少突星形細胞瘤的甲基化率高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.051。1MGMT[n(%)n1420.00彌漫型星形細胞瘤甲基化非甲71041.18191457.58GBM61528.57GBM23679.317463.64131252.00胞瘤甲基化非甲基化8561.54室管膜瘤甲基化非甲基化1420.00節(jié)細胞膠質(zhì)瘤甲基化非甲基化1614.29WHO167WHO3.59%(6/16738.92%(65/16727.54%(46/167)，Ⅳ級29.94%(50/167WHO2。WHO56646502WHOnWHO6I117Ⅱ733Ⅲ19GBM21Ⅳ6GBM29Ⅳ2311Ⅱ725Ⅱ1313Ⅲ85Ⅱ17Ⅱ1GBM統(tǒng)計學意義(P<0.053。3各類膠質(zhì)瘤細胞標本對應患者年齡情況病理類型甲基化狀態(tài)n222.52±3.31421.62±4.67化741.45±3.74非甲基化1031.21±3.61間變性星形細胞瘤甲基化1951.48±5.341433.73±8.26GBM655.17±8.251554.93±8.46GBM2347.45±7.92633.81±4.64少突膠質(zhì)瘤甲基化731.36±3.89非甲基化431.27±5.25少突星形細胞瘤甲基化1344.56±2.02非甲基化1229.23±5.28間變性少突星形細胞瘤甲基化843.85±5.51非甲基化534.34±5.76室管膜瘤甲基化034.78±8.12非甲基化532.21±4.62節(jié)細胞膠質(zhì)瘤甲基化139.33±3.17非甲基化736.64±6.61MGMTWHOPearsonWHO(γ=0.674，P=0.019)，與年齡呈負相關(γ=-0.732，P<0.001)。討論了較高要求[6]。腦膠質(zhì)瘤包含一些特異的組織學類型，根據(jù)腦膠質(zhì)瘤的細胞學和WHO：WHO50%；WHO30%；WHO(Glioblastomamultifome，GBM)，主要呈現(xiàn)浸潤性WHOWHOgliomas，LGG)，是不常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，通常被認為是無痛的或良性的腦腫瘤，惡性程度較低，術后預后較好，但是可能發(fā)展成為GBM。WHOⅢ級和WHOⅣ級統(tǒng)稱為惡性腦膠質(zhì)瘤(Malignantglioma)，也被稱為高級別的腦膠質(zhì)瘤(High-gradegliomas，HGG)，WHOsurvival，OS)36WHOsurvival，OS9～12[7]。神經(jīng)膠質(zhì)物—替莫唑胺(Temozolomid)是一種新型咪唑四烷類藥物，通過對基因組DNA的甲基化修飾發(fā)揮作用[8]，其對人類腫瘤細胞系具有廣譜抗腫瘤活性。1999FDA20056替莫唑胺耐藥，其臨床應用受到一定的限制。MGMTDNA10q26170kb5，4GC6Spl2(GRE)，AP-IcDNA769bp207MGMT精氨酸-纈氨酸-”(IPCHRV)活性基序列，活性位點在145位半胱氨酸殘基上[12]。16786MGMT51.50%。同時，彌漫型及間變性星形細胞瘤、繼發(fā)性GBM、少突膠質(zhì)瘤、少突星形細胞瘤的甲基化率更高，差異有統(tǒng)計學意義。WHO分級為Ⅰ級3.59%，Ⅱ級38.92%，Ⅲ級27.54%，Ⅳ級29.94%。MGMT基因甲基化的年齡普遍較非甲基化的年齡更大，在彌漫型星形細胞瘤、繼發(fā)性GBM及少突星形細胞瘤的甲基化年齡顯著高于非甲基化，差異有統(tǒng)計學意義。根據(jù)Pearson法分析相關性可知，MGMT基因甲基化與WHO分級呈正相關(γ=0.674，P=0.019)，與年齡呈正相關(γ=0.732，P<0.001)。綜上所述，MGMT基因甲基化在膠質(zhì)瘤中具有較高的發(fā)生率，尤其是WHO分級Ⅱ～Ⅳ級及年齡較高者中，其對膠質(zhì)瘤的形成及發(fā)展具有重要作用。參考文獻【相關文獻】DolecekTA，ProppJM，StroupNE，etal.CBTRUSstatisticalreport：primarybrainandcentralnervoussystemtumorsdiagnosedintheUnitedStatesin2005-2009[J].NeuroOncol，2012，(14Suppl5)：v1-49.LouisDN，PerryA，ReifenbergerGetal.The2016worldhealthorganizationclassificationoftumorsofthecentralnervoussystem：asummary[J].ActaNeuropathol，2016，131(6)：803-820.OlarA，SulmanEP.Molecularmarkersinlow-gradeglioma-towardtumorrecalssification[J].SeminRadiatOncol，2015，25(3)：155-163.許春偉，王魯平，葛暢.MGMT[J].中國醫(yī)藥導報，2014，11(2)：11-16.OginoS，KawasakiT，BrahmandamM，etal.Precisionandperformancecharacteristicsofbisulfiteconversionandreal-timePCR(MethyLight)forquantitativeDNAmethylationanalysis[J].JMolDiagn，2006，8(2)：209-217.AndratschkeN，GrosuAL，MollsM，etal.Perspectivesinthetreatmentofmalignantgliomasinadults[J].AnticancerRes，2001，21(5)：3541-3550.CankovicM，NikiforovaNN，SnuderlM，etal.TheroleofMGMTtestinginclinicalpractice：areportoftheassociationformolecularpathology[J].JMolDiagn，2013，15(5)：539-555.StuppR，WeberDC.Theroleofradio-andchemotherapyinglioblastoma[J].Onkologie，2005，28(6-7)：315-317.HegiME，DiserensAC，GorliaT，etal.MGMTgenesilencingandbenefitfromtemozolomideinglioblastoma[J].NEnglJMed，2005，352(10)：997-1003.BleekerFE，MolenaarRJ，LeenstraS.Recentadvancesinthemolecularunderstandingofglioblastoma[J].JNeurooncol，2012，108(1)：11-27.DanielsDS，WooTT，LuuKX，etal.DNAbindingandnucleotideflipping