微生物實(shí)驗(yàn)-細(xì)菌培養(yǎng)、接種

第二次實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容1.細(xì)菌培養(yǎng)法（錄象）2.基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備（講解示教）3.細(xì)菌接種法（一份/組）講解4.人體、物品中細(xì)菌檢查（一份/組）講解5.飛沫、空氣中細(xì)菌檢查（一份/桌）講解6.觀察細(xì)菌代謝產(chǎn)物（講解）7.第一次實(shí)驗(yàn)報(bào)告評(píng)講基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備去筋膜黃牛肉絞碎500g加入1000ml蒸餾水直接煮沸2小時(shí)調(diào)整酸堿度至pH7.6過濾，補(bǔ)足失水重新校正pH一次分裝，高壓滅菌，15磅（121.3℃）15～20分鐘檢菌如無細(xì)菌生長(zhǎng)（液體透明）即可應(yīng)用脫脂紗布過濾，按比例加入1％蛋白胨、0.5%NaCl，0.1%K2HPO4加熱溶解補(bǔ)足水至1000ml4℃浸泡過夜煮沸半小時(shí)人體、物品中細(xì)菌檢查手衣發(fā)錢材料：普通平板（1份/組）蓋上，標(biāo)記,置37℃，18-24h后觀察。飛沫、空氣中細(xì)菌檢查材料：血平板

（1份/組）距口15—20cm用力咳嗽三次置空氣中（避日光照射）30分鐘飛沫空氣蓋上，標(biāo)記,置37℃，18-24h后觀察。結(jié)果觀察——血平板

表皮葡萄球菌在血瓊脂平板培養(yǎng)基上形成不溶血的菌落。甲型溶血性鏈球菌形成的α溶血現(xiàn)象也稱為甲型溶血現(xiàn)象或草綠色溶血現(xiàn)象，屬于不完全溶血。金黃色葡萄球菌形成的β溶血現(xiàn)象也稱為乙型溶血現(xiàn)象，屬于完全溶血。細(xì)菌培養(yǎng)接種法——平板劃線法

菌種：混合菌液材料：普通平板用具：接種環(huán)方法：分區(qū)劃線1區(qū)2區(qū)3區(qū)4區(qū)原始區(qū)域半固體培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基

細(xì)菌培養(yǎng)接種法--斜面接種、液體接種、半固體菌種：大腸桿菌或葡萄球菌斜面材料：斜面、液體、半固體培養(yǎng)基用具：接種環(huán)、接種針液體培養(yǎng)基結(jié)果觀察——普通平板

普通瓊脂平板培養(yǎng)基上，大腸埃希菌形成菌苔和菌落生長(zhǎng)現(xiàn)象。注意：大小、顏色、透明度、凸起度、表面干燥或濕潤(rùn)、光滑或粗糙、邊緣是否整齊及血平板上的溶血情況。結(jié)果觀察——液體培養(yǎng)基

結(jié)果觀察——斜面培養(yǎng)基

瓊脂斜面培養(yǎng)基上大腸埃希菌形成的菌苔生長(zhǎng)現(xiàn)象菌苔（mossy）指細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖后，在培養(yǎng)基表面形成的一層培養(yǎng)物結(jié)果觀察——半固體培養(yǎng)基

1、擴(kuò)散生長(zhǎng)：具有動(dòng)力的細(xì)菌,可見培養(yǎng)物擴(kuò)散和培養(yǎng)基變混濁。即有鞭毛的細(xì)菌：由穿刺線向外擴(kuò)散生長(zhǎng)（羽毛狀或云霧狀）2、原位生長(zhǎng)：沒有動(dòng)力的細(xì)菌，可見培養(yǎng)物沒有擴(kuò)散，培養(yǎng)基仍然澄清。即無鞭毛的細(xì)菌：沿穿刺線生長(zhǎng)

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112細(xì)菌代謝產(chǎn)物觀察

細(xì)菌的酶不一樣，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解能力不一樣，產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物也不一樣。常見：糖發(fā)酵試驗(yàn)吲哚（indol）試驗(yàn)甲基紅（methylred）實(shí)驗(yàn)VP（Voges-Proskauer）試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用（citrateutilization）試驗(yàn)?zāi)蛩孛冈囼?yàn)硫化氫試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)不同細(xì)菌分解糖類的能力和代謝產(chǎn)物不同。

甲基紅（methylred）實(shí)驗(yàn)M-甲基紅（methylred）實(shí)驗(yàn)葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇甲基紅-葡萄糖→丙酮酸甲基紅+吲哚（indol）試驗(yàn)I-吲哚（indol）試驗(yàn)色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚↑

對(duì)二甲基氨基苯甲醛枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)C-枸櫞酸鹽利用（citrateutilization）試驗(yàn)利用枸櫞酸鹽生長(zhǎng)+不能利用-

硫化氫試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)（醋酸鉛培養(yǎng)基）某些細(xì)菌分解含硫氨基酸，生成H2S，H2S遇鐵鹽（如硫化亞鐵、醋酸鉛等），則形成黑褐色硫化鐵（鉛）沉淀物，而呈黑色為（＋）。

尿素酶試驗(yàn)

產(chǎn)生氨使培養(yǎng)基變堿，

指示劑顯紅色，為陽(yáng)性。

如：變形桿菌為陽(yáng)性。IMViC試驗(yàn)I-吲哚（indol）試驗(yàn)M-甲基紅（methylred）試驗(yàn)V-VP（Voges-Proskauer）試驗(yàn)C-枸櫞酸鹽利用（citrateutilization）試驗(yàn)IMViC試驗(yàn)

IMViC試驗(yàn)大腸埃希菌++--

產(chǎn)氣桿菌

--++IMViC試驗(yàn)：是吲哚、甲基紅、V-P以及枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)四者的合稱。常用于腸道桿菌的鑒定。實(shí)驗(yàn)小結(jié)1、三類培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基——用于增菌；

均勻混濁、沉淀、表面生長(zhǎng)半固體培養(yǎng)基——觀察動(dòng)力；保存菌種（6個(gè)

月）；穿刺線，擴(kuò)散生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基——分離純化；保存菌種（1個(gè)月）

菌落、菌苔2、IMViC試驗(yàn)第三次實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容1、熱力對(duì)細(xì)菌和芽胞的