【課件】3.2基因工程的基本操作程序（第2課時(shí)）課件（人教版2019選擇性必修3）

3.2基因工程的基本操作程序-2新教材?人教版?選擇性必修三【教學(xué)過(guò)程】TeachingProcess1.概念圖3.教學(xué)總結(jié)、綜合2.課堂教

學(xué)內(nèi)容4.課堂練習(xí)鞏固典型習(xí)題規(guī)律總結(jié)探究?實(shí)踐建立模型基本步驟1.轉(zhuǎn)化指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定維持和表達(dá)的過(guò)程。2.轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞受體細(xì)胞將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法花粉管通道法——顯微注射法——Ca2+處理法冠癭瘤農(nóng)桿菌是普遍存在于土壤中的一種革蘭氏陰性菌，它能在自然條件下趨化性地感染大多數(shù)雙子葉植物和裸子植物的受傷部位，并誘導(dǎo)產(chǎn)生冠癭瘤等。2.轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞（1）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞為什么農(nóng)桿菌容易感染雙子葉植物？科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)植物體受到損傷時(shí)，傷口處的細(xì)胞會(huì)分泌大量的酚類(lèi)化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞，這時(shí)農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA（可轉(zhuǎn)移的DNA）轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞染色體的DNA上。這種酚類(lèi)化合物主要在雙子葉植物細(xì)胞壁中合成，單子葉植物通常沒(méi)有。2.轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞（1）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞A.載體：B.受體細(xì)胞：農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒（T-DNA)主要是雙子葉植物和裸子植物農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒隨著轉(zhuǎn)化方法的突破，農(nóng)桿菌侵染水稻、玉米等多種單子葉植物也取得了成功。2.轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞（1）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞構(gòu)建表達(dá)載體含目的基因的重組Ti質(zhì)粒表現(xiàn)出新性狀的植株導(dǎo)入植物細(xì)胞植物細(xì)胞將目的基因插入染色體DNA中目的基因Ti質(zhì)粒T-DNA含重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌C.過(guò)程農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法示意圖Ti質(zhì)粒目的基因構(gòu)建基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞T-DNA攜帶目的基因插入植物細(xì)胞染色體DNA中表達(dá)新性狀2.轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞（1）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞D.轉(zhuǎn)化的具體方法：a.可以將新鮮的從葉片上取下的圓形小片__________________，然后________________，并_____________；受體細(xì)胞為_(kāi)______與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞再生成植株體細(xì)胞b.可以將_______直接浸沒(méi)在___________________中一段時(shí)間，然后培養(yǎng)植株并獲得____，再進(jìn)行_____、_____等；受體細(xì)胞為_(kāi)______花序含有農(nóng)桿菌的溶液種子篩選鑒定受精卵2.轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞（1）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞例1.該過(guò)程經(jīng)過(guò)____次拼接、____次導(dǎo)入？(1)第一次拼接___________________________(2)第二次拼接______________________________________________________(3)第一次導(dǎo)入___________________________(4)第二次導(dǎo)入___________________________將目的基因拼接到Ti質(zhì)粒的T-DNA上插入目的基因的T-DNA拼接到受體細(xì)胞染色體的DNA上（非人工操作）兩兩將含目的基因的Ti質(zhì)粒重新導(dǎo)入農(nóng)桿菌含目的基因的T-DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞（非人工操作）Ti質(zhì)粒目的基因構(gòu)建基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞T-DNA攜帶目的基因插入植物細(xì)胞染色體DNA中表達(dá)新性狀三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞例1.該過(guò)程經(jīng)過(guò)____次拼接、____次導(dǎo)入？(5)用農(nóng)桿菌感染時(shí)，優(yōu)先選擇

（受傷的/完好的）葉片與重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌培養(yǎng)，選用該葉片的理由是

。受傷的葉片傷口處的細(xì)胞可釋放大量的酚類(lèi)物質(zhì)，可吸引農(nóng)桿菌(6)若要利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化單子葉植物細(xì)胞，可采取添加

，其目的是

。(7)利用Ti質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒的目的是：

。酚類(lèi)物質(zhì)吸引農(nóng)桿菌移向受體細(xì)胞，有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化將目的基因插入到Ti質(zhì)粒上的T-DNA上，利用其將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞染色體DNA上，使目的基因的遺傳特性穩(wěn)定維持和表達(dá)兩兩三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞B.在植物授粉后一定時(shí)間內(nèi)，剪去柱頭，將DNA溶液滴在花柱切面，使目的基因通過(guò)花粉管通道進(jìn)入胚囊。如A.用微量注射器將含目的基因的DNA溶液直接注入子房中；②花粉管通道法我國(guó)科學(xué)家獨(dú)創(chuàng)的將Bt基因?qū)朊藁?xì)胞的方法2.轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞（1）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞C.實(shí)例:將Bt基因?qū)朊藁?xì)胞三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞①方法：顯微注射法②操作程序：取受精卵顯微注射移植到同期發(fā)情的母畜子宮內(nèi)為什么常選用受精卵作為受體細(xì)胞呢？提純基因表達(dá)載體2.轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞（2）將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞③拓展：【其他方法】科學(xué)家也用病毒DNA

與目的基因一起構(gòu)建的載體，去感染受體動(dòng)物細(xì)胞，也能使目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞內(nèi)。如慢病毒載體、腺病毒載體等。2.轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞（2）將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞腺病毒載體新冠疫苗的制備將編碼新冠病毒刺突蛋白（S）基因插入腺病毒基因組中，接種后，隨載體增殖，大量所需的抗原得以表達(dá)。接種疫苗，責(zé)無(wú)旁貸！2.轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞（2）將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞①受體細(xì)胞：微生物（常用大腸桿菌）優(yōu)點(diǎn)：繁殖周期短體積小易于培養(yǎng)操作多為單細(xì)胞遺傳物質(zhì)相對(duì)較少②方法流程：大腸桿菌CaCl2感受態(tài)細(xì)胞溶于緩沖液中的重組DNA分子轉(zhuǎn)化2.轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞（3）將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞③實(shí)例：利用轉(zhuǎn)基因大腸桿菌生產(chǎn)藥物原核生物作為受體細(xì)胞產(chǎn)生的真核生物的蛋白質(zhì)通常沒(méi)有生物活性，需要在體外進(jìn)行再加工。2.轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞（3）將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞種類(lèi)項(xiàng)目植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；花粉管通道法顯微注射法Ca2＋處理法受體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞DNA中→表達(dá)目的基因表達(dá)載體提純→取受精卵→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動(dòng)物Ca2＋處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子【小結(jié)】三.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞檢查目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，是否穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性；2.檢測(cè)內(nèi)容及方法:類(lèi)型檢測(cè)內(nèi)容方法分子水平的檢測(cè)個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定受體細(xì)胞的染色體DNA上是否插入了目的基因目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAPCR等技術(shù)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原-抗體雜交技術(shù)個(gè)體是否具有相應(yīng)性狀病原體接種實(shí)驗(yàn)等四.目的基因的檢查與鑒定1.目的:DNA分子雜交法：

其基本原理是具有一定同源性的兩條DNA單鏈，在一定條件下（適宜的溫度等）可以按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則形成雙鏈。雜交過(guò)程中，雜交的雙方是待測(cè)的DNA和用放射性同位素標(biāo)記的已知DNA片段（又稱(chēng)為基因探針）。若待測(cè)DNA中有能與探針互補(bǔ)的四.目的基因的檢查與鑒定特異性DNA片段，用于示蹤的放射性同位素標(biāo)記會(huì)指示出其所在的位置，表明目的基因已插入轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA中（如圖)。探究?實(shí)踐：DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定1.實(shí)驗(yàn)原理（1）利用PCR在體外進(jìn)行DNA片段擴(kuò)增的原理①PCR利用了DNA的_________原理，通過(guò)_________來(lái)控制DNA雙鏈的解聚與結(jié)合，PCR儀實(shí)質(zhì)上就是一臺(tái)能夠________________的儀器，一次PCR一般要經(jīng)歷___次循環(huán)；熱變性調(diào)節(jié)溫度自動(dòng)調(diào)控溫度30②PCR擴(kuò)增DNA片段還利用了_________________的原理；DNA半保留復(fù)制基因工程的基本操作程序（2）DNA片段電泳鑒定的原理①DNA分子具有_____________，在一定的___下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷，在_____的作用下，這些________會(huì)向著__________________的電極移動(dòng)，這個(gè)過(guò)程就是_____；可解離的基團(tuán)pH電場(chǎng)帶電分子電泳與它所帶電荷相反②PCR的產(chǎn)物一般通過(guò)_______________來(lái)鑒定；③在凝膠中DNA分子的遷移速率與___________、________________和_____等有關(guān)④凝膠中的DNA分子通過(guò)_____，可以在波長(zhǎng)為_(kāi)_______的______下被檢測(cè)出來(lái)。瓊脂糖凝膠電泳凝膠的濃度染色300nm紫外燈DNA分子的大小構(gòu)象基因工程的基本操作程序2.材料用具①PCR儀（自動(dòng)控溫，實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增）②微量離心管（實(shí)際上是進(jìn)行PCR反應(yīng)的場(chǎng)所）③微量移液器（用于向微量離心管轉(zhuǎn)移PCR配方中的液體）④一次性吸液槍頭（微量移液器吸取一種試劑更換一次槍頭）⑤電泳裝置（包括電泳儀、電泳槽等）基因工程的基本操作程序10倍濃縮的擴(kuò)增緩沖液（含Mg2+）5μL20mmol/L的4種脫氧核苷酸的等量混合液（實(shí)為dNTP）1μL20μmol/L的引物Ⅰ2.5μL20μmol/L的引物Ⅱ2.5μLH2O28～33μL1-5U/μL的TaqDNA聚合酶（即耐高溫的DNA聚合酶）1～2U模板DNA（用量為1pg-1μg）5～10μL總體積50μL⑧PCR反應(yīng)體系的配方⑥4種脫氧核苷酸等量混合液、2種引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、擴(kuò)增緩沖液、無(wú)菌水。⑦電泳緩沖液、凝膠載樣緩沖液、瓊脂糖和核酸染料等基因工程的基本操作程序

使DNA充分變性，以利于引物更好地和模板結(jié)合。3.方法步驟（1）DNA片段的擴(kuò)增①移液：用微量移液器按照PCR反應(yīng)體系配方或PCR試劑盒的說(shuō)明書(shū)，在微量離心管中依次加入各組分②離心：待所有組分都加入后，蓋嚴(yán)離心管的蓋子，將微量離心管放入離心機(jī)里，離心約10s，使反應(yīng)液集中在離心管的底部（提高反應(yīng)速率）③反應(yīng)：參照下表的參數(shù)，設(shè)置好PCR儀的循環(huán)程序。將裝有反應(yīng)液的微量離心管放入PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)。循環(huán)程序變性復(fù)性延伸預(yù)變性94℃,5min//30次94℃,30s55℃,30s72℃,1min最后一次94℃,1min55℃,30s72℃,1min預(yù)變性：基因工程的基本操作程序（2）DNA片段的電泳鑒定①配制瓊脂糖溶液

根據(jù)待分離DNA片段的大小，用電泳緩沖液配制瓊脂糖溶液，一般配制質(zhì)量體積比0.8%-1.2%的瓊脂糖溶液。在沸水浴或微波爐內(nèi)加熱至瓊脂糖熔化。稍冷卻后，加入適量的核酸染料混勻②制備凝膠A.將溫?zé)岬沫傊侨芤貉杆俚谷肽＞?，并插入合適大小的梳子，以形成加樣孔。C.將電泳緩沖液加入電泳槽中，電泳緩沖液沒(méi)過(guò)凝膠1mm為宜B.待凝膠溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝膠放入電泳槽內(nèi)。基因工程的基本操作程序3.方法步驟③加樣

將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物與凝膠載樣緩沖液（內(nèi)含指示劑）混合，再用微量移液器將混合液緩慢注入凝膠的加樣孔內(nèi)。留一個(gè)加樣孔加入指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物④電泳

接通電源，根據(jù)電泳槽陽(yáng)極至陰極之間的距離來(lái)設(shè)定電壓，一般為1～5V/cm。待指示劑前沿遷移接近凝膠邊緣時(shí)，停止電泳⑤觀察記錄取出凝膠置于紫外燈下觀察和照相（2）DNA片段的電泳鑒定基因工程的基本操作程序3.方法步驟注意:①為避免外源DNA等因素的污染，PCR實(shí)驗(yàn)中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進(jìn)行高壓滅菌處理。

②該實(shí)驗(yàn)所需材料可以直接從公司購(gòu)買(mǎi)，緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份，并在-20℃儲(chǔ)存。使用前，將所需試劑從冰箱拿出，放在冰塊上緩慢融化。

③在向微量離心管中添加反應(yīng)組分時(shí)，每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭都必須更換。

⑤在進(jìn)行操作時(shí)，一定要戴好一次性手套。

⑥PCR擴(kuò)增不能隨意加大試劑用量?；蚬こ痰幕静僮鞒绦?.方法步驟4.結(jié)果分析與評(píng)價(jià)(1)你是否成功擴(kuò)增出DNA片段？判斷的依據(jù)是什么？(2)你進(jìn)行電泳鑒定的結(jié)果是幾條條帶？如果不止一條條帶，請(qǐng)分析產(chǎn)生這個(gè)結(jié)果的可能原因。

可以在紫外燈下直接觀察到DNA條帶的分布及粗細(xì)程度來(lái)評(píng)價(jià)擴(kuò)增的結(jié)果。進(jìn)行電泳鑒定的結(jié)果應(yīng)該是一條條帶，該片段大小約為750bp。

如果擴(kuò)增不成功，可能的原因有：漏加了PCR的反應(yīng)成分，各反應(yīng)成分的用量不當(dāng)，PCR程序設(shè)置不當(dāng)?shù)?。如果擴(kuò)增結(jié)果不止一條條帶，可能的原因有：引物設(shè)計(jì)不合理，它們與非目的序列有同源性或容易形成二聚體；退火溫度過(guò)低；DNA聚合酶的質(zhì)量不好等?；蚬こ痰幕静僮鞒绦?.個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定具體方法舉例轉(zhuǎn)基因生物鑒定方法成功標(biāo)志抗蟲(chóng)植物抗病毒（菌）植物抗鹽植物抗除草劑植物獲取目的基因產(chǎn)物的轉(zhuǎn)基因生物飼喂害蟲(chóng)（抗蟲(chóng)接種實(shí)驗(yàn)）害蟲(chóng)死亡病毒（菌）接種實(shí)驗(yàn)未染病鹽水澆灌正常生長(zhǎng)噴灑除草劑正常生長(zhǎng)提取細(xì)胞產(chǎn)物與天然產(chǎn)品進(jìn)行功能活性比較功能、活性正常四.目的基因的檢查與鑒定1.在實(shí)際種植過(guò)程中，棉鈴蟲(chóng)是否對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因的抗蟲(chóng)棉產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗性？證據(jù)是什么？

科研人員對(duì)長(zhǎng)江流域種植的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，2011年的數(shù)據(jù)顯示，大部分轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉品種的抗蟲(chóng)性屬于中抗及高抗水平；2013年的數(shù)據(jù)表明，如果棉田周?chē)嬖诖罅刻烊槐幼o(hù)所，靶標(biāo)害蟲(chóng)棉鈴蟲(chóng)、紅鈴蟲(chóng)等并未對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因的抗蟲(chóng)棉產(chǎn)生明顯抗性。在我國(guó)、澳大利亞、印度等國(guó)的多個(gè)實(shí)驗(yàn)室中，通過(guò)毒素的連續(xù)抗性篩選，已經(jīng)培育出多個(gè)高抗水平的轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉品種。

到社會(huì)中去2.科研工作者在沒(méi)有發(fā)現(xiàn)棉鈴蟲(chóng)出現(xiàn)抗性之前，就應(yīng)該想辦法應(yīng)對(duì)。他們想出的延緩棉鈴蟲(chóng)對(duì)Bt抗蟲(chóng)蛋白產(chǎn)生抗性的措施有哪些？這些措施的原理是什么？有效嗎？

科研人員想出的延緩棉鈴蟲(chóng)對(duì)Bt抗蟲(chóng)蛋白產(chǎn)生抗性的措施有很多，主要可以分為以下幾個(gè)方面。（1）基因策略。該策略是在分子水平上提高轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉的抗蟲(chóng)性和抗蟲(chóng)持久性。包括在棉花中轉(zhuǎn)入多個(gè)殺蟲(chóng)基因、構(gòu)建組織特異性表達(dá)的啟動(dòng)子、提高殺蟲(chóng)基因的表達(dá)量等。例如，最早種植的抗蟲(chóng)棉中只轉(zhuǎn)入了一種Bt基因，抗性比較單一；現(xiàn)在經(jīng)常將兩種或兩種以上的Bt基因(如CrylAa和CrylAc基因)同時(shí)轉(zhuǎn)入棉花細(xì)胞，這樣既可以提高殺蟲(chóng)活性，又可以延緩害蟲(chóng)抗性的產(chǎn)生和發(fā)展，還可以通過(guò)不同基因間的互補(bǔ)作用擴(kuò)大抗蟲(chóng)范圍。

到社會(huì)中去（2）田間策略。這是在種植時(shí)采取的措施，如提供庇護(hù)所、與其他作物輪作或套種等。例如，在澳大利亞和美國(guó)等地普遍采取的措施是在轉(zhuǎn)基因棉田中，總面積的4%種植不使用任何殺蟲(chóng)劑的非轉(zhuǎn)基因棉花，或在轉(zhuǎn)基因棉田周?chē)N植20%～30%面積的可使用化學(xué)殺蟲(chóng)劑的非轉(zhuǎn)基因棉花；在印度，一些地區(qū)要求，在轉(zhuǎn)基因棉田周?chē)辽俜N植5行或者20%面積的非轉(zhuǎn)基因棉花。我國(guó)除新疆棉區(qū)及大型農(nóng)場(chǎng)需設(shè)計(jì)專(zhuān)門(mén)的庇護(hù)所外，其他棉區(qū)如長(zhǎng)江、黃河流域棉區(qū)多采用多種作物混作的耕作制度(如將轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉與番茄、向日葵、高梁、玉米、辣椒等棉鈴蟲(chóng)寄主作物混作)，這些作物可以構(gòu)成天然的庇護(hù)所，一般無(wú)須種植非轉(zhuǎn)基因棉花作為庇護(hù)所。

到社會(huì)中去

這樣做的原理是為少部分害蟲(chóng)提供一個(gè)正常的取食環(huán)境，始終保持一定的敏感目標(biāo)害蟲(chóng)種群。這樣，即使目標(biāo)害蟲(chóng)對(duì)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉產(chǎn)生了抗性，但是因?yàn)槠渑c敏感目標(biāo)害蟲(chóng)交配，后代抗性基因會(huì)發(fā)生分離，所以抗性目標(biāo)害蟲(chóng)的種群也不至于迅速增加。（3）國(guó)家宏觀調(diào)控策略。該策略包括實(shí)施分區(qū)種植管理、加強(qiáng)抗性監(jiān)測(cè)、進(jìn)行嚴(yán)格的安全生評(píng)價(jià)等。

到社會(huì)中去一.概念檢測(cè)1.研究人員將一種海魚(yú)的抗凍蛋白基因afp整合到土壤農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上，然后用它侵染番茄細(xì)胞，獲得了抗凍的番茄品種。判斷下列相關(guān)表述是否正確。（1）afp基因是培育抗凍番茄用到的目的基因。（

）（2）構(gòu)建含有afp基因的Ti質(zhì)粒需要限制酶、DNA連接酶和核酸酶。（

）（3）只要檢測(cè)出番茄細(xì)胞中含有afp基因，就代表抗凍番茄培育成功。（

）√××練習(xí)與應(yīng)用（P83）一.概念檢測(cè)2.利用PCR既可以快速擴(kuò)增特定基因，也可以檢測(cè)基因的表達(dá)。下列有關(guān)PCR的敘述錯(cuò)誤的是（

）A.PCR用的DNA聚合酶是一種耐高溫酶B.變性過(guò)程中雙鏈DNA的解開(kāi)不需要解旋酶C.復(fù)性過(guò)程中引物與模板鏈的結(jié)合遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則D.延伸過(guò)程中需要DNA聚合酶、ATP和4種核糖核苷酸D練習(xí)與應(yīng)用（P83）二、拓展應(yīng)用1.研究人員在研究轉(zhuǎn)基因煙草中外源卡那霉素抗性基因的遺傳穩(wěn)定性時(shí)，發(fā)現(xiàn)44株轉(zhuǎn)基因煙草中有4株該基因的遺傳不符合孟德?tīng)栠z傳規(guī)律，在它們的自交后代中出現(xiàn)了較多的沒(méi)有卡那霉素抗性的植株。請(qǐng)查找相關(guān)資料，嘗試對(duì)這個(gè)問(wèn)題作出解釋。外源基因插入基因組中可能為單位點(diǎn)插入，或者同一染色體多位點(diǎn)插入，或者不同染色體多位點(diǎn)插入。大多數(shù)情況下，插入的位點(diǎn)難以做到定點(diǎn)插入；插入的拷貝數(shù)也是隨機(jī)的。因此，外源基因在轉(zhuǎn)基因植物中的遺傳是很復(fù)雜的。例如，科研人員在對(duì)轉(zhuǎn)GUS基因(β-葡糖醛酸糖苷酶基因)的煙草進(jìn)行基因表達(dá)分析時(shí)，發(fā)現(xiàn)部分轉(zhuǎn)基因植株的染色體DNA中整合了多個(gè)拷貝的基因，從而導(dǎo)致GUS基因失活。除此之外，外源基因丟失、基因重排等也都可能影響外源基因的穩(wěn)定性。練習(xí)與應(yīng)用（P64）二、拓展應(yīng)用2.八氫