衛(wèi)生及微生物知識培訓

衛(wèi)生及微生物知識培訓根本要求制藥廠的所有工作人員，特別是干凈區(qū)域內(nèi)的工作人員〔包括維修、輔助人員〕都應(yīng)定期進展衛(wèi)生和微生物學根底知識、干凈作業(yè)等方面的培訓及考核；對于需要進入干凈室〔區(qū)〕的臨時外來人員也應(yīng)進展指導和監(jiān)視。微生物的定義微生物的定義： 存在于自然界中的一群體型細小、構(gòu)造簡單、肉眼看不見，必須借助于特殊儀器放大后才能觀察到的微小生物。微生物的定義 按其構(gòu)造、化學組成及生活習性可分為以下幾大類：原核類： 僅有原始核質(zhì)，無核仁或核膜，細胞器很不完善。如細菌、放線菌、支原體、立克次氏體、衣原體、螺旋體。微生物的定義真核類： 細胞核的分化程度較高，有核膜、核仁和染色體，細胞器完整。如真菌〔酵母菌和霉菌〕、原生動物、藻類。非細胞類： 體積微小，能通過除菌過濾器。如病毒和朊病毒等。微生物的定義按微生物對人類的致病性，可以分為兩類：病原性微生物：

病原微生物是指可以侵犯人體，引起感染甚至傳染病的微生物，或稱病原體，以細菌和病毒的危害性最大。微生物的定義按微生物對人類的致病性，可以分為兩類：非病原性微生物：

非病原性微生物指不會侵犯人體，不會引起感染等疾病的微生物。在我們體內(nèi)其實存在著很多微生物，我們?nèi)祟惢ダ采Ｈ缒c道中很多微生物，它們幫助我們消化食物，而我們給它們提供生活環(huán)境，營養(yǎng)等。微生物的特點個體?。何⑸镆话阈∮?.1mm，肉眼不可見。分布廣，種類多〔目前的超過10萬種〕： 在自然界中到處都有，如水、空氣、土壤等，其中在土壤中的數(shù)量最多。代謝強，轉(zhuǎn)化快： 發(fā)酵乳糖的細菌在1小時內(nèi)可分解其自重1000～10000倍的乳糖。微生物的特點生長旺，繁殖快：

微生物有驚人的繁殖速度，大多數(shù)微生物幾分鐘到幾十分鐘內(nèi)就可以繁殖一代。適應(yīng)性強，易變異：

由于細菌的適應(yīng)性極強，并且能產(chǎn)生變異，原有的抗生素就不能發(fā)揮作用，這就是人們常說的細菌產(chǎn)生了耐藥性的原因。微生物的特點葡萄球菌

酵母菌〔芽痕〕棒狀桿菌大腸桿菌弧狀菌鏈球菌一些常見的微生物的形態(tài)微生物的分布土壤：

在土壤中，由于溫度與濕度適中，富含微生物所需要的營養(yǎng)物質(zhì)，是微生物生活最適宜的環(huán)境，在土壤中微生物的種類與數(shù)量最多。水：

是僅次于土壤的微生物分布、定居場所。微生物的分布空氣：

空氣中的微生物主要來源于帶有微生物菌體及孢子的灰塵，這類微生物大多數(shù)是腐生性的，還來源于人和動物，它們大多數(shù)是通過呼吸道排出的，其中也包含有病原微生物，懸浮在大氣中。微生物的分布 由于空氣中的微生物不是以微生物的獨立形態(tài)存在，而是由微生物菌體及孢子與灰塵抱團，懸浮在大氣中，這也就是為什么在藥品生產(chǎn)過程中，我們需要建立干凈房間的原因，當空氣的干凈度〔塵埃粒子數(shù)〕符合要求時，也就控制了微生物數(shù)量，就能保證產(chǎn)品的質(zhì)量。微生物的分布人體中的微生物 人在出生以后，自然界中的微生物就逐漸進入人體。在正常人體皮膚、粘膜及與外界相通的各種腔道〔如口腔、鼻咽腔、腸道和泌尿道〕等部位，存在著對人體無害的微生物群，包括細菌、真菌、螺旋體等，這些都稱為正常菌群，這些菌群保證了人類的生存。微生物的分布人體中的微生物 能使宿主〔人或動物〕感染致病的細菌稱為致病菌或病原菌，不能造成宿主感染致病的為非致病菌或非病原菌。有些細菌在正常情況下并不使宿主致病，但當在某些條件改變的特殊情況下可以致病，這類菌稱為條件致病菌或時機致病菌。微生物的作用及危害微生物的作用

絕大多數(shù)微生物對人和動物是有益的，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、食品、醫(yī)藥、釀造、化工、制革、石油等行業(yè)，發(fā)揮了越來越重要的作用。例如與我們?nèi)粘Ｉ蠲芮邢嚓P(guān)的如生產(chǎn)酸奶、酒類，在制藥工業(yè)中生產(chǎn)抗生素、疫苗等。微生物的作用及危害微生物的危害 微生物中也有一局部能引起人及動、植物發(fā)生病害，這些具有致病性的微生物，稱為病原微生物。 如人類的許多傳染病〔感冒、傷寒、痢疾、結(jié)核、脊髄灰質(zhì)炎、病毒性肝炎等〕，都是由病原微生物引起的。微生物的作用及危害微生物的危害

從藥品生產(chǎn)的衛(wèi)生學要求而言，微生物對藥品的原料、生產(chǎn)環(huán)境和成品的污染，往往是造成生產(chǎn)失敗、產(chǎn)品不合格的重要因素。

微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造細菌是一類細胞細而短、構(gòu)造簡單、細胞壁堅韌，以二分裂〔一分為二，二分為四，以此類推〕方式無性繁殖的原核微生物，分布非常廣泛；細菌的體型非常小，一般需要借助于高倍顯微鏡或電子顯微鏡才能觀察到。微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造細菌的形態(tài)與構(gòu)造：球菌： 多數(shù)球菌直徑在1微米左右，外觀呈球形或近似球形，由于繁殖時分裂平面不同可形成不同的排列方式，分為雙球菌、鏈球菌、葡萄球菌等。微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造葡萄球菌微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造四聯(lián)球菌微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造桿菌：

桿菌的形態(tài)多數(shù)呈直桿狀，也有的菌體稍彎，多數(shù)呈分散存在，也有的呈鏈狀排列，分為棒狀桿菌、鏈狀桿菌、球桿菌等。

微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造與球菌不同，桿菌的大小、長短、粗細很不一致。炭疽芽胞桿菌3～10μm大中大腸埃希菌2～3μm小布魯菌0.6～1.5μm微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造兩端齊平炭疽芽胞桿菌兩端尖細白喉棒狀桿菌桿菌的形態(tài)多樣微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造分枝桿菌雙歧桿菌桿菌的形態(tài)多樣微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造螺形菌：

螺形菌的菌體彎曲，呈弧形或螺旋形，如幽門螺桿菌。微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造螺形菌弧菌螺菌螺桿菌微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造細菌雖然很小，仍然具有一定的細胞構(gòu)造和功能。細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)和核質(zhì)等各種都有，是細菌的根本構(gòu)造。微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造 真菌是一類有細胞壁，無葉綠素，以寄生或腐生方式生存，能進展無性或有性繁殖的一類真核細胞型微生物。微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造真菌包括單細胞與多細胞兩類：

單細胞真菌呈圓形或卵圓形，這一類被稱為酵母菌；

多細胞真菌由菌絲和孢子組成，并交織成團，稱絲狀菌或霉菌。微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造 真菌最適宜的生長溫度為22～28℃，最適宜的pH值為4～6。其繁殖能力強，但生長速度比細菌慢，常需1～4周才形成菌落。真菌對熱的抵抗力不強，一般加熱至60~70℃，1小時即被殺死，但對枯燥、日光、紫外線和一些化學消毒劑有抵抗力，但對2.5％碘酒、10％甲醛那么較敏感。微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造3.病毒

病毒屬非細胞型微生物，在自然界分布非常廣泛，可在人、動物、植物、真菌和細菌中寄居并引起感染。微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造 病毒是體積最小、構(gòu)造最簡單的一類微生物，往往需要借助于電子顯微鏡才能觀察到，它僅有一種核酸〔DNA-脫氧核糖核酸或RNA-核糖核酸〕作為其遺傳物質(zhì)。 病毒必須在宿主活的細胞內(nèi)寄生，依靠宿主的細胞提供的能量、營養(yǎng)物質(zhì)及生物大分子合成機制，完成病毒的復制過程。微生物的類群和形態(tài)構(gòu)造 病毒與人類的關(guān)系極為密切，人類的傳染病大約有75％是由病毒所引起的。有些病毒傳染性強，可引起世界大流行〔如流感、艾滋病等〕，并且病毒的變異極快。熱原與內(nèi)毒素 “熱原〞系指由微生物產(chǎn)生的能引起恒溫動物體溫異常升高的致熱物質(zhì)。它包括細菌性熱原、內(nèi)源性高分子熱原、內(nèi)源性低分子熱原及化學熱原等。 對于制藥公司生產(chǎn)產(chǎn)品所指的“熱原〞，主要是指細菌性熱原，它是由某些細菌的代謝產(chǎn)物、細菌尸體及內(nèi)毒素所構(gòu)成。熱原與內(nèi)毒素 “熱源〞致熱能力最強的是革蘭氏陰性桿菌的代謝產(chǎn)物，其次是革蘭陽性桿菌類，革蘭陽性球菌那么較弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能產(chǎn)生熱原。熱原與內(nèi)毒素 細菌內(nèi)毒素一般指革蘭陰性細菌細胞壁的構(gòu)造成分，主要是脂多糖。 從以上的描述可見我們可以看出熱源與內(nèi)毒素的區(qū)別，熱原包含內(nèi)毒素，所以熱原的范圍更大。 細菌內(nèi)毒素生物學活性可分為兩類：一是致病作用，一是保護性反響。細菌內(nèi)毒素的特點1.耐熱性：120℃加熱4h，可以破壞98%，180℃加熱2h或250℃加熱30min，才可以徹底破壞。2.濾過性：由于其體積小，約在1~5nm之間，所以能通過各種過濾器進入濾液中。熱原與內(nèi)毒素細菌內(nèi)毒素的特點3.具有水溶性及不揮發(fā)性。4.能被強酸、強堿和氧化劑破壞。

由于細菌內(nèi)毒素具有上述特點，在藥品生產(chǎn)過程中，需要特別注意細菌內(nèi)毒素對產(chǎn)品的污染，一旦產(chǎn)品被污染，細菌內(nèi)毒素將很難除去。熱原與內(nèi)毒素熱源〔細菌內(nèi)毒素〕引入的途徑： 從溶劑中帶進〔主要是水，在水中往往存在細菌和細菌內(nèi)毒素，在一般情況下，有機溶劑中細菌無法生存，也就不會產(chǎn)生熱源〕； 從原料中帶進； 沉著器、用具、管道和設(shè)備設(shè)施等帶進； 制備過程中的污染。熱原與內(nèi)毒素熱原與內(nèi)毒素消除細菌內(nèi)毒素的方法：

高溫破壞法：可用180℃干烤3~4h或250℃干烤30min；

吸附法：一般選用活性炭；

蒸餾法：此法僅限于制備蒸餾水；

化學酸堿和氧化法；

離子交換法；

熱原與內(nèi)毒素消除細菌內(nèi)毒素的方法： 反滲透法； 凝膠過濾法； 超濾法。 在生產(chǎn)實踐活動中，采用比較多的方法是高溫破壞法、吸附法、蒸餾法、化學酸堿法和氧化法。熱原與內(nèi)毒素 在藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理標準〔GMP〕條件下，藥品生產(chǎn)的質(zhì)量控制一般可以承受的觀點是：不存在細菌內(nèi)毒素意味著不存在熱原，所有在實際制定的質(zhì)量標準和質(zhì)量檢驗中，往往檢測產(chǎn)品的細菌內(nèi)毒素。消毒與滅菌我們平時都習慣所消毒滅菌，實際上消毒與滅菌是兩個不同的概念。以下術(shù)語常用于表示物理或化學方法對微生物的殺滅程度：消毒： 殺死物體上病源微生物的方法,并不一定能殺死細菌的芽胞，消毒所用的試劑稱為消毒劑。消毒與滅菌抑菌：

抑制體內(nèi)或體外細菌的生長繁殖，常用的抑菌劑為各種抗生素，可抑制細菌的生長繁殖。滅菌：

殺滅物體上所有微生物的方法；滅菌比消毒要求高，包括殺滅細菌芽孢在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。消毒與滅菌芽孢：

芽孢是細菌的休眠體，在適宜的條件下可以重新轉(zhuǎn)變成為營養(yǎng)態(tài)細胞；

一般的芽孢在普通的條件下可保存幾年至幾十年的生存能力；目前世界上發(fā)現(xiàn)的最古老的芽孢至今已有億年。消毒與滅菌 芽孢對熱力、枯燥、輻射、化學消毒等常規(guī)理化因素有極為強大的抵抗力；殺滅芽胞最可靠的方法是高壓蒸汽滅菌。消毒與滅菌防腐：

防止或抑制體外細菌生長繁殖的方法，而細菌一般不死亡；同一種化學試劑在高濃度時是消毒劑，低濃度時一般可以作為防腐劑。無菌：

即不存在活的細菌；防止細菌進入人體或其他物品的操作技術(shù)，稱為無菌操作。消毒與滅菌無菌： 不存在活的生物〔GMP指南〕 “無菌〞從定義上來說應(yīng)該是一個絕對的概念，但遺憾的是，在科學和技術(shù)高度開展的今天，要做到絕對無菌是不可能的，也無法加以證實。因此，從藥品的平安性出發(fā)要求人們設(shè)定無菌的相對標準。消毒與滅菌美國FDA、歐洲制藥工業(yè)界曾將百萬分之一微生物污染率作為滅菌產(chǎn)品“無菌〞的相對標準，它和蒸汽滅菌后產(chǎn)品中微生物存活的概率為10-6相符，這一標準如今已為世界各國普遍承受和采用。消毒與滅菌1.物理滅菌方法 熱力滅菌法； 輻射殺菌法； 濾過除菌法； 超聲波殺菌法； 枯燥與低溫抑菌法。消毒與滅菌熱力滅菌法：

使蛋白質(zhì)、酶及核酸永久性破環(huán)，細胞膜溶解，導致細胞發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的死亡。干熱滅菌法：

采用灼燒或干熱空氣滅菌，使用方便，適用于玻璃器皿和瓷器等可以耐高溫的固體物的滅菌。消毒與滅菌濕熱滅菌法： 利用熱蒸汽殺死微生物的方法。 高壓蒸汽滅菌：利用高溫高壓蒸汽進展滅菌的方法，蒸汽的穿透力較熱空氣強，可以殺死一切微生物，包括細菌的芽孢，真菌的孢子或休眠體等耐高溫的個體，是一種最可靠最適用最廣泛的滅菌方法。消毒與滅菌輻射滅菌法紫外線：

波長190～300nm的紫外線具有殺菌作用。但穿透物質(zhì)的能力很差，一般要求紫外燈距離照射物不超過米為宜。電離輻射：

高速電子、X射線、γ射線。消毒與滅菌微波〔電磁輻射〕： 波長1mm～1m的電磁波。濾過除菌法 用物理阻留的方法將液體或空氣中的細菌除去，以到達除菌目的。

消毒與滅菌 濾菌器中含有細微的小孔，孔徑≤0.22微米，只允許液體或氣體通過，而大于該孔徑的細菌等顆粒不能通過〔細菌的直徑一般均大于0.22微米〕； 濾過除菌法適用范圍：血清、毒素、抗生素、溶液以及空氣等的除菌。消毒與滅菌2.化學滅菌方法 許多化學藥物能夠影響微生物體內(nèi)的化學組成、物理構(gòu)造和生理活性，從而發(fā)揮防腐、消毒及滅菌的作用。 在干凈室〔區(qū)〕內(nèi)應(yīng)定期消毒，使用的消毒劑不得對設(shè)備、物料和成品產(chǎn)生污染。消毒劑品種應(yīng)定期更換，防止產(chǎn)生耐藥菌株。微生物的控制 微生物的種類繁多，有的對人有益，有的對人有害，有的無益也無害。但是在藥品生產(chǎn)過程中，不可能對環(huán)境中的各種微生物加以區(qū)別對待，為保證產(chǎn)品的平安有效，就需要對所有的微生物進展控制。 許多以前被人們認為是極端條件下〔高溫、高壓、強酸、強堿、低溫等〕，甚至是致死的環(huán)境，現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在這些極端仍然條件下生活著各種類型的微生物〔我們稱為極端微生物〕。事實說明，微生物有特別頑強的生存、繁殖和變異能力來適應(yīng)環(huán)境。微生物的控制

當飲用水經(jīng)水塔或貯水池貯存后，短期內(nèi)微生物就可能繁殖到105~106個/ml。

人的頭皮上有140萬個/cm2，兩手上約有4~40萬個，1g指甲污垢就有38億個，1g糞便可達10~1000億個。可以說微生物是無處不在，無處不有。微生物的控制微生物的控制干凈室〔區(qū)〕內(nèi)微生物的來源1.空氣。2.水。3.人員〔在干凈室內(nèi)，人是第一污染源〕。4.室內(nèi)的外表和設(shè)備、工器具的外表。 針對以上4點，就能有目的的對干凈室內(nèi)的微生物進展控制，保證產(chǎn)品質(zhì)量。

微生物的控制1.對空氣的控制

利用空氣過濾技術(shù)將每升空氣中含有的以十萬計甚至百萬計的灰塵顆粒，降低到每升空氣中只含有幾粒，幾百粒，幾千粒的不同凈化等級，以控制空間的含塵數(shù)量，控制了整個空間的含塵數(shù)量，也就是控制了微生物的數(shù)量。微生物的控制 微生物不是憑空存在的，99%的微生物都是附著在灰塵顆粒上的，或以芽孢形式懸浮于空氣中，控制了空氣中的顆粒數(shù)量，就控制了微生物的數(shù)量，1μm以下者處于懸浮狀態(tài)，10μm以上者會逐漸沉下來而形成含菌的灰塵，所以我們需要對灰塵顆粒進展嚴格控制。微生物的控制2021版GMP對干凈區(qū)域的規(guī)定如下：潔凈度級別懸浮粒子最大允許數(shù)/立方米靜態(tài)動態(tài)≥0.5μm≥5.0μm≥0.5μm≥5.0μmA級352020352020B級3520293520002900C級3520002900352000029000D級352000029000不作規(guī)定不作規(guī)定微生物的控制2.對水的控制

水是微生物的樂園，水體是微生物廣泛分布的第二個天然環(huán)境；

水中的微生物來自土壤、塵埃、污水、人畜排泄物及垃圾等。微生物的控制2021版GMP明確規(guī)定： 純化水、注射用水的制備、貯存和分配應(yīng)當能夠防止微生物的滋生； 純化水、注射用水儲罐和輸送管道所用材料應(yīng)當無毒、耐腐蝕； 儲罐的通氣口應(yīng)當安裝不脫落纖維的疏水性除菌濾器；微生物的控制 純化水、注射用水輸送管道的設(shè)計和安裝應(yīng)當防止死角、盲管，應(yīng)當按照操作規(guī)程定期對純化水、注射用水管道進展清洗和消毒，并有相關(guān)記錄。 嚴