標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 24863-2010 畜禽細(xì)胞體外培養(yǎng)與冷凍保存技術(shù)規(guī)程》是由中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會發(fā)布的一項國家標(biāo)準(zhǔn),主要針對畜禽細(xì)胞在實驗室環(huán)境下的培養(yǎng)及長期保存提供了具體的操作指南。該標(biāo)準(zhǔn)涵蓋了從樣本采集、處理到細(xì)胞培養(yǎng)以及最終的冷凍保存等多個環(huán)節(jié)的技術(shù)要求。
首先,在樣本采集方面,規(guī)定了應(yīng)選取健康且無特定病原體感染的動物作為供體,并詳細(xì)描述了不同組織或器官樣本的正確采集方法及其注意事項,以確保獲得高質(zhì)量的起始材料。
接著,對于細(xì)胞分離與初步處理,標(biāo)準(zhǔn)中列舉了幾種常用的酶消化法和機械分散法來獲取單個細(xì)胞懸液,并對如何根據(jù)目標(biāo)細(xì)胞類型選擇合適的分離策略進(jìn)行了指導(dǎo)。此外還強調(diào)了在整個過程中保持無菌操作的重要性,防止污染發(fā)生。
然后是關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)的部分,包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基的選擇、血清及其他添加劑的使用比例、pH值調(diào)整等關(guān)鍵參數(shù)設(shè)置;同時指出了定期更換培養(yǎng)液、監(jiān)測細(xì)胞生長狀態(tài)、適時傳代擴增等日常維護(hù)工作的要求。
最后,針對細(xì)胞冷凍保存,《GB/T 24863-2010》推薦采用逐步降溫的方法進(jìn)行冷凍保護(hù),并介紹了DMSO(二甲基亞砜)等常用凍存劑的配制比例及其作用機制。還特別提到了解凍后細(xì)胞復(fù)蘇效率評估的重要性,建議通過觀察存活率、貼壁能力等指標(biāo)來判斷保存效果。
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2010-06-30 頒布
- 2011-01-01 實施
文檔簡介
犐犆犛65.020.30
犅40
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
犌犅/犜24863—2010
畜禽細(xì)胞體外培養(yǎng)與
冷凍保存技術(shù)規(guī)程
犜犲犮犺狀犻犮犪犾狉犲犵狌犾犪狋犻狅狀狅犳犳犪狉犿犪狀犻犿犪犾狊犮犲犾犾犮狌犾狋狌狉犲犪狀犱犮狉狔狅狆狉犲狊犲狉狏犪狋犻狅狀
20100630發(fā)布20110101實施
中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局
發(fā)布
中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會
書
犌犅/犜24863—2010
前言
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(SAC/TC274)歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:關(guān)偉軍、馬月輝、李向臣、李晗、閆雷、趙倩君、宮雪蓮。
Ⅰ
書
犌犅/犜24863—2010
畜禽細(xì)胞體外培養(yǎng)與
冷凍保存技術(shù)規(guī)程
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了畜禽體細(xì)胞保存方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬、牛、羊、馬、驢、雞、鴨、鵝等畜禽細(xì)胞體外培養(yǎng)與保存。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有
的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn),然而,鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究
是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
3術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
3.1
體細(xì)胞體外培養(yǎng)犻狀狏犻狋狉狅狊狅犿犪狋犻犮犮犲犾犾犮狌犾狋狌狉犲
將體細(xì)胞在模擬體內(nèi)生存環(huán)境的體外條件中進(jìn)行培養(yǎng),使細(xì)胞生長增殖,并保留其完整結(jié)構(gòu)和功能
特性的方法。
3.2
原代細(xì)胞培養(yǎng)狆狉犻犿犪狉狔犮犲犾犾犮狌犾狋狌狉犲
將體細(xì)胞在模擬體內(nèi)生存環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng),使細(xì)胞生長增殖達(dá)到可傳代狀態(tài)的培養(yǎng)方法。
3.3
細(xì)胞冷凍保存犮犲犾犾犮狉狔狅狆狉犲狊犲狉狏犪狋犻狅狀
將體外培養(yǎng)細(xì)胞與凍存液按一定比例混勻后,按設(shè)定的降溫速率降溫,使其于液氮中長期保存的
過程。
4工作區(qū)條件
工作區(qū)一般要由準(zhǔn)備室、緩沖間、無菌室、細(xì)胞保存室組成。
其中,緩沖間面積應(yīng)不小于3m2,并設(shè)有更衣柜和紫外燈,紫外燈的強度為不少于1.5W/m3。紫
外線燈管距地面不應(yīng)超過2.5m,每次照射時間為20min~30min。無菌室無菌等級的最低標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)
到萬級。
5主要儀器、設(shè)備
超凈工作臺、冰箱、鼓風(fēng)干燥箱、高壓蒸汽消毒器、液氮生物容器、離心機、電子天平、CO2
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