鹽析法分離蛋白質(zhì)專業(yè)課件

第4章鹽析法知識(shí)點(diǎn)：鹽析法，等電點(diǎn)沉淀法，有機(jī)溶劑沉淀法，選擇性變性沉淀法，金屬離子沉淀法。重點(diǎn)：上述幾種沉淀方法的概念、原理及其適用范圍；鹽析法的影響因素對(duì)沉淀效果的影響，并能根據(jù)實(shí)際情況予以靈活應(yīng)用和選擇。難點(diǎn)：常用沉淀方法的靈活運(yùn)用。1沉淀定義沉淀特點(diǎn)應(yīng)用范圍沉淀分類1.沉淀法概述2鹽析法

有機(jī)溶劑沉淀法選擇性變性沉淀法等電點(diǎn)沉淀法離子型聚合物沉淀法聚電解質(zhì)沉淀法高價(jià)金屬離子沉淀法沉淀法分類3活性蛋白非活性蛋白理化性質(zhì)溶解度提取方法蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)的回顧

4鹽析沉淀步驟加沉淀劑方式陳化條件脫鹽處理2.鹽析沉淀5鹽析機(jī)理示意圖678①鹽離子與蛋白質(zhì)分子爭(zhēng)奪水分子，降低了用于溶解蛋白質(zhì)的有效水量，減弱了蛋白質(zhì)的水合程度，破壞了蛋白表面的水化膜，導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶解度下降；②鹽離子電荷的中和作用，使蛋白質(zhì)溶解度下降；③鹽離子引起原本在蛋白質(zhì)分子周圍有序排列的水分子的極化，使水活度降低。鹽析的機(jī)理9Cohn方程式logS=β-KsIKs鹽析β鹽析二次鹽析鹽析沉淀基礎(chǔ)109、人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:50:13PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請(qǐng)。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個(gè)人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/3圖1碳氧血紅蛋白的溶解度與硫酸銨離子強(qiáng)度的關(guān)系圖129、人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:50:13PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請(qǐng)。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個(gè)人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/3不同蛋白質(zhì)的溶解度曲線14蛋白質(zhì)的鹽析分布曲線15溶解度曲線(a)和鹽析分布曲線(b)

16對(duì)β影響對(duì)Ks影響鹽種類鹽濃度溫度pH值鹽析影響因素17無機(jī)鹽種類的影響圖7不同鹽溶液中碳氧血紅蛋白的溶解度與離子強(qiáng)度的關(guān)系（25℃）

(○)NaCl;(▼)KCl;(?)MgSO4;(▲)NH4)SO4;(●)Na2SO4;(□)K2SO4;(■)檸檬酸三鈉18溫度的影響19pH對(duì)β的影響20蛋白質(zhì)起始濃度的影響21二次鹽析22鹽析操作233等電點(diǎn)沉淀實(shí)例①?gòu)呢i胰臟中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝8.9，可先于pH3.0左右進(jìn)行等電點(diǎn)沉淀，除去共存的許多酸性蛋白質(zhì)(pI=3．O)。工業(yè)生產(chǎn)胰島素(pI＝5.3)時(shí)，先調(diào)pH至8.0除去堿性蛋白質(zhì)，再調(diào)pH至3.0除去酸性蛋白質(zhì)(同時(shí)加入一定濃度的有機(jī)溶劑以提高沉淀效果)。②堿性磷酸酯酶的pI沉淀提?。喊l(fā)酵液調(diào)pH4.0后出現(xiàn)含堿性磷酸酯酶的沉淀物，離心收集沉淀物。用pH9.0的0.1mol/LTris-HCl緩沖液重新溶解，加入20～40%飽和度的硫酸銨分級(jí)，離心收集的沉淀Tris-HCl緩沖液再次沉淀，即得較純的堿性磷酸酯酶。244有機(jī)溶劑沉淀原理圖25有機(jī)溶劑沉淀實(shí)例26酵母干粉中加入0.066mol/L磷酸氫二鈉溶液，37℃水浴保溫2h，室溫?cái)嚢?h，離心收集上清液，升溫至55℃，保溫20min后迅速冷卻離心去除熱變性蛋白，上清液中多為熱穩(wěn)定性較高的醇脫氫酶。5選擇性熱變性沉淀實(shí)例27（1）非離子型聚合物沉淀法（2）聚電解質(zhì)沉淀法（3）金屬離子沉淀法（4）親和沉淀6其他沉淀法28凝聚技術(shù)絮凝技術(shù)7凝聚和絮凝技術(shù)29第五章沉淀法課后練習(xí)名詞解釋：

鹽析法，有機(jī)溶劑沉淀法，選擇性變性沉淀法，等電點(diǎn)沉淀法，鹽溶，鹽析，β鹽析，Ks鹽析，二次鹽析鹽析的機(jī)理

有機(jī)溶劑沉淀的機(jī)理

二次鹽析如何實(shí)現(xiàn)？

309、人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。03-2月-2303-2月-23Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。***2/3/20234:50:14PM11、人總是珍惜為得到。03-2月-23**Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請(qǐng)。***Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。03-2月-2303-2月-23**03February202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月2023**03-2月-2315、一個(gè)人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。。二月23*03-2月-23*03February202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。**2/3/202317、一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。***03-2月-23謝謝大家319、人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:50:14PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請(qǐng)。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一